结核分枝杆菌固体培养结合不同分子生物学检测的应用分析

目的探讨分枝杆菌固体培养(L-J)结合实时荧光定量PCR(FQ-PCR)、环介导等温扩增(LAMP)、线性探针杂交(LPA)和多色半巢式荧光定量PCR(GeneXpert)检测痰液中结核分枝杆菌(MTB)及耐药的临床应用价值。方法连续收集湖南省胸科医院2018年5月至2019年11月初诊肺结核疑似患者(A组)和活动性肺结核住院患者(B组)痰标本。A组进行L-J、FQ-PCR和LAMP 3种方法检测,比较联合与单独检测的病原学阳性率,计算3种方法病原学结果的一致率;B组进行L-J及绝对浓度法固体药敏试验、LPA和GeneXpert 3种方法检测,比较联合与单独检测的病原学阳性率,计算3种方法病原学和药敏结果的一致率。结果A组共检测347例患者痰标本,L-J+FQ-PCR和L-J+LAMP的阳性率分别为33.1%和28.5%,均显著高于L-J(21.6%),差异有统计学意义(χ2=11.59,P<0.01;χ2=4.42,P<0.01);3种方法病原学结果总的一致率为79.3%(275/352)。B组共检测172例患者痰标本,L-J+LPA的阳性率(57.6%)显著高于LPA(42.4%),L-J+GeneXpert的阳性率(62.2%)显著高于L-J(45.4%),差异有统计学意义(χ2=7.86,P<0.01;χ2=9.84,P<0.01);3种方法病原学检测和利福平药敏结果总的一致率分别为65.7%(113/172)和94.0%(47/50)。结论固体培养联合一种分子生物学检测技术可以提高肺结核患者病原学阳性率,适合在县、市级结核病定点医疗机构推广应用。     

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术检测333例肺结核患者痰标本的结果分析

目的探讨采用利福平(RFP)耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)检测肺结核患者痰标本的结果并进行分析。方法选择2015年1~12月该所就诊的肺结核患者痰标本333例,分别进行抗酸染色涂片镜检、Xpert MTB/RIF、传统罗氏培养法检测,使用Xpert MTB/RIF检测痰标本的结核分枝杆菌(MTB)和RFP耐药的敏感度和特异度,并与传统罗氏培养法检测结果进行一致性比较。结果 Xpert MTB/RIF检测MTB的敏感度为93.6%,特异度为92.0%,2种方法进行Kappa检验,Kappa=0.82,具有良好的一致性;RFP耐药的敏感度和特异度分别为78.6%和93.4%,2种方法的Kappa=0.78,具有良好的一致性。结论应用Xpert MTB/RIF检测肺结核患者痰标本,检测速度快,准确性高,快速获得患者是否耐药的结果,可指导临床准确用药,值得临床应用和推广。     

应用一致性检验对泌尿系结核3种检测方法的评估

目的评价结核分枝杆菌rpob基因和突变检测技术(Xpert MTB/RIF)、结核杆菌固体培养与抗酸染色镜检对泌尿系结核的诊断效能及其一致性。方法采用随机双盲、"金标准"对照的临床诊断实验设计,收集临床泌尿系结核可疑患者163例的晨尿,分别应用Xpert MTB/RIF、结核杆菌固体培养与抗酸染色镜检进行检测。以临床综合诊断作为泌尿系结核诊断的"金标准",评价3种检测方法的诊断效能并比较其检测结果的一致性。结果 163例患者尿标本使用Xpert MTB/RIF检出结核阳性51例(31.29%),结核杆菌固体培养法检出结核阳性40例(24.54%),抗酸染色镜检检出结核阳性39例(23.93%)。与"金标准"临床诊断泌尿系结核诊断比较,Xpert MTB/RIF检测和结核杆菌固体培养具有极高的一致性,抗酸染色镜检的一致性较弱。结论3种实验室检测方法均适用于临床泌尿系结核的诊断,其中结核杆菌固体培养法与临床综合诊断法具有更高的一致性。Xpert MTB/RIF不仅具有高度的一致性而且具有更高的灵敏度,适用于泌尿系结核的快速诊断。     

GeneXpert MTB/RIF系统对肺结核的诊断价值

目的评价Gene Xpert MTB/RIF系统对肺结核的诊断价值。方法对拟诊为肺结核的99例患者痰样本分别进行痰涂片抗酸染色镜检、结核分枝杆菌(MTB)培养和Gene Xpert MTB/RIF系统分子检测,对比分析结果。结果在所有拟诊病例中,Gene Xpert MTB/RIF系统、MTB培养和抗酸染色镜检的阳性率分别为29.6%、25.7%、20.2%;在确诊病例中,Gene Xpert MTB/RIF系统、MTB培养和抗酸染色镜检的阳性率分别为100.0%、100.0%、80.0%。结论 Gene Xpert MTB/RIF系统对肺结核的诊断和疗效评估具有重要价值。     

Xpert MTB/RIF检测痰标本结核分枝杆菌与利福平耐受性的临床应用研究

目的分析Xpert MTB/RIF方法用于临床快速检测结核分枝杆菌(MTB)与利福平耐受性的临床意义。方法收集2015年1-12月在惠州市结核病防治研究所及5个县区医院结核科就诊的肺结核患者痰标本552例,进行涂片镜检、Xpert MTB/RIF核酸检测和改良罗氏培养,并对培养阳性者进行药敏实验。评价各种方法 MTB检测灵敏度与特异度,对比传统药敏方法和Xpert MTB/RIF检测利福平耐药性的结果并分析。结果 Xpert MTB/RIF与改良罗氏培养法对MTB检测结果相比,敏感度95.3%、特异度93.1%;耐药性对比结果中,所有阳性标本中利福平耐药的敏感度82.1%,特异度97.8%;Xpert MTB/RIF检测MTB分级与改良罗氏培养分级一致性分析中,kappa=0.688,提示两者结果具有良好的一致性。结论 Xpert MTB/RIF可用于临床早期快速检测结核分枝杆菌与利福平耐药检测的筛查,有利于临床快速决策。     

Xpert MTB/RIF检测技术在肺结核实验室诊断中应用价值探析

目的：探讨结核分枝杆菌及利福平耐药检测(Xpert MTB/RIF)在肺结核实验室诊断中的临床价值。方法：选取2020年1月至2022年1月收治的118例疑似肺结核患者作为研究对象,所有疑似患者均采集痰液标本,开展痰培养、痰涂片抗酸染色、Xpert MTB/RIF检测,并以痰培养为金标准,分析痰涂片抗酸染色法、Xpert MTB/RIF检测诊断肺结核的临床价值;采用kappa检验验证痰涂片抗酸染色法、Xpert MTB/RIF检测诊断肺结核与痰培养的一致性。结果：118例疑似患者痰培养检出92例,其中痰涂片抗酸染色法检出80例,检出率为86.96%(80/92);Xpert MTB/RIF检测检出90例,检出率为97.83%(90/92);Xpert MTB/RIF检测检出率高于痰涂片抗酸染色法,差异有统计学意义(χ²=7.731,P=0.005);Xpert MTB/RIF检测诊断肺结核的灵敏度[96.74%(89/92)]、准确度[96.61%(114/118)]及阴性预测值[89.29%(25/28)]高于痰涂片抗酸染色法[84.78%(78/92)、86....     

Xpert MTB/RIF技术在基层定点医院肺结核病诊断中的应用价值

目的探讨Xpert MTB/RIF技术在基层定点医院肺结核病诊断中的应用价值。方法选取本院感染科门诊2014年7月至2015年9月疑似肺结核患者的痰标本185份,分别进行固体培养法、Xpert MTB/RIF检测技术和药敏试验,比较Xpert MTB/RIF检测和传统检测痰液标本中结核分枝杆菌培养及利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值。结果痰结核分枝杆菌培养阳性96份,阳性率为51.9%;以固体培养法作为金标准,Xpert MTB/RIF检测的敏感度94.8%,特异度为87.6%,阳性预测值为89.2%,阴性预测值为94.0%,Kappa值为0.826;以比例法药敏试验作为金标准,Xpert MTB/RIF检测的敏感度为86.7%,特异度为94.9%,阳性预测值为76.5%,阴性预测值为97.4%,Kappa值为0.774。结论 Xpert MTB/RIF检测快速,操作简便,硬件设施要求低,能够有效检测结核分枝杆菌及利福平耐药性,可在基层结核实验室大力推广。     

Xpert MTB/RIF在肺结核及耐药结核检测中的应用价值分析

目的评价结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测(Xpert MTB/RIF)技术在耐药结核中的应用价值。方法收集2015年1月至2016年12月该院住院治疗的可疑耐药肺结核及初筛痰涂片阳性自愿行Xpert MTB/RIF及痰培养检查的161例患者,以痰培养及药敏试验结果为金标准,比较不同检测方法检出结核杆菌及耐药菌的情况。结果 63例可疑耐药肺结核患者,Xpert MTB/RIF检测方法均检出结核分枝杆菌,其中耐药24例,痰培养检出23例耐药,以痰培养耐药结果为金标准,Xpert MTB/RIF检测法的灵敏度及特异度分别为100.00%和97.50%;98例初筛痰涂片阳性病例中,Xpert MTB/RIF检测法均检出结核分枝杆菌,检出耐药9例,痰培养检出8例耐药,以痰培养耐药结果为金标准,Xpert MTB/RIF检测法的灵敏度及特异度分别为100.00%和98.89%。结论 Xpert MTB/RIF是一种快速、有效、准确的诊断耐药结核病的方法,对结核杆菌及耐药结核菌检测的灵敏度和特异度都较高,可作为临床检出结核菌及耐药结核筛查首选方法。     

Xpert MTB／RIF检测技术与痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌的比较

目的：探讨痰液XpertMTB／RIF检测技术与涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌的结果及二者之间的符合程度。方法：本文对475例结核病患者或疑似结核病患者的痰标本分别做XpertMTB／RIF和涂片抗酸染色检测,并将结果进行比较。结果：两种方法检测结核杆菌共有165例阳性,阳性率为34．74％。其中涂片检查阳性90例,阳性率为18．95％;Xpert检测阳性153例,阳性率为32．21％;两种方法均阳性78例,均阴性310例,二者符合率达81．74％;二者比较,差异非常显著（P〈0．001）。结论：XpertMTB／RIF检测MTB速度快,灵敏度高,特异性强,同时还可以检测结核杆菌对利福平的药敏结果,方法简单、操作便捷、安全,对基层单位结核病患者的早期发现、早期诊断及治疗具有重要的意义。     

肺结核患者结核菌L型感染及其荧光定量PCR检测的意义

目的评价荧光定量PCR（FQ-PCR）和结核菌（MTB）L型检测的临床价值。方法收集61例痰阴性肺结核患者痰、血标本分别进行分枝杆菌及其L型培养,并采用染色、免疫组化和FQ-PCR技术进行检测和鉴定,部分标本透射电镜观察。结果痰MTB及其L型检测的阳性率为72.4%,血液阳性率为28.3%,而痰血检测总的阳性率为75.4%。痰直接FQ-PCR33.3%,培养后FQ-PCR40.4%,总阳性率45.5%。血直接FQ-PCR0/35,培养后FQ-PCR 22.5%。痰血FQ-PCR阳性率比较,χ^2=5.3028,P〈0.05,差异有统计学意义,痰阳性率明显高于血。痰和血FQ-PCR阳性率低于相应的涂片和培养结果。结论分枝杆菌L型的分离和FQ-PCR的应用可提高痰菌阴性肺结核的诊断效率。FQ-PCR阴性不能完全排除结核病,但可用于痰及血中分枝杆菌L型的辅助诊断,尤其对不易从感染部位取得标本的患者更有帮助。     

支气管肺泡灌洗液和痰液Xpert MTB/RIF检测对肺结核临床诊断的价值分析

目的 分析支气管肺泡灌洗液和痰液结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测(Xpert MTB/RIF)在肺结核临床诊断中的应用价值.方法 选取2019年1月至2021年5月在川北医学院附属医院送检肺泡灌洗液或痰液进行Xpert MTB/RIF的1352例可疑肺结核患者作为研究对象,根据临床诊断分为肺结核组(699例)和非肺结核...     

环介导等温扩增技术检测肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌

目的建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测肺结核患者痰标本和分枝杆菌阳性培养物中的结核分枝杆菌(MTB)。方法选择临床可疑肺结核患者痰标本121份、MTB阳性分离物14份,非结核分枝杆菌(NTM)阳性分离物14种共31株,用涂片抗酸染色镜检、罗氏固体培养基培养、LAMP技术分别进行检测,用LAMP技术对人MTB标准菌株H37Rv及卡介苗(BCG)进行检测,判断LAMP检出限并评价敏感性和特异性。结果涂片法抗酸杆菌检出率为38.02%(46/121),培养法MTB检出率为42.15%(51/121),LAMP法MTB检出率为49.28%(56/121),差异无统计学意义(χ2分别为3.146和1.247,P均>0.05)。对121例可疑肺结核患者痰标本进行MTB检测,以罗氏固体培养基培养结果为金标准,LAMP检测结果的敏感性为92.16%(47/51),特异性为87.14%(61/70),二者无显著性差异(χ2=1.247,P>0.05),且一致性强(kappa=0.78,P<0.01)。LAMP能准确分辨MTB和NTM阳性分离物,对H37Rv、BCG检测结果均为阳性;对H37Rv菌株的检出限为120 CFU/mL。结论 LAMP检测MTB敏感性和特异性高,操作简便易行、快速准确,不需要昂贵的检验设备,适于基层医院结核病诊断的推广和应用。     

Xpert MTB/RIF检测技术诊断结核病及其耐药的研究

目的探讨多色巢式实时荧光定量核酸扩增(Xpert MTB/RIF)检测技术在初诊疑似肺结核患者中的诊断价值及其耐药性。方法收集2015年1-6月在上海市松江区中心医院就诊的初诊疑似肺结核患者430例,对其痰标本同时进行痰涂片抗酸染色、MGIT 960液体分枝杆菌培养和Xpert MTB/RIF检测,比较3种方法诊断结核病的阳性率和符合度。同期将其中91例液体培阳的标本送至上海市疾病预防控制中心(CDC)进行分枝杆菌菌群鉴定(PNB法、TCH法和28℃培养试验)和一线抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇)的敏感性试验(传统比例法),以上海市CDC鉴定结果为标准,分析Xpert MTB/RIF检测方法的敏感度、特异度和准确度及其耐药性。结果 430例患者中,痰涂片抗酸染色、液体培养和Xpert MTB/RIF 3种检测方法的分枝杆菌检出率分别为14.19%、26.74%、22.79%。Xpert MTB/RIF检测法与液体培养法的符合率为89.53%(385/430),与涂片法的符合率为90.93%(391/430)。91例液体培养阳性患者,经上海市CDC菌群鉴定,84例为结核分枝杆菌复合群(MTC),7例为非结核分枝杆菌,Xpert MTB/RIF检测方法的敏感度为77.38%(65/84),特异度为100.00%(7/7),准确度为79.12%(72/91)。Xpert MTB/RIF检测出的4例利福平耐药患者和61例利福平敏感患者与比例法药敏鉴定结果完全一致。结论 Xpert MTB/RIF检测方法阳性率明显高于涂片法,与传统液体培养法有较好的一致性。该方法具有较高的敏感度、特异度和准确度。     

环介导等温扩增技术快速检测结核分枝杆菌核酸

摘要:目的：建立一种快速准确的检测结核分枝杆菌（MTB）核酸的环介导等温扩增（LAMP）方法。 方法：以重复插入序列IS6110为目的基因,设计LAMP引物,特异检测MTB核酸。用本法与痰涂片抗酸染色镜检法、实时荧光PCR法对100例可疑患者痰标本进行对比检查。 结果：LAMP法特异性强,仅扩增MTB复合群核酸;灵敏度高,检测限达100 fg;而实时荧光PCR检测限为1 pg。对100例疑似结核病患者痰液标本检测,涂片抗酸染色法、LAMP法、实时荧光PCR法的阳性率分别为28%、39%和38%。 结论：本研究建立的LAMP方法检测MTB核酸特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为临床快速检测MTB的新方法。     

Xpert MTB/RIF Ultra在结核分枝杆菌及利福平耐药检测中的价值

目的通过与Xpert MTB/RIF比较,评价Xpert MTB/RIF Ultra在结核分枝杆菌及利福平耐药检测中的价值。方法选取出现肺结核症状的患者,根据是否确诊肺结核以及治疗情况分为结核检测组(CDG)和耐药结核组(DRG)。分别采用Xpert MTB/RIF和Xpert MTB/RIF Ultra检测2组患者的痰标本,以MGIT960液体培养作为参考方法,比较2种方法在结核分枝杆菌及利福平耐药检测中的敏感性和特异性。结果 Xpert MTB/RIF Ultra在结核分枝杆菌检测中的敏感性(96.1%)高于Xpert MTB/RIF(85.2%),特异性相同;Xpert MTB/RIF Ultra在抗酸染色涂片阴性患者的结核病检测中敏感性(75.5%)明显高于Xpert MTB/RIF(22.6%)。结论 Xpert MTB/RIF Ultra在结核病患者尤其是在抗酸染色涂片阴性患者结核病检测中的价值优于Xpert MTB/RIF。     

5种结核分枝杆菌检测方法的临床应用价值研究

目的评价5种结核分枝杆菌检测方法对肺结核的辅助诊断价值。方法统计2018年1-10月在广州医科大学附属第一医院住院的患者,分为临床诊断肺结核患者和临床诊断非结核普通住院患者共209例,用结核培养法、PCR-荧光探针法、结核感染T淋巴细胞酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)法、抗酸染色法、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)法分别进行检测,比较这5种方法在临床诊断中的价值。结果结核培养法、抗酸染色法、PCR-荧光探针法、T-SPOT.TB法、Xpert MTB/RIF法阳性率分别为16.8%、23.4%、39.2%、53.0%、52.2%。结核培养法灵敏度为52.17%,特异度为100.00%;抗酸染色法灵敏度为42.45%,特异度为96.67%;PCR-荧光探针法灵敏度为76.00%,特异度为97.98%;T-SPOT.TB法灵敏度为91.67%,特异度为79.80%;Xpert MTB/RIF法灵敏度为99.09%,特异度为100.00%。结论Xpert MTB/RIF法是最值得推荐的方法,也是唯一可以作为诊断结核感染的分子生物学方法,如果能够联合这几种方法,可以快速、准确地对结核感染进行诊治。     

Xpert MTB/RIF技术用于结核分枝杆菌联合检测的研究

目的评价Xpert MTB/RIF用于结核分枝杆菌联合检测的临床价值。方法收集汕头市2015年1月至2016年4月2 284例疑似结核病患者标本,应用离心浓缩涂片法、BACTEC MGIT-960液体培养法、结核分枝杆菌DNA荧光定量法(TBDNA)、结核杆菌RNA恒温扩增检测(SAT TB-RNA)、Xpert MTB/RIF技术分别进行检测,Xpert MTB/RIF利福平耐药结果与线性探针结核分枝杆菌耐药快速检测系统(HAIN)检测结果比较。结果 2 284例患者中1 097例为活动性结核病患者、1 187例为非结核患者,Xpert MTB/RIF阳性检出率最高,与离心浓缩涂片、BACTEC MGIT-960液体培养、TB-DNA、SAT TB-RNA比较差异均有统计学意义(χ~2=31.23,P0.01;χ~2=4.94,P0.05;χ~2=6.15,P0.05;χ~2=41.77,P0.01);Xpert Mtb/RIF法敏感性[50.14%(550/1 097)]和特异性[100.00%(1 187/1 187)],高于TB-DNA+SAT TB-RNA联合检测的45.49%(499/1 097)、97.98%(1 163/1 187),二者比较差异有统计学意义(χ~2=4.75,P0.05;χ~2=24.25,P0.01)。以HAIN检测结果为金标准,Xpert Mtb/RIF检测RIF耐药的敏感性为100.00%(60/60),特异性为99.52%(418/420),两种方法具有较好的一致性(Kappa=0.98)。结论 Xpert MTB/RIF敏感性和特异性高,可用于取代TB-DNA+SAT TB-RNA+HAIN与离心浓缩涂片法、BACTEC MGIT-960液体培养及一二线药敏试验组成结核分枝杆菌联合检测,既能在2h内报告结核分枝杆菌及利福平耐药结果,又能在后续培养出结核分枝杆菌进行一二线药敏试验供临床调整治疗方案,操作更加简便快速且易于开展,对结核病和耐多药结核病的快速诊断具有极高的应用价值。     

噬菌体生物扩增法直接检测痰标本中结核分枝杆菌异烟肼耐药性的研究

目的利用噬菌体生物扩增法(PhaB法)直接检测痰结核分枝杆菌(MTB)对异烟肼的耐药性,以建立一种特异性强,敏感性高的MTB药敏试验方法。方法选取临床上初步诊断为耐药肺结核的40例患者痰标本,使用PhaB法直接检测痰MTB对异烟肼的耐药性,同时用绝对浓度法检测异烟肼的耐药性,将两者结果进行比较。结果 40例患者痰标本PhaB法与绝对浓度法异烟肼耐药性检测结果均阳性22例,均阴性11例,两法不相符7例。以绝对浓度法检测结果为判断标准,则PhaB法异烟肼耐药性检测的敏感性、特异性、准确性分别是78.57%(22/28)、91.67%(11/12)、82.50%(33/40);Kappa检验,k=0.63 P=0.00<0.05。结论 PhaB法直接检测痰MTB对异烟肼的耐药性简便快速,具有较高的敏感性、特异性和准确性,且与绝对浓度法有较好的一致性。     

Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的准确性与结核病患者痰细菌载量的相关性：一项天津市的回顾性研究

目的 分析Xpert MTB/RIF不同细菌载量(1+、2+、3+、4+)检测结核分枝杆菌利福平(RIF)耐药的准确性,为有效临床药敏结果判断提供参考。方法 回顾性收集2020年1月至2021年12月天津市结核病控制中心参比室接收的1 936份结核病疑似患者痰标本的液体BACTEC MGIT960培养阳性检测结果,排除16份非结核分枝杆菌后,1 158份XpertMTB/RIF阳性标本的结果纳入分析,对Xpert MTB/RIF检测阳性且液体BACTEC MGIT960培养阳性的1 142例结核分枝杆菌(MTB)菌株进行常规培养法体外药物表型药敏试验(DST)。应用SPSS 19.0软件进行统计学分析,结果采用配对χ²检验,P<0.05为差异有统计学意义;两种检验方法的一致性采用Kappa检验。结果 1 936份液体BACTEC MGIT960培养阳性标本中XpertMTB/RIF检测结核的阳性筛查率为59.81%,XpertMTB/RIF检测结核的细菌载量1+～4+中,RIF耐药的检出率分别为8.88%、14.91%、11.37%、15.15%。以表型DS...     

Xpert MTB/RIF在快速诊断肺结核及利福平耐药中的临床应用

目的探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)在肺结核诊断及其耐药性检测中的临床应用价值。方法收集408例结核患者标本,同时采用抗酸染色法、固体培养法及Xpert MTB/RIF检测,并对其结果进行分析比较。结果 408例标本抗酸染色法、固体培养法和Xpert MTB/RIF检测出结核分枝杆菌的阳性率分别为25.00%(102/408)、42.16%(172/408)和58.09%(237/408)。经统计学分析,Xpert MTB/RIF阳性率高于抗酸染色法和固体培养法,差异均有统计学意义(P0.05)。其中,固体培养法和Xpert MTB/RIF检测均为阳性的标本共168例,经比例法药物敏感试验与Xpert MTB/RIF检测利福平耐药率分别为26.19%(44/168)和27.38%(46/168),2种方法耐药率比较,差异无统计学意义(P0.05),以比例法药敏试验作为金标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感度为97.73%(43/44),特异性为97.58%(121/124)。结论 Xpert MTB/RIF可快速、准确检测结核分枝杆菌及利福平耐药性,具有重要的临床应用价值。