六神曲的质量调查与评价研究

目的调查六神曲的质量现状,完善其质量评价方法。方法对六神曲的文献研究、市场调研及对各地六神曲样品的外观性状、显微特征及酶活力进行比较分析。结果各地药品标准中六神曲的制作工艺要求不一,差异主要体现在原料配比与生产条件上;市场六神曲的产品来源有4种,少数源自正规厂家,多数来自小作坊,其发酵制作缺乏规范,生产加工的随意性较大;不同产地的六神曲外观性状差别主要体现在颜色、质地、表面和断面特征上;各地六神曲粉末显微特征鉴别大多含有麦麸的单细胞非腺毛与种皮珠心残余细胞,多数缺乏苦杏仁的石细胞,部分缺乏赤小豆的栅状细胞及脐点裂隙状淀粉粒;淀粉酶活力有显著差异。结论六神曲市场待规范,其质量评价体系待完善。     

鲜干品组方及不同制法六神曲中消化酶活力的动态检测及分析

目的:探讨青蒿等鲜干品组方及不同制法对六神曲中脂肪酶、淀粉酶活力的影响及其动态变化规律,为六神曲发酵工艺优化及青蒿等鲜干品可能的入药机制分析提供依据。方法:通过拆方研究,制备6组六神曲样品,第1组为基本组(面粉、赤小豆、苦杏仁),第2~3组为鲜品组(基本组+鲜品榨汁、煎汁),第4~6组为干品组(基本组+干品1/3量煎汁,全量煎汁,1/3量粉碎拌料)。各组分别在28,33℃条件下自然发酵,保持湿度70%~80%,发酵时间10 d,逐日动态取样,置于40℃下干燥后待测。动态测定不同温度下各组发酵样品中脂肪酶和淀粉酶的活力。结果:六神曲样品在28℃条件下发酵并不充分;在33℃条件下发酵,脂肪酶、淀粉酶活力在第3~4天达到峰值,基本组与2个鲜品组消化酶活力均明显高于干品组,差异具有显著性,基本组与鲜品组之间差异无显著性。结论:以脂肪酶、淀粉酶活力为检测指标,六神曲33℃发酵优于28℃发酵,青蒿等鲜品入药优于干品入药,鲜品煎汁组优于鲜品榨汁组;六神曲发酵时间以3~5 d为宜。     

不同产地六神曲麦芽低聚糖酶活力实验比较研究

目的:比较分析不同产地六神曲质量。方法:采用麦芽低聚糖酶活力为质量评价指标,比较不同产地六神曲生品、炒制品麦芽低聚糖酶活力,同时进行聚类分析。结果:六神曲各产地麦芽低聚糖酶活力有较大差异,其中生品六神曲中活力最高为广西(509.25±7.30)U·g~(-1)、最低为四川2(37.99±0.59)U·g-1,相同产地生品与炒制品比较中河北1生品(406.97±2.20)U·g~(-1),炒制后活力明显下降(P0.01),为(97.19±3.99)U·g~(-1)。结论:不同产地六神曲麦芽低聚糖酶活力均有差异,同一产地六神曲生品麦芽低聚糖酶活力大于炒制品,麦芽低聚糖酶活力可作为六神曲质量评价的指标,根据聚类分析可对不同产地六神曲质量进行分级分类。     

六神曲发酵机理研究方向的思考

目的:整理归纳古代本草对于六神曲文献记载及现代研究成果,思考六神曲发酵机理研究方向,为六神曲工艺规范化研究提供思路。方法:按照年代梳理六神曲古代文献,并参考当时的农艺等杂项书籍作为佐证,梳理六神曲名称、制备方法、药物功效等记载,追溯六神曲出现的背景,从六神曲名称的由来推测其炮制原意,进而结合现代研究文献,对六神曲的发酵机理研究提出自己的推论和思考。结果:通过文献整理,认为六神曲来源于古代酒曲,其"神"字由其酿酒效率高而来,由于用途不同,其制法逐渐脱离酒曲,微生物种类变化和鲜药材的加入,都与增强消食疗效有关。     

建神曲与六神曲的比较研究

本文对六神曲和建神曲的组成及加工方法进行调研比较,结果表明,二者的组成存在一定的差异。六神曲的生产各地皆采用发酵法,而建神曲在福建等地用发酵法生产,在上海等地则为非发酵法生产。结合临床实践。本文认为发酵法加工的建神曲可代六神曲配方。     

六神曲不同的制备工艺对其淀粉酶活力的影响

目的:优化六神曲的制备工艺。方法:采用单因素试验,以六神曲的淀粉酶活力为评价指标,考察发酵时间及原料药的拌曲工艺等因素对六神曲淀粉酶活力的影响;同时将最优制备工艺所制六神曲与市售六神曲的优品和劣品从淀粉酶活力、可溶性淀粉量、可溶性多糖量3个方面进行对比。结果:最佳发酵时间为7 d;赤小豆的最佳处理方法为煮烂拌曲;青蒿、辣蓼、苍耳草的最佳添加方式为以鲜品水煎液混合均匀后拌曲,发酵后六神曲的酶活力可达49.372 mg.min-1.g-1,可溶性淀粉含量可达7.967%,可溶性多糖含量可达16.65%,明显高于市售的2种六神曲。结论:六神曲的最优制备工艺为将赤小豆粉碎后,加入面粉、苦杏仁粉末混合均匀,陆续加入青蒿、辣蓼、苍耳草的鲜品水煎液混合均匀后拌曲,发酵时间为7 d。     

基于仿生感官技术对不同产地六神曲的质量评价

目的：基于仿生感官技术分析不同产地六神曲性状,比较不同产地六神曲质量。方法：采用电子舌、电子鼻、分光测色计对24批次六神曲粉末味、气、色数据进行主成分分析（PCA）,从中提取特征指标,后对整体感官特征指标做PCA、聚类分析。结果：以前2个主成分对滋味建模,累积贡献90.86%,PC1特征值较大的是PKS（通用）、NMS（鲜）、ANS（甜）、CPS（通用）、CTS（咸）,PC2特征值最大的是SCS（苦）;对气味响应明显的是W1W（无机硫）和W2W（有机硫）,以前2个主成分建模,累积贡献99.92%。色度系统变异系数a*>b*>L*。以ANS、CTS、NMS、W1W、W2W、a*、b*指标分析六神曲整体性状,提取前3个主成分,分别定义为滋味因子、甜味因子和气色因子,累积贡献91.27%。欧氏距离=24时,样品划分为1、2两类,欧氏距离=20时,可划分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三类。结论：仿生感官技术与PCA和聚类分析相结合可为六神曲质量评价提供参考。     

生物效价检测在中药品质及药性研究中的应用

在分析现行中药品质与药性研究状况的基础上,认为中药品质与药性是辩证统一的关系,提出借鉴生物效价检测能够直接从中药的有效性和安全性角度共同把握中药的品质评价和药性研究.通过建立的生物效价检测方法对中药饮片建立效价标签,使医生在临床应用上可针对病情需要有意识地根据生物效价的方向和效价强度不同(药性特点)遣方用药,有利于保证中医药临床疗效的重复性,提高中医药的整体医疗水平.     

致泻效价检测用于大黄品质评价的方法研究

目的：建立大黄致泻效价测定的模型和方法，为探索建立基于生物效价检测的大黄品质评价方法提供技术支持。方法：以大黄泻下活性的量效关系、数据变异程度以及实验的可操作性为考察指标，筛选并确定了大黄致泻效价测定模型的观测指标(10 h内排便量)、动物品系(ICR小鼠)、性别(雄性)、便秘模型造模剂用量(复方地芬诺酯50 mg·kg^-1)等实验条件。根据确立的模型和方法结合化学含量测定评价了不同大黄样品的品质。结果：不同大黄样品的致泻效价总体趋势与总蒽醌(R²=0.653 7)、结合蒽醌(R²=0.553 6)的含量有关，但均未呈现良好的线性关系。大黄蒽醌的含量测定结合致泻效价的测定更能充分表征不同大黄样品的品质差异。结论：致泻效价检测方法可用于大黄的品质评价和质量控制。     

基于化学表征和生物效价检测的大黄配方颗粒质量评价研究

该文尝试将多指标成分同时定量分析和生物效价分析方法联合使用的模式应用于中药配方颗粒的质量评价,并以大黄配方颗粒为模式药进行了示范性研究。采用超高效液相色谱法同时测定大黄配方颗粒中芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷等10个蒽醌类化学成分的含量;在复方地芬诺酯片致小鼠便秘模型上,测定不同批次大黄配方颗粒致泻生物效价;在体外抗大鼠血小板聚集模型基础上,测定不同批次大黄配方颗粒的活血生物效价;采用SPSS统计软件对测定的10个蒽醌类化学成分与致泻、活血生物效价之间的相关性进行统计学分析。多指标化学含量测定结果显示10个批次间大黄配方颗粒的化学表征差异较大,与此同时,致泻、活血生物效价均存在一定的差异性;相关性分析结果显示大黄配方颗粒的致泻生物效价强弱和其含有的结合型蒽醌糖苷类成分的含量有显著相关性(P0.01),活血生物效价的强弱和其含有的游离型蒽醌成分的含量有显著相关性(P0.01)。综上,采用多组分化学表征和生物效价检测联用的模式可以客观量化、更全面的反映不同批次大黄配方颗粒的整体质量差异。     

基于抗菌效价检测的板蓝根药材品质评价方法的研究

目的：建立板蓝根抗菌效价生物测定的方法，为探索建立基于抗菌效价检测的板蓝根品质评价方法提供技术支持。方法：以管碟法的抑菌圈直径的大小为指标，通过单因素考察菌浓度、培养时间、细菌传代数对板蓝根抗菌效价的影响，选择适宜条件建立板蓝根抗菌效价的测定方法，并采用该方法检测定来自GAP种植基地不同批次、其他不同产地不同来源板蓝根药材的抗菌效价。结果：管碟法测定板蓝根药材抗菌生物效价的适宜条件为：以药典规定的管碟法条件基础上，菌浓度为0．38MCF，培养时间为15h，细菌传代数为3代或4代金黄色葡萄球菌；测定的同一GAP种植基地不同批次板蓝根药材的抗菌效价差别不大（3.80U左右），其他不同产地的则差别明显（从0．83U到6．77U不等）。结论：所建立了板蓝根抗菌效价生物测定方法，该方法可用于板蓝根的品质评价和质量控制。     

中药生物效价研究现状及开发思路探讨

中药质量控制一直是中药现代化的重点和难点,如何证明产品的质量一致性和临床疗效一致性,是中药创新与发展探索的重要方向。由于中药天然存在的异质性,有必要在现有检测方法的基础上结合生物效价方法,以更全面地保证药品质量。拟从中药生物效价研究现状出发,系统总结和分析现行国内外法规对植物药/中药生物效价建立过程的要求与建议、现阶段研发的难点及探索,并对基于中药药动学-药效动力学(pharmacokinetic-pharmacodynamic,PK-PD)特点的适宜效价方法的开发思路进行探讨,为中药质量评价体系的构建提供思路,促进国际药政管理部门对中药质量标准的认可。     

基于平喘生物效价的麻黄品质评价研究

目的研究37个不同产地麻黄平喘作用及其生物效价的差异。方法取豚鼠离体气管平滑肌建立平喘药效模型,按累积计量法于麦氏浴槽中加入不同质量浓度梯度(剂间距1:0.5)的麻黄水煎液,计算不同产地麻黄解痉率;按照《中国药典》2010年版二部附录XIV生物检定统计法项下"量反应平行线法"(2,2)法计算生物效价值;采用HPLC法测定麻黄药材中麻黄碱和伪麻黄碱的量;对不同产地麻黄生物效价值进行聚类分析。结果麻黄对磷酸组胺(His)引起的豚鼠离体气管平滑肌收缩有解痉作用,与麻黄对照药材相比,有20个产地的麻黄达显著水平(P0.05),麻黄解痉作用与给药质量浓度呈剂量依赖性,草麻黄与中麻黄种间解痉率无显著差异(P0.05);37个产地的麻黄药材与对照药材相比平喘效价值存在显著差异(P0.05、0.01),平喘效价值为22.35~489.04 U/g,可信限率(FL)13.15%~38.97%,效价相差近21.88倍,麻黄平喘生物效价与麻黄碱及伪麻黄碱总量之间相关不显著;采用聚类分析法能够将不同平喘生物效价值的麻黄区分开来,37份麻黄药材中有24份生物效价值高于对照药材,占麻黄样品总数的64.86%。结论平喘生物效价值可以定量评价不同产地麻黄的质量。     

响应面法优化超声辅助提取六神曲中总黄酮的工艺研究

目的:研究响应面法优化超声辅助提取六神曲中总黄酮的工艺条件。方法:以六神曲为原料,以总黄酮提取率为响应值,通过单因素法考察提取时间、料液比和溶剂浓度对六神曲提取效果的影响。根据Box-Behnken原理,采用3因素3水平响应面试验设计进行优化。结果:溶剂浓度对六神曲的提取效果影响最大,其次是提取时间和药材重量。响应面法优化得六神曲中总黄酮超声提取工艺的最适条件为:超声时间28 min、乙醇浓度77%、料液比13 g:30 mL,在此条件下六神曲中总黄酮提取率为0.046%,模型预测值为0.049%,二者相对偏差小于5%。结论:方程拟合良好,说明响应面优化所得的六神曲提取工艺稳定、可行。     

基于抗凝血活性的丹红注射液生物效价测定方法的建立

目的 以凝血酶时间(thrombin time,TT)为指标,建立丹红注射液(Danhong Injection,DHI)抗凝血生物效价测定方法,以评价其质量。方法 收集10批次合格DHI,同时采用光照、高温、暴露进行稳定性加速处理,共得样品40批。工作参照物的制备采用丹酚酸B、羟基红花黄色素A与辅料1∶1∶8混合,并调制成40 mg/mL。按照“量反应平行线(3.3)法”设计抗凝血活性测定实验,所用的血浆为4只家兔等比混合的血浆,药物剂间距为1∶0.8,半自动凝血分析仪测定TT值,对线性关系、可靠性、精密度、重复性、稳定性进行考察,优化并确定检测条件,即反应体系为100μL血浆+工作参照物或样品溶液50μL+凝血酶试剂100μL,对样品开展生物效价检测。结果 工作参照物和DHI在20～40 mg/mL时,与TT值线性关系良好,r值分别为0.982 7、0.969 6。生物效价结果表明工作参照物和合格的DHI均具有显著的抗凝血活性,且结果能通过可靠性检验,10批次DHI的效价值范围为3700～4300 U/mL;与加速处理的样品生物效价测定结果比较,暴露、光照处理DHI样品可被全部检出...     

NIR结合LS‒SVM用于六神曲发酵过程质量监测的适用性研究

目的:考察近红外光谱分析(NIR)技术结合最小二乘支持向量机(LS-SVM)用于六神曲发酵过程质量监测的适用性。方法:利用近红外光谱仪获取67个发酵过程六神曲样品在400-2 500 nm范围内的光谱数据,并用Folin-酚法与DNS法分别测定了六神曲样品的蛋白酶与淀粉酶活力,运用LS-SVM建立蛋白酶与淀粉酶活力的预测模型。结果:蛋白酶近红外模型的Rc与Rp值分别为0.975,0.938;RMSEC与RMSEP分别为5.297,9.795;淀粉酶近红外模型的Rc与Rp值分别为0.987,0.973;RMSEC与RMSEP分别为7.215,6.864。结论:此模型可用于六神曲发酵过程中蛋白酶与淀粉酶活力的定量分析,为六神曲发酵过程质量参数的在线检测奠定了基础。     

LC-MS法结合化学计量学法探讨发酵时间对六神曲中化学成分的影响

目的 采用LC-MS法结合化学计量学分析法探究不同发酵时间六神曲中葫芦巴碱、没食子酸、原儿茶酸、原儿茶醛、隐绿原酸、苦杏仁苷、香草酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、东莨菪内酯、阿魏酸、紫云英苷、槲皮素、槲皮苷、异绿原酸B、木犀草素、芹菜素的含量,并筛选差异性标志物。方法 该药物的分析采用Hypersil GOLD C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.9μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温30℃。采用主成分分析(PCA)对六神曲进行分类和评价,再借助正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)法筛选出差异性标志物,并通过聚类热图进行区分。结果 发酵过程中,葫芦巴碱、原儿茶醛、苦杏仁苷、芦丁、金丝桃苷、东莨菪内酯、紫云英苷质量分数呈下降趋势,没食子酸、原儿茶酸、香草酸、木犀草素、芹菜素质量分数呈上升趋势,隐绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、槲皮素、槲皮苷、异绿原酸B质量分数存在波动;PCA结果显示,不同发酵时间六神曲可聚类为4个发酵阶段;OPLS-DA结果表明,原儿茶酸、苦杏仁苷、金丝桃苷、东莨菪内酯、阿魏酸、异绿原酸B为差异性标志...     

基于NMR指导的六神曲成分研究

目的研究六神曲的化学成分。方法运用各种色谱技术分离六神曲的化学成分,并利用理化性质和波谱技术鉴定其结构。结果从六神曲中分离得到11个成分,分别鉴定为5-二十五烷基间苯二酚(1)、5-十七烷基间苯二酚(2)、5-二十一烷基间苯二酚(3)、5-二十三烷基间苯二酚(4)、(9S,10E,12Z)-9-hydroxy-10,12-octadecadienoic acid(5)、trans-4-hydroxy-2-nonenoic acid(6)、9,10,11-trihydroxy-11(E)-octadecenoic acid(7)、(9S,12R,13S)-9,12,13-trihydroxy-10(E)-octadecenoic acid(8)、(9S,12S,13S)-9,12,13-trihydroxy-10(E)-octadecenoic acid(9)、(9S,12S,13S)-9,12,13-trihydroxy-10(E)-octadecenoic acid methyl ester(10)、9,12(Z)-octadecadienoic acid methyl ester(11)。结论化合物1～11均为首次从六神曲中分离得到。抗炎活性研究显示,六神曲氯仿提取物和化合物8均显示出良好的抗炎活性。     

4种消食中药的质量生物活性测定方法研究：消化酶种类选择与活力效价测定

目的 为有效评控消食类中药的质量,研究基于消化酶活力检测的消食类中药生物效价测定方法并结合传统论述以探索消食类中药的质量控制方法。方法 以山楂、六神曲、麦芽、谷芽为研究对象,筛选适宜消化酶种类;采用“质反应平行线法”建立基于酶活性的生物效价测定法,并进行方法学考察,测定10个批次各药物的生物效价;最后采用营养糊黏度测定法验证不同效价各药降低黏度的活性差异,评价酶活力效价与药物质量的相关性。结果 蛋白酶、脂肪酶与淀粉酶活力测定方法的吸光度与产物质量浓度有良好线性关系,r2均大于0.99;结合实验结果与传统论述,山楂善消肉积且蛋白酶活力效价系数为效价综合系数中的最大值,六神曲善消谷麦酒积但脂肪酶活力效价系数为效价综合系数中最大值,麦芽谷芽善消淀粉食积且淀粉酶活力效价系数为效价综合系数中的最大值,故山楂、六神曲、麦芽和谷芽分别选取蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶做标准酶。实验所用供试品制备方法的量效曲线与阳性药胃蛋白酶片相似,重复性、精密度及中间精密度考察结果均符合要求;各药10批样品的效价差异较大,山楂蛋白酶活力效价为175.40～330.66 U/mg,六神曲脂肪酶活力效价为187.36～858....     

止血生物效价用于白及品质评价的研究

采用凝血酶时间(TT)将对照物质维生素K1注射液与白及参照物质进行对比检定,对白及参照物质进行标化,建立了白及体外测定凝血酶时间的生物活性测定方法,运用"量反应平行线法"(3.3)对不同产地的白及进行止血生物效价测定。白及参照物质量效之间具有良好的线性关系(Y=66.332-23.913X,R2=0.995 3),测得不同产地白及止血生物效价为821.93~1 187.53 U·g-1,并均能通过可靠性检验(偏离直线P>0.05,偏离平行P>0.05)。该方法仪器精密度(RSD3.8%)、中间精密度(RSD 4.6%)、重复性(RSD 3.2%)、稳定性(RSD 3.7%)较好,所建立的白及止血生物效价检测方法可靠,操作简便,重复性好,可用于白及止血生物效价的测定。