去唾液酸糖蛋白受体介导的肝肿瘤靶向载药系统研究进展

去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)是一种主要表达在肝窦状隙和基底外侧细胞表面的受体,它能专一性识别、结合并内吞末端具有半乳糖或乙酰氨基半乳糖残基的去唾液酸糖蛋白类物质。基于这一特性,ASGPR受体介导的肝肿瘤靶向治疗引起了研究者们的广泛关注。本文从糖基化前药、小分子纳米药物载体和糖基化基因复合物3个方面对近3年来该领域的最新研究进展进行综述。     

去唾液酸糖蛋白受体介导的肝脏靶向性研究进展

去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)又称半乳糖受体,主要表达于哺乳动物肝窦状隙的肝实质细胞表面,参与多种生理功能.多年来ASGPR一直被用于介导药物和基因的肝靶向递送以及肝脏成像等方面的研究,目前已取得许多进展.ASGPR介导的药物肝靶向递送研究主要集中在抗肿瘤药物、降胆固醇药物等.基因肝靶向递送多见于反义药物.肝脏成像研究包括评价肝脏功能、鉴别肝细胞肝癌和肿瘤肝转移灶等.近年来ASGPR的靶向性应用研究还进一步扩展到肝细胞立体培养、肝细胞筛选及肝细胞移植等领域.本文就这些内容作一综述.     

肝靶向半乳糖基细胞色素C的合成及其肝靶向性研究

作者报道了半乳糖－细胞色素Ｃ偶联物的制备方法及其对肝无唾液酸糖蛋白受体结合的实验研究。结果表明：该偶联物的肝摄取具有高度的组织特异性、饱和性、种属特异性，符合受体介导结合的基本特征。肝的最大摄取值可达３２．９％，且保留了原细胞色素Ｃ生物活性的７８．５％，说明该偶联物具有明显的肝靶向性，可望成为肝靶向药物或靶向药物的载体。     

ASGP受体介导的体内基因转移

我们针对肝细胞特异的ＡＳＧＰ（去唾液酸糖蛋白）受体，构建了一种具有肝细胞特异导向性的基因转移载体系统，该载体包括两种共价结合的功能成分：一种为ＡＳＧＰ，作为配体，与肝细胞表面特异的ＡＳＧＰ受体结合；另一种为多聚左旋赖氨酸（ｐｏｌｙ－Ｌ－ｌｙｓｉｎｅ），与ＤＮＡ以强静电作用相结合。小鼠尾静脉注射３２Ｐ－ＤＮＡ－ｐｏｌｙ－Ｌ－ｌｙｓｉｎｅ－ＡＳＯＲ（去唾液酸ａｌ酸性糖蛋白）或等量的３２Ｐ－ＤＮＡ、ＡＳＯＲ、ｐｏｌｙ－ＤＬ－ｌｙｓｉｎｅ单体混合物，２０小时后，小鼠肝、脾、肾各组织的放射性计数结果表明该载体系统具有较强的肝组织特异性。     

受体介导TNFα基因转移的实验研究

目的检测受体介导基因转移人肿瘤坏死因子α基因的靶向性和表达效率.方法人转铁蛋白同多聚赖氨酸共价交联,盐键合成交联蛋白和外源基因质粒的超分子复合物,对表达转铁蛋白受体的肿瘤细胞株进行β-半乳糖苷酶和人肿瘤坏死因子α基因转移.结果检测到外源基因表达;转染人肿瘤坏死因子α基因后细胞上清液检测到一过性人肿瘤坏死因子α活性升高.结论受体介导基因转移肯有良好的靶向性,但表达效率低.     

肝靶向半乳糖基细胞色素C的合成及其肝靶向性研究

作者报道了半乳糖－细胞色素Ｃ偶联物的制备方法及其对肝无唾液酸糖蛋白受体结合的实验研究，结果表明：该偶联物的肝摄取具有高度的组织特异性、饱和性、种属特异性，符合受体介导结合的基本特征。肝的最大摄取值可达３２．９％，且保留了原细胞色素Ｃ生物活性的７８．５％，说明该偶联物具有明显的肝靶向性，可望成为肝勒向药物或靶向药物的载体。     

肝癌细胞膜上转铁蛋白受体和去唾液酸糖蛋白受体数量的变化

研究肝癌细胞膜摄取转铁蛋白受体的变化。采用免疫组化及配体受体结合法分别测定正常肝脏，肝 癌组织及癌旁肝组织转铁蛋白受体及去唾液酸糖蛋白受体的含量。该变化有利于肝癌细胞对转铁蛋白的有效摄取，也增加了肝癌细胞对高度唾液酸化的转铁蛋白的相对特异性摄取。     

靶向性非病毒载体GE7系统的构建及对人脑胶质瘤体外转移效率分析

目的：组建表皮生长因子受体介导的靶向性非病毒载体GE7系统，研究GE7系统对U251人恶性胶质瘤细胞株的体外转导效率。方法：应用上海市肿瘤研究所组建的EGF-R配体16肽GE7、流感病毒血凝素N端20肽HA20与多聚赖氨酸P.L.组成非病毒载体基因转移系统，分别与β-gal报道基因、p21WAF-1/CIP1基因组成多肽/DNA载体四元复合物。β-gal报道基因体外转导U251细胞，分析GE7系统体外导入效率。结果：载体DNA复合物组转染后24h即可观察到少量外源基因的表达，72h外源基因表达达到高峰，然后逐渐下降，转染后168h基本消失。单纯质粒DNA组仅见微弱外源基因的转入；对照组未见外源基因的转入。结论：GE7基因转移系统具有较高的基因转移效率和靶向性，为脑胶质瘤基因治疗提供了一种新的途径。     

受体介导TNFα基因转移的实验研究

目的 检测受体介导基因转移人肿瘤坏死因子α基因的靶向性和表达效率。方法 人转铁蛋白同多聚赖氨酸共价交联,盐键合成交联蛋白和外源基因质粒的超分子复合物,对表达转铁蛋白受体的肿瘤细胞株进行β－半乳糖苷酶和人肿瘤坏死因子α基因转移。结果 检测到外源基因表达;转染人肿瘤坏死因子α基因后细胞上清液检测到一过性人肿瘤坏死因子α活性升高。结论 受体介导基因转移具有良好的靶向性,但表达效率低。     

脑靶向非病毒基因递释系统的研究进展

脑靶向非病毒基因递释系统可有效介导基因药物跨越血脑屏障,到达病变部位发挥疗效,已成为研究热点之一。多项研究结果显示,通过适当机制如配体-受体特异性结合作用可显著提高非病毒基因递释系统在脑部的蓄积量,从而提高所携带外源基因在脑部的表达量。本文主要从受体介导和吸附介导两种机制入手,综述脑靶向非病毒基因递释系统的最新研究进展。     

肝靶向给药系统的研究

肝细胞直接与血液相通,是药物给药系统理想的靶部位.欲实现肝脏不同细胞靶向,可通过载体上的相应配体与肝实质细胞膜上的无唾液酸糖蛋白受体或非实质细胞膜上的甘露糖受体、清除受体等的特异相互作用来达到;也可通过脂质体、毫微粒、乳剂、脂蛋白等载体的被动靶向作用而实现器官靶向.本文对以上各种途径进行,旨在对治疗肝脏疾病提供参考.     

无唾液酸糖蛋白受体介导肝靶向给药系统的研究

成果完成单位　华西医科大学附属第一医院 ;华西医科大学药学院主要研究人员　管昌田　谭天秩　李云春　梁正路　何　生　李铜铃　钟裕国　　　　　　　吴　勇　庞其捷　宋志平　严忠勤鉴定组织部门　四川省科学技术委员会鉴定时间　 1 999年 5月 2 7日　　以核医学为主体与药学结合 ,在国内外首次对无唾液酸糖蛋白受体 (ASGP- R)介导肝靶向给药系统进行了多学科综合研究。该研究合成了 ASGP- R的特异性配体 NGA ,能特异与肝细胞结合 ,并发现蛋白或多肽半乳糖或乳糖化后均可经受体介导与肝细胞结合。据此 ,将 NGA与治疗药物偶联或将…     

半乳糖基抗CD3单抗—TIL体外趋肝性研究

为增强肝癌肿瘤浸润淋巴细胞的趋肝性,制备了半乳糖基抗ＣＤ３单克隆抗体－ＴＩＬ,将其与肝细胞共同孵育,在倒置显微镜下观察两者通过无唾液酸糖蛋白受体介导的作用情况。     

FXR及其作用的靶基因

核受体（nuclear receptor）是一类配体依赖的转录因子。是一个迄今约有150个成员的大家族，它包括甾体激素受体，非甾体激素受体以及大量的配体尚待鉴定功能不清的孤儿受体（orphan nuclear receptors）。近年研究发现几种孤儿核受体，包括肝脏X受体（liver X receotor，LXR）、法尼醇受体（farnesoid Xreceptor，FXR）、肝受体同源物-1（liver receptor homology-1，LRH-1）、小分子异源二聚体伴侣（smallheterodimer partner，SHP）及它们介导的信号途径在调节胆固醇及胆汁酸代谢平衡方面起重要的作用。而目前与胆汁酸代谢关系较明确的是FXR。现就FXR及其作用的靶基因综述如下。     

肝靶向抗病毒药Lac-PLL-ACV的制备及其趋肝性研究

目的：减少抗病毒药阿昔洛韦（Acyclovir,ACV）在治疗乙型肝炎中的肝外毒副作用，获得肝靶向ACV偶联物。方法：多聚赖氨酸（Poly-L-lysine,PLL)在氰硼酸钠的催化作用下与乳糖反应生成乳糖化多聚赖氨酸，乳糖化多聚赖氨酸与咪唑化阿昔洛韦在37℃pH9.5的条件下反应合成偶联物乳糖化多聚赖氨酸－阿昔洛韦（Lactosaminated poly-L-lysine-acyclovir,Lac-PLL-ACV）。偶联物经尾静脉注射进入小鼠体内后，收集小鼠血浆及肝脏样品，用高效液相色谱法测定药物浓度，研究遇联物的体内分布和药代动力学。结果：HPLC检测证实Lac-PLL-ACV在血浆中十分稳定，不易解离出ACV。偶联物的肝最大摄取率约为60％，是ACV组的10倍以上，偶联物肝中的T1／2，AUC，CL分别为ACV的4．2倍，56．6倍和1／57，具有明显的肝靶向性。结论：乳糖化多聚赖氨酸作为肝去唾液酸糖蛋白受体（Asialoglycoprotein receptor,ASGPR)介导的一种药物载体，能使抗病毒药ACV获得较满意的肝靶向性。     

肝X受体在脂质代谢和炎症反应中的作用

近年来，对于核受体的研究进展迅速，肝X受体属于孤核受体家族，是配体依赖性转录因子超家族成员。目前研究发现肝X受体的信号转导对于脂质代谢、炎症反应和先天性免疫意义重大，肝X受体调控下的靶基因改变是脂质代谢、运输、转化、合成，以及糖代谢的关键调控点。现已证实肝X受体和发育过程的基因表达、细胞分化、代谢等生理过程密切相关。本文将就肝X受体的研究现状进行综述，阐明肝X受体调控下的信号转导途径和靶基因表达改变对脂质代谢和炎症反应的作用。     

转铁蛋白受体介导的肝癌靶向性HSV-tk/GCV系统的构建及体外效应研究

目的：构建肝癌靶向性HSV—tk／GCV基因转移系统，并研究其在体外对肝癌细胞的杀伤效应。方法：体外培养通过基因重组技术构建和表达抗转铁蛋白受体(TfR)人—鼠嵌合抗体的转染瘤细胞D2C5．6，诱导裸鼠(Balb／c，nu／nu)产生腹水并纯化；以蛋白质连接因子—水溶性碳二亚胺(EDC)介导TfR的抗体与多聚左旋赖氨酸的连接(Ab—PLL)，与pEBAF／tk按比例混匀，得到Ab—PLL—pETAF／tk基因转移系统；分别转染不同的细胞株进行体外效应研究：人肝癌细胞株HepG2、SMMC7721，人肺癌细胞株549，观察给予不同浓度的更昔洛韦(GCV)随时间延长的细胞改变情况，用MTT法检测GCV对不同细胞的杀伤作用。结果：分析型酸性尿素凝胶电泳证实抗TfR的抗体与PLL成功连接；体外杀伤实验显示：经Ab—PLL—pETAF／tk基因转移系统处理的3种细胞对GCV表现出不同的敏感性。HepG2细胞(CD71 ，AFP )对GCV很敏感，低浓度的GCV(1mg／L)处理3d，即可使细胞生长抑制率达到74．8％，SMMC7721细胞(CD71 ，AFP )对GCV低度敏感，A549(CD71-，AFP-)对GCV不敏感。结论：TfR介导的肝癌靶向性HSV—tk／GCV基因转移系统构建成功；有可能用以肝癌细胞为靶细胞的基因治疗的研究。     

电基因疗法治疗肿瘤的研究进展

迄今大量研究已经证实,肿瘤发生与发展的生物学基础是基因突变,所以,肿瘤基因治疗已成为广大肿瘤学者研究的热点.基因转导和策略选择是肿瘤基因治疗的关键.目前基因转导方法包括DNA-磷酸钙共沉淀、脂质体介导、电穿孔、显微注射、受体介导转移、DNA直接注射、基因枪及病毒介导等,但仍存在许多问题,如基因转移效率低、靶向性不确切、安全性低等.1996年,Toru Nishi等利用电穿孔法转染lacZ基因和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)DNA治疗神经胶质瘤,并首次将此法命名为"电基因疗法"(electrogene therapy),为肿瘤治疗提供一种新的思路.     

CD71抗体靶向转移系统的构建及对细胞的生长抑制作用

目的:构建肝癌靶向性的Survivin 反义RNA/HSP70基因转移系统,并研究其在体外对肝癌细胞的生长抑制作用.方法:体外培养抗转铁蛋白受体(CD71)抗体的杂交瘤细胞株D2C5.6,诱导裸鼠产生腹水并纯化,以水溶性碳二亚胺介导CD71抗体与多聚左旋赖氨酸(PLL)的连接,再与Survivin 反义RNA/HSP70双基因载体按比例混匀,得到-PLL-载体系统;转染人肝癌细胞株HepG2后,采用MTT法观察细胞的生长情况.结果:分析型酸性尿素凝胶电泳实验证实抗CD71抗体与PLL成功连接;MTT试验显示,Ab-PLL-Survivin 反义RNA/HSP70基因转移系统处理的HepG2细胞生长明显受到抑制.结论:CD71抗体介导的肝癌靶向转移系统已经成功构建,为肝癌的基因治疗提供了一定的实验基础.     

肝非唾液酸糖蛋白受体显像与肝储备功能关系的研究

目的 探讨肝非唾液酸糖蛋白受体显像与肝储备功能关系。方法 对１９例肝硬变、门脉高压患者用＾９９ｍＴｃ标记ＮＧＡ（新半乳糖白蛋白）与ＡＳＧＰ－Ｒ（肝非唾液酸糖蛋白受体）结合法,观测肝受体显像;眼声多普勒观测肝血流的变化。结果 肝硬变组的ＭＲＩ、ＨＢＦ和ＡＢＣＨＥ均呈正相关,与总胆红素呈显著负相关。行肝切除贲门周围血管离断术７例,术后１周重新评估肝功能分级：术前肝功能Ⅰ级２例无变化;术前肝功能Ⅱ级５例