人血超氧化物歧化酶结构与功能的研究——Ⅰ、人血超氧化物歧化酶的分离、纯化

成人静脉血来自血站输血队员,脐带血取自正常产妇分娩后,肝素抗凝,4℃保存,三天内进行纯化。 (1)分离红细胞,制备溶血物;所分离出的红细胞再用4倍体积的生理盐水洗两次(4℃预冷),洗净压紧的红细胞加同体积的双蒸馏水,使之成溶血物。     

正交设计进行消淤接骨散的醇提工艺

背景：采用传统水提法提取的消淤接骨散药效不明显,推测可能为有效成分提取不充分所致。 目的：正交实验进行消淤接骨散醇提取工艺设计。 方法：以处方的醇浸膏得率和君药骨碎补有效成分柚皮苷含量为考察指标,采用L₉(3⁴)正交实验法进行优选,HPLC法测定柚皮苷含量,对消淤接骨散醇提取工艺进行优化筛选。观察醇浸膏得率,柚皮苷含量及吸醇率。 结果与结论：第3次醇提的醇浸膏得率及柚皮苷提取量所占比率均大于10%,应进行3次醇提方可完全提取药物成分。药材吸醇率平均值为265.67 mL/g,表明提取时第1次应多加3倍量溶剂。正交实验结果分析,由极差R值大小显示,各因素作用主次为加醇量>乙醇体积分数>提取时间,方差分析结果表明：乙醇体积分数、加醇量两因素的影响具有显著性意义(P < 0.05)。最佳优选工艺即药材加乙醇回流提取3次,第1次加6倍量体积分数65%乙醇提取2 h,第2次加5倍量体积分数65%醇提取1.5 h,第3次加5倍量体积分数65%醇提取1.5 h。较以往中药提取工艺可更有效得出药物有效成分、节省不必要的工艺流程,且该工艺操作简单,重复性好,柚皮苷含量高。     

酶免疫法测定免疫球蛋白G,A和M的轻链比率

作者采用已知总K 和λ浓度的商品化人血清作工作标准,采用ELISA 法,能特异、敏感地测定各免疫球蛋白轻链比率。方法:微量反应板各孔加100μl 经包被缓冲液稀释2000倍的兔抗人IgG,IgA 和IgM血清,4℃过夜。用前,将已包被的反应板用洗涤液洗10次。未结合位点用100g/L 牛血清白蛋白(BSA)的PBs 37℃封闭1小时。洗板,各孔加100μl 经PBS 适当稀释的标准液和样品,37℃孵育3小时。洗板,然后将洗     

阿莫西林与舒巴坦联合的抗菌作用及对β-人酰胺酶稳定性的研究

目的 :评价阿莫西林钠 /舒巴坦钠 (AMOX/SBT)的体内、外抗菌活性及对 β 内酰胺酶的稳定性 ,并与其他抗菌药比较。采用琼脂二倍稀释法对临床分离鉴定的产酶菌株 (2 0 0株 )及标准产酶株 (1 6株 )进行体外抑菌实验 ;体内抗菌实验按Bliss法用NDST软件计算半数有效量ED50 值及 95 %可信限 ;对标准产 β 内酰胺酶菌株用超声波碎法提取粗酶 ,比较各药的相对水解率。结果不同配比AMOX/SBT对 2 0 0株临床分离产 β -内酰胺酶菌株的抗菌活性较AMOX单用强 2～ 64倍 ,以 2∶1为最佳。对 1 6株国际标准产酶株的体外抗菌试验显示 :AMOX的MI…     

3种疱疹科病毒DNA提取方法的建立

采用ＨＳＶ1、ＨＳＶ2和ＨＣＭＶ 3种疱疹科病毒的病毒细胞培养液 ,用冻融法、煮沸法、蛋白酶Ｋ法、ＮＰ40 (乙基苯基聚乙二醇 )法、综合法及改良通用法提取病毒ＤＮＡ。综合法是将 3种病毒细胞培养混合物各 2ｍｌ,2 5 0 0ｒ/ｍｉｎ离心 10ｍｉｎ ,用2ｍｌ冷ＰＢＳ缓冲液溶解沉淀 ,12 0 0ｒ/ｍｉｎ离心 5ｍｉｎ ,用 1ｍｌ胰酶 (0 2 5 % )溶解沉淀 ,5 0℃保温 18ｈ ,加入等体积的酚 /氯仿 /异戊醇 (2 5 2 4 1) ,30 0 0ｒ/ｍｉｎ离心10ｍｉｎ ,取水相加入 1/ 2体积 7 5ｍｏｌ/Ｌ的ＮＨ4 (ＡＣ) ,2倍无水乙醇 , 2 0℃放置 30ｍｉｎ ,10 0 0 0…     

应用微囊法培养高密度的人TIL和其它免疫反应性T细胞

作者所用肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)来自黑色素瘤患者,用含1000U/ml rIL-2的无血清AIM-V 培养基培养。从正常人外周血分离其它T 细胞,以用EB 病毒转化及丝裂霉素C 处理过的B 细胞作为刺激细胞,也用AIM-V 培养,内含25-100U/ml rIL-2。微囊的制作采用Damon 生物技术公司的专利技术(专利号4,352,883)。基本过程如下:离心(350×g)5分钟收集细胞,以150mM 的NaCl 液洗一次,重新悬浮于用150mM NaCl 液配制的含1.2%(W/V)藻酸钠的溶液中,再通过一球形微滴形成装置     

冻干保护剂和预冻结速率对猪关节软骨压缩杨氏模量的影响

探索冻干保护剂的种类、浓度以及预冻结速率等对猪关节软骨力学性能的影响.采用动态机械热分析仪(DMA)的压缩模式,研究预冻结速率为1、10、20℃/min,不同体积百分比浓度[10％、20％、30％、40％、50％、60％、80％ (V/V)]二甲亚砜(DMSO)、甘油和丙二醇作为保护剂及对猪关节软骨压缩杨氏模量的影响.研究结果表明:1)经中低浓度[小于40％ (V/V)]冻干保护剂处理样品的杨氏模量随冻干保护剂浓度的增大而增大,而高浓度范围内[大于40％(V/V)]随冻干保护剂浓度的增大而减小,如:预冻结速率为1℃/min时,经浓度为10％ (V/V)DMSO处理样品的杨氏模量为1.412 MPa,30％ (V/V) DMSO为2.031 MPa,40％(V/V) DMSO为2.331 MPa,50％(V/V) DMSO为2.227 MPa,60％ (V/V) DMSO为1.991 MPa,80％ (V/V) DMSO为1.868 MPa;2)经中低浓度[小于40％ (V/V)]冻干保护剂处理的样品采取慢速预冻结速率对于保护冻干关节软骨的杨氏模量效果最好,如:预冻结速率为1℃/min时,经浓度为40％ (V/V) DMSO处理样品的杨氏模量为2.331 MPa,预冻结速率为10℃/min时,杨氏模量为2.151 MPa;3)在一定浓度范围内[即大于30％ (V/V)且小于60％(V/V)],相同浓度下样品经DMSO处理的杨氏模量最大,甘油次之,丙二醇的最小.     

纯化血中树突状细胞的新技术

作者报导一种简单的方法,可使人类外周血树突状细胞(DC)的提取纯度达40～80%,同时也解决了一些其他细胞,如单核细胞、T 细胞和B 细胞的提纯。首先经Ficoll(?)Paque 分离液从人血中分离出外周血单个核细胞(PBMC),随即加入Percoll 密度梯度分离液中,4℃时1800g 离心25分,此为1℃Percoll 密度梯离离心。1℃和高密度细胞在低温下洗3次,并进一步经玫瑰花结形成试验分离成富含(Er~+)和除掉(Er~-)T 细胞的细胞群,所用羊红细胞是经神经氨酸处理     

用单克隆抗独特型抗体检测肾综合征出血热(HFRS)病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体的临床意义

用抗独特型抗体(Ab_2)检测细胞表面抗原受体是将Ab_2作为探针用于免疫学检测而出现的新的研究方法。本文在制备了HFRS病毒抗独特型抗体的基础上应用单克隆抗独特型抗体(IB_1)作间接免疫荧光试验,检测了HFRS病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体。首先,采取病人外周肝素抗凝血用淋巴细胞分离液按常规方法分离淋巴细胞,将淋巴细胞用RPMl1640不完全培养液离心洗一次后弃上清,将沉降细胞重新悬浮后调至0.1ml并加入5％小牛血清,混匀,取约10～30μ1加在预置于离心细胞沉淀器的玻片上,800rpm离心5     

改进的从全血中直接进行PCR扩增的方法

许多PCR诊断性检测都是以血液作为生物性材料。从血液中提取DNA一般采用苯酚/氯仿方法。可是这样既耗时又容易导致提取过程中的DNA污染。为了解次上述问题,一种替代方法直接从血液样品中扩增靶DNA的方法问世。以前的研究者报导能够进行扩增的最小体积有2μl和8μl,而当超过上述体积时都将抑制PCR反应。但作者认为,当血液样品靶DNA的含量很少时,增加血液样品的体积可提高反应的灵敏度。作者介绍了一种简单、有效的方法可以从较大体积的全血样品(约45μl)中进行PCR扩增。在100μl反应体系中可直接对45μl的全血进行     

羊红细胞与抗体IgG致敏酵母菌混合玫瑰花试验在临床上的初步应用

本文介绍一种新的检测具有IgGFc受体T淋巴细胞的方法—羊红细胞(E)与抗体IgG致敏酵母菌(YC)混合玫瑰花试验(简称E_1 IgG Y混合玫瑰花试验。具体方法:(1)首先制备抗酵母菌IgG。(2)试验程序:(a)IgG致敏酵母制备:酵母菌煮20分钟后,洗1次用定性滤纸过滤,再洗2次,用生理盐水配制5×10~7/毫升悬液,加等量不同浓度的抗酵母抗体IgG使用液,混匀37℃水浴1     

用反向被动血凝试验检测流行性脑膜炎病人和带菌者的研究

本文报道用脑膜炎双球菌A群抗血清致敏红细胞的反向被动血凝试验(简称RPHA),作流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)病人和带菌者的检测,方法简便,特异快速,经济有效,并能提高检出率。 一、方法: (一)致敏红细胞的制备:取10％经丙酮醛和甲醛固定的人“O”型红细胞吸收过的脑膜炎A群抗血清(稀释浓度1:400)1毫升,混匀,置37℃水浴1小时,继而离心沉淀取积压红细胞,用0.11MpH7.2PB洗2～3次,并配成7.5％的致敏红细胞悬液,置4℃保存。临用时用0.1％牛血清白蛋白磷酸缓冲液(简称0.1％ APB)稀释10倍     

用单克隆抗独特型抗体检测肾综合征出血热（HFRS）病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体的临床意义

用抗独特型抗体(Ab2)检测细胞表面抗原受体是将Ab2作为探针用于免疫学检测而出现的新的研究方法。本文在制备了HFRS病毒抗独特型抗体的基础上应用单克隆抗独特型抗体(1B1)作间接免疫荧光试验，检测了HFRS病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体。首先，采取病人外周肝素抗凝血用淋巴细胞分离液按常规方法分离淋巴细胞，将淋巴细胞用RPMI 1640不完全培养液离心洗一次后弃上清，将沉降细胞重新悬浮后调至0．1ml并加入5％小牛血清．混匀，取约10—30μl加在预置于离心细胞沉淀器的玻片上，800rpm离心5分钟，取下玻片待干燥后加丙酮-福尔马林固定液固定30秒，水洗，吹干。     

单克隆抗体对霍乱弧菌抗原性的研究——Ⅰ.12株McAb对50株霍乱弧菌菌体抗原的初步研究

本文是用12株单克隆抗体对50株El Tor生物型霍乱弧菌的菌体抗原的研究结果。采用的方法是ELlSA间接法:于酶联板中加入经鉴定的待检测的菌体抗原50ul/孔(1亿/ml),过夜蒸干包被,洗3次,加入1％BSA100ul/孔,37℃经1小时封闭,洗3次:加入McAb(1:80)50ul/孔,37℃1小时,洗3次,加兔抗鼠酶标抗体50ul/孔,37℃作用2小时,洗3次后,加底物20分钟后,用2M硫酸终止反应,于酶联免疫检测仪中测定OD值,以P/N>     

人C_1q:迅速分膏和免疫扩散定量测定

从人血清或血浆中分离C_1q的方法很多,但这些方法难以获得纯C_1q。本文介绍一种简单,快速的两步法,从人血浆中分离C_1q,纯度好,产量高。另外还用单向免疫扩散法测定了混合人血浆中C_1q的浓度。其方法是:(1)过时的O型人枸橼酸血浆1000ml,用2M NaOH调pH到8.8,加入55ml 0.2M EDTA,再调pH到8.8。用5mM1.3-二氨基丙烷(PH8.8)透析后形成沉淀物,离心(6000g,10分钟)分离之,并用40ml透析缓冲液洗3次。悬浮再用含10mMEDTA3×25ml 5mM磷酸盐缓冲液(PBSE)(pH7.4,μ=0.15)离心取沉淀物,获得富含     

人类第22号染色体

第22号染色体令人感兴趣的主要原因有两个:(1)它比较短,因而容易用克隆的DNA片段组建分子图;(2)有相对大量的遗传性和获得性疾病与它有关,特别是恶性肿瘤。正带人类第22号染色体的细胞遗传学第22号染色体是最短的人类染色体之一。它大约含1.8%完整单倍体基因组,约含52MbDNA,比第21号染色体稍长。它比最大的1号染色体小5倍,比X染色体小3倍,且作图最多。由于其体积较小,故用流式分类(flow sorting)分离较好,尤其是     

用随意扩增多态性DNA PCR方法检查实验小鼠的嗜肺性巴氏杆菌

嗜肺性巴氏杆菌是动物致病菌 ,人感染多通过猫、狗咬伤或抓伤而致。嗜肺性巴氏杆菌是实验啮齿动物 (特别是小、大鼠和豚鼠 )巴氏杆菌病的主要病原菌。为了鉴定从实验小鼠分离的 15株嗜肺性巴氏杆菌的基因型 ,本文用 3个随机引物 (每个引物不得由 0个碱基组成 ) ,用ＲＡＰＤ ＰＣＲ方法对分离的 15株嗜肺性巴氏杆菌进行扩增试验 ,以鉴定这 15株嗜肺性巴氏杆菌的基因分型。本试验所用的 15份测试菌株标本采自小白鼠 ,编号 1～ 15号。 2 4ｈ培养物离心沉淀 ,收集嗜肺性巴氏杆菌 ,细菌用ＰＢＳ洗 2次 ,再用单蒸水洗 1次 ,沉淀物加 0 7ｍｌ无菌…     

培养在细胞外基质类似物中的成纤维细胞和上皮细胞的形态

为了制造人工皮肤,作者研究出一种含有葡糖胺聚糖和糖蛋白,或只含糖蛋白胶原复合材料。作者使用Ⅰ型胶原材料,先用蒸馏水和异丙醇(1:1V/V)洗干净,然后消毒冷冻干燥。用一个容器,把     

同基因背景小鼠核蛋白诱导狼疮鼠模型

背景：自发性狼疮鼠模型不能对基因以外其他的致病因素进行研究。 目的：以同基因背景Balb/c小鼠核蛋白免疫小鼠后诱导狼疮鼠模型。 方法：选取4~6周SPF级Balb/c小鼠30只,等分为3组。V1组肌肉注射提取的同系Balb/c小鼠核蛋白,间隔3周免疫1次,共免疫4次;V2组注射等体积PBS;V3组为正常对照。检测小鼠末次免疫后3周的24 h尿蛋白、血清抗核抗体、抗双链DNA抗体、小鼠肾脏直接免疫荧光。 结果与结论：V1组小鼠24 h尿蛋白、血清抗双链DNA抗体、抗核抗体均明显高于V2组、V3组,且V1组小鼠肾小球有免疫球蛋白G免疫复合物沉积,可见肾小球轮廓,V2组、V3组未见肾小球轮廓,只见非特异性的微弱荧光。说明以同基因背景Balb/c小鼠核蛋白免疫Balb/c小鼠能够成功诱导狼疮鼠模型。     

肺癌肺内肿瘤三维适形放疗正常肺组织定义的研究

目的:分析肺癌肺内肿瘤三维适形放疗中各种正常肺体积定义,探讨合理的正常肺体积定义方法。方法:肺癌肺内病变患者CT定位,扫描范围包括全肺,将数据传输到治疗计划系统(TPS),勾画肿瘤靶区(GTV)、临床靶区(CTV)、计划靶区(PTV)。将PTV外所有具备正常肺功能的肺组织定义为正常肺组织,设计制定计划一(P1);将GTV外所有具备正常肺功能的肺组织定义为正常肺组织,设计制定计划二(P2);将全肺组织定义为正常肺组织,设计制定计划三(P3)。P1、P2、P3的射野数、射野方向、权重,剂量分布等相同。利用剂量体积直方图(DVH),分析比较三个计划的V20、V30、Dmean等值。结果:P3的V20、V30、Dmean等比P2的稍大,均数没有显性差异(P﹥0.05);P1的V20、V30、Dmean等比P2的小,均数均有差异(P﹤0.05)。结论:P1掩盖了肺体积的损伤,尤其是肿瘤体积大时更为突出,容易产生严重肺损伤。P2反映了客观情况,可以引起医生高度警惕,避免严重肺损伤发生,建议将GTV外所有具备正常肺功能的肺组织定义为正常肺组织。