翻白草含药血清对高糖培养肾小管上皮细胞增殖作用及其对RhoA/ROCK信号通路的影响

目的:探讨翻白草含药血清对高糖培养小鼠肾小管上皮细胞增殖及其对转分化机制的影响。方法:制备各组大鼠含药血清;10%胎牛血清(FBS)-RPMI 1640培养基培养小鼠肾小管上皮细胞,传代培养后按3 000个/孔接种于96孔培养板,分为正常组、高糖组、厄贝沙坦组及翻白草组;加入相对应6%含药血清的高糖RPMI 1640培养基;培养12,24,48,60 h时分别观察各组细胞形态,并应用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组吸光度A;高糖培养24 h后应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组肾小管上皮细胞小G蛋白(RhoA),Rho蛋白激酶1(ROCK1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和钙黏附蛋白-E(Ecadherin)蛋白表达情况。结果:高糖培养后肾小管上皮细胞由扁平不规则的多角形变为长梭形;加入相应含药血清干预后细胞呈扁平不规则的多角形;与正常组比较,12 h时高糖组肾小管上皮细胞呈明显增殖状态(P0.05),24,48,60 h时增殖显著(P0.01);与高糖组比较,12 h时翻白草组能抑制肾小管上皮细胞增殖(P0.05),24,48,60 h时翻白草组抑制肾小管上皮细胞增殖作用显著增强(P0.01);与厄贝沙坦组比较,48,60 h翻白草组能抑制肾小管上皮细胞增殖(P0.05);与模型组比较,翻白草组E-cadherin蛋白表达显著增加,RhoA,ROCK1和α-SMA蛋白表达显著减少(P0.01)。结论:翻白草含药血清可以抑制高糖培养的肾小管上皮细胞增殖、抑制肾小管上皮细胞转分化,可能与RhoA/ROCK信号通路有关。     

消渴通痹颗粒对高糖诱导的HUVEC屏障功能的影响及保护作用

目的:观察益气活血中药消渴通痹颗粒对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)屏障功能及紧密连接蛋白(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)表达的影响,探讨消渴通痹颗粒保护糖尿病周围神经病变内皮细胞屏障功能的作用及机理。方法:将不同浓度的消渴通痹颗粒含药血清和5.5 mmol/L葡萄糖作用于HUVEC 24 h,MTT法检测细胞的存活率,确定消渴通痹颗粒含药血清的给药浓度。根据葡萄糖的浓度和消渴通痹颗粒含药血清的浓度将实验分为正常对照组,高糖模型组和消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组。各组细胞传代8代～15代时,应用HRP检测HUVEC单层通透性;流式细胞术检测HUVEC凋亡;免疫荧光法、流式细胞术检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达。结果:与正常对照组相比,5%、10%消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组的存活率明显升高(P<0.05),15%、20%消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组的存活率明显下降(P<0.05或P<0.01),故而确定消渴通痹颗粒含药血清的浓度为5%、10%、15%。与正常对照组相比,高糖模型组单层通透性增加,凋亡率显著上升,ZO-1、Occludin蛋白的表达减少、荧光信号减弱、边缘粗糙、细胞与细胞之间的连接有断裂(P<0.05或P<0.01)。与高糖模型组相比,5%、10%消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组单层通透性降低,凋亡率下降,ZO-1、Occludin的蛋白表达上调、荧光信号加强、边缘趋于光滑、细胞与细胞之间连接紧密(P<0.05或P<0.01);15%消渴通痹颗粒22.5 g/kg含药血清组单层通透性降低,凋亡率下降,Occludin蛋白表达下调、荧光信号减弱(P<0.05或P<0.01),ZO-1蛋白表达变化不明显(P>0.05)。结论:益气活血中药消渴通痹颗粒改善了高糖诱导的HUVEC细胞屏障功能,其机制可能与增加紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达有关。     

炎调方调节RhoA/ROCK信号通路对急性胰腺炎大鼠肠屏障损伤的影响

目的 观察炎调方调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho激酶（ROCK）信号通路对急性胰腺炎（AP）大鼠肠屏障损伤的影响。方法 将84只大鼠随机分为对照组、模型组、炎调方低剂量组、炎调方高剂量组、乌司他丁组、溶血磷脂酸（LPA）组、炎调方+LPA组,每组12只。除对照组外,其他组构建AP大鼠模型。造模成功后立即进行给药处理,每6小时给药1次,共4次。ELISA法检测大鼠血清中淀粉酶、脂肪酶、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、D-乳酸、二胺氧化酶（DAO）水平;HE染色检测大鼠胰腺组织和回肠组织病理变化;免疫组化染色检测大鼠回肠组织中ZO-1、Occludin蛋白平均光密度;Western blotting检测回肠组织中RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠胰腺组织和回肠组织病理损伤严重,淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6、D-乳酸、DAO水平及RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高,ZO-1、Occludin蛋白平均光密度降低（P <0.05）;与模型组比较,炎调方低剂量组、炎调方高剂量组、乌司他丁组大鼠...     

淫羊藿苷通过调节RhoA/ROCK信号通路改善AD神经元和树突损伤的机制

目的 观察淫羊藿苷对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠Ras同源基因家族成员A（RhoA）/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）信号通路的作用,并探讨其改善神经元和树突损伤的作用机制。方法 通过对大鼠双侧侧脑室注射β样淀粉蛋白1-42（Aβ_1-42, 2.5 g·L^-1）建立AD模型,并将大鼠分为模型组,淫羊藿苷低、中、高剂量组（0.03、0.06、0.09 g·kg^-1）,另设空白组。空白组和模型组按10 mL·kg^-1的剂量灌胃等体积的生理盐水。采用Morris水迷宫评估大鼠的认知功能。采用尼氏染色观察大鼠海马CA1区病理形态。采用高尔基染色观察大鼠海马CA1区树突棘密度和树突长度。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠海马中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、RhoA、ROCK1和ROCK2的mRNA表达水平。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1和ROCK2的蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著增加（P<0.01）,穿越平台次数和目标象限驻留时间显著减少（P<0.01）。与模型组比较,淫羊藿苷中、高剂量组大鼠逃避潜伏期减少（P<0.05,P<0.01）,穿越平台次数和目标象限驻留时间增加（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,模型组大鼠海马CA1区神经元数量、树突棘密度和树突长度显著减少（P<0.01）。与模型组比较,淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马CA1区神经元数量、树突棘密度和树突长度增加（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,模型组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA和蛋白表达水平下降（P<0.05,P<0.01）。结论 淫羊藿苷改善AD认知功能、神经元和树突损伤可能与抑制RhoA/ROCK信号通路相关。     

消渴通痹颗粒对糖尿病大鼠周围神经功能的影响及作用机制

目的:观察消渴通痹颗粒对糖尿病大鼠周围神经早期病变神经功能的影响, 并探讨其作用机制.方法:采用STZ诱发糖尿病(DM)大鼠模型.分别用不同剂量的消渴通痹颗粒灌胃,并与弥可保相对照,2个月后对照观察各组大鼠红细胞山梨醇(RBCS)、神经热痛阈值、运动传导速度(MNCV)及感觉传导速度(SNCV)的变化.结果:消渴通痹颗粒降低糖尿病大鼠红细胞山梨醇的含量、增加坐骨神经的热痛阈值、加快神经传导速度的综合疗效优于弥可保. 结论:消渴通痹颗粒可显著改善糖尿病大鼠周围神经功能,其作用机制可能与抑制多元醇代谢亢进途径等有关.     

蛭龙活血通瘀胶囊通过Rho/ROCK通路改善脑出血后脑水肿的实验研究

目的:研究蛭龙活血通瘀胶囊通过Ras同源基因/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Rho/ROCK)信号通路改善大鼠脑出血后脑水肿的分子机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为模型对照组、蛭龙活血通瘀胶囊1.2 g/kg组、盐酸法舒地尔注射液12 mg/kg组,每组15只,自体血注入法复制脑出血模型,另设正常对照组,干预3 d后检测脑含水量及脑系数、血脑屏障通透性(EB含量)及超微结构,WB法检测脑组织闭锁小带蛋白(ZO-1)、咬合蛋白(Occludin)、RhoA、ROCK2、p-MLC蛋白表达,qRT-PCR法检测ZO-1、Occludin、RhoA、ROCK2 mRNA水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组脑含水量及脑系数、脑组织EB含量、RhoA、ROCK2、p-MLC蛋白及RhoA、ROCK2 mRNA表达均明显升高(P<0.05或P<0.01),血脑屏障超微结构损坏明显,脑组织ZO-1、Occludin蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,各药物组脑含水量及脑系数显著减少(P<0.01),脑组织EB含量显著降低(P<0.01),血脑屏障结构明显改善,ZO-1、Occludin蛋白表达显著上调(P<0.01),ZO-1、Occludin mRNA水平均明显上调(P<0.05),RhoA、ROCK2、p-MLC蛋白表达显著下调(P<0.01),RhoA、ROCK2 mRNA水平明显下调(P<0.05)。结论:蛭龙活血通瘀胶囊可能通过抑制Rho/ROCK通路调节血脑屏障功能,改善脑出血后脑水肿。     

糖肾平含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK 信号通路影响的研究

目的：探讨糖肾平含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路的影响。方法：制备鼠含药血清;培养肾小管上皮细胞分为：正常组,高糖组,抑制剂（Y27632）组,厄贝沙坦组,糖肾平低、中、高剂量组,3000细胞/孔种于96孔板,每组8个复孔,12、24、48、60 h观察细胞,MTT法检测细胞增殖。Western blotting检测肾小管上皮细胞中RhoA、ROCK1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达。结果：高糖诱导后细胞呈梭型或不规则三角形;含药血清干预后,细胞呈扁平不规则多角形。MTT：12 h,与正常组比,各组OD值升高;24、48、60 h,与正常组比,高糖组OD值显著升高（P<0.01）;与高糖组比,各治疗组OD值有不同程度降低（P<0.05）,48 h,与Y27632组、厄贝沙坦组和糖肾平高剂量组比,糖肾平低、中剂量组OD值降低（P<0.05）;60 h,与Y27632组比,糖肾平中剂量组降低;与厄贝沙坦组比,糖肾平各剂量组OD值降低（P<0.05）;与糖肾平高剂量组比,糖肾平低剂量组升高（P<0.05）。Western blotting,与正常组比,高糖组E-Cadherin蛋白表达减少,RhoA、ROCK1和α-SMA蛋白表达增加（P<0.01）;与高糖组比,各组E-Cadherin蛋白表达增加,RhoA、ROCK1和α-SMA蛋白表达减少,高剂量组有显著差异（P＜0.01）;与Y27632组比,糖肾平高剂量组ROCK1、E-Cadherin和α-SMA蛋白表达无统计学差异（P＞0.05）,RhoA蛋白表达减少（P＜0.01）;与厄贝沙坦组比,糖肾平高剂量组RhoA、ROCK1、E-Cadherin和α-SMA蛋白表达无统计学差异（P＞0.05）。结论：糖肾平通过抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖和RhoA/ROCK信号通路相关分子的表达,从而逆转上皮-间质转分化,抑制肾间质纤维化,延缓糖尿病肾病病情进展。     

补阳还五汤对糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体纤维化及RhoA、ROCK2蛋白表达的影响北大核心CSCD

目的观察补阳还五汤(BHD)对糖尿病性勃起功能障碍(DMED)的作用,并探讨其作用机制。方法经腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病DMED大鼠模型,通过阿扑吗啡实验筛选DMED大鼠。将36只DMED大鼠分为模型组、低、中、高剂量BHD组,每组9只。另取9只同月龄SD大鼠作为正常组。低、中、高剂量BHD组分别给予12.8、25.6、51.2 g/(kg·d)BHD灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃。测量阴茎海绵体内压(ICP)及ICP曲线下面积(AUC)/平均动脉压(MAP)观察勃起功能;Masson染色检测海绵体纤维化程度;免疫组化技术检测阴茎海绵体Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶2(ROCK2)蛋白表达;Western Blot检测阴茎海绵体α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、RhoA、ROCK2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组ICP峰值、AUC/MAP、阴茎海绵体平滑肌面积、平滑肌/胶原纤维、α-SMA蛋白表达降低(P<0.05),TGF-β1、RhoA、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,中、高剂量BHD干预后ICP峰值、AUC/MAP、阴茎海绵体平滑肌面积、平滑肌/胶原纤维、α-SMA蛋白表达升高(P<0.05),TGF-β1、RhoA、ROCK2蛋白表达降低(P<0.05)。结论BHD可有效改善DMED大鼠勃起功能,其作用机制可能与抑制阴茎海绵体纤维化、维持其平滑肌含量以及抑制RhoA/ROCK2信号蛋白表达有关。     

糖肾宁含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路影响的实验研究

目的：探讨糖肾宁含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路的影响。方法：10% FBS的RPMI 1640培养细胞,培养细胞分为正常组、模型组、厄贝沙坦组和糖肾宁组,按每孔3000个细胞接种于96孔板中。每组8个复孔,加入6%的各组含药血清培养,分别于12、24、48、60 h观察细胞形态并应用MTT法检测细胞增殖情况;Western blotting检测RhoA、ROCK1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达。结果：正常组细胞呈扁平不规则多角形,高糖刺激下,细胞呈梭型,加入含药血清后呈扁平不规则多角形。MTT：24、48 h,正常组与模型组比较,有极显著性差异（P<0.01）,60 h,正常组与模型组比较,有显著性差异（P<0.05）;24 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组比较,有显著性差异（P<0.05）;48 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组、Y27632组比较,有极显著性差异（P<0.01）;60 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组、Y27632组比较,有显著性差异（P<0.05）。Western blotting：正常组与模型组、Y27632组比较RhoA蛋白表达减少,有极显著性差异（P<0.01）;糖肾宁组与模型组比较,有极显著性差异（P<0.01）;糖肾宁组与Y27632组比较,有显著性差异（P<0.05）。正常组与模型组比较ROCK1蛋白表达减少,有极显著性差异（P<0.01）;Y27632组、各治疗组和模型组比较,有显著性差异（P<0.05）。正常组与模型组比较α-SMA蛋白表达减少,有极显著性差异（P<0.01）;Y27632组、各治疗组和模型组比较,有显著性差异（P<0.05）。正常组与模型组组比较E-Cadherin蛋白表达增加,有显著性差异（P<0.05）;Y27632组与糖肾宁组比较,有显著性差异（P<0.05）;模型组与Y27632组、各治疗组比较,有显著性差异（P<0.05）。结论：糖肾宁可抑制高糖培养肾小管上皮细胞增殖和RhoA/ROCK信号通路相关分子的表达,逆转肾小管上皮细胞转分化、减轻肾间质纤维化、延缓DKD进程。     

壮药龙钻通痹方对胶原诱导型关节炎大鼠血清及滑膜Fas/FasL系统的影响北大核心CSCD

目的观察壮药龙钻通痹方对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清及滑膜Fas/FasL系统的影响。方法 60只雄性Wistar大鼠随机选取10只作为正常对照组,其余50只采用牛Ⅱ胶原蛋白与弗氏不完全佐剂混合液诱导制作CIA模型,造模后分为模型组,甲氨蝶呤组(MTX组),壮药龙钻通痹方高、中、低剂量组(简称壮药高、中、低剂量组),每组10只。模型组灌服生理盐水,MTX组按0.27mg/100g大鼠体重灌胃MTX溶液,每周1次,灌胃4周;壮药高、中、低剂量组分别予以壮药龙钻通痹方汤剂(4.32、2.16、1.08g/mL)灌胃,每日2次,灌胃30日。HE染色观察滑膜形态变化;ELISA法定量检测干预后大鼠血清、滑膜组织匀浆液Fas/FasL的表达。结果正常组中为正常滑膜细胞,模型组中滑膜细胞增殖明显,下层脂肪细胞减少或变形,成纤维细胞增多,伴有淋巴细胞及单核细胞浸润;MTX组及壮药低、中、高剂量组较模型组明显改善。与正常组比较,模型组血清及滑膜组织Fas表达升高,血清FasL表达降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,MTX组、壮药中、高剂量组血清及滑膜组织Fas表达降低,MTX组、壮药低、中、高剂量组血清及MTX组、壮药中、高剂量组滑膜组织FasL表达升高(P<0.05,P<0.01);与MTX组比较,壮药低剂量组血清及壮药低、中剂量组滑膜组织Fas表达升高,壮药高剂量组血清及滑膜组织Fas表达降低,壮药低、中剂量组血清及滑膜组织FasL表达降低,壮药高剂量组血清及滑膜组织FasL表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论调节Fas/FasL系统介导的细胞凋亡机制,减缓类风湿关节炎的病理反应可能是壮药龙钻通痹方控制与治疗类风湿关节炎的作用机制之一。     

丹参素对IUGR胎鼠脑神经细胞及脑组织Rho/ROCK信号通路的影响

目的：探讨丹参素对IUGR胎鼠脑神经细胞及脑组织Rho/ROCK信号通路的影响。方法：将40只孕鼠以随机数字表法分为正常组、IUGR组、IUGR+低剂量、中剂量、高剂量丹参素组,予以低蛋白饮食法建立IUGR模型,正常组、IUGR组于妊娠第12天尾静脉注射等体积生理盐水5.0 mg/（kg·d）,丹参素低、中、高剂量组分别于妊娠第12天起尾静脉注射等体积不同浓度丹参素溶液,低剂量组10 μg/（kg·d）,中剂量组20 μg/（kg·d）,高剂量组30 μg/（kg·d）,于自然分娩后6 h内测定胎鼠体质量,麻醉处死后行脑组织HE染色,选择RT-PCR、Western blot法对RhoA、ROCKⅡmRNA及蛋白表达进行测定,流式细胞术检测脑神经细胞凋亡率。结果：IUGR组胎鼠体质量明显低于正常组,IUGR+丹参素高剂量组胎鼠体质量高于中剂量组、低剂量组（P<0.05）。IUGR组RhoA、ROCKⅡ mRNA、蛋白表达及脑神经细胞凋亡率均高于正常组,而IUGR+丹参素高剂量组低于中剂量组、低剂量组（P<0.05）。结论：丹参素可调控Rho/ROCK信号通路并抑制其活性,以促进IUGR胎鼠脑神经细胞增殖,改善其生长发育。     

宣痹通瘀方通过调控PI3K/Akt信号通路对急性心肌缺血大鼠发挥保护作用

目的 研究宣痹通瘀方对急性心肌缺血大鼠的保护作用及其机制。方法 冠脉结扎法制备急性心肌缺血大鼠模型,选取造模成功的大鼠随机分为假手术组、模型组、对照组、宣痹通瘀高、中、低剂量组以及宣痹通瘀高剂量+LY294002(PI3K抑制剂,以下简称为LY)组。宣痹通瘀高、中、低剂量组采用不同浓度、相同体积的方法灌胃,灌胃体积均为10ml/kg/次。宣痹通瘀高剂量+LY组除按照高剂量组给药方法灌胃给药以外,每日需皮下注射LY(10mg/kg/d)。假手术组与模型组均给予等体积的0.5%羧甲基纤维素钠混悬液。对照组给予同体积麝香保心丸混悬液。每日灌胃给药1次,连续两周。各组大鼠分别于造模前、冠脉结扎后以及药物干预治疗两周后各记录一段标准Ⅱ导联心电图,测量ST段偏移的数值;经腹主动脉取血,测定血清CK-MB和LDH活性、MDA含量以及SOD活性;心肌组织取材,HE染色,观察心肌病理损伤;Evans Blue-TTC双染法检测心肌梗死面积;RT-PCR技术检测PI3KmRNA、AktmRNA的表达。结果 宣痹通瘀方能够改善急性心肌缺血模型大鼠的心电图;能够降低CK-MB、LDH、MDA含量,提高SOD活...     

消渴通痹颗粒对高血糖下缺血性周围神经病变大鼠新生血管及神经结构的影响

目的探讨消渴通痹颗粒对高血糖状态下缺血性周围神经病变大鼠新生血管及神经结构影响的观察。方法建立糖尿病大鼠坐骨神经缺血损伤模型,用不同剂量的消渴通痹颗粒灌胃,并与西洛他唑对照,2个月后取缺血一侧坐骨神经,用免疫组化法检测坐骨神经中CD34、VEGF表达,电镜观察坐骨神经髓鞘超微结构变化。结果模型组大鼠坐骨神经CD34、VEGF表达呈现代偿性增加,神经髓鞘弯曲折叠,少部分髓鞘分层、脱髓鞘,形态不规则,Schwann cell肿胀,电子密度降低,轴浆内线粒体肿胀,神经微丝减少,毛细血管轻度肿胀;中药高剂量组大鼠坐骨神经CD34、VEGF表达明显增强,与模型组比较(P<0.05,P<0.01),与低剂量组比较(P<0.01),坐骨神经呈现髓鞘板层轻度弯曲,神经维丝略有减少,可见到新生的Schwann cell及毛细血管;中药低剂量组CD34、VEGF虽较模型组表达增加(P<0.05),但神经结构改善不如高剂量组明显;西洛他唑组CD34、VEGF表达亦较模型组增多(P<0.05,P<0.01),神经结构改变同中药高剂量组。结论消渴通痹颗粒组能促进雪旺氏细胞增殖、促进新生血管形成,减轻轴突损伤,从而减轻或延缓糖尿病(DM大鼠)周围神经损伤,其高剂量组效果与西洛他唑相当。     

基于RhoA/ROCK信号通路探讨逍遥散对肝郁脾虚证大鼠胃肠动力的影响

目的：通过观察逍遥散对肝郁脾虚证大鼠胃组织RAS同源基因家族成员A(RhoA)和Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)1、ROCK2表达的影响,探讨其调节肝郁脾虚证大鼠胃肠动力的作用机制。方法：72只SD雄性大鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、氟西汀组(0.001 8 g·kg^-1)、逍遥散高(16.7 g·kg^-1)、中(8.35 g·kg^-1)、低(4.175 g·kg^-1)剂量组,每组12只。除正常组外,其余各组大鼠采用慢性束缚应激方法造模,造模同时正常组和模型组大鼠给予10 mL·kg^-1生理盐水灌胃,各药物组大鼠给予相应剂量的药物灌胃,每日1次,共21 d。造模结束后,测定各组大鼠胃排空率、小肠推进率;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃组织RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA和蛋白表达。结果：与正常组比较,模型组大鼠胃排空率、小肠推进率及胃组织RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA和...     

基于Akt/JNK/p38 MAPK信号通路探讨健脾活骨方对酒精致血管内皮细胞功能损伤的保护作用

目的 观察健脾活骨方（JPHGP）对酒精致血管内皮细胞功能损伤的保护作用,并基于蛋白激酶B/c-Jun氨基末端激酶/p38 MAPK（Akt/JNK/p38 MAPK）信号通路探索相关作用机制。方法 通过鸡胚尿囊膜实验、胸主动脉环实验和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的迁移、侵袭、黏附和管腔形成实验,在有或无酒精诱导条件下,观察JPHGP不同质量浓度8、16、32 μg·L^-1对血管新生的影响;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HUVEC中Akt、JNK、p38 MAPK等磷酸化表达水平。结果 与正常组比较,模型组动脉环周围微血管数目及长度均减少,HUVEC的迁移、侵袭、和管腔形成能力降低（P<0.05,P<0.01）;JPHGP 16、32 μg·L^-1组作用后能明显升高鸡胚尿囊膜新生血管长度（P<0.05,P<0.01）,与模型组比较,JPHGP 8、16、32 μg·L^-1组能浓度依赖地增加胸主动脉环周围微血管数量（P<0.05,P<0.01）,JPHGP 32 μg·L^-1组能升高胸主动脉环周围微血管长度（P<0.05）;JPHGP 16、32 μg·L^-1组均能增强HUVEC的迁移、侵袭、和管腔形成能力。Western blot检测结果表明,与正常组比较,模型组中的p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-Akt/Akt蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）;与模型组比较,JPHGP 8、16、32 μg·L^-1组的p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-Akt/Akt蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）,JPHGP 16、32 μg·L^-1组的p-JNK/JNK的蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。结论 JPHGP对酒精致血管内皮细胞功能损伤具有保护作用,其机制可能与激活Akt/JNK/p38 MAPK信号通路有关,相关研究结果将为JPHGP“健脾活血”功效阐明提供一定的科学依据。     

消渴方基于CN/NFAT信号通路对2型糖尿病大鼠的干预效果研究

目的探讨消渴方对2型糖尿病模型大鼠钙调磷酸酶(CN)/活化T细胞因子(NFAT)信号通路的影响。方法选取45只清洁级Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组、消渴方组各15只,模型组、消渴方组建立2型糖尿病模型。建模成功后,消渴方组大鼠给予消渴方灌胃,正常组和模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,均连续15 d。灌胃结束后,取血检测血清糖脂代谢指标[空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]、胰岛功能指标[空腹胰岛素(FINS)、胰岛β细胞功能指数(HBCI)、胰岛β细胞分泌功能指数(FBCI)];取胰腺组织,采用HE染色法进行病理组织观察,采用免疫组化SP法进行胰岛β细胞胰岛素分泌情况观察,采用酶联免疫法检测胰腺组织中氧化应激损伤指标[丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)],体外检测胰岛β细胞生长活力、存活率、凋亡率,采用Western blot法检测胰腺组织中CN/NFAT信号通路蛋白表达量。结果与正常组比较,模型组大鼠血清FPG、TC、TG、LDL-C水平及胰腺组织中MDA、TNF-α均明显升高(P均<0.05),血清HDL-C、FINS、HBCI、FBCI及胰腺组织中T-SOD均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,消渴方组大鼠血清FPG、TC、TG、LDL-C水平及胰腺组织中MDA、TNF-α均明显降低(P均<0.05),血清HDL-C、FINS、HBCI、FBCI及胰腺组织中T-SOD均明显升高(P均<0.05)。模型组大鼠胰岛组织出现萎缩,胰岛素分泌量显著减少;消渴方组大鼠胰岛组织形态与正常组相似,胰岛素分泌量增加。与正常组比较,模型组大鼠胰岛β细胞生长活力、存活率及胰腺组织中PDX-1、Bcl-2蛋白表达量均明显降低(P均<0.05),胰岛β细胞凋亡率及胰腺组织中CN、NFATc1、Bax蛋白表达量均明显升高(P均<0.05);与模型组比较,消渴方组大鼠胰岛β细胞生长活力、存活率及胰腺组织中PDX-1、Bcl-2蛋白表达量均明显升高(P均<0.05),胰岛β细胞凋亡率及胰腺组织中CN、NFATc1、Bax蛋白表达量均明显降低(P均<0.05)。结论消渴方可改善2型糖尿病大鼠胰岛功能,减轻胰腺氧化应激反应,促进胰岛β细胞再生分化成熟,抑制胰岛β细胞凋亡,其机制可能与阻断CN/NFAT信号通路相关。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马齿状回神经元树突及Wnt5a/RhoA信号通路的影响

目的 探讨左归降糖解郁方治疗糖尿病并发抑郁症的可能作用机制。方法 60只大鼠随机分为正常组、模型组、无翅型MMTV整合位点家族成员5a (Wnt5a)激动剂组、左归降糖解郁方组、左归降糖解郁方+Wnt5a抑制剂组,每组12只。除正常组外,其余各组大鼠采用高脂饲料饲养、链脲佐菌素注射和慢性温和不可预知应激联用法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型。造模成功后Wnt5a激动剂组大鼠给予双侧海马立体定位注射Wnt5a激动剂Foxy-5各5μl,连续7天;左归降糖解郁方组给予左归降糖解郁方20.52 g/(kg·d)灌胃;左归降糖解郁方+Wnt5a抑制剂组进行灌胃给药和双侧海马立体定位注射Wnt5a抑制剂Box5,给药剂量和注射方法同上。正常组和模型组给予10 ml/(kg·d)生理盐水灌胃。各组灌胃均连续4周。干预结束后采用强迫游泳实验(不动时间)和旷场实验(活动次数)评价大鼠的抑郁样行为;检测大鼠的血糖和胰岛素含量,并计算胰岛素抵抗指数;采用高尔基染色观察大鼠海马齿状回神经元的树突形态;采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)注射及免疫荧光检测齿状回神经元增殖水平;采用RT-qPCR和Western ...     

糖肾宁对高糖诱导的足细胞损伤模型Rho/ROCK通路的影响

目的：基于Rho/ROCK信号通路研究中药糖肾宁对高糖诱导足细胞损伤模型的影响。方法：高糖培养足细胞,以不同药物分组干预足细胞24 h,用罗丹明染色的鬼笔环肽法检测足细胞骨架,细胞免疫荧光检测足细胞标志蛋白Nephrin,Western Blotting检测RhoA、ROCK1、Nephrin蛋白的表达。比较不同药物或药物浓度对高糖诱导足细胞损伤模型的影响。结果：糖肾宁可改善足细胞骨架结构,下调高糖诱导的足细胞损伤模型中异常升高的RhoA和ROCK1蛋白表达,上调Nephrin表达。结论：中药糖肾宁可抑制高糖诱导的足细胞损伤模型RhoA/ROCK1信号通路,减轻足细胞骨架重构,改善足细胞损伤。     

牛膝-白芍配伍对帕金森病小鼠神经炎症及RhoA/ROCK2信号通路的影响

目的：观察牛膝和白芍不同剂量对肝阳上亢证帕金森病小鼠神经炎症及多巴胺能神经元的保护作用,并探究其作用机制。方法：将C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、牛膝-白芍低、中、高剂量组（3.25、6.5、13 g·kg-1）、司来吉兰组（0.01 g·kg-1）。采用附子汤灌胃联合1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）腹腔注射的方法制备肝阳上亢证帕金森病模型。通过小鼠转棒实验和爬杆实验评估其行为学改变;蛋白免疫印迹法（Western blot）测定小鼠脑黑质中Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)、Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶2(ROCK2)、肌球蛋白轻链1(MLC1)、α-突触核蛋白（α-synuclein）的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测脑黑质中RhoA、ROCK2、MLC1 mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)促炎细胞因子含量;透射电镜观察小鼠神经元超微结构变化。结果：与正常组比较,模型组跌落潜伏期显著缩短及爬杆时长显著增加（P<0.01...     

壮药龙钻通痹方对胶原诱导型关节炎大鼠血清及滑膜Fas/FasL系统的影响

目的观察壮药龙钻通痹方对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清及滑膜Fas/FasL系统的影响。方法 60只雄性Wistar大鼠随机选取10只作为正常对照组,其余50只采用牛Ⅱ胶原蛋白与弗氏不完全佐剂混合液诱导制作CIA模型,造模后分为模型组,甲氨蝶呤组(MTX组),壮药龙钻通痹方高、中、低剂量组(简称壮药高、中、低剂量组),每组10只。模型组灌服生理盐水,MTX组按0.27mg/100g大鼠体重灌胃MTX溶液,每周1次,灌胃4周;壮药高、中、低剂量组分别予以壮药龙钻通痹方汤剂(4.32、2.16、1.08g/mL)灌胃,每日2次,灌胃30日。HE染色观察滑膜形态变化;ELISA法定量检测干预后大鼠血清、滑膜组织匀浆液Fas/FasL的表达。结果正常组中为正常滑膜细胞,模型组中滑膜细胞增殖明显,下层脂肪细胞减少或变形,成纤维细胞增多,伴有淋巴细胞及单核细胞浸润;MTX组及壮药低、中、高剂量组较模型组明显改善。与正常组比较,模型组血清及滑膜组织Fas表达升高,血清FasL表达降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,MTX组、壮药中、高剂量组血清及滑膜组织Fas表达降低,MTX组、壮药低、中、高剂量组血清及MTX组、壮药中、高剂量组滑膜组织FasL表达升高(P0.05,P0.01);与MTX组比较,壮药低剂量组血清及壮药低、中剂量组滑膜组织Fas表达升高,壮药高剂量组血清及滑膜组织Fas表达降低,壮药低、中剂量组血清及滑膜组织FasL表达降低,壮药高剂量组血清及滑膜组织FasL表达升高(P0.05,P0.01)。结论调节Fas/FasL系统介导的细胞凋亡机制,减缓类风湿关节炎的病理反应可能是壮药龙钻通痹方控制与治疗类风湿关节炎的作用机制之一。