靶向超声微泡在卵巢癌治疗中的研究进展

近年来,随着对超声生物效应的深入研究,各种兼具诊断治疗双重作用的超声探头及靶向微泡造影剂的研制逐渐成为热点.靶向超声微泡作为一种新的基因或药物有效运载工具,通过携带基因或药物对肿瘤组织靶向释放,介导肿瘤细胞坏死、凋亡以及肿瘤微血管的栓塞和阻断,从而达到靶向治疗的目的.目前,超声微泡介导靶向治疗卵巢癌也展现出了良好的前景,本文就其研究进展进行简要综述.     

载CXCL12抗体靶向超声微泡制备及其体外卵巢癌细胞粘附性实验

目的 制备携带基质细胞衍生因子1(CXCL12)抗体的靶向超声微泡,检测其一般物理特性及体外寻靶能力.方法 通过生物素-亲和素桥接法将CXCL12抗体连接到声诺维微泡上,制备成靶向超声微泡,作为实验组,用流式细胞仪和荧光显微镜检测微泡的结合率及稳定性,体外粘附性实验观察靶向超声微泡与卵巢癌细胞的结合能力.以未连接CXC...     

LHRHa靶向紫杉醇脂质体的制备及体外抗肿瘤作用

目的：制备促黄体激素释放激素类似物（Luteinizing hormone releasing hormone analogues,LHRHa)靶向紫杉醇脂质体（Paclitaxel liposomes,PTX-Lipo）,研究其在体外增强紫杉醇（Paclitaxel,PTX）对卵巢癌A2780/DDP细胞的抑制作用。方法：采用薄膜超声法制备PTX-Lipo与LHRHa靶向紫杉醇脂质体（LHRHa-Paclitaxel liposomes,LHRHa-PTX-Lipo）,用透射电镜考察脂质体形态;高效液相色谱法测定2种PTX-Lipo的包封率;激光共聚焦法通过卵巢癌A2780/DDP细胞对4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑荧光素的摄取检测来反映细胞对NBD-Lipo与NBD-LHRHa-Lipo的摄取情况;MTT法及细胞克隆形成实验检测LHRHa-PTX-Lipo体外对卵巢癌细胞的生长抑制情况。-结果：制备LHRHa-PTX-Lipo的平均粒径123.4 nm,包封率在90%以上;A2780/DDP细胞对NBD-LHRHa-Lipo组的荧光摄取明显高于NBD-Lipo组;LHRHa-PTX-Lipo对A2780/DDP细胞的生长及克隆形成抑制明显高于PTX组及PTX-Lipo组（P＜0.05）。结论：采用薄膜超声法制备的LHRHa-PTX-Lipo可使药物在靶部位聚集,增强药物对卵巢癌细胞的抑制作用。     

LHRHa靶向紫杉醇脂质体的制备及体外抗肿瘤作用

目的:制备促黄体激素释放激素类似物(Luteinizing hormone-releasing hormone analogues,LHRHa)靶向紫杉醇脂质体(Paclitaxel liposomes,PTX-Lipo),研究其在体外增强紫杉醇(Paclitaxel,PTX)对卵巢癌A2780/DDP细胞的抑制作用。方法:采用薄膜超声法制备PTX-Lipo与LHRHa靶向紫杉醇脂质体(LHRHa-Paclitaxel liposomes,LHRHa-PTX-Lipo),用透射电镜考察脂质体形态;高效液相色谱法测定2种PTX-Lipo的包封率;激光共聚焦法通过卵巢癌A2780/DDP细胞对4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑荧光素的摄取检测来反映细胞对NBD-Lipo与NBD-LHRHa-Lipo的摄取情况;MTT法及细胞克隆形成实验检测LHRHa-PTX-Lipo体外对卵巢癌细胞的生长抑制情况。结果:制备LHRHa-PTX-Lipo的平均粒径123.4 nm,包封率在90%以上;A2780/DDP细胞对NBD-LHRHa-Lipo组的荧光摄取明显高于NBD-Lipo组;LHRHa-PTX-Lipo对A2780/DDP细胞的生长及克隆形成抑制明显高于PTX组及PTX-Lipo组(P<0.05)。结论:采用薄膜超声法制备的LHRHa-PTX-Lipo可使药物在靶部位聚集,增强药物对卵巢癌细胞的抑制作用。     

正电荷载基因纳米微泡的超声成像及靶向杀伤肝癌细胞的研究

目的：制备载基因纳米微泡并探讨其体内外超声成像和靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法：采用薄膜水化?机械震荡法制备磷脂为壳膜、六氟化硫（suphurhexafluoride,SF6）气体为核心的正电荷纳米微泡,再偶联甲胎蛋白（alpha fetoprotein,AFP）启动子的单纯疱疹病毒胸苷激酶（simplex herpes virus thymidine kinase,HSV?TK）质粒DNA制备载基因纳泡。对其形态、平均粒径、zeta电位、DNA结合力、基因转染进行检测;然后对其体内外超声成像特性进行考察;最后采用CCK?8和流式细胞（FCM）分析检测载基因纳泡联合超声靶向微泡击破（ultrasound?targeted microbubble destruction,UTMD）技术对BEL?7402和SMCC?7721细胞的杀伤作用。结果：电镜显示纳泡呈圆球形壳核结构;平均水合粒径约为667 nm,带正电;琼脂糖凝胶电泳显示质量比≥5时,纳泡可有效结合质粒DNA;体内外超声显示载基因纳泡具有良好的超声对比增强特性;RT?PCR检测显示纳泡联合UTMD能使HSV?TK在AFP阳性肝癌细胞内表达。CCK?8 和FCM分析显示载基因纳泡+UTMD组能显著抑制BEL?7402细胞的增殖和诱导其凋亡,与其他组相比差异具有显著性（P < 0.05）。结论：具有良好超声成像功能的载基因纳泡能够高效靶向杀伤AFP阳性的肝癌细胞。     

DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对人肝癌HepG2细胞凋亡及增殖的影响

目的 探讨DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂技术对人肝癌HepG2细胞凋亡以及Bcl-2、NF-κB、Caspase-8、DR5蛋白表达的影响。方法 体外培养HepG2细胞并分为9组：空白对照组（Con）,药物组（Drug）,药物联合超声组（Drug+US）,空白微泡组（MBs）,空白微泡联合超声组（MBs+US）,载药微泡组（DLLM）,载药微泡联合超声组（DLLM+US）,DR5介导的靶向载药微泡组（DR5-DLLM）,DR5介导的靶向载药微泡联合超声组（DR5-DLLM+US）。Drug、Drug+US、DLLM、DLLM+US、DR5-DLLM、DR5-DLLM+US组中的多烯紫杉醇以IC50的药物浓度（5 nmol/L）给药,Con组加入0.5 mL生理盐水,超声以0.5 W/cm2的声强辐照45s,分组处理后,继续培养细胞24 h,分别用CCK-8、TUNEL、流式细胞术检测各组细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期,并检测Bcl-2、NF-κB、Caspase-8、DR5的mRNA和蛋白表达水平。结果 与其他组相比,DR5介导的靶向载药微泡联合超声组对HepG2细胞的增殖抑制作用、凋亡诱导作用和G2/M细胞周期阻滞作用更强（P<0.001）,且该组的Bcl-2 和 NF-κB mRNA 和蛋白表达水平明显降低（P<0.001）,而 DR5 和 Caspase-8 的 mRNA 和蛋白表达水平明显升高（P< 0.001）。结论 DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂技术可通过下调Bcl-2和NF-κB表达、上调Caspase-8和DR5表达,从而增强对人肝癌HepG2细胞周期阻滞、细胞增殖抑制和细胞凋亡诱导作用,因此有望成为一种新型、有效的肝癌超声靶向治疗方法。     

载多西紫杉醇脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对人肝癌细胞增殖和凋亡影响的初步研究

目的：初步研究载多西紫杉醇脂质微泡（docetaxel-loaded lipid microbubbles,LDLM）联合超声靶向微泡破裂（ultrasound targeted microbubbles destruction,UTMD）对人SMMC-7721肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：体外培养人SMMC-7721细胞,确定适宜的多西紫杉醇浓度,细胞分为6组,比较各组的细胞增殖抑制率、超微结构改变、凋亡率和细胞周期分布。结果：载药微泡+超声组的细胞增殖抑制率明显高于其他组,与其他各组相比差异有统计学意义（P=0.000）;电镜下观察载药微泡+超声组的凋亡细胞最多;流式细胞仪检测结果显示载药微泡+超声组的细胞凋亡率最高（P=0.000）,LDLM+US组G0/G1期细胞比例明显减少,为（0.79±0.27）%（P=0.000）,G2/M期细胞比例升高最明显,为（90.54±0.48）%（P=0.000）。结论：LDLM联合UTMD可抑制人SMMC-7721细胞的增殖、促进其凋亡,为后续进一步从蛋白、基因层面探索其作用的机制奠定了重要基础。     

靶向纳米级脂质超声微泡在肿瘤治疗领域的研究进展

肿瘤已成为威胁人类生命健康的主要疾病之一,早期肿瘤多采用手术治疗,必要时行术后辅助放、化疗,晚期肿瘤多采取放、化疗、免疫治疗等综合性治疗,由于其在杀伤肿瘤细胞的同时也对正常的组织、细胞存在损伤,产生一系列的不良反应,因而,寻找一种靶向性好、不良反应低的治疗手段已成为当前肿瘤治疗的热点。随着超声医学技术的不断发展,利用携带基因或药物的纳米级超声微泡(纳泡)与特异性的单克隆抗体偶联,     

靶向微泡超声造影剂的研究进展

近年来随着超声技术的不断发展,超声造影在临床诊断和治疗方面都展现出了巨大的潜力,尤其在肿瘤诊疗方面,以超声靶向微泡造影剂为基础的超声靶向转运系统显露出显著的优势。常规的给药途径使化疗药物杀死肿瘤细胞的同时,     

亚微米级荧光脂质微泡的制备及其肝脏成像的实验研究

目的制备荧光标记的脂质微泡,检测一般物理性质、荧光标记情况以及评价在兔肝脏的显影效果。方法用二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)溶解细胞膜绿色荧光分子探针(3,3 dioetadeeyloxaearboeyanineperehlorate,DiO)后,抽取少量溶解液加至脂质冻干粉内与溶媒液相溶,全氟丙烷置换瓶内空气,最后机械振荡仪高速振荡制成带有荧光标记的脂质微泡,检测其微泡的一般物理性质、荧光标记情况;随机选取6只健康新西兰大白兔,雄性,体质量2.0～2.5 kg,经兔耳缘静脉团注荧光微泡后动态观察微泡在兔肝实质的显影效果,手术切取部分肝脏,冰冻切片后在荧光显微镜下观察荧光素在肝脏内的分布情况。结果荧光标记的脂质微泡形态呈圆形,大小均一,微泡浓度范围(4～7)×109/mL,微泡粒径为(429±119)nm,激光共聚焦显微镜下微泡外壳被绿色光圈环绕。兔肝脏造影可见持续饱满的增强显影效果,荧光显微镜下肝脏内荧光素面积分布较少。结论荧光标记的脂质微泡大小均一,粒径大小达到进入肺循环标准,在兔肝脏内显影效果显著。     

磁性脂质超声微泡造影剂的制备及影像增强的实验研究

目的:探讨自制磁性脂质微泡超声造影剂在体外的基本特性及体内的影像增强效果,为研制既能在超声诊断中使影像增强,又能对肿瘤进行热疗的超声造影剂提供理论基础和实验依据.方法:(1) 采用化学共沉淀法制备Fe3O4磁性纳米材料,机械振荡法制备磁性脂质微泡.(2) 马尔文粒径测量仪测量磁性脂质微泡粒径,血球计数板测量浓度,扫描电镜及能谱分析对其形态和成分进行分析.(3) 将已制备的磁性脂质微泡原溶液放入4 ℃冰箱里储存2周后观察其形态和粒径的变化.(4) 大型彩超仪评价其在兔肝脏的显像效果.(5) 分别将含有不同浓度磁性纳米粒子的脂质微泡置于频率230 kHz、输出电流30 A的SPG-06A高频磁感应加热设备平板线圈上加热1 h,观察其体外升温情况.结果:此微泡平均粒径为1 127 nm,浓度为3×109ml-1.在4 ℃冰箱中放置2周后,其形态和粒径未发生明显改变.经耳缘静脉注入兔肝脏后,肝实质回声可见明显增强.一定浓度的磁性脂质微泡在一定磁场作用下具有升温恒温的特性,温度可恒定在42～62 ℃之间.结论:此磁性脂质微泡造影剂粒径小,性质稳定,影像增强效果好,在磁场作用下具有升温恒温能力,为今后临床的进一步应用提供了实验依据.     

2种人卵巢癌裸鼠移植瘤模型的生物学特性比较研究

目的:建立人卵巢癌裸鼠腹腔及皮下移植瘤模型,比较2种模型的生物学特性.方法:采用细胞悬液注射法将人上皮性卵巢癌细胞A2780/DDP注射于裸鼠皮下或腹腔,建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,观察模型动物肿瘤的生长规律及组织学特性,流式细胞术分析细胞周期分布,免疫组化检测促黄体激素释放激素受体(Luteinzing-hormon...     

血小板受体特异性微泡造影剂靶向粘附血栓的实验研究

目的构建能够靶向血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa受体的特异性脂质微泡，观察其对微血栓、体外人工血栓的粘附效应。方法用RGDS(Arg-Gly-Asp-Ser)耦联的方法构建靶向微泡，观察其对血小板聚集形成的微血栓的粘附效应。另在体外制作人工血栓模型，在二维超声下观察微泡造影剂对声学信号的影响。结果血小板聚集后加入经构建的靶向微泡，最后粘附在血小板微血栓周围；而加入普通微泡的对照孔则未见这种粘附效应。体外血栓模型中，未加微泡的血栓超声图像周围边界模糊，加入靶向微泡后血栓图像边界明显增强。结论血小板受体特异性靶向微泡对血栓有明显的趋附作用．并且能够增强血栓的超声信噪比。对血栓的临床诊断和治疗有潜在的意义。     

绒癌细胞靶向微泡造影剂结合特性研究

目的 探索体外靶向SonoVue微泡与绒癌细胞的结合特性、结合率及靶向微泡的稳定性,为临床进行滋养细胞肿瘤的超声定位提供依据.方法 用SonoVue微泡与兔抗人HCG抗体作用制成靶向造影剂,然后分别与绒癌细胞及子宫内膜间质细胞作用,比较各自的结合率及冲洗前后的结合率.结果 SonoVue微泡与兔抗人HCG抗体的结合率为77.6%;绒癌细胞与靶向SonoVue微泡的花环形成率为(87.8±6.3)%,明显高于子宫内膜间质细胞花环形成率的(9.4±1.7)%(P＜0.05);靶向SonoVue微泡与贴壁生长的绒癌细胞结合率为(85.4±4.7)%,冲洗后结合率为(83.1±3.8)%(P＞0.05);流式细胞仪检测绒癌细胞与靶向SonoVue微泡的结合率为81.0%.结论 在体外靶向SonoVue微泡与绒癌细胞可特异性结合,其结合力具有一定的强度,可望能抵抗毛细血管内血流生理性冲洗的破坏,实现靶向显影.     

超声联合靶向微泡治疗急性脑血栓的动物实验研究

【摘要】 目的 探讨超声联合靶向微泡治疗急性血栓的效果,以及对纤溶系统的影响。方法 采用脑血管造影后将大白兔自体血栓通过导管注入颈动脉制备脑血栓动物模型。6 h后造影确定血栓未自溶。49只大白兔分为4组。A组（n=13）:经导管注射新型结合血小板Ⅱb /Ⅲa受体的靶向微泡（TMB）;B组（n=12）:经导管直接注射非靶向微泡（NTMB）;C组（n=12）:注射艾通立（重组纤溶酶原激活物r-TPA）:D组（n=12）:经导管注射生理盐水。A、B、D组均在治疗时应用低频超声(1 MHz,2.0 W/cm2)30 min。分别在治疗后立刻、1 h和2 h造影观察血栓溶解、血流再通情况,并在栓塞前和治疗后2 h取静脉血,检测凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（Fib）和D-二聚体。结果 A组6只（46.15%）,B组1只（8.33%）,C组4只（33.33%）,D组1只（8.33%）血栓溶解,A、C组血栓溶解率高于B、D组(P0.05),组间差异也无统计学意义(P>0.05),而C组中D-二聚体高于其他组（P<0.05）,Fib低于其他组（P<0.05）。结论 超声联合靶向微泡可快速溶解血栓使血管再通,其作用与 r-TPA相似而出血等副作用小。     

载紫杉醇-阿霉素微泡的制备以及控制释放研究

目的制备能同时携带2种抗肿瘤药物的脂质微泡,对其载药量以及体外控制释放能力进行研究。方法以机械振荡法制备脂质微泡,嵌入法对紫杉醇进行装载以及生物素-亲和素体系连接阿霉素脂质体。粒径分析仪以及荧光显微镜对其表征分析,紫外分光光度法以及酶标仪分别测定紫杉醇和阿霉素载药量;在超声辐照条件下,促使微泡对紫杉醇以及阿霉素的释放,并测定各自药物释放量确定超声辐照微泡的药物释放效率。结果粒径分析仪测得载药微泡其粒径约为(1.45±0.27)μm,荧光显微镜下能够观察到微泡周围显红色荧光;以3 mg固定磷脂用量,紫杉醇最大包封率为(54.64±2.98)%,每108个微泡载阿霉素量为(4.52±0.53)μg;当超声波机械指数为1.0时(MI=1.0),90%的微泡破碎以及紫杉醇和阿霉素释放率分别为15%和80%。结论载药微泡在超声辐照作用下具有良好的药物释放能力,能够在超声图像辅助给药体系为肿瘤治疗提供一种有效的双药载体。     

超声联合紫杉醇微泡对卵巢癌细胞株A2780/DDP增殖和凋亡的影响

目的:探讨超声联合紫杉醇微泡对人卵巢癌细胞A2780/DDP细胞的增殖和凋亡的影响。方法:将人卵巢癌细胞株A2780/DDP随机分为5组:对照组、紫杉醇组、紫杉醇+超声组、紫杉醇微泡组和紫杉醇微泡+超声组。采用噻唑蓝(Methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测作用24、48 h和72 h后卵巢癌细胞的增殖活性,并用Hochst 33258和TUNEL染色法检测细胞凋亡情况。结果:MTT法检测显示紫杉醇微泡+超声组24、48 h和72 h抑制率分别为(37.20±2.01)%、(51.60±2.10)%和(57.47±2.85)%,明显高于其他各处理组(P<0.05);Hochst 33258和TUNEL染色均显示紫杉醇微泡+超声组凋亡率最高,作用24 h后的凋亡率为(46.10±4.15)%,明显高于其余各组(P<0.05)。结论:超声联合紫杉醇微泡能明显抑制人卵巢癌细胞A2780/DDP的增殖和诱导其凋亡。     

超声联合紫杉醇微泡对卵巢癌细胞株A2780/DDP增殖和凋亡的影响

目的：探讨超声联合紫杉醇微泡对人卵巢癌细胞A2780/DDP细胞的增殖和凋亡的影响。方法：将人卵巢癌细胞株A2780/DDP随机分为5组：对照组、紫杉醇组、紫杉醇+超声组、紫杉醇微泡组和紫杉醇微泡+超声组。采用噻唑蓝（Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测作用24、48 h和72 h后卵巢癌细胞的增殖活性,并用Hochst 33258和TUNEL染色法检测细胞凋亡情况。结果：MTT法检测显示紫杉醇微泡+超声组24、48 h和72 h抑制率分别为（37.20±2.01）%、（51.60±2.10）%和 （57.47±2.85）%,明显高于其他各处理组（P＜0.05）;Hochst 33258和TUNEL染色均显示紫杉醇微泡+超声组凋亡率最高,作用24 h后的凋亡率为(46.10±4.15)%,明显高于其余各组（P＜0.05）。结论：超声联合紫杉醇微泡能明显抑制人卵巢癌细胞A2780/DDP的增殖和诱导其凋亡。     

载基因磁性脂质微泡的制备及对人HepG2细胞的生长抑制作用研究*

目的 探讨自制载基因磁性脂质微泡的制备方法及该微泡在联合磁感应热疗和基因治疗下对人HepG2细胞的生长抑制作用。方法 采用机械振荡法制备载基因磁性脂质微泡。对磁性脂质微泡进行表征分析及检测Fe3O4磁性脂质微泡的升温情况。利用pEGFP-C1观察磁性脂质微泡介导外源基因转染的效率。MTT法,流式细胞仪评价载基因磁性脂质微泡对人HepG2细胞生长情况的影响。结果 载基因磁性脂质微泡粒径小,性质稳定,具有良好的磁响应性能,可将外源WtP53基因转染至HepG2细胞系并高效表达,在磁场作用下具有升温恒温能力,在联合磁感应热疗和基因治疗下对人HepG2细胞有生长抑制作用。结论 载基因磁性脂质微泡为肿瘤的联合治疗开辟新的思路。     

载多西紫杉醇脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤作用的初步研究

目的：初步探讨载多西紫杉醇脂质微泡（docetaxel-loaded lipid microbubbles,DLLM）联合超声靶向微泡破裂（ultrasound targeted microbubbles destruction,UTMD）对兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤的治疗作用。方法：成功建立兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤动物模型30只,随机分为A组、B组、C组、D组、E组、F组（n=5）：A组为单纯药物组、B组为单纯载药微泡组、C组为药物+超声组、D组为单纯微泡+超声组、E组为载药微泡+超声组、F组为对照组。治疗前后用超声测量各组动物颈部淋巴转移瘤大小,计算瘤体体积和抑瘤率;比较各组动物颈部淋巴转移瘤组织中CD34、微血管密度（microvessel density,MVD）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达。结果：E组实验动物颈部淋巴转移瘤的抑瘤率高于其他组（P<0.05）,与其他各组相比差异有统计学意义;E组实验动物颈部淋巴转移瘤中CD34表达水平最低,MVD、VEGF表达水平显著低于其他各组（P<0.01）与其他各组相比差异有统计学意义。结论：DLLM联合UTMD不仅能在宏观表现上抑制兔VX2舌癌颈部淋巴转移瘤生长,更能一定程度上从分子生物学水平明显抑制兔VX2 舌癌颈部淋巴转移瘤的转移、生长。