miR-107靶向肿瘤蛋白D52抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭

目的研究microRNA-107(miR-107)对前列腺癌细胞生物学功能的影响和潜在的作用机制。方法采用瞬时转染、细胞克隆、细胞划痕、侵袭实验检测miR-107组与对照组(miR-NC组)对前列腺癌细胞生物学功能的影响。此外,通过靶基因预测软件TargetscanHuman7.2筛选出肿瘤蛋白D52(TPD52)作为miR-107的潜在下游靶基因并采用双荧光素酶报告基因实验进行了特异性结合的验证。同时,进一步通过蛋白免疫印迹和免疫荧光实验进行靶基因的表达检测。结果miR-107组的细胞划痕愈合率、侵袭率、增殖率均低于miR-NC组(P < 0.01)。miR-107组对靶基因TPD52表达量小于miR-NC组(P < 0.01)。结论miR-107通过靶向TPD52抑制前列腺癌的增殖和侵袭。     

Notch1表达与乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的相关性

目的 研究Notch1的表达与乳腺癌细胞迁移侵袭能力的相关性.方法 以RT-qPCR及Western blot检测细胞株MCF-7及MCF-7/ADR中Notch1基因及蛋白的表达情况;以Transwell小室进行迁移实验和侵袭实验检测上述细胞株的迁移、侵袭能力.结果 MCF-7/ADR的Notch1 mRNA表达水平明显高于MCF-7[(0.074 8±0.004 3)vs.(0.046 1±0.002 2)],差异有统计学意义(P<0.05);MCF-7/ADR的Notch1蛋白表达水平明显高于MCF-7[(1.636 0±0.042 2)vs.(0.622 0±0.028 6)],差异有统计学意义(P<0.05);MCF-7/ADR的迁移及侵袭的穿膜细胞数均明显多于MCF-7的穿膜细胞数[(60.16±5.27) vs.(13.88±3.16);(13.62±2.25) vs.(9.62±1.30)],差异均有统计学意义(均P<0.05).Notch1 mRNA及蛋白的表达水平与乳腺癌细胞侵袭、迁移能力呈正相关.结论 Notch1信号通路参与调控乳腺癌细胞的侵袭与迁移能力,阻断该通路活化将可能抑制乳腺癌细胞的侵袭、迁移.     

DTX2通过Notch2/Akt轴促进结直肠癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨DTX2对结直肠癌（CRC）细胞迁移侵袭的影响及作用机制。方法 利用基因工具干预CRC细胞,分为敲低组（DTX2-shRNA）、敲低空载组（neg-shRNA）、未转染组（con）、过表达空载组（pcDNA）及过表达组（pcDNA-DTX2）,利用qRTPCR及Western blotting法检测转染效率。采用划痕和Transwell侵袭实验检测DTX2基因的表达改变对CRC细胞迁移侵袭能力的影响,并通过Western blotting检测各组中Notch2、NICD、Akt、p-AKT、MMP-2及MMP-9蛋白的表达水平。CRC细胞共转染pcDNA-DTX2和Notch2 siRNA,检测回复实验对CRC细胞迁移侵袭能力的影响。结果 CRC细胞中DTX2 mRNA和蛋白表达量,敲低组中明显降低（P<0.01）,过表达组中明显升高（P<0.01）。划痕和Transwell侵袭实验提示,CRC细胞迁移侵袭能力,DTX2 shRNA显著低于con和neg-shRNA(P<0.01);pcDNA-DTX2显著高于con和pcDNA(P<0.01)。Wes...     

MiR-148a调控胃癌细胞侵袭迁移的作用机制研究

目的 研究miR-148a在胃癌侵袭迁移中的作用,为新肿瘤标志物的研究提供理论基础。方法 荧光实时定量PCR（RT-PCR）检测miR-148a在胃癌细胞系和正常胃黏膜细胞中的表达水平,HGC-27分别转染miR-148a control/miR-148a mimic和miR-148a control/miR-148a inhibitor后检测miR-148a表达水平的改变,Transwell法检测miR-148a对HGC-27细胞侵袭和迁移的影响,Western blot法检测miR-148a对胃癌细胞中c-myc蛋白表达的调控。结果 MiR-148a在胃癌细胞中的表达明显低于正常胃黏膜细胞;HGC-27转染miR-148a mimic后miR-148a表达升高,HGC-27转染miR-148a inhibitor后miR-148a表达下降;miR-148a能够显著抑制HGC-27细胞的侵袭和迁移;miR-148a能够明显下调c-myc蛋白的表达。结论 miR-148a通过c-myc来发挥抑制胃癌侵袭迁移的作用。     

circ_0001588靶向miR-1286调控人胃癌AGS细胞糖酵解、增殖、迁移及侵袭

目的 探讨circ_0001588对人胃癌AGS细胞糖酵解、增殖、迁移及侵袭的影响及可能机制.方法 采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织、人胃癌细胞株中circ_0001588、miR-1286表达;将人胃癌细胞分为si-NC组、si-circ_0001588组、miR-NC组、miR-1...     

miR-381靶向MAP3K2抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的: 探讨微小RNA-381(miR-381)对前列腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响,并研究miR-381的靶基因及其功能。方法: 采用qRT-PCR检测miR-381在人前列腺癌细胞系中的表达水平。采用基因转染方法过表达或敲减miR-381在前列腺癌细胞中的表达,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕损伤实验、Transwell迁移实验和基质胶侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用生物信息学方法预测miR-381靶点,并采用荧光素酶报告基因分析进行验证。结果： miR-381在前列腺癌细胞中低表达。与空白对照组相比,miR-381 mimics组前列腺癌细胞增殖能力明显降低,克隆数显著减少,凋亡明显增加,迁移和侵袭的细胞数减少;miR-381 inhibitor组结果则相反。荧光素酶报告基因分析证实MAP3K2是miR-381中的靶基因。miR-381 mimics下调而miR-381 inhibitor上调前列腺癌细胞中MAP3K2 基因和蛋白表达。 结论： miR-381通过靶向MAP3K2抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,发挥抑癌基因作用。     

miR-599靶向YAP1对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响

目的：探讨miR-599靶向Yes相关蛋白1(YAP1)对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响。方法：采用qRT-PCR检测正常卵巢上皮细胞IOSE-80与卵巢癌细胞SKOV3中miR-599的表达;将SKOV3细胞分为6组：空白组、miR-NC组、miR-599 mimics组、siRNA-NC组、YAP1 siRNA组、YAP1 siRNA+miR-599 inhibitor组,划痕实验检测各组细胞迁移;Transwell实验检测各组细胞侵袭;Western Blot检测各组细胞中YAP1蛋白表达;双萤光素酶实验验证miR-599与YAP1的关系。结果：miR-599在SKOV3细胞中的表达水平显著低于IOSE-80细胞（P<0.05）;过表达miR-599或沉默YAP1均可抑制SKOV3细胞的迁移和侵袭;miR-599可靶向调控YAP1表达;抑制miR-599可逆转沉默YAP1对SKOV3细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论：过表达miR-599通过下调YAP1来抑制SKOV3细胞的迁移和侵袭。     

miRNA-186靶向Twist-1促胃癌侵袭、迁移的机制研究

目的检测miRNA-186在胃癌中的表达情况,观察miRNA-186表达改变对人胃癌细胞株侵袭、迁移能力的影响并分析可能的分子机制。方法RT-PCR法检测40例胃癌患者胃癌及配对的正常胃黏膜组织中miRNA-186的表达水平,同时检测miRNA-186在胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞中的表达水平。在胃癌细胞中分别转染miRNA-186模拟物（mimic）、抑制物（inhibitor）以上调、下调miRNA-186的表达,应用Transwell试验观察其对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响。应用生物信息学软件预测miRNA-186可能的靶基因,并经双荧光素酶试验及Westernblot试验验证靶基因,分析其促转移的分子机制。结果胃癌组织相较于正常胃黏膜组织、胃癌细胞株相较于正常胃黏膜上皮细胞株的miRNA-186表达水平均降低（均P＜0.05）。在胃癌细胞中,分别上调、下调miRNA-186的表达水平,能够抑制、促进胃癌细胞的侵袭、迁移能力。miRNA-186与Twist-1之间存在反向调控的关系,Twist-1是miRNA-186的靶基因。同时发现,下调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达上调,E-cadherin表达下调,而当上调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调。结论在胃癌组织中miRNA-186的表达水平降低,可能通过靶向调控Twist-1的表达,改变E-cadherin和N-cadherin的表达水平,导致胃癌细胞上皮间质转化,进而促进胃癌细胞的侵袭、迁移。     

MiR-4719通过靶向调控ARHGAP36抑制人乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 检测miR-4719在乳腺癌组织和细胞中的表达,研究其对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响及其分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR检测30对人乳腺癌组织和癌旁组织,乳腺癌细胞株（BT549和MDA-MB-231）以及正常乳腺上皮细胞（MCF-10A）中miR-4719和ARHGAP36的表达水平。生物信息手段分析miR-4719对乳腺癌患者生存率的影响,并预测miR-4719的潜在靶基因。将miR-4719模拟物,靶向ARHGAP36的shRNA、ARHGAP36过表达质粒分别转染乳腺癌细胞。Western blot和免疫组化实验检测ARHGAP36的蛋白水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测癌细胞的迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-4719与ARHGAP36的mRNA 3'-非翻译区（3'-UTR）直接结合。结果 与癌旁组织、正常乳腺上皮细胞相比,miR-4719和ARHGAP36分别在乳腺癌组织(P<0.001)和乳腺癌细胞（P<0.01）中显著降低和增高。miR-4719低表达与乳腺癌患者不良预后密切相关（P<0.01）。过表达miR-4719或敲低ARHGAP36可明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移（P<0.01）。乳腺癌组织中miR-4719和ARHGAP36表达水平呈负相关（P<0.01）,双荧光素酶报告实验显示miR-4719可靶向调控ARHGAP36的表达（P<0.01）,向癌细胞外源性导入miR-4719可明显抑制ARHGAP36的表达（P<0.01）。此外,过表达ARHGAP36可逆转miR-4719模拟物对癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用（P<0.01）。结论 乳腺癌组织和癌细胞中miR-4719的丧失,导致靶基因ARHGAP36的异常高表达,促进了人乳腺癌细胞的迁移和侵袭。     

miR-138靶向SYT13对胃癌细胞侵袭和迁移的影响及机制研究

目的 探究microRNA-138(miR-138)对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响并探讨其相关机制.方法 RT-PCR检测胃癌和癌旁组织中miR-138的表达及miR-138与上皮标志物E-Cadherin及间质标志物Vimentin表达的相关性;使用TargetScan 7.2预测miR-138的可能结合靶点,荧光素...     

microRNA-137对人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭的影响

目的 研究miR-137 过表达对人胃癌MKN-45 细胞迁移侵袭的影响. 方法 采用RT-PCR法检测5 株胃癌细胞和人胃黏膜上皮细胞( GES )中 miR-137 的表达. 构建miR-137慢病毒,并转染MKN-45细胞. 通过划痕实验、细胞侵袭小室检测和Transwell侵袭实验以分析过表达miR-137对MKN-45细胞迁移侵袭的影响. 结果 MKN-45 细胞中miR-137的表达丰度明显低于在 GES、MKN-74、AGS、SGC-7901和BGC-823细胞,差异有统计学意义(P<0. 05). 同时成功构建micro up病毒感染的细胞组. 划痕实验结果显示,与空白对照组( CON组)和阴性对照组( NC组)比较, micro up组24、48 h后平均迁移率差异有统计学意义( P<0. 05 );细胞侵袭小室检测结果显示,与 CON组、NC组比较, micro up组的平均迁移率差异有统计学意义( P<0. 01 );Transwell侵袭实验结果显示,与CON组、NC组比较,micro up组平均迁移率差异有统计学意义( P<0. 01 ). 结论 miR-137过表达能明显抑制人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭能力,有可能成为胃癌治疗的新靶点.     

miR-503靶向调控CXCL9抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭

目的:研究miR-503对人皮肤黑色素瘤细胞A375迁移、侵袭能力的影响及相关机制.方法:实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测黑色素瘤组织及细胞系中miR-503的表达水平;将miR-503模拟物(miR-503 mimics)或miR-503抑制物(miR-503 inhibitors)瞬时转染A375细胞,Transwell实验检测转染后细胞迁移及侵袭能力的变化;生物信息学预测miR-503与CXCL9的结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测其靶向结合关系;将CXCL9单独转染或与miR-503共转染A375细胞后,检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果:黑色素瘤组织中miR-503的表达明显低于癌旁组织(t=6.602,P=0.000),且黑色素瘤细胞(A375、SK-MEL-1及SK-MEL-5)中miR-503的表达也均明显低于人表皮黑色素细胞HEM(F=19.445,P=0.000);A375细胞转染miR-503 mimics后迁移及侵袭能力明显受到抑制(P=0.017,P=0.049),而转染miR-503 inhibitors后迁移及侵袭能力明显增强(P=0.004,P=0.000);CXCL9是miR-503的直接靶基因;CXCL9能促进A375细胞的迁移和侵袭(P=0.000,P=-0.009),但其作用效果能被miR-503逆转.结论:miR-503通过靶向调控CXCL9而抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭.     

miRNA-143对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miRNA-143对鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响.方法 利用荧光定量PCR检测人永生化鼻咽上皮细胞(NP69)、高分化鼻咽癌细胞(CNE-1)、低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平.利用感染慢病毒的方式建立稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞,并用荧光定量PCR法进行检测.通过CCK-8法检测过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞增殖的影响,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞迁移和侵袭的影响.结果 低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平显著低于CNE-1和NP69细胞(P<0.01).稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞(CNE-2Z/miR-143)中miRNA-143的表达水平显著高于CNE-2Z细胞(P<0.01)和慢病毒对照组细胞(CNE-2Z/miR-NC)(P<0.01).细胞增殖能力检测显示,与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比,CNE-2Z/miR-143组在72 h和96 h时细胞活力显著降低(P<0.05,P<0.01).Transwell迁移和侵袭试验结果显示,CNE-2Z/miR-143组与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01).结论 miR-143能够抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖、迁移和侵袭能力,提示其可能对鼻咽癌的诊断、治疗及预后评价有重要意义.     

miR-503靶向调控CXCL9抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭

目的:研究miR-503对人皮肤黑色素瘤细胞A375迁移、侵袭能力的影响及相关机制.方法:实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测黑色素瘤组织及细胞系中miR-503的表达水平;将miR-503模拟物(miR-503 mimics)或miR-503抑制物(miR-503 inhibitors)瞬时转染A375细胞,Transwell实验检测转染后细胞迁移及侵袭能力的变化;生物信息学预测miR-503与CXCL9的结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测其靶向结合关系;将CXCL9单独转染或与miR-503共转染A375细胞后,检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果:黑色素瘤组织中miR-503的表达明显低于癌旁组织(t=6.602,P=0.000),且黑色素瘤细胞(A375、SK-MEL-1及SK-MEL-5)中miR-503的表达也均明显低于人表皮黑色素细胞HEM(F=19.445,P=0.000);A375细胞转染miR-503 mimics后迁移及侵袭能力明显受到抑制(P=0.017,P=0.049),而转染miR-503 inhibitors后迁移及侵袭能力明显增强(P=0.004,P=0.000);CXCL9是miR-503的直接靶基因;CXCL9能促进A375细胞的迁移和侵袭(P=0.000,P=-0.009),但其作用效果能被miR-503逆转.结论:miR-503通过靶向调控CXCL9而抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭.     

LINC01614通过miR-34a/Notch2轴促进胃癌发展机制的研究

目的检测LINC01614在胃癌组织中的表达水平,研究其通过miR-34a/Notch2轴促进胃癌发展的机制。方法构建含有LINC01614荧光素酶质粒的胃癌细胞株,采用qRT-PCR方法检测胃癌组织及细胞株中LINC01614及miR-34a的表达水平;采用荧光素酶报告试验及RIP试验,研究LINC01614对miR-34a的结合作用;采用qRT-PCR方法检测胃癌组织及细胞株中LINC01614及miR-34a的表达水平;采用荧光素酶报告试验及RIP试验,研究LINC01614与miR-34a的相互作用关系;采用qRT-PCR、荧光素酶报告试验及RIP试验,研究LINC01614与miR-34a/Notch2通路间的关系,研究LINC01614参与调控胃癌进展的分子机制。结果 LINC01614在胃癌组织及细胞株中表达上调(P<0.01)。MiR-34a在胃癌组织中表达下调,与LINC01614的表达水平呈负相关(P<0.05)。Notch2在胃癌组织中表达上调,与miR-34a的表达水平呈负相关,与LINC01614的表达水平呈正相关(P<0.05)。结论 LI...     

紫草素对人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力影响

目的 观察紫草素对人胃癌细胞SGC-7901增殖、侵袭、迁移能力的影响.方法 MTT法检测细胞增殖抑制作用,Transwell小室侵袭迁移实验检测细胞侵袭、迁移能力.实时荧光定量PCR测定加入不同浓度紫草素24h的SGC-7901细胞的MMP-2、MMP-7 mRNA的表达水平.结果 紫草素可以抑制人胃癌细胞的增殖,在2μg/ml之前其抑制效应呈浓度-时间依赖性;紫草素作用胃癌细胞株SGC-7901细胞48h后SGC-7901细胞的侵袭、迁移能力降低;紫草素作用胃癌细胞株SGC-7901细胞24h后,紫草素组的MMP-2的相对表达量均显著低于阴性对照组的相对表达量.结论经紫草素作用后SGC-7901细胞的侵袭、迁移能力降低,其机制可能与下调MMP-2、MMP-7 mRNA的表达有关.     

Hedgehog信号通路对人胃癌SGC-7901细胞侵袭迁移作用及机制探讨

目的:探讨Hedgehog(Hh)信号通路对人胃癌SGC-7901细胞侵袭迁移的作用及其机制.方法:环靶明特异性阻断Hh信号通路后,Transwell小室和划痕实验检测SCC-7901细胞侵袭和迁移的能力;RT-PCR检测SGC-7901细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA表达;细胞免疫化学检测SGC-7901细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果:阻断Hh信号通路能显著抑制SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力(P＜0.05).MMP-2和MMP-9的mRNA以及蛋白表达亦显著降低(P＜0.05).结论:Hh信号通路可能是通过调节MMP-2和MMP-9的表达促进SCC-7901细胞侵袭、迁移.