移植神经干细胞在脑缺血大鼠损伤脑区的定向分化及其对运动功能的影响

目的:研究神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脑缺血模型损伤脑区结构和功能的影响。方法:从新生的Wistar大鼠脑组织中分离、培养NSCs。制作大鼠脑缺血再灌注模型,24h后移植BrdU标记的NSC于梗死灶同侧的侧脑室。记录损伤和移植后的大鼠运动功能评分,研究移植后的NSC迁徙、定向分化的情况及其与宿主细胞间的关系。结果:大鼠NSCs移植后部分可在体内存活并迁徒至脑缺血病灶区,在缺血区内能分化成为神经元细胞并与宿主神经细胞形态一致,运动神经功能评分与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。结论:移植的NSCs对缺血损伤脑区结构有修复作用,可改善脑缺血模型动物运动功能。     

脐血源性神经干细胞移植对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠的治疗作用

目的 探讨人脐血源性神经干细胞(NSCs)移植治疗缺血缺氧性脑损伤(HIBD)新生大鼠的可行性.方法 7d龄大鼠随机分成NSCs移植(A)组、HIBD模型对照(B)组和正常对照(C)组,每组40只.从人脐血中分离出单个核细胞(UBC-MNCs),定向诱导分化出NSCs并行溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)标记,经尾静脉移植到HIBD新生大鼠体内.免疫组化法检测移植后1、7、14、21 d各组动物脑组织易损区室管膜前下区(SVZa)神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、BrdU染色阳性细胞表达情况及移植细胞在脑内的存活、迁移和分化情况.结果 UBC-MNCs可体外培养并定向诱导分化为NSCs,A组SVZa区NSE、BrdU阳性细胞表达量较B组均增高(P<0.01);移植早期Nestin增高,移植后14 d达峰,以后逐渐下降(P(0.01);A组GFAP表达较B组降低,大鼠损伤区面积显著减小(P<0.01).结论 移植的NSCs可在HIBD新生大鼠SVZa存活、增殖及分化,促进组织结构恢复和细胞功能重建,NSCs移植是治疗HIBD的一种新途径.     

新型超顺磁性氧化铁在干细胞活体示踪中的应用研究

目的：研究超顺磁性氧化铁（superparamagnetic iron oxide,SP10）标记干细胞的效率及其在磁共振活体示踪中的应用价值。方法：以3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTS）修饰Fe2O3配制成SP10,用SP10转染标记骨髓间充质干细胞（MSCs）,对标记后的MSCs行普鲁士蓝染色鉴定、MTT测试细胞相对数量。最后将标记后的MSCs移植入大鼠脑内,磁共振（MRI）扫描示踪显示。结果：普鲁士蓝染色可直接显示SP10高效率标记MSCs,MTT测试表明SP10标记对MSCs增殖数量及其活力无明显影响,MRI检查发现脑内移植的SP10标记MSCs在T2上呈明显的低信号。结论：APTS修饰Fe2O3配制而成的新型SP10对细胞无明显毒性,没有多聚赖氨酸（PLL）等转染剂仍可直接高效率标记MSCs,MRI活体显影示踪效果良好。     

脑缺血再灌注损伤后BMSCs 不同示踪方式的比较

目的比较脑缺血再灌注损伤后,不同示踪方式观察骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植后的效果。方法 BMSCs 复苏培养后,分别采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）、PKH26 进行标记,并且与绿色荧光蛋白（GFP）转染细胞,分别对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织进行移植。将75 只SPF 级雄性SD 大鼠随机均分为假手术组,模型组,BrdU、 PKH26、GFP 示踪组。采用线栓改良法制备大鼠左侧大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注损伤模型。脑缺血再灌注24 h 后,假手术组、模型组分别采用脑立体定位仪经脑实质植入10 μL 生理盐水;BrdU、PKH26、GFP 示踪组分别植入 10 μL 的BMSCs/BrdU、BMSCs/PKH26、BMSCs/GFP。采用神经行为学评分、TTC 染色、脑组织含水量法进行模型鉴定及疗效判定,采用焦油紫染色进行神经元计数,并在荧光显微镜下计数标记细胞阳性率。结果移植前细胞BrdU、 PKH26、GFP 标记率无明显差异。移植4 周后3 示踪组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积、脑组织含水量均显著低于模型组,神经元计数显著高于模型组;神经行为学评分、脑梗死体积高于假手术组,脑组织含水量、神经元计数与假手术组差异无统计学意义;3 示踪组间上述指标差异均无统计学意义。GFP 示踪组的荧光标记细胞阳性率高于 BrdU、PKH26 示踪组。结论脑缺血再灌注损伤中,GFP 示踪方式效果更为持久,优于BrdU 和PKH26。     

新型超顺磁性氧化铁在雪旺细胞移植后活体示踪中的应用研究

目的：研究一种新型超顺磁性氧化铁（Superparamagnetic iron oxide,SPIO）在雪旺细胞（SCs）标记及磁共振（MRI）活体示踪中的应用。方法： 以二巯基丁二酸修饰三氧化二铁（Fe2O3）配制成一种新型SPIO,用于标记SCs。实验组用SPIO标记SCs,对照组不用SPIO标记,每组各10个样本。对标记后的SCs行普鲁士蓝染色鉴定、MTT测试细胞相对数量。最后将标记后的SCs移植入大鼠脑内,MRI扫描活体示踪。结果： 普鲁士蓝染色发现该SPIO可高效率标记SCs,MTT测试表明实验组与对照组的雪旺细胞相对数量无统计学差异（P〉0．05）,MRI检查发现脑内移植的SPIO标记SCs在T。相上呈明显的低信号。结论：通过二巯基丁二酸修饰Fe2O2获得了新型SPIO,该新型SPIO对细胞增殖及活力无明显影响,不需要转染剂仍可高效率标记SCs,MRI活体显影示踪效果良好。     

共移植体对神经干细胞向神经元分化的影响

目的:探讨共移植体所构成的微环境对神经干细胞移植后向神经元分化的影响。方法:48只同一基因背景的Wistar大鼠,随机分为:NSCs移植组,共移植体移植组。在新生的同一基因背景鼠海马取神经干细胞和大脑皮质取血管内皮细胞,把单独NSCs和共移植体移植入同一基因背景大鼠MCAO造模后24h缺血半暗带区,Brdu标记其中NSCs,利用免疫荧光双标于3d,7d,14d,60d分别观察NSCs向神经元分化情况。结果:在7d,14d,60d三个时间点神经干细胞向神经元分化中,共移植体组神经元分化率高于NSCs组,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:共移植体对移植入MCAO模型大鼠的NSCs向神经元分化有促进作用。     

骨髓间充质干细胞移植对缺血性脑损伤大鼠的作用及其机制研究

目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对大鼠缺血性脑损伤后神经功能恢复的作用并探讨其作用机制。方法体外培养MSCs;线栓法制作SD大鼠脑缺血2h再灌注模型,24h后将标记5-溴脱氧尿嘧啶(B rdu)的MSCs通过颈动脉移植入脑缺血大鼠体内;采用神经功能缺损评分检测大鼠神经系统功能;用苏木素-伊红(HE)染色以观察梗死灶的部位和范围;用免疫组化方法检测脑内MSCs的迁移及分泌营养因子的分泌情况;寡核苷酸末端脱氧核糖核酸介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)原位检测缺血周边区皮质神经细胞凋亡的情况。结果动脉移植后,MSCs在脑内存活、迁移,同时分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)等多种神经保护性因子;显著上调BDNF和VEGF的表达,延长其高表达时程;并减少了神经细胞的凋亡。与模型组和PBS组相比,MSCs移植组神经功能明显改善;脑组织病理变化明显减轻(P<0.05)。结论动脉移植MSCs治疗大鼠缺血性脑损伤具有较好的疗效。MSCs分泌多种神经保护性营养因子及减少缺血周边区神经细胞凋亡可能是其主要机制之一。     

超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞移植治疗兔急性胰腺炎的磁共振活体示踪

重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）是由各种原因引起胰酶被激活,导致胰腺组织自身消化、水肿、出血和坏死的炎症反应,常继发感染性腹膜炎、休克、全身炎症反应综合征和多器官功能障碍综合征等严重并发症,预后极差.目前的治疗措施主要是对症治疗、支持治疗、预防胰腺感染和坏死,疗效仍不佳.近年来,骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）移植治疗急性胰腺炎的实验研究认为MSCs可分化为有功能的胰腺干细胞,对损伤的胰腺进行修复,为治疗重症SAP提供了一种薪的思路和手段,而细胞移植后在活体内示踪成为随之而来的研究难点.近年来,随着超顺磁性氧化铁（SPIO）纳米颗粒标记细胞技术的成熟,磁共振成像（MRI）活体示踪SPIO标记细胞成为新的研究热点[3].本实验拟采用SHO标记兔MSCs并移植入SAP模型兔行MRI扫描,探讨干细胞移植治疗SAP过程中,MRI活体示踪移植干细胞的可行性.     

神经干细胞抗帕金森病的实验治疗学进展

神经干细胞(neural stem cells,NSCs)具有高度的自我更新能力、多向分化潜能(包括神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞)和迁移能力.主要来源于哺乳动物胚胎期的大部分脑区以及成体脑组织的两个区域:海马齿状回的颗粒下层和侧脑室的室管膜下区.目前,应用NSCs治疗帕金森病(Parkinson's diseas...     

脑缺血大鼠骨髓间质干细胞移植后脑内分布与迁移

目的观察骨髓间质干细胞移植后在脑缺血大鼠脑内的存活、分布及迁移情况。方法Fieoll-Paque分离液梯度离心分离大鼠骨髓间质干细胞（rat bone mesenchymal stem cells，rMSCs），经体外培养扩增并流式细胞术鉴定；线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）脑局灶缺血模型，Hoechst33342标记细胞，分别通过静脉移植及立体定向局部移植到大鼠缺血侧纹状体。经过1、3、5周处死大鼠，取脑组织切片，在倒置荧光显微镜下观察细胞在脑内的存活、分布及迁移情况。结果应用梯度离心方法可以分离得到rMSCs，经过体外扩增可得到足够细胞数量用于移植，流式细胞术检测CD34、CD45表达阴性，CD29、CD90表达阳性。大鼠脑缺血后，无论静脉还是局部移植，rMSCs在脑内均能较长时间存活，移植细胞与宿主有很好组织相容性。静脉移植的细胞集中于脑缺血灶及其周围，缺血灶对侧脑组织移植的细胞较少（P〈0．05）；局部移植的细胞随着时间的推移向缺血灶不断迁移，分布在两侧大脑的差别都具有统计学意义（P〈0．05）。结论rMSCs通过静脉及立体定向两条途径进行移植后，能够在宿主缺血的脑中存活，向损伤部位迁移。rMSCs的这种迁移现象很可能与缺血灶的细胞信号改变有关，在临床上具有很大的潜在价值。     

Survival and differentiation of transplanted neural stem cells in mice brain with MPTP-induced Parkinson disease

AIM: To determine survival and differentiation of cultured neural stem cells (NSCs) into viable and functional neurons upon transplantation into mice brain of MPTP-induced Parkinson disease (PD). METHODS: Mouse model of PD was established with two subcutaneous (sc) injections of 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP, 40 mg/kg) twice, 16h apart. NSCs isolated from rat embryo midbrain were cultured in clonal density. After labeled with 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU), the NSCs were transplanted into the uni-or bi-lateral striatum of PD mouse. Tyrosine hydroxylase (TH) immunofluorescence was used to evaluate the toxicity of MPTP on the neural cells in the substantia nigra. Immunohistology and laser confocal microscope were used to detect the survival and differentiation of transplanted NSCs. RESULTS: The cultured NSCs generated neurospheres and differentiated into neuron and astrocyte. It indicated that the cultured NSCs were multipotent and self-renewal in vitro. TH-positive neural cells were     

移植的神经干细胞在MPTP诱导的帕金森病小鼠脑内的存活与分化

AIM: To determine survival and differentiation of cultured neural stem cells (NSCs) into viable and functional neurons upon transplantation into mice brain of MPTP-induced Parkinson disease (PD). METHODS: Mouse model of PD was established with two subcutaneous (sc) injections of 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine(MPTP,40mg/kg) twice, 16h apart. NSCs isolated from rat embryo midbrain were cultured in clonal density.After labeled with 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU), the NSCs were transplanted into the uni-or bi-lateral striatumof PD mouse. Tyrosine hydroxylase (TH) immunofluorescence was used to evaluate the toxicity of MPTP on the neural cells in the substantia nigra. Immunohistology and laser confocal microscope were used to detect the survival and differentiation of transplanted NSCs. RESULTS: The cultured NSCs generated neurospheres and differentiated into neuron and astrocyte. It indicated that the cultured NSCs were multipotent and self-renewal in vitro.TH-positive neural cells were significantly reduced in the substantia nigra. Immunohistology showed that the uni-or bi-lateral transplanted NSCs survived in the brain of PD model mouse. Laser confocal microscope indicated that some transplanted NSCs could properly differentiate into targeted TH-positive neural cells in vivo. CONCLUSION:The transplanted multipotent NSCs could survive and differentiate into functional dopamine neurons.     

亚低温联合载神经干细胞的纤维蛋白支架对颅脑创伤的修复作用

目的 研究大鼠颅脑创伤 （TBI） 后原位移植神经干细胞 （NSCs） 治疗的可能性, 探讨载有 NSCs 的纤维蛋白支架及与亚低温（MHT）联合对 TBI 的治疗作用。方法 从孕 14 d SD 大鼠皮质组织中分离 NSCs, 与纤维蛋白支架共培养, 应用扫描电镜观察支架及 NSCs 的形态, 并通过免疫荧光检测细胞类型。将 48 只雄性 SD 大鼠随机分成 TBI 组 （A 组）、 TBI+NSC 组 （B 组）、 TBI+MHT 组 （C 组）、 TBI+NSC+MHT 组 （D 组）, 每组 12 只。A 组通过液压损伤仪行 TBI 造模; B 组 TBI 后接受 NSCs 移植治疗; C 组 TBI 后接受 MHT 治疗; D 组 TBI 后接受 NSCs 与 MHT 联合治疗。分别在第 14、 28 天通过神经功能缺陷评分 （mNSS） 和水迷宫实验对大鼠进行神经功能评价; 28 d 后取脑组织切片, 行细胞免疫荧光检测, 观察移植后的 NSCs 在体内分化情况。结果 电镜扫描显示, NSCs 与纤维蛋白支架共培养 3 d 后形态无明显改变; 免疫荧光提示 NSCs 特异性标志物 Nestin 阳性表达, 表明神经干细胞在纤维蛋白支架上存活; D 组大鼠的 mNSS 在第 14 天和第 28 天均低于 A、 B、 C 各组; 水迷宫结果显示, D 组大鼠逃避潜伏期短于 A、 B、 C 各组; D 组 28 d 后脑组织取材可追踪到 BrdU 标记的神经干细胞分化为了神经元。结论 纤维蛋白支架与 NSCs 生物相容性良好, 具有可降解性。亚低温与载 NSCs 的纤维蛋白支架对大鼠 TBI 后的神经功能修复具有协同作用。     

胼胝体损伤的CT和MRI诊断

目的探讨胼胝体损伤的CT和MRI表现,评价CT和MRI对其诊断价值。方法搜集16例胼胝体损伤CT和MRI表现作回顾性分析,16例均行CT和MRI检查。结果 16例胼胝体损伤中,5例位于体部,5例位于压部,5例累及体部和压部,1例位于膝部;常规MRI上表现为T2WI均为高信号,T1WI为低、等或略低信号,弥散加权像(DWI)对胼胝体损伤具有敏感性,病灶显示高于常规T2WI,极易发现病灶且均表现为高信号。CT检查胼胝体区未见异常密度。12例还合并颅内多处挫伤和血肿。结论胼胝体损伤少见,CT检查难以发现,MRI是最好的影像检查方法 ,胼胝体损伤大多数合并颅内损伤。     

弥漫性轴索损伤的MRI诊断价值

目的探讨脑弥漫性轴索损伤（DAI）的MRI特征及诊断价值。方法回顾性分析临床确诊的28例DAI,患者均做了MRI检查,其中17例患者同时行CT检查。结果 28例中共发现了126个病灶,其中大脑白质及皮髓质交界区103个,胼胝体10个,基底节区7个,脑干3个,小脑3个。89.7%病灶为非出血性病灶,T1WI低信号,T2WI高信号。CT上难以发现病灶的小脑、脑干、胼胝体等处,MRI均可清晰显示。结论 MRI为DAI的临床诊断、预后判断提供了可靠的影像学依据。     

神经干细胞移植对Alzheimer病大鼠脑形态及动物行为学影响

目的 :观察移植入 Alzheimer病 (AD)大鼠脑内的神经干细胞存活、分化及功能。方法 :由新生大鼠海马分离培养神经干细胞 ,采用切断穹窿海马伞的方法制作 AD大鼠模型 ,模型建立 8～ 10 d后行神经干细胞移植。移植 1个月后 ,通过暗回避试验检测大鼠的学习记忆能力 ,应用尼氏染色 ,乙酰胆碱酯酶 (Ach E)染色观察体内移植神经干细胞的存活 ,分化以及 AD大鼠 Ach E纤维密度的变化。结果 :神经干细胞在额叶和海马都能够存活 ,分化成神经元 ,可与宿主建立突触联系 ,在海马区移植神经干细胞的生长优于额叶。与对照组相比 ,接受神经干细胞移植鼠的暗回避潜伏期变长 (P <0 .0 5 ) ,探索次数减少(P<0 .0 5 ) ,海马 Ach E纤维密度增加 (P <0 .0 5 )。结论 :神经干细胞能够在 AD大鼠额叶、海马存活、分化 ,并可导致 Ach E纤维密度增加 ,AD大鼠学习、记忆能力改善