ERK1/2-核因子-кB通路介导乙型肝炎病毒x蛋白抑制过氧化物酶体增殖物激活受体-α表达

目的研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-α的抑制作用,并探讨其中的内在机制。方法培养人肝癌细胞系HepG2,转染HBx表达质粒,Western blot方法检测PPAR-α、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK,ERK1／2)和IкB蛋白的变化,凝胶迁移率实验检测核转录因子(NF)-кB蛋白的活性改变,分别加入MAPK和NF-кB特异性的抑制剂PD98059与吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC),观察PPAR-α蛋白的变化。结果(1)HBx质粒转染HepG2后,与对照组相比,ERK2表达增加,NF-кB被激活,PPAR-α的表达下调；(2)阻断NF-кB后,NF-кB的活性下降,PPAR-α的表达增加；(3)阻断MAPK后,转染HBx表达质粒,NF-кB的活性下降,PPAR-α的表达增加。结论HBx抑制细胞核转录因子PPAR-α的表达,可能与ERK1／2-NF-кB激活有关。     

乙肝病毒X蛋白激活NF-κB信号通路对AFP表达的影响

目的: 研究乙肝病毒X蛋白（HBx）通过核因子-κB (NF-κB)信号通路对甲胎蛋白（AFP）的调节作用。方法:建立稳定转染HBx基因的L02细胞系(L02-HBx)，用特异性的NF-κB信号通路阻断剂PDTC阻断该信号通路，荧光双标激光扫描共聚焦显微镜观察转染前后及加入PDTC前后NF-κB信号通路的激活、失活情况，同时用实时定量 PCR和Western Blot技术检测转染前后及加入PDTC前后AFP在mRNA及蛋白水平上的表达变化。结果:以L02细胞为参照，转染HBx基因后的L02-HBx细胞NF-κB信号通路被激活，AFP mRNA和蛋白水平较转染前分别增加（2.78±0.43）倍和（4.72±0.53）倍,差异有统计学意义（P<0.05）；PDTC作用24 h后L02/HBx细胞NF-κB信号通路阻断，AFP mRNA和蛋白表达分别为（1.40±0.16）倍和（3.12±0.44）倍，与未加入PDTC作用的L02-HBx细胞相比，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:NF-κB信号通路是HBx上调AFP表达的途径之一。     

核因子-κB诱骗寡核苷酸增强阿霉素对肝癌耐药细胞化疗敏感性的机制

目的 研究核因子（NF）-κB诱骗（decoy）寡核苷酸对肝癌耐药细胞株HepG2／阿霉素（ADM）化疗敏感性的影响及其内在机制。方法培养肝癌耐药细胞株，转染FITC标记的NF-κB decoy寡核苷酸，通过荧光显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位的观察，凝胶迁移率实验检测转染前后NF-κB结合活性的变化，加入ADM，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖，采用流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡，观察转染NF-κB decoy寡核苷酸后肝癌耐药细胞对化疗药物的敏感性变化，DEVD-pNA降解法检测Caspase-3的活性变化，Western blot检测bcl-2蛋白表达的变化。结果转染荧光标记的NF-κB decoy寡核苷酸1h，倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜显示定位于细胞核内，凝胶阻滞分析实验（EMSA）分析示NF-κB decoy寡核苷酸能够降低NF-κB核内结合，加入化疗ADM（0.1mg／L）后，ADM作用24h后出现细胞凋亡，流式细胞术、TUNEL法检测NF-κBdecoy寡核苷酸转染HepG2／ADM细胞的凋亡，与对照组相比，凋亡指数增加，Caspase-3的活性增加，bcl-2的表达下调。结论 NF-κB decoy寡核苷酸转染肝癌耐药细胞株HepG2／ADM后，能够抑制NF-κB的激活，Caspase-3活性增加和bcl-2的表达下调是其增加化疗药物的敏感性的可能机制。     

HBX基因对人肝癌细胞系HepG2中HNF-4α及NF-κB表达的影响

目的通过检测转染X基因HepG2人肝癌细胞脂质体中NF-4α及NF-κB的表达,探讨X基因与HNF-4α,NF-κB及肝癌细胞的关系。方法将Hep G2成人肝癌细胞分成三组:将HBx真核表达载体pc DNA3/HBx转入Hep G2细胞做为实验组;以转染空载体细胞组和未转染Hep G2细胞组作为对照组。PCR检测各组X基因、HNF-4α及NF-κB的核内RNA表达情况,Western Blot检测NF-κB核内蛋白的表达情况。结果转染HBx细胞组中HNF-4α的表达值低于另两组,而NF-κB表达值高于另两组。同组中,HNF-4α的表达值与NF-κB表达值呈负相关。结论成功将X基因转染入Hep G2细胞,并在细胞中表达,转染HBx基因可通过X蛋白抑制HNF-4α的表达而增强NF-κB的活性,促进肝癌细胞增殖致其癌变及生长转移等方面加速。     

乙肝病毒X蛋白通过激活核因子-κB信号通路上调MDR1的表达

目的 探讨核因子(NF)-κB信号通路是否是乙肝病毒X蛋白(HBx)上调多药耐药基因(MDR1)的途径之一.方法 建立稳定转染HBx基因的L02(L02/HBx)细胞系,用NF-kB信号通路阻断剂吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)阻断NF-κB信号通路.采用荧光双标激光扫描共聚焦显微镜观察转染前后及PDTC加入前后NF-κB信号通路的激活失活,同时用实时聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测转染前后及PDTC加入前后MDRl的表达.结果 转染HBx基因后NF-κB信号通路被激活,MDRI表达明显上调(P<0.05);PDTC加入后NF-κB信号通路被阻断,MDRi表达明显下调(P<0.05).结论 NF-κB信号通路可能是HBx介导肝癌多药耐药,上调多药耐药基因MDR1的途径之一.     

肿瘤坏死因子-α对肿瘤抑制基因RECK在HepG2细胞中表达的调节作用

目的 探讨肿瘤坏死因子（TNF）-α对人肝癌细胞HepG2肿瘤抑制基因RECK表达的影响，检测核转录因子（NF）-κB在RECK基因表达的调控中的作用。方法 将培养的细胞分为3组，A组用4种浓度的TNF-α（1、5、50、100μg／L）作用人肝癌细胞HepG2细胞株6h，B组用浓度为50μg／L的TNF-α分别作用HepG2细胞1、6、12、24h，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测RECK mRNA的表达；C组将NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡硌烷（PDTC，10mol／L）与TNF-α（50μg／L）同时作用以及TNF-α（50μg／L）单独作用于HepG2细胞6h，凝胶滞留电泳实验（EMSA）DNA结合反应检测NF-κB出的活性，RT-PCR和Western blot分别检测RECK基因mRNA和蛋白的表达。明胶酶谱试验检测细胞MMP-9的活性。结果HepG2细胞中RECK基因无表达。TNF-α作用后RECK的表达显著增高，作用呈时间和剂量依赖关系（P〈0．01），TNF-α能激活NF-κB并能显著抑制HepG2细胞MMP-9的活性（P〈0．01），而PDTC能显著的抑制这种作用（P〈0．01）。结论TNF-α能上调RECK基因在肝癌细胞系HepG2中的表达同时抑制细胞MMP-9的活性。而NF-κB可能参与了这一过程。     

肾病综合征氧化低密度脂蛋白脂质肾损伤的实验研究

目的 通过观察氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）对系膜细胞（Mesangial Cells,MCs）分泌炎症介质功能的影响及MAPK信号通路和核因子-κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）活性的改变,进一步阐明脂质在肾损伤中的作用机制.方法 利用ox-LDL诱导大鼠系膜细胞增殖,分别采用ELISA、real-time PCR、western blot技术检测MCs炎症介质、MAPK通路相关蛋白（p38、JNK、ERK）及NF-κB的表达水平.结果 利用ox-LDL诱导大鼠系膜细胞增殖并加入CXCR6受体后,其表面炎症因子[CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17、干扰素（IFN）、白细胞介素（IL6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）]的表达水平以及MAPK信号通路（p38、JNK、ERK）、NF-κB的磷酸化水平显著升高（P〈0.01）.结论 ox-LDL可促使系膜细胞释放CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17、IFN、IL6、TNF-α等炎症介质,CXCR6可介导这一途径.ox-LDL激活MAPK信号转导通路,使p38、ERK1/2、SAPK/JNK的磷酸化水平升高,激活了NF-κB p65的活性,CXCR6-CXCL16介导MAPK信号途径.     

p38有丝分裂素激活蛋白激酶在白蛋白刺激肾小管上皮细胞表达调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子中的作用

目的探讨p38有丝分裂素激活蛋白激酶（p38MAPK）对白蛋白诱导的大鼠肾小管上皮细胞表达调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子（RANTES）及核因子-κB（NF-κB）活性的影响。方法培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E），分别加入不同浓度白蛋白（5、15、30g／L）或／和SB203580（p38MAPK抑制剂），应用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹法分别检测RANTESmRNA及蛋白表达水平；应用凝胶迁移率变动分析检测NF-κB的活性变化；p38MAPK的磷酸化水平分析采用Western印迹法。结果白蛋白呈浓度和时间依赖性上调RANTESmRNA及蛋白表达水平，呈时间依赖性激活NF-κB活性，白蛋白明显刺激了p38MAPK磷酸化水平增高，SB203580可抑制白蛋白刺激的RANTES表达与NF-κB活性。结论白蛋白通过p38MAPK信号通路刺激RANTES的表达和NF-κB的活性。     

核因子-κB圈套对Kupper细胞活化的抑制作用及其机制

目的探讨核因子-κB（NF-κB）圈套对大鼠Kupper细胞（KCs）活化的抑制作用及其机制。方法分离大鼠KCs并随机分为3组：正常对照组、内毒素（LPS）刺激组及NF-κB圈套组，后者KCs在LPS刺激前转染NF-κB圈套。除对照组外，两个实验组培养液中加入终浓度为1mg／L的LPS。于LPS刺激6h后，凝胶电迁移率改变分析法（EMSA）检测NF-κB蛋白结合活性，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测KCs膜表面CD80mRNA表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养上清肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-6表达情况。结果转染NF-出圈套可以高效抑制KCs激活。EMSA结果显示NF-κB活性仅为LPS组的0．53，RT—PCR结果显示KCs CD80 mRNA表达仅为LPS组的0．46，ELISA结果显示培养上清TNF-α表达量仅为LPS组的0、37，IL-6仅为LPS组的0．60。结论NF-κB圈套可以高效抑制NF—κB的转录活性，降低KCs膜表面共刺激分子和细胞因子的产生，为活体内应用NF—κB圈套提供了可靠的实验依据。     

突变型ⅠκBα转染对肝门部胆管癌多药耐药基因的调控作用

目的　探讨阻断核转录因子 κB(NF κB)活性对肝门部胆管癌细胞多药耐药基因(MDR 1)表达的影响。方法　用突变核转录因子 κB抑制蛋白αⅠκBα质粒 (mⅠκBα)转染肝门部胆管癌细胞株 (QBC93 9)及稳定表达丙型肝炎病毒核心蛋白 (HCVC)的QBC93 9(QBC93 9HCVC+) ,凝胶迁移率电泳 (EMSA)检测mⅠκBα质粒转染的QBC93 9和QBC93 9HCVC +细胞中NF κBDNA结合活性 ;逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR )检测转染mⅠκBα质粒对肝门部胆管癌细胞中MDR 1基因及其表达产物 (P GP )表达的影响。结果　转染mⅠκBα质粒组的QBC93 9和QBC93 9HCVC +细胞放射性浓聚影明显淡于非转染组 ,密度计成对扫描显示 ,转染组和非转染组相对信号密度有明显差异 ;转染突变型ⅠκBα质粒的QBC93 9和QBC93 9HCVC +细胞中MDR 1mRNA和蛋白的表达水平明显低于非转染组。结论　转染mⅠκBα能明显逆转肝门部胆管癌细胞多药耐药性 ,阻断NF κB活性有望成为肝门部胆管癌基因治疗新策略的“靶位”。     

新型接头蛋白CARMA3在肝癌HepG2细胞中的表达与意义

目的观察新型接头蛋白CARMA3在肝癌HepG2细胞中的表达,以及CARMA3在G蛋白偶联受体诱导核转录因子κB(NF-κB)激活中的作用。方法提取肝细胞肝癌的总mRNA和蛋白,用逆转录PCR、免疫沉淀和免疫印迹方法检测肝脏肿瘤细胞中CARMA3基因和蛋白的表达水平。负显性CARMA3质粒转染肝脏肿瘤细胞24 h后用溶血磷脂酸(LPA)诱导NF-κB的激活,提取胞浆蛋白和核蛋白,用免疫印迹和电泳迁移试验检测负显性CARMA3的表达和IKK及NF-κB的活化。结果肝细胞肝癌表达CARMA3。在肝脏肿瘤细胞中转染负显性CARMA3后,LPA所诱导IKK和NF-κB的激活被显著抑制。结论肝细胞肝癌表达CARMA3。GPCR(LPA)-CARMA3-NF-κB信号传导通路存在于肝细胞肝癌中。抑制CARMA3的功能可以阻遏GPCR(LPA)所诱导的NF-κB的激活,由此为肝细胞肝癌的治疗提供了新的思路。     

HSF-1 抑制HMGB1 所致炎症反应的作用及机制

目的：探讨热休克转录因子1（HSF-1）抑制高迁移率族蛋白1（HMGB1）引起炎症反应的作用及机制。 方法：RAW264.7细胞分别转染含HSF-1的质粒（HSF-1过表达组）和空白质粒（阴性对照组）后,以无处理的RAW264.7细胞作为空白对照组,用Western blot法检测各组细胞HSF-1蛋白的表达;将以上3组细胞分别用HMGB1（1 μg/mL）刺激后,用ELISA法测定TNF-α水平、Western blot法检测丝裂原活化蛋白激酶家族（MAPK）通路和NF-κB通路相关蛋白的表达、非放射性凝胶阻滞（EMSA）检测NF-κB与DNA结合活性。 结果：Western blot结果显示,HSF-1过表达组HSF-1蛋白表达量较阴性对照组与空白对照组明显升高（均P<0.05）,而后两组间HSF-1蛋白表达量无统计学差异（P>0.05）;HMGB1作用4 h,HSF-1过表达组TNF-α水平较阴性对照组与空白对照组明显降低（均P<0.05）,而后两组间无统计学差异（P>0.05）;HMGB1作用不同时间后,各组细胞MAPK通路相关蛋白p-ERK、p-JNK、p-p38以及NF-κB通路相关蛋白p-IKα-B的表达均无统计学差异（均P>0.05）;EMSA结果显示,HMGB1作用1 h后,HSF-1过表达组NF-κB灰度值明显低于阴性对照组与空白对照组（均P<0.05）,而后两组间无统计学差异（P>0.05）。 结论：HSF-1过表达可以减少HMGB1引起的TNF-α表达,其分子机制与MAPK通路的活化无关,但与NF-κB和DNA的结合能力有关。     

9型重组腺相关病毒介导抗核转录因子-κB核酶基因体外转染大鼠心肌细胞及对核转录因子-κB活性的影响

目的 观察9型重组腺相关病毒(rAAV9)介导抗核转录因子-κB(NF-κB)核酶基因(rAAV9-ECFP-R65)对大鼠心肌H9C2细胞的转染及对NF-κB活性的影响.方法 rAAV9-EGFP-R65按转染复数(MOI)1×106v.g./cell转染H9C2细胞,在倒置荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP)阳性表达,采用流式细胞仪检测转染效率.Alamar Blue法检测rAAV9-EGFP-R65对H9C2细胞增殖影响.肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、rAAV9-EGFP-R65及PDTC处理H9C2细胞,凝胶迁移滞后实验(EMSA)检测NF-κB活性.结果 转染后第1天EGFP开始表达,表达强度随着时间延长而逐渐增强,第5天达到高峰,此时流式细胞仪检测转染率为(32.27±3.19)%.Alamar Blue法检测表明转染组细胞增殖末受影响.常态下H9C2细胞NF-κB有一定活性,TNF-α刺激后NF-κB活性明显增高,而rAAV9-EGFP-R65、PDTC抑制NF-κB活性.结论 rAAV9-ECFP-R65能够有效地转染H9C2细胞,对细胞增殖无明显抑制,并能显著抑制H9C2细胞NF-κB活性.     

过氧化物酶增殖物激活受体γ减少血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞外基质的积聚及其作用机制

目的 探讨过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)γ1对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的系膜细胞外基质积聚的抑制作用及其机制。方法 脂质体转染质粒pIRES2-EGFP-PPARγ1/WT(野生型)于系膜细胞，给予AngⅡ(10-7 mol/L)刺激48 h。采用RT-PCR检测TGF-β1、PAI-1、c-fos、c-jun mRNA表达水平。采用ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1和FN浓度。Western印迹观察胞浆中I-κB、NF-κB及胞核中NF-κB、pERK蛋白表达水平。利用PPARγ与PPRE结合活性测定PPARγ1在系膜细胞中的活性。同时以PPARγ激动剂吡格列酮(6 μmol/L)、不具有目的基因PPARγ1的空白质粒pIRES2-EGFP和表达功能缺陷-突变型(DN)PPARγ1的质粒pIRES2-EGFP-mPPARγ1/DN作为对照。结果 PPARγ1过表达能显著性抑制AngⅡ诱导的系膜细胞TGF-β1、PAI-1的mRNA高表达(P < 0.05)，同时下调c-fos和c-jun mRNA高表达(P < 0.05)。转染PPARγ1/WT能显著降低AngⅡ 48 h刺激下细胞上清液中FN和TGF-β1浓度(P < 0.05)。在AngⅡ作用下系膜细胞AT1表达增加(P < 0.05)， PPARγ1可显著性减少AT1的高表达(P < 0.05)。AngⅡ诱导的系膜细胞pERK表达明显升高， PPARγ1可显著性减少pERK表达(P < 0.05)。转染PPARγ1/WT能上调AngⅡ刺激下系膜细胞胞浆中I-κB低表达，同时下调NF-κB由胞浆向细胞核的转移(P < 0.05)。转染PPARγ1/DN并无上述作用。吡咯列酮具有与PPARγ1相同的显著性效应。PPARγ1/WT转染组PPARγ1的活性明显高于其他组(P < 0.05)。结论 PPARγ1过表达能够抑制AngⅡ刺激下系膜细胞外基质的聚积，降低AT1受体蛋白表达，具有直接抗硬化的非代谢性效应，其机制可能是通过抑制ERK/AP-1及NF-κB等信号分子的传递。     

NF-κB、MMP-9与肝细胞肝癌浸润转移的实验研究

目的观察高转移性肝癌细胞系HCC9204细胞转染抑制性κB基因（IκB-α）后核因子κB（NF-κB）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的改变以及细胞浸润转移能力的改变。方法采用脂质体法将IκB-α基因转染HCC9204细胞，应用Western-blot及RT-PCR法检测MMP-9和NF-κB的表达；电泳迁移率分析（EMSA）测定NF-κB活性；免疫组化法检NF-κBp65、MMP-9的表达；激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察MMP-9细胞定位以及细胞形态；基底膜侵袭实验检测肿瘤细胞的浸润和转移。结果HCC9204细胞转染PCDNA3-IκB-α后，细胞内NF-κB和MMP-9 mRNA表达以及NF-κB活性下降；NF-κB、MMP-9表达具有明显的正相关；MMP-9蛋白表达位置和细胞形态改变；细胞侵袭转移能力明显下降。结论NF-κB表达水平与HCC9204的浸润转移能力有关；NF-κB活性抑制后细胞浸润转移能力下降，MMP-9表达下降可能起主要作用。     

白细胞介素-1β激活核转录因子-κB介导A549细胞分泌白细胞介素-8的研究

目的研究白细胞介素-1β(IL-1β)对肺II型上皮A549细胞分泌白细胞介素-8(IL-8)的诱导作用,探讨相关的细胞内信号通道的激活和传导的机理。方法以1ng/ml终浓度的IL-1β干预经核转录因子-κB(NF-κB)的IKK2复合物抑制物(AS602868)预处理的A549细胞,Western blot检测IL-1β干预后细胞内磷酸化IκBα(p-IκBα)和IκBα蛋白的表达水平;激光扫描共焦显微镜(LSCM)检测NF-κB的p65和p50蛋白的核转移过程;ELISA检测NF-κB的p65和p50蛋白与DNA结合活性及IL-8蛋白的释放。结果IL-1β干预后细胞内p-IκBα蛋白明显升高,IκBα蛋白明显下降;LSCM扫描显示p65和p50蛋白从胞浆向胞核转移,同时p65和p50与DNA结合活性明显升高(P<0.01);IL-8的蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。细胞经AS602868的预处理,阻断了细胞内p-IκBα蛋白升高和IκBα蛋白降解;减少了p65和p50蛋白的核转移和与DNA结合活性(P<0.01);降低了IL-8蛋白的表达水平(P<0.01)。结论IL-1β通过激活NF-κB介导了A549细胞分泌IL-8,结果提示可能通过抑制NF-κB信号通道的方法,减轻呼吸机相关肺损伤(VALI)的生物性损伤。     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ减少高糖诱导系膜细胞外基质的积聚及其机制

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)γ对高糖诱导肾小球系膜细胞(GMC)外基质(ECM)积聚的抑制作用及其机制。方法以表达野生型小鼠PPARγ1的质粒pIRES2-EGFP-mPPARγ1/WT转染系膜细胞(WT),然后予30mmol/L的高糖(HG)刺激48h,以ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1、纤连蛋白(FN)的浓度。GMC中c-fos、c-jun、葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)mRNA的表达检测采用半定量RT-PCR法,并以Western印迹检测胞浆中核因子抑制物(Ⅰ-κB)、核因子(NF-κB)及胞核中NF-κB、磷酸化细胞外调节激酶(p-ERK)的蛋白表达水平。同时以2μmol/L的PPARγ激活剂吡咯列酮(Pio)、转染表达功能缺陷的突变型(dominantnegative,DN)PPARγ1的质粒pIRES2-EGFP-mPPARγ1/DN(DN)或空白质粒pIRES2-EGFP作为对照。PPARγ的活性以其与PPARγ反应元件(PPRE)的结合能力表示。结果HG培养时系膜细胞的PPARγ活性较正常糖浓度(5mmol/L)培养时明显上升(P<0.01),HG WT组的PPARγ活性显著高于HG DN、HG pIRES2-EGFP和HG Pio组。与HG DN、HG pIRES2-EGFP相比,WT转染所致的PPARγ1高表达能显著抑制高糖诱导GMC的TGFβ-1、FN生成增多,减轻c-fos和c-jun的mRNA表达的上调,改善p-ERK蛋白水平的增加、胞浆Ⅰ-κB表达的降低以及NF-κB由胞浆向胞核转移的增加(P均<0.0     

一种新的NF-κB信号小分子抑制物

核转录因子-κB（NF-κB）能与多种细胞基因启动子和增强子序列位点发生特异性结合，调控其转录和表达，参与众多与免疫、炎症和应激反应相关的基因转录，同时也参与细胞增殖调控和凋亡等过程。近年来研究亦现实NF-κB活性失控与人类肿瘤发生密切相关。NF-κB蛋白在胞浆内与抑制性蛋白IκB结合成无活性复合物而存在，活化时IκB先被磷酸化为IκBα，随后被泛素一蛋白酶系统（UPS：由泛素活化酶E1、泛素结合酶E2与泛素一蛋白连接酶E3等组成）经泛素化及蛋白水解而降解，NF-κB被释放出来，进而进入细胞核发挥转录调控作用。     

核因子кB诱捕物寡核苷酸对肾小管上皮细胞炎症因子表达的影响

目的 研究核因子(NF)κB结合位点诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)对肾小管上皮细胞的NF-κB活性及下游炎症因子表达的影响。方法 (1)鱼精蛋白-脂质体法转染NF-κB decoyODN:将NF-κB decoy ODN与鱼精蛋白、脂质体混合,转染至TNF-α刺激培养的大鼠肾小管上皮细胞内,测定转染率。(2)凝胶电泳迟滞分析测定转染 NF-κB decoy ODN后细胞NF-κB活性。(3)RT-PCR方法检测转染NF-κB decoy ODN后细胞 ET-1、iNOS、ICAM-1、VCAM-l以及MCP-1 mRNA表达水平。结果 当+/-比例为4时,鱼精蛋白-脂质体法转染率高达93.20％;转染NF-κB decoy ODN可抑制TNF-α激活的NF-κB活性,从而进一步抑制ET-1、iNOS、ICAM-1、VCAM-I和MCP-1的mRNA表达。结论(1)鱼精蛋白-脂质体法是一种不受血清影响的高效率转染方法。(2)NF-κB decoy ODN在体外通过抑制NF-κB活性,进而影响肾小管上皮细胞炎症因子的表达。     

核因子κB诱捕物寡核苷酸对肾小管上皮细胞炎症因子表达的影响

目的 研究核因子(NF)κB结合位点诱捕物寡核苷酸(NF—κBdecoyODN)对肾小管上皮细胞的NF-κB活性及下游炎症因子表达的影响。方法 (1)鱼精蛋白-脂质体法转染NF-κBdecoy ODN：将NF-κBdecoyODN与鱼精蛋白、脂质体混合，转染至TNF—α刺激培养的大鼠肾小管上皮细胞内，测定转染率。(2)凝胶电泳迟滞分析测定转染NF-κBdecoy ODN后细胞NF-κB活性。(3)RT—PCR方法检测转染NF-κB decoy ODN后细胞ET-1、iNOS、ICAM-1、VCAM-1以及MCP-1mRNA表达水平。结果 当 ／一比例为4时，鱼精蛋白-脂质体法转染率高达93．20％；转染NF-κB decoy ODN可抑制TNF—α激活的NF-κB活性，从而进一步抑制ET-1、iNOS、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的mRNA表达。结论 (1)鱼精蛋白-脂质体法是一种不受血清影响的高效率转染方法。(2)NF—κBdecoy ODN在体外通过抑制NF-κB活性，进而影响肾小管上皮细胞炎症因子的表达。