加减大柴胡汤对胆固醇结石湿热证小鼠的作用机制

目的 研究加减大柴胡汤对胆固醇结石（CS）湿热证小鼠胆固醇-胆汁酸代谢相关因子的影响，探讨其作用机制。方法 将48只SPF级小鼠随机分为空白组、模型组、大柴胡汤组和熊去氧胆酸组，每组12只；空白组作为对照，其他3组采用“内湿+外湿+高胆固醇致石饲料”的模式造模12周，建立CS湿热证小鼠模型。造模成功后大柴胡汤组和熊去氧胆酸组分别给予加减大柴胡汤和熊去氧胆酸灌胃，模型组和空白组给予等量的生理盐水灌胃，连续干预4周。观察各组小鼠的结石及一般情况，进行旷场实验，NPP底物-AMP缓冲液法、GCNA底物法与钒盐酸氧化法分别检测血清碱性磷酸酶（ALP）、γ-谷 氨酰基转移酶（GGT）、总胆红素（TBIL）含量，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测胆汁中总胆固醇（TC）、总胆汁酸（TBA）含量；实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）及蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测小鼠回肠组织中法尼酯衍生物X受体（FXR）、成纤维细胞生长因子15（FGF15）和肝脏组织中成纤维细胞生长因子受体4（FGFR4）、细胞外信号调节激酶（ERK）1/2、c-Jun氨基末端激酶（JNK） mRNA及蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型组小鼠胆囊结石状况及湿热证候表现明显，胆汁TC增多、TBA减少（P<0.01），肝功能指标（ALP、GGT、TBIL）均显著升高（P<0.01），肝脏组织明显的脂肪样变性，回肠结构完整性被破坏，回肠FXR、FGF15与肝脏FGFR4、ERK1/2、JNK mRNA及蛋白表达均显著升高（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，大柴胡汤组小鼠胆囊结石状况、肝脏和回肠组织病理形态以及湿热证候表现改善明显；大柴胡汤组和熊去氧胆酸组小鼠胆汁内TC含量均显著降低（P<0.01）、TBA含量均显著增高（P<0.01），血清ALP、GGT、TBIL含量均显著降低（P<0.01）。与熊去氧胆酸组比较，大柴胡汤组血清肝功能指标和胆汁成分改善更显著（P<0.01）。与模型组比较，两用药组小鼠FXR、FGF15、FGFR4、ERK1/2、JNK mRNA和蛋白表达均呈下调趋势，其中大柴胡汤组小鼠回肠组织FXR、FGF15及肝脏组织FGFR4、ERK1/2、JNK mRNA相对表达量均显著降低（P<0.05，P<0.01）；大柴胡汤组小鼠回肠FXR蛋白表达显著下调（P<0.01）、肝脏p-JNK蛋白表达明显下调（P<0.05）。结论 加减大柴胡汤可通过调节FXR/FGF15/FGFR4通路相关因子的表达，调控胆固醇-胆汁酸代谢，发挥清热利湿、利胆消石之效。     

苓桂术甘汤对瘦素基因缺陷ob/ob小鼠肝FXR/FGF15/SHP途径的影响

目的:观察苓桂术甘汤对瘦素基因缺陷小鼠肝脏的影响,探讨其保护作用机制是否与其干预肝法尼醇X受体(FXR)/成纤维细胞生长因子15(FGF15)/小异源二聚体伴侣(SHP)途径有关。方法:将雌性C57小鼠和ob/ob小鼠随机分为正常组,模型组,苓桂术甘汤高、低剂量组(23.1,7.7 g·kg-1),阳性药组(立普妥,0.002 6 g·kg-1),每组各8只。治疗4周后处死小鼠,取小鼠肝脏组织,称量小鼠体质量和肝脏质量,计算肝脏指数;苏木素-伊红(HE)染色和油红O染色观察肝脏组织形态和脂质沉积情况,免疫荧光染色检测肝脏组织法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测成纤维细胞生长因子15(FGF15)和酪氨酸磷酸酶(SHP)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组体质量和肝脏指数显著增高(P0.01),肝脏脂质沉积严重,肝脏组织FXR,FGF15和SHP蛋白表达下调(P0.01);与模型组比较,苓桂术甘汤组小鼠体质量和肝脏指数降低(P0.05,P0.01),肝脏脂质沉积减少,上调肝脏组织FXR,FGF15和SHP蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:苓桂术甘汤能够抗瘦素基因缺陷模型小鼠的肝损伤,其作用机制可能与其干预肝FXR-FGF15-SHP途径有关。     

二陈汤对非酒精性脂肪性肝病FXR信号通路及胆汁酸水平的影响

目的：观察二陈汤对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)法尼酯衍生物X受体(FXR)信号通路及胆汁酸水平的影响。方法：以高脂饮食诱导NAFLD模型，以二陈汤高、中、低剂量干预，以奥贝胆酸为阳性对照。干预4周后对肝脏组织进行HE染色，对肝脏组织及血清胆汁酸水平进行测定，并以Realtime-PCR法和Western blot法检测FXR、小异二聚体伴侣（SHP）、胆固醇7α羟化酶（CYP7A1）和胆盐输出泵（BSEP）mRNA及蛋白表达水平。结果：二陈汤不同剂量及奥贝胆酸均可不同程度地改善NAFLD肝脏组织病理学形态、降低肝脏及血清胆汁酸水平、上调肝脏FXR、SHP、BSEP，下调CYP7A1 mRNA和蛋白表达，且以二陈汤高剂量疗效最佳。结论：二陈汤可激活NAFLD大鼠FXR信号通路，降低胆汁酸水平，改善肝脏脂肪病变。     

津力达颗粒对高脂饮食诱导的肥胖小鼠代谢紊乱及FGF21/AMPK信号通路的影响

目的研究津力达颗粒对高脂饮食诱导的肥胖小鼠代谢紊乱及成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)/磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-dependent/activated protein kinase,AMPK)信号通路的影响。方法C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、津力达颗粒(3.8g/kg)组,对照组小鼠喂食标准饲料,其余各组小鼠喂食高脂饲料;给予津力达颗粒进行干预后,每周称定小鼠体质量并记录小鼠日摄食、饮水量;ELISA法检测各组小鼠血清中三酰甘油(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;苏木素-伊红(HE)染色法观察各组小鼠肝脏、脂肪组织病理变化;通过腹膜内葡萄糖耐量实验测定各组小鼠血糖水平;qRT-PCR和Westernblotting法检测小鼠肝脏和脂肪组织中FGF21/AMPK通路相关基因和蛋白的表达。结果与模型组比较,津力达颗粒组小鼠体质量、棕色脂肪质量、白色脂肪质量、肝脏质量显著降低(P<0.05、0.01、0.001);血清TG、LDL-C水平显著降低(P<0.01、0.001),HDL-C水平显著升高(P<0.001);血糖水平显著降低(P<0.01、0.001);肝脏FGF21、成纤维生长因子受体1(fibroblast growth factor receptors 1,FGFR1)m RNA表达水平显著升高(P<0.05、0.01);肝脏FGF21、p-AMPK、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平明显升高(P<0.05、0.001),肝脏AMPK、Klotho、沉默信息调节因子1(silentinformationregulator1,SIRT1)蛋白水平明显降低(P<0.05);脂肪FGF21 mRNA表达水平显著升高(P<0.01),脂肪FGFR1、AMPK、p-AMPK蛋白表达水平明显升高(P<0.05、0.001)。结论津力达颗粒可以通过调节FGF21及其蛋白受体复合物(FGFR1/β-Klotho),进一步激活AMPK信号通路,改善高脂饮食诱导的代谢紊乱,为津力达颗粒在代谢综合征的临床应用提供依据。     

升清胶囊对胆固醇结石小鼠核受体及三磷酸腺苷结合盒(ABC)转运蛋白影响的研究

目的探讨升清胶囊对胆固醇结石模型小鼠核受体及三磷酸腺苷结合盒(ABC)转运蛋白表达的影响。方法将30只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组和升清胶囊组,每组10只;模型组和升清胶囊组采用喂养高脂致石饲料连续7周诱导胆固醇结石模型,正常组喂养正常饲料;升清胶囊组在造模的同时给予相应药物灌胃,正常组和模型组给予等量0.9%NaCl溶液灌胃。各组均于造模结束后取材,观察成石率,HE染色观察胆囊和肝脏大体形态变化,酶比色法检测血清及肝脏TG、TC、TBA含量,Real-time PCR和Western blot法分别检测肝脏LXR-α、FXR、ABCA1、ABCG5、ABCG8 mRNA及蛋白表达。结果 (1)与正常组比较,模型组成石率升高(P0.05),胆囊和肝脏大体形态学存在不同程度损伤;与模型组比较,升清胶囊组成石率降低(P0.05),胆囊和肝脏大体形态学均有不同程度改善。(2)与正常组比较,模型组血清和肝脏TC、TG含量升高,肝脏TBA含量降低,肝脏LXR-α、FXR、ABCA1、ABCG5、ABCG8 mRNA及蛋白表达均升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,升清胶囊组血清和肝脏TC、TG含量降低,LXR-α、FXR、ABCG5、ABCG8 mRNA及蛋白表达均降低,ABCA1蛋白表达降低(P0.05,P0.01)。结论升清胶囊可能是通过下调LXR/FXR及其直接靶基因ABC转运蛋白来降低C57小鼠结石成石率。     

复方降脂3号对高胆固醇血症新西兰白兔胆固醇-胆汁酸代谢的影响

目的:探讨复方降脂3号对胆固醇-胆汁酸代谢的影响。方法:24只新西兰白兔分为正常对照组、模型组和复方降脂3号组,每组8只。模型组和复方降脂3号组予高胆固醇饮食诱导高血脂,并给予相应药物灌胃。治疗4周后,检测白兔外周血清总胆固醇、胆汁酸水平,酶联免疫吸附测定法检测肝脏胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)活性,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测CYP7A1、法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)靶基因胆盐输出泵(bile saltexport pump,BSEP)和短异源二聚体伴侣(small heterodimer partner,SHP)受体mRNA表达情况。结果:模型组胆固醇和胆汁酸水平较正常对照组明显升高(P0.01);肝脏CYP7A1活性降低,mRNA表达下降(P0.01);BSEP和SHP mRNA表达明显增加(P0.01)。与模型组比较,复方降脂3号组胆固醇水平明显下降(P0.01);肝脏CYP7A1活性升高,mRNA表达增加(P0.01);BSEP和SHP mRNA表达明显下降(P0.01)。复方降脂3号组胆汁酸含量与模型组比较,差异无统计学意义。结论:复方降脂3号可能通过上调CYP7A1表达和抑制BSEP、SHP mRNA表达,促进肝脏内胆固醇合成胆汁酸,继而降低血清胆固醇水平。     

残黄片对ANIT诱导黄疸模型大鼠的退黄作用机制分析

目的:考察残黄片对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导黄疸模型大鼠肝脏法尼醇X受体(FXR),尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)mRNA和蛋白表达的影响,探讨其治疗残留黄疸的作用机制。方法:大鼠分为正常组、模型组、残黄片(CHP)组和熊去氧胆酸片(UDCA)组,ANIT灌胃复制黄疸模型,相应药物干预后进行血清总胆红素(TBIL),总胆汁酸(TBA),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的含量检测和肝组织病理学检查,以评价残黄片的治疗作用。应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测各组大鼠肝组织FXR,UGT1A1,MRP2 mRNA和蛋白的相对表达量。结果:CHP能显著降低由ANIT引起的大鼠血清TBIL,TBA,ALT,AST,ALP的升高,抑制肝脏病理学改变,退黄作用优于UDCA。与正常组比较,ANIT造模后显著抑制大鼠肝组织FXR,UGT1A1,MRP2的mRNA水平(P0.01)。与模型组比较,CHP和UDCA干预后均显著提升了各蛋白目的基因mRNA水平(P0.01),在提升胆红素代谢酶UGT1A1的mRNA水平上CHP优于UDCA(P0.01)。在影响蛋白表达方面,与正常组比较ANIT造模使大鼠FXR表达明显升高(P0.05),CHP干预有促进FXR表达的趋势,而UDCA未见有促进趋势,但二者无显著差异。在促进胆红素代谢和胆汁排泄方面,ANIT造模使得UGT1A1,MRP2的表达显著降低(P0.01),而CHP治疗后显著提高了UGT1A1和MRP2蛋白的表达(P0.01)。在提高胆红素与胆汁酸外排蛋白MRP2的表达上CHP优于UDCA(P0.01)。结论:CHP退黄作用机制与激活肝脏FXR mRNA的表达,促进胆红素代谢酶UGT1A1和胆汁酸转运体MRP2的mRNA和蛋白表达,提高肝脏对游离胆红素的代谢并促进胆汁酸排出肝脏,缓解胆汁淤积性肝损伤有关。     

法尼醇X受体在胆汁淤积幼龄大鼠模型中的表达及利胆合剂的干预作用

目的研究法尼醇X受体(FXR)在胆汁淤积幼龄大鼠模型中表达及利胆合剂干预作用。方法将30只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)组、利胆合剂高、低剂量组。正常和模型组羧甲基纤维素钠溶液灌胃,其余UDCA或利胆合剂灌胃。第5天(正常组除外)给予α-异硫氰酸奈酯(ANIT),ANIT 48h处死。检测血清TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、GGT、ALP,实时荧光定量PCR检测肝组织FXR及小异源二聚体伴侣(SHP)、UDP葡糖醛酸基转移酶家族2多肽B4(UGT2B4)、胆盐输出泵(BSEP)mRNA;Western blot检测肝组织FXR及SHP、UGT2B4、BSEP蛋白。结果模型组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平较正常组增高(P0.01);与模型组比较,UDCA组、利胆合剂高、低剂量组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平降低(P0.01);与UDCA组比较,利胆合剂高、低剂量组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平降低(P0.01);与利胆合剂低剂量组比,高剂量组AST、TBA、GGT水平降低(P0.01)。模型组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白表达量较正常组降低(P0.01);与模型组比较,UDCA组、利胆合剂高、低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及高剂量组蛋白表达量升高(P0.01),低剂量组FXR、BSEP蛋白表达量升高(P0.05);与UDCA组比较,利胆合剂高、低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白表达量升高(P0.01,P0.05);与利胆合剂低剂量组相比,高剂量组FXR、SHP、UGT2B4、 BSEP mRNA表达量升高(P0.01,P0.05), SHP、UGT2B4蛋白表达量升高(P0.01)。结论利胆合剂可缓解ANIT诱导的胆汁淤积大鼠,且在一定范围内,剂量越高,效果越明显,其疗效优于UDCA,其机制可能与促进FXR及下游的SHP、UGT2B4、BSEP分子表达有关。     

六味降脂汤对高脂血症大鼠肠道菌群及小肠NPC1L 1、ACAT2和APOB48蛋白表达的影响

目的:探究六味降脂汤对高脂血症可能的干预机制以及对肠道菌群的影响。方法:60只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阿托伐他汀0.9 mg/kg组及六味降脂汤5.4、10.7、21.4 g/kg。除正常对照组外,其余各组给予高脂饲料合并高脂乳剂灌胃6 w制备高脂血症大鼠模型,造模成功各组灌胃给予相应药物,8 w后采集血清、粪便及小肠组织样本,检测大鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)含量;同时采用16S rDNA高通量测序分析肠道菌群的多样性和结构变化;免疫组织化学法检测大鼠小肠组织NPC1L1、ACAT2及APOB48蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清TC、TG、LDL-C含量显著升高,小肠NPC1L1、ACAT2及APOB48蛋白表达显著上调(P<0.01),肠道菌群Beta多样性改变;与模型对照组比较,各给药组TC、TG、LDL-C含量均明显降低(P<0.05或P<0.01),六味降脂汤10.7 g/kg组小肠NPC1L1、ACAT2及APOB48蛋白表达明显下调(P&...     

山楂叶总黄酮对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏FXR/SREBP-1c表达的影响

目的:研究山楂叶总黄酮(TFHL)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织法尼酯衍生物受体(FXR)与固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)通路的影响,探讨其抗NAFLD的作用机制。方法:采用高脂饮食建立NAFLD大鼠模型,TFHL高、中、低剂量组、模型组及正常组共5组,每组8只,药物干预后采用全自动生化仪检测肝组织病理学、血脂、血清转氨酶等,Real-time PCR及Western Blot分别检测肝组织中FXR、小异二聚体伴侣分子(SHP)、SREBP-1c、脂肪合成酶(FAS)的mRNA和蛋白表达。结果:应用TFHL干预后,大鼠肝组织病理学改善,肝组织甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL)含量和血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平较模型组明显降低(P0.05,P0.01);FXR mRNA和蛋白、SHP mRNA表达较模型组明显增加(P0.05);SREBP-1c mRNA和蛋白、FAS mRNA表达较模型组明显减少(P0.05)。结论:FXR表达下调及其靶基因SREBP-1c、FAS表达上调可能是NAFLD肝脏脂质沉积的分子基础;TFHL可能通过调控FXR/SREBP-1c通路改善高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝脏脂质代谢紊乱。     

黄连红曲药对调控Nrf2/HO-1通路改善非酒精性脂肪肝的作用研究北大核心CSCD

目的:研究黄连红曲对非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic Fatty Liver Disease, NAFLD)的疗效及机制。方法:62只SD大鼠随机分成正常对照组(12只)和造模组(50只),采用高脂饲料加脂肪乳灌胃造模8 w,造模成功后将模型组随机分为模型对照组、黄连红曲1.1、2.1 g/kg组和奥贝胆酸0.5 mg/kg组,每组8只。采用全自动生化仪检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C),血糖(GLU)含量,谷丙转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活力;比色法检测血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)含量;生化法测定肝脏TC、TG、FFA含量;ELISA法检测血清胰岛素含量;HE和油红O染色分别观察肝脏病理和脂质沉积情况;qPCR检测肝脏Nrf2和Ho1 mRNA表达;免疫组化检测肝脏Nrf2的表达;WB检测肝脏Nrf2、HO-1蛋白表达情况。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠体质量增加,肝指数增加,血脂TC、TG、LDL-C含量和肝脏脂质TC、TG、FFA含量显著升高,血清ALT、AST活力升高,血清MDA含量增加,SOD活力、GSH-Px含量降低,胰岛素抵抗指数增加,肝脏出现脂肪样变及大量脂滴,Nrf2、Ho1 mRNA及蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,黄连红曲组大鼠体质量减轻,血脂降低,肝脏脂质含量降低,肝功能得到改善,胰岛素抵抗指数降低,肝脏病理学显示大鼠肝脏脂质沉积减轻,脂滴减少;肝脏Nrf2、Ho1 mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论:黄连红曲药对可以改善大鼠NAFLD,其机制可能与上调Nrf2/HO-1通路减轻氧化应激损伤有关。     

黄精多糖对高脂血症小鼠脂代谢相关基因mRNA及蛋白表达的影响

该文旨在研究黄精多糖对高脂血症小鼠脂代谢相关基因mRNA及蛋白表达的影响,将小鼠随机分为空白对照组,高脂血症模型组,辛伐他汀组,黄精多糖低、中、高剂量组(200,400,800 mg·kg^-1·d^-1),连续给药14 d后,腹腔注射75%新鲜蛋黄乳剂建立高脂血症小鼠模型。给药结束后测定血清中TC,TG,LDL-C,HDL-C的含量;采用Real-time PCR法测定肝脏组织中PPAR-α,PPAR-β,PPAR-γ,SREBP-1c,IL-6,TNF-αmRNA的表达水平;通过Western blot法分析检测黄精多糖对脂代谢相关基因(PPAR-α,PPAR-β,PPAR-γ,SREBP-1c,IL-6,TNF-α)蛋白表达的影响,以探讨黄精多糖的降血脂机制。实验结果表明,黄精多糖低、中、高剂量组均能降低血清中TC,TG,LDL-C的含量,以中、高剂量组多糖效果最为显著(P<0.01),同时,黄精多糖低、中、高剂量组均能升高血清中HDL-C的含量,以中、高剂量组多糖效果最为显著(P<0.01);此外,黄精多糖中、高剂量组可显著上调肝脏中PPAR-α,PPAR-βmRNA和蛋白表达量(P<0.05),下调肝脏中PPAR-γ,SREBP-1c,IL-6,TNF-αmRNA和蛋白表达量(P<0.05)。以上研究表明黄精多糖具有抑制肝脏脂质氧化,调节与脂类代谢相关基因和蛋白表达的作用,进而起到防治高脂血症的功效。     

桂枝通过调控FXR通路改善ANIT诱导的肝内胆汁淤积大鼠模型的机制研究

研究桂枝通过调控法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)通路改善α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导大鼠肝内胆汁淤积的作用及机制。将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)组(60 mg·kg~(-1))、桂枝60 mg·kg~(-1)治疗组、桂枝20 mg·kg~(-1)治疗组5组,每组8只。除正常组和模型组外,其余各组按对应浓度连续水溶液0. 005 m L·g~(-1)体质量灌胃,每天1次,灌胃7 d;除正常对照组外,其余各组于灌胃第5天予100 mg·kg~(-1)ANIT灌胃造模,每天1次,灌胃3 d。末次给药24 h后腹主动脉取血,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBi L)、总胆汁酸(TBA)水平;取大鼠肝脏组织1. 5～2 cm,经10%甲醛固定,进行石蜡包埋切片,并行HE染色,免疫组化(IHC)分析FXR的表达;取大鼠肝脏组织提取RNA及蛋白,检测FXR mRNA表达及FXR下游分别与胆汁酸合成、解毒、转运相关的SHP,UGT2B4,BSEP蛋白的表达情况。结果表明,与正常组比较,模型组血清ALT,AST,TBi L,TBA的水平升高(P0. 01),肝脏损伤严重,FXR蛋白和mRNA表达降低,SHP,UGT2B4,BSEP蛋白表达均降低(P0. 05,P0. 01);与模型组比较,药物组能在不同程度上降低血清ALT,AST,TBi L,TBA水平(P0. 05,P0. 01),改善肝脏组织损伤,增加FXR蛋白灰度值,促进FXR mRNA和FXR,SHP,BSEP和UGT2B4蛋白的表达(P 0. 05,P 0. 01)。桂枝可以缓解ANIT诱导的肝内胆汁淤积,减轻肝细胞损伤,降低血清ALT,AST,TBi L,TBA水平。其机制可能是通过FXR-SHP,FXR-UGT2B4,FXR-BSEP信号通路来进行干预。故而,在肝内胆汁淤积的发病过程中,可以尝试在桂枝改善肝内胆汁淤积方面做更进一步的探索和尝试,为临床治疗肝内胆汁淤积提供有效药物。     

柴胡疏肝散对胆囊胆固醇结石小鼠胆囊收缩功能的影响

目的 探讨柴胡疏肝散对胆囊胆固醇结石（CS）小鼠胆囊收缩功能的影响及其作用机制。方法将32只ICR小鼠随机分为空白组8只和造模组24只。空白组予以普通饲料喂养，造模组采用高胆固醇致石饲料喂养制备CS小鼠模型，9周后随机选取8只模型小鼠胆囊取材，观察CS造模是否成功。将成模小鼠随机分为模型组和柴胡疏肝散组。柴胡疏肝散组予柴胡疏肝散灌胃，空白组和模型组予等量的生理盐水灌胃，连续干预4周。用ELISA法检测血清胆囊收缩素（CCK）、二酰基甘油（DAG）、甘油三脂（TG）与胆汁总胆固醇（TC）、总胆汁酸（TBA）含量；HE染色法观察胆囊和肝脏的组织形态；分别采用q-PCR法与Western blot法检测肝脏蛋白激酶C(PKC)和胆囊调宁蛋白（CAP）、血管活性肠肽（VIP）基因水平和蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组血清DAG、TG及胆汁TC含量明显升高（P<0.05,P<0.01），血清CCK和胆汁TBA含量明显降低（P<0.01），肝脏PKC mRNA与蛋白表达均明显降低（P<0.05,P<0.01），胆囊CAP、VIP的mRNA与蛋白表达均明显升高（P&...     

田黄方抑制ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化作用及机制研究

目的基于1-磷酸鞘氨醇(S1P)/1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1PR1)通路探讨田黄方抑制ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用及相关机制。方法将40只ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型组、田黄方低剂量组(1.5 g/kg)、田黄方高剂量组(4.5 g/kg)和阿托伐他汀组(10 mg/kg),每组10只,另选具有相同遗传背景的同龄野生型C57BL/6J小鼠10只为对照组。模型组与药物干预组均给予高脂饲料喂养8周,对照组给予普通饲料喂养。干预组每日灌胃相应药物,对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃。12周后,取小鼠血清,分离主动脉,保存于-80℃冰箱。全自动生化分析仪检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C水平,高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)检测血清中S1P含量;油红O染色法观察主动脉组织形态学变化;RT-PCR法检测肝脏与胆固醇逆转运相关蛋白CD36、ABCA1、SR-BI、LXRa和S1PR1 mRNA表达情况。结果模型组主动脉管腔内及主动脉根部可见较大的AS斑块形成,与模型组比较,干预组主动脉管腔内及主动脉根部的AS斑块面积显著减小(P0.05)。与对照组比较,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平及CD36 mRNA表达升高(P0.01),HDL-C、S1P水平及ABCA1、SR-BI、LXRa和S1PR1 mRNA表达降低(P0.01)。与模型组比较,各给药组TG、TC、LDL-C水平及CD36 mRNA表达降低(P0.05,P0.01),HDL-C水平及ABCA1、SR-BI、LXRa mRNA表达升高(P0.05,P0.01)。结论田黄方具有调节血脂和抗AS的作用,其机制可能与其调控S1P-S1PR1通路介导胆固醇逆转运有关。     

利胆软坚方降脂减肥作用及其对胆汁酸代谢轮廓谱的影响

目的:基于肥胖“从胆论治”的学术观点,研究利胆软坚方对高脂饮食诱导肥胖大鼠的降脂减肥作用及其对血清胆汁酸轮廓谱的影响,探讨其作用机制。方法:42只大鼠高脂饲料喂养9周建立肥胖大鼠模型,取24只造模成功大鼠随机分为模型组、利胆软坚方高、低剂量组(30,15 g·kg^-1),每组8只,另取8只正常大鼠作为正常组,模型组和正常组给予生理盐水,给药组给予相应剂量药物,灌胃4周。测定大鼠体质量、肝脏质量、脂肪质量等肥胖指标;胆管插管术引流监测2 h内胆汁流量;全自动生化仪测定血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)法测定大鼠血清胆汁酸代谢轮廓谱中各胆汁酸的含量。结果:与正常组比较,模型组体质量、肝脏质量、脂肪质量均显著升高(P<0.01),血清TC,TG,LDL-C水平明显上升(P<0.05,P<0.01),2 h内胆汁总分泌量及各测试点胆汁流量均降低,初级胆汁酸占比明显下降(P<0.05),血清总胆汁酸含量显著降低(P<0.01),血清胆汁酸轮廓谱中胆酸(CA),脱氧胆酸(DCA),鹅去氧胆酸(CDCA),猪去氧胆酸(HDCA),牛磺胆酸(TCA),牛磺去氧胆酸(TDCA),牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA),牛磺猪去氧胆酸(THDCA),甘氨去氧胆酸(GDCA)含量明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,利胆软坚方高、低剂量组体质量、肝脏质量明显降低(P<0.05,P<0.01),利胆软坚方高剂量组血清TC,TG,LDL-C水平明显下降(P<0.05,P<0.01),低剂量组TG水平明显下降(P<0.05),高剂量组在给药后1~1.5 h胆汁流量明显增加(P<0.05),高、低剂量组初级胆汁酸占比明显升高(P<0.05),利胆软坚方高剂量组TCA,DCA,甘氨胆酸(GCA),GDCA水平明显升高(P<0.05,P<0.01),低剂量组仅TCA,TCDCA水平明显升高(P<0.05)。结论:利胆软坚方具有降脂减肥作用,其机制可能与其增加胆汁分泌量,增加初级胆汁酸合成及调节胆汁酸轮廓谱有关。     

银蓝调脂胶囊抗ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的作用

目的通过给予ApoE基因敲除小鼠高脂饮食建立动脉粥样硬化模型,探讨银蓝调脂胶囊抗动脉粥样硬化的作用及其机制。方法选取10只C57BL/6小鼠作为正常组,50只ApoE^-/-小鼠随机分成模型组,辛伐他汀片组,银蓝调脂胶囊高、中、低剂量组,每组10只。使用高胆固醇鼠饲料喂养ApoE^-/-小鼠12周,建立动脉粥样硬化模型。造模12周后连续灌胃给药12周,每天1次。检测血清ox-LDL水平,检测肝脏TC、TG、LDL-C水平,检测胸主动脉斑块面积及肝脏脂质面积,RT-qPCR法和Western blot法检测银蓝调脂胶囊对小鼠LXR信号通路相关基因和蛋白表达的影响。结果银蓝调脂胶囊能降低ApoE^-/-小鼠血清中ox-LDL水平(P<0.01)以及胸主动脉脂质斑块面积(P<0.01),减少肝脏中TC、TG、LDL-C水平(P<0.05,P<0.01)和脂质面积(P<0.01)。机制研究表明,银蓝调脂胶囊能上调肝脏中ABCG5、SR-B1 mRNA表达(P<0.01)和降低iNOS mRNA表达(P<0.01),上调LXRα、ABCG5、CYP7A1、SREBP-1c蛋白表达(P<0.05)并降低iNOS、COX2蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论银蓝调脂胶囊有较好的抗动脉粥样硬化作用,其机制可能与激活LXR信号通路,促进胆固醇逆向转运并抑制炎症有关。     

黄连肉桂对自发性2型糖尿病小鼠胆汁酸代谢、肠上皮Occludin蛋白表达及小肠形态结构改变的影响

目的观察黄连肉桂通过对自发性2型糖尿病(diabetes mouse,db/db)小鼠胆汁酸代谢、肠上皮紧密连接蛋白(Occludin)表达及小肠形态结构改变的降糖机制。方法以6只db/m小鼠为空白组,30只db/db小鼠随机分成5组,每组6只;实验组分别用二甲双胍、黄连、肉桂及黄连肉桂进行干预,对照组给予等量的生理盐水,在8周测量每组小鼠的血糖同时测量小鼠空腹胰岛素;利用液相色谱法检测小鼠粪便胆汁酸的代谢含量、蛋白免疫印迹法检测回肠Occludin蛋白的表达、电镜扫描小鼠小肠形态学的改变。结果黄连肉桂可以有效改善db/db小鼠的高血糖状态、降低小鼠血糖,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05),同时可以增加db/db小鼠胆汁酸中胆酸(cholic acid,CA)、鹅去氧胆酸(chenodeoxy cholic acid,CDCA)分泌,减少熊去氧胆酸(Ursodeoxy cholic acid,UDCA)分泌,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。黄连肉桂能够增加小鼠回肠Occludin蛋白的表达,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05);还能够改善db/db小鼠肠道超微状态、增强肠道屏障作用、降低其通透性。结论黄连肉桂可以改善db/db小鼠高血糖状态,其机制可能与其可以调节胆汁酸分泌和增加肠Occludin蛋白表达,增强肠道屏障作用、降低其通透性有关。     

何首乌水提物大鼠连续灌胃给药28 d肝毒性研究——胆汁淤积相关机制探讨

目的:考察何首乌水提物(AEPM)对大鼠肝脏中胆汁酸合成、代谢、转运相关分子影响,探讨何首乌肝毒性相关机制。 方法:SD大鼠分别灌胃AEPM 60,30 g·kg^-1,每天1次,连续28 d。28 d后解剖取肝脏,分别采用荧光定量PCR和Western blot检测肝脏MRP3,MRP2,BSEP,FXR,CYP7A1等分子的mRNA和蛋白表达水平。 结果:与正常组相比,AEPM高剂量组雄性大鼠肝脏中MRP3和BSEP的mRNA表达均显著升高(P<0.05),而AEPM高、低剂量组肝脏FXR的mRNA表达均显著降低(P<0.05);AEPM高、低剂量组雌性大鼠肝脏 MRP3,MRP2,BSEP,CYP7A1的mRNA表达均显著升高(P<0.05)。Western blot检测结果显示,AEPM高、低剂量给药组雄性和雌性大鼠肝脏中MRP3,MRP2,BSEP,FXR,CYP7A1蛋白表达水平与mRNA变化基本一致,但均未达统计学显著差异。 结论:AEPM大鼠灌胃给药28 d对肝脏胆汁酸合成、转运、排泄相关蛋白的表达具有一定的影响,在mRNA表达水平既具有胆汁淤积分子特征,同时也可见促进胆汁酸排泄的分子特征。     

清胰Ⅱ号对小鼠胆汁淤积性肝损伤的保护作用

目的:本研究旨在探讨清胰Ⅱ号对胆管结扎造成的胆汁淤积性肝损伤的保护作用及其机制。方法:昆明种小鼠随机分为假手术组,模型组,低、高剂量清胰Ⅱ号组(0.5,1.0 g·kg-1),连续ig给药7 d后,采用胆管结扎(BDL)术制备小鼠肝脏胆汁淤积性肝损伤模型,制模后72 h麻醉处死动物,收集血液和肝脏观察各组生化指标和肝组织病理学改变以及实时荧光定量-聚合酶链式反应(q PCR)检测肝脏胆酸代谢通路相关基因的mRNA水平的表达。结果:与假手术组比较,模型组丙氨酸氨基转移酶(ALT),碱性磷酸酶(ALP),总胆汁酸(TBA),总胆红素(TBIL)水平均显著增高,肝组织病理显示在大量中性粒细胞浸润、肝细胞水肿、变性和坏死,同时胆酸合成基因胆固醇7α-羟化酶(Cyp7a1),甾醇12α-羟化酶(Cyp8b1),类法尼酯衍生物X受体(FXR),小分子异源二聚体伴侣(SHP),牛磺胆酸钠协同转运蛋白(Ntcp)mRNA表达均降低(P0.05);与模型组比较,给药组可降低ALT,ALP活性和TBA,TBIL水平,改善其病理损伤,上调上述基因mRNA水平(P0.05)。结论:清胰Ⅱ号对胆汁淤积性肝损伤具有保护作用,通过作用于肝脏中与胆汁酸合成和转运相关的基因表达,以维持胆汁酸的稳态。