新型冠状病毒核酸检测模拟室内质控品的研制

摘要：目的?评价用阴性临床样本稀释假病毒原料、制备新型冠状病毒核酸检测模拟室内质控品的可行性。方法?用PBS与阴性临床样本梯度稀释噬菌体病毒样颗粒(假病毒)制备模拟室内质控品，用荧光PCR仪检测ORF1ab和N靶基因。同时加入RNase抑制剂-20 ℃保存，评价其稳定性。结果?PBS与阴性临床样本稀释制备的模拟室内质控品核酸检测Ct值差异无统计学意义，且所用试剂N靶基因的检测灵敏度大于ORF1ab基因。制备的模拟质控品在-20 ℃条件下可稳定保存60 d，且无需添加RNase抑制剂。结论?阴性临床样本作为基质稀释假病毒原料制备模拟质控品可更好地反映基质效应，可用作新冠病毒核酸检测室内质控品。同时应关注靶基因检测灵敏度不同造成的单靶标阳性样本，防止漏检。     

新型冠状病毒核酸检测弱阳性质控失控分析及影响因素

<正>新型冠状病毒肺炎(新冠肺炎,COVID-19)疫情在世界范围内持续流行,引发疫情的新型冠状病毒(新冠病毒,2019-nCoV)基因组不断变异,影响病毒的生物学特性。根据《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》(试行第九版),新冠病毒核酸检测阳性为确诊的首要标准[1]。各医疗机构应当加强核酸检测的质量控制,确保检测结果准确可靠。按照《新型冠状病毒核酸检测工作手册(试行第二版)》要求[2],实验室应开展室内质控,     

血液核酸筛查室内质控品浓度选择的探讨

<正>献血者血液检测HBV、HCV和HIV病原体的核酸能有效缩短病原体感染性指标检测的窗口期,降低输血传播性疾病风险,提升血液安全[1～3]。目前我国采供血机构正在逐步推广血液核酸检测技术的应用,而在《血站技术操作规程     

自制新型冠状病毒抗体检测质控品及其临床应用评价

目的 制备新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体检测质控品,并评价其在各检测系统中的性能指标和临床应用情况。方法 采用抗SARS-CoV-2核衣壳蛋白（nucleocapsid protein, NP）单克隆抗体和抗SARS-CoV-2刺突单克隆抗体的IgG或（和）IgM阳性质控物制备SARS-CoV-2抗体检测质控品,并对其适用性、均匀性和稳定性进行评价。稀释SARS-CoV-2抗体检测质控品制备SARS-CoV-2抗体检测调查品,并下发至各参评实验室,依据回报结果,对其临床应用进行评价。结果 SARS-CoV-2抗体检测质控品适用于17种国家药监局批准的SARS-CoV-2抗体检测系统,适用性良好。SARS-CoV-2抗体检测质控品在胶体金检测系统D的均匀性符合要求,在化学发光检测系统K,J和I检测系统中的检测结果（S/Co）分别为397.67±23.83(F=0.77,P=0.74),2.80±0.23(F=0.38,P=0.76)和36.09±0.50(F=0.55,P=0.91),均匀性符合要求。SARS-CoV-2抗体检测质控品开瓶14天内的t值范围在0.182～1.98...     

不同方法处理核酸片段的对比研究

目的 探讨不同处理方法对核酸片段的清除效果,为核酸检测实验室尤其是基层实验室寻求简单方便又行之有效的实验室污染处理方法。方法 分别用75%乙醇、含氯消毒剂、紫外线处理2种不同长度(120 bp和1 600 bp)的高水平核酸片段,利用琼脂糖电泳技术及凝胶成像技术验证核酸片段的完整性,比较3种方法对核酸片段的清除效果。结果 75%乙醇、紫外线对核酸片段的清除无明显效果,含氯消毒剂在有效氯终水平≥2 500 mg/L时能有效清除核酸片段。结论 84消毒液是最常见的含氯消毒剂,配置适合水平的84消毒液能有效处理实验室的核酸污染,值得在基层实验室大力推广应用。     

4种不同核酸提取试剂在自建新型冠状病毒核酸检测系统中性能比较

目的 比较不同品牌核酸提取试剂盒在自建新型冠状病毒核酸检测中的性能差异,为临床实验室自建新型冠状病毒核酸检测系统提供参考依据。方法 将第3方新型冠状病毒核酸检测质控品稀释成4种浓度,采用上海之江生物科技股份有限公司(A)、重庆中元生物技术有限公司(B)、广州和信生物科技有限公司(C)及杭州博日科技有限公司(D)4个不同厂家核酸提取试剂组成的4种自建检测系统进行检测,比较其阳性检出率及批内重复性。结果 在不同浓度样本中,D品牌提取试剂盒提取的样本结果阳性率最高,靶基因检出率最高;B品牌扩增结果的Ct值最小,提取产物浓度最高。结论 不同品牌核酸提取试剂的提取性能在自建检测系统中存在一定差异,实验室在自建核酸检测系统时,选择核酸提取试剂盒时应进行充分验证,以保证检测结果的准确性。     

血气质控品检测结果的影响因素探讨

目的探讨影响血气质控品检测结果的主要原因。方法通过改变质控品的放置温度、振摇程度、放置时间等参数,并对比改变参数前、后的检测结果。结果温度对氧分压（PO2）的检测结果影响较大。质控品温度从室温降到4℃后,PO2、pH值、二氧化碳分压（PCO2）的改变差异均有统计学意义（P〈0.01、P〈0.05）。振摇程度对检测结果无明显的影响。质控品打开后,随时间的推移,PO2逐渐增高。PO2和打开时间呈正相关（r=0.84,P〈0.01）。结论在室内血气质控品检测时,需保证质控品的贮藏温度恒定,打开安瓿后应立即完成检测。     

血气质控品检测结果的影响因素探讨

目的探讨影响血气质控品检测结果的主要原因。方法通过改变质控品的放置温度、振摇程度、放置时间等参数,并对比改变参数前、后的检测结果。结果温度对氧分压(PO2)的检测结果影响较大。质控品温度从室温降到4℃后,PO2、pH值、二氧化碳分压(PCO2)的改变差异均有统计学意义(P<0.01、P<0.05)。振摇程度对检测结果无明显的影响。质控品打开后,随时间的推移,PO2逐渐增高。PO2和打开时间呈正相关(r=0.84,P<0.01)。结论在室内血气质控品检测时,需保证质控品的贮藏温度恒定,打开安瓿后应立即完成检测。     

3种不同核酸提取方法对新型冠状病毒检测的影响

目的:研究磁珠法、离心柱法及一步法对新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸提取效率的差异。方法:2021年3月5日,在南京大学医学院附属泰康仙林鼓楼医院核酸采样室采集本科室员工咽拭子标本10份,将阳性质控品混入其中,作为模拟阳性标本。用磁珠法、离心柱法及一步法分别提取模拟阳性样本及其稀释样本RNA、人源性标本及其稀释样...     

葡萄糖酸氯己定与75%乙醇消毒液消毒皮肤对指尖血糖值的对比研究

目的探讨葡萄糖酸氯己定在临床中代替75%乙醇消毒液行皮肤消毒后测指尖血糖的可行性。方法 2013年1月-3月采用同期自身对照方法对40例术后患者进行随机指尖血糖监测,分别将患者同侧手的食指与中指随机用葡萄糖酸氯己定与75%乙醇消毒液消毒后监测血糖,对两种消毒方法测得的血糖值进行配对t检验。结果葡萄糖酸氯己定与75%乙醇消毒液消毒所测血糖值分别为(8.13±2.21)、(8.26±2.26)mmol/L,差异无统计学意义(t=1.360,P=0.182)。结论临床使用葡萄糖酸氯己定代替乙醇消毒液消毒皮肤,监测指尖血糖值安全、可行。     

2种国产新型冠状病毒核酸检测试剂检测结果的比较与分析

目的对不同的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测试剂的检测结果进行比较和分析,以供实验室参考。方法收集本院2月9日至2月11日期间共101例检测SARS-CoV-2核酸的临床样本,用两种国产试剂盒进行平行检测,根据检测结果比较试剂盒差异。结果 101例样本中试剂A阳性32例(阳性率31.68%),阴性56例(阴性率55.45%),试剂B阳性35例(阳性率34.65%),阴性53例(阴性率52.48%),两组对比,差异无统计学意义(c2=0.2169,P=0.8972)。试剂单通道结果统计发现两种试剂盒N检测位点检出率较ORF1a/b检测位点检出率高,其中试剂A两个通道的检出率分别为ORF1a/b:31.68%,N:44.55%;试剂B为ORF1a/b:35.64%,N:40.59%且14例确诊患者检测结果显示两种试剂盒对于N位点检出的Ct值非常接近。结论本研究中两种SARS-CoV-2核酸检测试剂的检出率无明显差异,两种试剂盒的N位点检出率都较ORF1a/b高,且两种试剂盒对于N基因检测结果相似。     

人乳头瘤病毒16和18型核酸检测用质控品制备及其应用

目的制备可模拟真实临床标本的HPV-16和HPV-18核酸检测用质控品,并用于上海地区临床实验室的室间质量评价。方法分别选择整合有HPV-16和HPV-18 L1基因的宫颈癌细胞系(Siha和Hela)进行培养,收集细胞后用HPV国际标准品定值并分装,对其均匀性和稳定性进行评价,然后将样本盘发送至参评实验室,对回报结果进行分析评价。结果均匀性评价结果显示质控品间均匀性良好,稳定性评价结果表明质控品检测结果随时间延长无明显趋势变化。参评实验室对高浓度样本的检测符合率较高,低浓度样本的检测符合率较低。对于不分型项目,26%参评实验室由于上报假阴性结果导致出错。对于分型项目,不同检测方法的结果间没有显著差异,样本检测出错主要是因为错检或漏检某一亚型所致。结论制备的核酸检测用质控品的均匀性和稳定性良好,可有效用于临床实验室室间质量评价。质评结果显示上海地区参评实验室HPV核酸检测质量整体较好,个别实验室检测能力尚需提高。     

不同核酸提取及扩增系统组合检测新型冠状病毒核酸的效能比较

目的 探讨不同核酸提取及扩增系统组合检测新型冠状病毒核酸的效能。方法 收集同一时间段内使用不同核酸提取系统(提取系统a、b、c)和扩增系统(扩增系统1、2、3)组合检测结果为阴性的人源性标本的内标基因(IC基因)的Ct值,以及在不同检测批次中所使用的同一批号弱阳性质控品O、N及IC基因的Ct值。比较不同核酸提取、扩增系统组合的检测效能。结果 不同提取系统提取的人源性标本IC基因经同一扩增系统扩增,同一提取系统提取的人源性标本IC基因经不同扩增系统扩增,其Ct值差异均有统计学意义(P<0.05)。除部分检测系统组合(提取系统a与扩增系统2/3组合、提取系统a/b与扩增系统3组合检测弱阳性质控品N基因;提取系统a与扩增系统2/3组合、提取系统a/c与扩增系统2组合、提取系统b与扩增系统1/3组合检测弱阳性质控品O基因;提取系统a/c与扩增系统3组合、提取系统a/c与扩增系统2组合检测弱阳性质控品IC基因)检测的Ct值差异无统计学意义(P>0.05)外,其他不同提取系统提取的核酸由同一扩增系统扩增,同一提取系统提取的核酸由不同扩增系统扩增,其IC、O、N基因Ct值差异均有统计学意...     

不同灭活温度对新型冠状病毒核酸检测的影响

目的 探讨不同灭活温度处理对新型冠状病毒核酸检测的影响.方法 收集该中心2020年1月25至2月25日采集的新型冠状病毒核酸检测阳性标本14份,每份标本分别采取未灭活56℃、35 min和65℃、15 min恒温金属浴灭活处理,比较未灭活标本和灭活标本循环阈值(Ct值),并进行统计学分析.结果 未灭活组和56℃、35 ...     

不同标本前处理方法对新型冠状病毒核酸检测结果的影响

目的 分析不同标本前处理方法对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测结果的影响.方法 选取该院SARS-CoV-2核酸检测结果为阳性的18份未灭活咽拭子标本为研究对象.分别采用56℃金属浴30 min、56℃金属浴60 min、56℃水浴30 min、56℃水浴60 min、化学裂解15 min、化学裂解30 m...     

RNA病毒扩增检测的质控品和标准品研究进展

RNA病毒如丙型肝炎病毒(HCV)、人免疫缺陷病毒(HIV)、严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)等的核酸检测对于感染的早期诊断和抗病毒治疗疗效的动态观察具有重要价值。自1983年发明聚合酶链反应(PCR)技术以来，出现了基因扩增的概念。目前多采用核酸扩增技术(NAT)检测病毒RNA，最常用的是逆转录(RT)-PCR方法。核酸扩增检测想得到可靠的结果，必须使用质控品进行严格的质量控制，而对病毒进行定量测定，通常还须有病毒RNA标准品。目前RNA病毒扩增检测的质控品和标准品分为两大类，一是裸露的RNA片段，二是内含特定RNA的病毒样颗粒或称之为带盔甲的RNA(armored RNA)。     

贵州省新型冠状病毒核酸检测质量现场考核结果分析

目的针对省内34家2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测实验室进行技术考核,确保SARS-CoV-2核酸检测结果的可靠性;对SARS-CoV-2不同厂家的核酸检测试剂盒的检测性能进行比较和分析,为各实验室对试剂盒的选择提供参考依据。方法将10批考核品(3批阴性、2批弱阳性、5批阳性)分别下发给各检测机构,并选取6种国产试剂(A～F)进行检测,34家检测机构分别选取一种试剂对这10批考核品进行RNA提取和扩增,根据各检测机构的检测结果与考核品预期结果的比较,分析各检测机构的检测能力以及不同厂家试剂的性能。结果 34家检测机构参与考核,在规定时间内收到30家的结果反馈,这30家检测机构的检测结果总符合率为100%,其中阳性样品符合率、阴性样品符合率、全省疾控系统总符合率、全省医疗机构总符合率、第三方机构总符合率均为100%。本次考核,共涉及6个厂家试剂,各试剂检出率均为100%;试剂A检测结果的平均循环阈值(Ct值)较试剂B小,且试剂A检测结果的变异系数(CV)波动较试剂B小,在9%～12%之间波动,而试剂B的CV波动在6%～18%,由此可见,试剂A的批间重复性较试剂B要好。在弱阳性样品202002和202006的检测中,试剂B的重复性均较试剂A好。结论核酸检测阳性率低的问题,主要是由患者疾病发展过程、标本采集、标本保存与运输等问题引起,与指定核酸检测机构的检测能力及试剂质量关系不大。     

不同检测系统对新型冠状病毒核酸的检测结果分析

目的评价不同检测系统对新型冠状病毒(2019-n Co V)核酸的检测能力差异,为选择2019-n Co V核酸检测试剂提供指导。方法用本实验室在用的提取试剂、扩增试剂及扩增仪组合成8个检测系统,分别对国家卫生健康委临床检验中心2019-n Co V室间质评发放的12个样本进行检测。结果纳入统计指标的10个样本中,有5个2019-n Co V阴性样本,8个检测系统对5份阴性样本均为未检出,与预期结果相符,另5份2019-n Co V阳性样本中,8个检测系统均未检出202010(128 copies/m L),均检测出202004、202008、202011。对202002(640 copies/m L)弱阳性样本,只有B及D 2个检测系统检出,其余均未检出。B及D检测系统扩增试剂均为e扩增试剂,检测的符合率总体优于f扩增试剂。N区的阳性率高于ORF区,样本2019-n Co V拷贝数越低,这一现象越显著。A-D检测系统检测到的ORF1ab基因的阳性率高于E-H检测系统,A-D检测系统均使用的是b快速提取试剂,而E-H检测系统使用的是a提取试剂,提取试剂的提取效率对检测结果影响较大。结论...     

一种国产新型冠状病毒核酸检测试剂盒的性能验证

目的　评估一种国产新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测试剂盒是否满足临床SARS-CoV-2 核酸检测要求。 方法　采用15 例SARS-CoV-2 核酸阳性和15 例SARS-CoV-2 核酸阴性的临床样本,1 支SARS-CoV-2 RNA 干粉标准 品,5 支阳性定值参考品和5 支阴性定值参考品,对该试剂盒检测SARS-CoV-2 阴性和阳性符合率、精密度、检出限和 交叉反应进行验证。结果　20 例阴性和20 例阳性样本的N 基因和ORF1ab 基因阴阳符合率均为100%。2 例阳性样本 ORF1ab 基因重复性CV 为0.41%~0.56%,优于N 基因重复性,N 基因和ORF1ab 基因重复性、实验室总不精密度CV 均＜ 5%。检出限重复20 次的检出率为100%,SARS-CoV-2 与常见呼吸道病原体、与SARS-CoV-2 同种属病毒（人副 流感病毒1 型、鼻病毒、MERS,SARS,甲型流感病毒、乙型流感病毒、冠状病毒HKU1,NL63,229E 和OC43）之间不 产生交叉反应。 结论　该试剂盒阴阳性符合率一致,重复性好。SARS-CoV-2 与常见呼吸道病原体,与SARS-CoV-2 同 种属病毒不会产生交叉反应,适用于临床实验室和检测机构进行SARS-CoV-2 核酸筛查。