基于HMGB1/TLR4/NF-κB通路探讨桃仁承气汤调节肠源性脓毒症大鼠肠道肌电活动及微环境稳态的作用机制

目的:基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)通路研究桃仁承气汤调节肠源性脓毒症大鼠肠道肌电活动及微环境稳态的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、甘草酸(HMGB1抑制剂,0. 03 g·kg~(-1))组、桃仁承气汤(10 g·kg~(-1))组、甘草酸+桃仁承气汤(0. 03 g·kg~(-1)+10 g·kg~(-1))组,每组12只。除假手术组外,其余各组建立肠源性脓毒症大鼠模型,各组分别以药物处理后,采用苏木素-伊红(HE)染色检测各组大鼠小肠黏膜组织病理改变,比较黏膜厚度、绒毛高度变化;采用试剂盒检测各组大鼠小肠黏膜组织分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量,血清二胺氧化酶(DAO)及D-乳酸水平;检测各组大鼠肠道肌电活动,比较小肠平滑肌慢波频率、慢波振幅;检测各组大鼠肠道菌群,比较大肠埃希菌、双歧杆菌和乳酸杆菌含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小肠组织中HMGB1/TLR4/NF-κB通路蛋白HMGB1,TLR4,MyD88,NF-κB p65表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠小肠黏膜组织绒毛高度、黏膜厚度,sIgA含量,平滑肌慢波频率及振幅、肠道双歧杆菌及乳酸杆菌含量显著降低,血清DAO及D-乳酸水平、肠道大肠埃希菌含量、小肠组织HMGB1,TLR4,MyD88及NF-κB p65蛋白表达明显升高(P0. 05);与模型组比较,桃仁承气汤组、甘草酸组、甘草酸+桃仁承气汤组大鼠小肠黏膜组织绒毛高度、黏膜厚度,sIgA含量、平滑肌慢波频率及振幅、肠道双歧杆菌及乳酸杆菌含量升高,血清DAO及D-乳酸水平、肠道大肠埃希菌含量、小肠组织HMGB1,TLR4,MyD88及NF-κB p65蛋白表达降低(P0. 05);与桃仁承气汤组、甘草酸组分别比较,甘草酸+桃仁承气汤组大鼠小肠黏膜组织绒毛高度、黏膜厚度,sIgA含量、平滑肌慢波频率及振幅、肠道双歧杆菌及乳酸杆菌含量升高,血清DAO及D-乳酸水平、肠道大肠埃希菌含量、小肠组织HMGB1,TLR4,MyD88及NF-κB p65蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P0. 05)。结论:桃仁承气汤可减轻小肠黏膜损伤,调控肠源性脓毒症大鼠肠道肌电活动及微环境稳态,恢复肠道功能,保持菌群平衡,可能是通过下调HMGB1/TLR4/NF-κB通路实现的。     

毛钩藤碱对Apc^(min/+)小鼠肠道息肉生长及肠道菌群的影响北大核心

目的:探讨毛钩藤碱对Apc^(min/+)小鼠肠道息肉生长及肠道菌群的影响。方法:将36只Apc^(min/+)小鼠随机分为模型组及毛钩藤碱低(5 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组,另选取C57BL/6J小鼠作为正常对照组,每组12只。连续灌胃给药12 w,观察小鼠疾病活动指数(DAI);记录小鼠肠道息肉的数量及直径;免疫组化检测小鼠肠息肉组织中增殖细胞核抗原(PCNA)表达;ELISA测定小鼠肠组织中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平;Western Blot检测小鼠肠组织NF-κB p65、IκBα、p-IκBα蛋白表达;16S rRNA测序法检测大鼠粪便中肠道菌群的结构变化。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠DAI评分、肠道菌群Alpha多样性及肠组织中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平和NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达显著升高,肠组织IκBα蛋白表达显著降低,肠道中拟杆菌属、norank_f_Erysipelotrichaceae等菌群丰度显著升高,乳酸菌属、双歧杆菌属、脱硫弧菌属等菌群丰度显著降低(P<0.05)。与模型组比较,毛钩藤碱高剂量组小鼠DAI评分及息肉数量和大小显著降低,息肉组织中PCNA阳性细胞比例、肠组织中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平和NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达及肠道菌群Alpha多样性显著降低,肠组织IκBα蛋白表达显著升高,肠道中乳酸菌属、双歧杆菌属、脱硫弧菌属等菌群丰度显著升高,拟杆菌属、norank_f_Erysipelotrichaceae等菌群丰度显著降低(P<0.05)。结论:毛钩藤碱可抑制Apc^(min/+)小鼠肠道息肉生长,并改善肠道菌群结构。     

黄连乌梅提取物对LPS所致炎症小鼠的影响及机制研究

目的:研究黄连乌梅提取物对脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)诱导的小鼠炎症和肠道菌群的影响及作用机制。方法:将50只雄性C57BL/6小鼠根据体质量随机分为正常对照组、模型对照组及黄连乌梅提取物8.5、17 g生药/kg组和醋酸泼尼松50 mg/kg组，各组动物灌胃给药14 d后腹腔注射LPS 5 mg/kg建立炎症小鼠模型，6 h后采集样本。采用HE染色法观察小鼠脾脏、肝脏组织形态结构；ELISA法检测小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量，脾脏组织中的MDA含量和SOD活力；Western blot法测定脾脏组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、核因子κB p65(NF-κB p65)和Toll样受体4 (TLR4)的蛋白表达；采用高通量测序法检测小鼠肠道菌群变化。结果:与正常对照组比较，模型对照组小鼠脾、肝脏组织均可见一定程度病理改变，血清中促炎细胞因子水平、脾脏组织中MDA含量明显升高，HMGB1、TLR4蛋白表达显著上调，脾脏组织中总SOD活力明显降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较，黄连乌梅提取物8.5、17 g生...     

电针对肥胖大鼠肠道Toll样受体4和核转录因子κB的影响

目的:观察电针对肥胖大鼠肠道组织Toll样受体4(TLR4)和核转录因子κB(NF-κB)的影响,探讨针灸减肥的作用机制。方法:Wistar雄性大鼠随机分为正常组和模型组,高脂饲料喂养建立肥胖大鼠模型,造模成功的24只大鼠随机分为模型组、抑制剂组和电针组,每组8只。电针治疗选取"关元""中脘""足三里"和"丰隆",每次治疗10 min,抑制剂组采用TAK-242腹腔注射,每周3次,共干预8周。每2周测量1次体质量和血糖,免疫共沉淀法测定肠道组织TLR4和NF-κB p65相互作用,凝胶迁移实验法测定肠道组织NF-κB p65活性,Western blot法测定肠道组织TLR4、NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达,实时荧光定量PCR测定肠道组织TLR4、NF-κB p65和IκBαmRNA表达。结果:与对照组比较,模型组体质量、血糖水平、TLR4、NF-κB p65、p-IκBα的蛋白和mRNA水平均显著升高(P0.01,P0.05),TLR4与NF-κB p65结合能力及NF-κB p65活性显著增强(P0.05,P0.01)。与模型组比较,电针组大鼠体质量显著降低(P0.05),电针组和抑制剂组干预后餐后血糖水平、TLR4、NF-κB p65、p-IκBα的蛋白和mRNA水平显著降低(P0.05,P0.01),NF-κB p65活性显著减弱(P0.01)。结论:电针能够有效调控肠道TLR4,抑制其与NF-κB p65相互作用,降低NF-κB p65活性,这可能是电针降低肥胖大鼠体质量和血糖水平,从而改善其肥胖状态的潜在机制之一。     

基于“脾为之卫”探讨历节胶囊对CIA小鼠炎症信号通路的影响

目的 观察历节胶囊对CIA小鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响，探讨其治疗类风湿关节炎(RA)的作用机制。方法 将60只DBA/1小鼠随机分成3组：正常组，模型组，历节胶囊组，每组各20只。每组给药连灌21天后处死。Western blot检测TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达量；PCR检测TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA表达水平；ELISA检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果 与正常组比较，模型组MyD88、NF-κB p65及TLR4的mRNA及蛋白表达量均上升，模型组的血清TNF-α水平升高，差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较，历节胶囊组MyD88、NF-κB p65及TLR4 mRNA及蛋白表达量均下降，血清TNF-α水平下降，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 历节胶囊可以通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB p65炎症信号通路以取得疗效。     

固本防哮饮对小鼠哮喘缓解期TLR4及TLR7的调节作用

目的:观察固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠模型Toll-样受体(TLR) 4,TLR7,核转录因子-κB p65(NF-κB p65),NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的调节作用,探讨固本防哮饮治疗哮喘缓解期的机制。方法:呼吸道合胞病毒(RSV)联合鸡卵蛋白(OVA)对3周龄BALB/c小鼠制备哮喘缓解期模型,将60只小鼠分为空白组、模型组、地塞米松组(0. 001 g·kg~(-1))以及固本防哮饮低、中、高剂量(6. 5,13,26 g·kg~(-1))组,分别进行干预,共给药28 d,每天1次。给药结束后处死小鼠,苏木素-伊红(HE)染色观察哮喘小鼠肺组织病理形态学变化,并对肺部炎症情况进行评分;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肺组织TLR4,TLR7,IκBα及肺组织细胞核内NF-κB p65蛋白表达水平;免疫荧光共聚焦观察NF-κB p65在细胞核表达情况。结果:与空白组比较,模型组小鼠肺组织有明显炎症细胞浸润及支气管狭窄(P 0. 01),同时小鼠肺组织细胞核内NF-κB p65分布显著增多(P 0. 01),表达明显增高(P 0. 05),TLR4,TLR7,IκBα蛋白表达明显降低(P 0. 05);与模型组比较,固本防哮饮各剂量组能显著缓解小鼠肺组织炎症浸润(P 0. 01),降低肺组织核蛋白NF-κB p65的表达(P 0. 01),核蛋白NF-κB p65入核情况减轻(P 0. 01),同时显著增加TLR4,TLR7,IκBα蛋白的表达(P 0. 01)。结论:固本防哮饮能够缓解气道炎症,并且可能是通过调节TLR4,TLR7,NF-κB p65,IκBα实现其治疗作用。     

4种归肺经中药对肺热证小鼠TLR2,NF-κB表达变化的研究

目的:研究麻黄、干姜、黄芩、桑白皮4味归肺经中药对肺热证小鼠肺组织TLR2,NF-κB p65表达的影响,探讨这4味中药干预肺热证的作用机制。方法:将100只健康KM种小鼠随机分为正常对照组、模型组、麻黄、干姜、黄芩、桑白皮组(20,10 g·kg^-1),鼻腔滴入肺炎链球菌菌液建立小鼠肺热证模型,分别给予不同中药治疗,应用免疫组化法检测肺组织TLR2,NF-κB p65蛋白含量,Real-time PCR法检测肺组织TLR2,NF-κB p65 mRNA表达水平。结果:与对照组比较,模型组TLR2,NF-κB p65蛋白含量升高（P<0.01）,mRNA表达上调（P<0.01或P<0.05）;与模型组比较,麻黄高、低剂量组、干姜低剂量组、黄芩高剂量组TLR2蛋白表达降低（P<0.05或P<0.01）;麻黄高、低剂量组、干姜低剂量组、黄芩高、低剂量组、桑白皮高、低剂量组NF-κB p65蛋白含量降低（P<0.05或P<0.01）;麻黄高、低剂量组、干姜高、低剂量组、黄芩高剂量组、桑白皮高剂量组TLR2 mRNA表达下调（P<0.01或P<0.05）。结论:麻黄、干姜、黄芩、桑白皮可能通过下调TLR2,NF-κB p65蛋白及mRNA表达,介导TLR2/NF-κB炎症信号通路,从而减轻小鼠肺热证肺组织损伤。     

薯蓣皂苷元对白细胞的粘附与迁移及内皮细胞ICAM-1的表达和NF-κB活化的影响(英文)

目的:探讨薯蓣皂苷元的抗炎活性及其可能机制,为其临床应用提供药理学依据。方法:采用酵母多糖A诱导的小鼠腹膜腔白细胞游走模型,评价薯蓣皂苷元的体内抗炎活性;利用白细胞与肿瘤坏死因子(TNF-α)活化的内皮细胞粘附的实验,验证薯蓣皂苷元的抗炎活性;采用聚合酶链式反应和流式细胞术,考察内皮细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达;蛋白印迹法测定细胞核中转录因子NF-κB/p65的表达及细胞裂解液中NF-κB/p65的磷酸化情况,以探讨薯蓣皂苷元抗炎的可能机制。结果:薯蓣皂苷元1,3mg·kg1灌胃给药1次,可显著减少酵母多糖A诱导的小鼠腹腔内白细胞数量;薯蓣皂苷元0.1,1μmol·L1体外加药5h,显著抑制人HL-60细胞与TNF-α活化的ECV304细胞的粘附,但对ECV304细胞活力无明显影响,也不影响HL-60细胞与静息状态ECV304细胞的粘附。同时,薯蓣皂苷元0.1,1μmol·L1明显抑制TNF-α诱导的ECV304细胞ICAM-1mRNA和蛋白的过量表达,1μmol·L1可抑制NF-κB/p65的核转移;薯蓣皂苷元明显减少TNF-α刺激10～30min诱导的NF-κB/p65的磷酸化,并呈一定浓度依赖性。结论:薯蓣皂苷元具有显著抑制白细胞的黏附迁移活性,其部分机制与抑制内皮细胞NF-κB活化,下调ICAM-1的表达有关。     

热毒宁注射液对LPS诱导ALI/ARDS小鼠TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响

目的 探讨热毒宁注射液对LPS诱导急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)小鼠肺损伤的保护作用及对TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响。方法 将小鼠随机分为对照组、模型组、热毒宁注射液组、地塞米松(阳性药)组，每组6只，气管注射LPS溶液制备ALI/ARDS模型，造模后3 h给予各组相应药物，连续干预7 d后，检测小鼠肺湿/干重比、肺组织MPO活性及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)水平，HE染色观察肺组织病理改变，Western blot法检测肺组织TLR4、MyD88、IKKα、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。结果 与对照组比较，模型组小鼠肺湿/干重比、肺组织MPO活性、血清炎性因子水平和肺组织TLR4、MyD88、IKKα、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01),肺泡腔增大，肺泡壁增厚，肺部有大量的炎性细胞浸润；与模型组比较，热毒宁注射液组和地塞米松组小鼠肺湿/干重比、肺组织MPO活性、血清炎性因子水平和肺组织TLR4、MyD88、I...     

清肺排毒汤对LPS诱导急性肺损伤小鼠炎症的作用

目的 探讨清肺排毒汤对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的抗炎作用及其机制。方法 小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组及清肺排毒汤低、高剂量组,除对照组外,其余各组采用气管穿刺注射LPS建立ALI模型,造模成功后给予相应药物干预7 d。记录小鼠存活率、肺湿干重比,HE染色观察肺损伤程度,吉姆萨染色法及血液分析仪分类计数肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞,RT-qPCR法检测肺组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达,ELISA法检测小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western blot法检测肺组织TLR4、MyD88、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达。结果 与模型组比较,清肺排毒汤高剂量组小鼠肺水肿和损伤程度,血清、BALF中炎性细胞因子和炎性细胞数量,肺组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达和肺组织TLR4、MyD88、p-NF-κB p65,p-IκBα蛋白表达均有不同程度降低(P<0.05,P<0.01)。结论 清肺排毒汤可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制炎症因子和介质释放,减轻LPS诱...     

平喘方对哮喘小鼠HMGB1/TLR4/NF-κB通路及IKKs、TGF-β1的影响

目的 研究平喘方对哮喘小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)及气道重塑相关因子IκB激酶家族（IKKs）、转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法 将32只雄性Balb/c小鼠随机分为空白组、模型组、地米组、平喘方组,每组8只。采用卵清白蛋白（OVA）联合氢氧化铝腹腔注射和5%OVA雾化吸入激发的方法建立哮喘模型,当日雾化结束1 h后灌胃给药14 d。各组于最后一次给药后收集小鼠血清、肺泡灌洗液（BALF）及肺组织。采用HE染色法观察小鼠肺组织病理改变,免疫组化染色法观察HMGB1、TLR4、NF-κB表达,ELISA法检测BALF及外周血中HMGB1、TLR4、TGF-β1、IKKs含量,RT-PCR检测肺组织中HMGB1、TLR4、NF-κB及IKKs mRNA表达,Western blot法检测肺组织中HMGB1、TLR4蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组气道重塑严重,HMGB1、TLR4及NF-κB表达明显增强,HMGB1、TLR4、TGF-β1及IKKs含量升高（P<0.05）,HMGB1、TLR4、NF-...     

降糖益肾丸对糖尿病肾病大鼠肾Toll样受体4和炎症因子的影响

目的：探讨降糖益肾丸治疗糖尿病肾病（DN）的作用机制。方法：36只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组：空白对照组、DN模型组、DN模型+降糖益肾丸组（高剂量组）、DN模型+降糖益肾丸组（中剂量组）、DN模型+降糖益肾丸组（低剂量组）、DN模型+盐酸二甲双胍+厄贝沙坦组（阳性药组）,每组6只。空白对照组给予普通饲料喂养,其余各组大鼠采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素（STZ）注射造模,药物组给药28天后,分别测定各组大鼠血清炎性因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,酶联免疫（ELISA）分析肾组织中TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平的变化。结果：与对照组比较,模型组大鼠IL-6、TNF-α、TLR4和NF-κB p65表达均显著升高（P<0.01）。与模型组比较,阳性药组与中、高剂量组大鼠IL-6、TNF-α、TLR4和NF-κB p65表达均显著下降,低剂量组大鼠IL-6、TNF-α、TLR4和NF-κB p65表达亦下降（P<0.01或P<0.05）。与中、高剂量组比较,低剂量组IL-6、TNF-α、TLR4和NF-κB p65表达显...     

苜蓿素对哮喘小鼠肺泡巨噬细胞TLR4/MyD88/NF-κB通路的抑制作用

目的观察苜蓿素对低剂量脂多糖(LPS)诱导的哮喘小鼠气道炎症的抑制作用。方法采用低剂量LPS+卵白蛋白(OVA)建立BALB/c小鼠哮喘气道炎症反应模型,随机分为哮喘模型组、苜蓿素组、地塞米松(阳性药)组,另设空白对照组。ELISA法对小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症介质NO、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平进行检测;HE染色观察小鼠肺组织病理情况;RT-PCR法和Western blot法对小鼠肺泡巨噬细胞的Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)、核因子κB p65(NF-κB p65)mRNA及蛋白表达进行检测。结果苜蓿素可显著降低哮喘小鼠BALF液中NO、TNF-α、IL-1β水平,有效改善哮喘小鼠肺部炎症,显著下调肺泡巨噬细胞的TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达量。结论苜蓿素对哮喘小鼠气道炎症有抑制作用,其机制可能与干预TLR4/My D88/NF-κB通路有关。     

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路及相关分子的影响,探讨二陈汤加味对COPD抗炎作用的分子机制。方法:将40只SD大鼠随机平均分为正常组、模型组、二陈汤加味组和EVP4593(NF-κB抑制剂)组。以香烟烟雾联合气管滴注脂多糖(LPS)方法制备COPD大鼠模型。二陈汤加味组以10 g·kg~(-1)灌胃(ig),EVP4593组皮下注射1 mg·kg~(-1),正常组、模型组ig等量生理盐水,连续干预14 d。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1),趋化因子(CXCL)-2,CXCL-3和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测肺匀浆中TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平,免疫组化(IHC)检测TLR4,MyD88,磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)在大鼠肺组织中的定位表达。结果:与正常组比较,模型组肺匀浆中TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA及蛋白表达均显著增加(P0.01),HMGB1,CXCL-2,CXCL-3和MCP-1含量显著升高(P0.01)。与模型组比较,二陈汤加味组TLR4,MyD88,NF-κB p65mRNA及其蛋白表达均显著减弱(P0.05,P0.01),HMGB1,CXCL-2,CXCL-3和MCP-1含量显著降低(P0.05,P0.01)。结论:二陈汤加味对COPD有抗炎作用,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路相关信号分子基因的表达,以及减少HMGB1,CXCL-2,CXCL-3和MCP-1的释放有关。     

黄连-干姜提取物对溃疡性结肠炎小鼠结肠上皮TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:观察中药黄连、干姜的主要成分黄连素和6-姜烯酚对溃疡性结肠炎小鼠结肠上皮细胞炎症信号通路Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)的影响。方法:50只昆明种小鼠随机分为正常组,模型组,黄连素组(100 mg·kg^-1),6-姜烯酚组(100 mg·kg^-1),6-姜烯酚合黄连素组(200 mg·kg^-1),每组10只。采用2%葡聚糖硫酸钠口服2周建立溃疡性结肠炎小鼠模型,各组给予相应剂量的药物灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水,给药20 d后取血清及结肠组织样本,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测结肠上皮组织TLR4,NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠结肠上皮组织TLR4,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达量显著升高(P<0.01),血清IL-1β,TNF-α含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,6-姜烯酚组,黄连素组,6-姜烯酚合黄连素组小鼠结肠上皮组织TLR4,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.01),血清IL-1β,TNF-α含量显著降低(P<0.01);三组间比较,6-姜烯酚合黄连素组作用力最强(P<0.01)。结论:6-姜烯酚、黄连素均能够抑制结肠组织炎症,减轻炎症损伤,治疗溃疡性结肠炎,黄连素和6-姜烯酚联合应用有显著的协同增效作用,其机制与抑制TLR4/NF-κB通路的过度活化进而调节肠道非可控性炎症有关。     

养阴清热化瘀方对急性放射性肺炎大鼠TLR-4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨养阴清热化瘀方对大鼠急性放射性肺炎的防护作用及可能机制。方法:采用随机数字表法将48只雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组(NC)、模型组(MD)、养阴清热化瘀方提前干预组(YHF-EI)及养阴清热化瘀方组(YHF-ST),分别于照射后4周时采集血清及取出右肺。观察大鼠的一般情况,应用HE染色观察肺组织病理改变,ELISA法检测血清中含量, RT-PCR和Western-blotting法分别检测肺组织内TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白的水平。结果:养阴清热化瘀方能显著减轻大鼠放射性肺炎的炎症表现; 与空白对照组比较,血清中TNF-α、IL-6、TGF-β的含量升高,TLR4和NF-κB p65 mRNA转录活性增强,肺组织中TLR4和NF-κB p65的蛋白表达水平升高; 与模型组比较,两组养阴清热化瘀方组血清中TNF-α、IL-6、TGF-β的含量降低,TLR4和NF-κB p65 mRNA转录活性下降,肺组织中TLR4和NF-κB p65的蛋白表达水平降低。结论:养阴清热化瘀方可能通过抑制“TLR4/NF-κB”信号通路,从而抑制TNF-α、IL-6、TGF-β的产生,起到抵抗放射性肺炎的发生,从而发挥放射防护作用。     

防风乙醇提取物对LPS所致小鼠炎症模型的抗炎作用及机制研究

观察防风乙醇提取物对脂多糖(LPS)所致小鼠急性炎症模型的抗炎作用及其TLR4/NF-κB信号通路机制。经大孔吸附树脂法分离纯化获得防风乙醇提取物,UPLC-QE/MS对其主要化学成分进行鉴定,结果表明防风乙醇提物含量前10位的成分主要是色原酮类和香豆素类化合物。腹腔注射LPS建立小鼠急性炎症模型考察药物抗炎作用,连续灌胃7 d,末次给药1 h后,除空白组外其余各组小鼠腹腔注射LPS(0.015 g·kg~(-1))建立小鼠炎症模型,造模后12 h小鼠取血分离血清,并收集肺泡灌洗液(BALF),ELISA法检测小鼠血清及BALF中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量;剖取肺组织,苏木素-伊红染色观察小鼠肺组织病理变化,蛋白免疫印迹法检测肺组织中TLR4/NF-κB信号通路相关分子的蛋白表达量。结果显示,防风乙醇提取物能显著改善模型小鼠肺组织的病理状态,有效抑制小鼠血清及BALF中NO、TNF-α、IL-6和IL-1β含量升高;显著下调肺组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、磷酸化核转录因子κB-p65/核转录因子κB-p65(P-p65/p65)蛋白表达水平,上调核因子κB抑制蛋白α(IκBα)蛋白表达量。防风乙醇提取物对LPS所致小鼠急性炎症模型有良好抗炎效应,作用发挥与抑制TLR4/NF-κB炎症信号通路激活有关,其色原酮类和香豆素类化合物是其抗炎作用的主要物质基础。     

麝香酮处理后CIRI模型大鼠海马组织中S100β、NF-κB表达变化研究

目的:对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型老年SD大鼠腹腔预先灌注麝香酮,检测实验后大鼠海马组织中S100β、NF-κB p65活性值,了解麝香酮对脑组织核转录因子NF-κB(NF-κB)信号传导的影响。方法:采用健康SD老年大鼠60只。随机分为缺血再灌注组(CIRI),麝香酮组(SXT)和生理盐水对照组(CON)。腹腔灌注麝香酮,造缺血再灌注动物模型,处死大鼠后取海马区脑组织,采用凝胶电泳迁移分析法测定海马组织中S100β、NF-κB p65活性值。实验分两次完成,每次完成30只大鼠实验。结果:CON、SXT与CIRI比较,S100β、NF-κB p65都有明显下降,SXT与CON比较S100β的变化有明显差别,而NF-κB p65的变化无明显差别。结论:麝香酮抗CIRI的作用可能与减少S100β蛋白释放,减少NF-κB蛋白表达,减轻兴奋性氨基酸毒性有关。     

人参皂苷Rg3对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠Th1/Th2失衡的影响

目的:观察人参皂苷Rg3对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠Th1/Th2失衡的影响。方法:将C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)200mg/kg组、人参皂苷Rg3 20mg/kg、40mg/kg组。除正常对照组以外的各组小鼠自由饮用3%的DSS溶液5天,后替换为正常饮用水。正常对照组和模型组给予蒸馏水灌胃,其余各组灌胃相应药物。每天观察小鼠一般状况、体重变化。第9天处死小鼠,测量结肠长度,对结肠组织进行组织形态学分析,ELISA法测定小鼠血浆中的IL-6、TNF-α和IL-10细胞因子浓度,QRT-PCR法检测结肠组织中IL-6、TNF-α和IL-10 mRNA的表达水平,Western blot测定结肠组织中NF-κB p65和p-NF-κB p65水平。结果:人参皂苷Rg3 40mg/kg组可显著增加小鼠体重和结肠长度,降低结肠病理评分,显著减少血浆TNF-α、IL-6的浓度,显著增加血浆IL-10的浓度,降低结肠组织中IL-6 mRNA、TNF-αmRNA的水平,提高IL-10 mRNA的水平。降低结肠组织中p-NF-κB p65/NF-κB p65的水平。结论:人参皂苷Rg3对DSS诱导的UC小鼠有明确的治疗作用,其机制可能是通过下调TNF-α、IL-6,上调IL-10水平,调节Th1/Th2平衡,抑制NF-κB活化,从而调节肠道免疫,促进肠道粘膜的修复。     

银翘散提取物对流感病毒性肺炎小鼠组织TLR4及NF-κB p65的影响

目的观察银翘散提取物对流感病毒性肺炎小鼠组织TLR4及NF-κB p65表达的影响。方法昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、银翘散组和利巴韦林组,每组10只,采用鼻腔接种甲型流感病毒FM1株诱导幼龄小鼠肺炎,于感染前1天,银翘散组灌服中药提取物,利巴韦林组腹腔注射利巴韦林注射液,正常组和模型组以等体积的生理盐水灌胃。观察各组小鼠的一般状态、肺组织形态学,各组小鼠感染5天后处死,采用免疫组化染色法检测各组小鼠肺组织NFB p65和TLR4的表达。结果与正常组相比,模型组小鼠肺组织中NF-κB p65、TLR4的表达显著增高(P0.05),银翘散组NF-κB p65、TLR4的表达较模型组明显降低(P0.05)。结论 NF-κB p65、TLR4表达降低,很可能是银翘散提取物治疗流感病毒性肺炎小鼠的机理。