粒细胞集落刺激因子与血管性痴呆大鼠海马凋亡相关蛋白

背景：研究表明粒细胞集落刺激因子在保护神经元免受各种因素所致的神经元变性和死亡中发挥重要作用。 目的：观察粒细胞集落刺激因子对血管性痴呆大鼠海马组织神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。 方法：采用永久性双侧颈总动脉结扎法建立SD大鼠血管性痴呆模型,以未进行血管结扎的大鼠作为假手术组。造模成功后,治疗组大鼠每日皮下注射粒细胞集落刺激因子50 μg/kg,假手术组和模型组注射等量的生理盐水。分别于造模后7,14,28 d取大鼠海马组织用于检测。 结果与结论：Morris水迷宫结果显示,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长(P < 0.01),而治疗组各时间点大鼠逃避潜伏期较模型组缩短(P < 0.01);TUNEL及免疫组织化学结果显示,与模型组比较,治疗组各时间点大鼠海马TUNEL及Bax阳性细胞吸光度值明显减小(P < 0.01),Bcl-2阳性细胞吸光度值明显增加(P < 0.01)。说明粒细胞集落刺激因子可提高血管性痴呆大鼠海马Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,减少神经细胞凋亡,改善大鼠的学习记忆功能。     

穴位埋线对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的影响

目的 观察穴位埋线疗法对血管性痴呆（VD）大鼠海马CA1区神经细胞凋亡和Bcl-2 mRNA及Bax mRNA表达的影响,探讨穴位埋线对VD大鼠脑缺血性损伤的神经保护机制。 方法 采用改良Pulsinelli’s 4血管阻断法建立VD大鼠模型,随机数表法分为VD模型组、穴位埋线组、尼莫地平组,并设置假手术组作为对照。两个治疗组分别施行穴位埋线和尼莫地平治疗。Morris 水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力后,取含海马的脑组织,TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡,原位杂交法检测其Bcl-2 mRNA及Bax mRNA表达,观察并比较各组大鼠海马神经细胞凋亡、蛋白表达的变化。 结果 VD模型组大鼠海马CA1区可见大量凋亡细胞、Bcl-2 mRNA 表达降低、Bax mRNA 的表达增高,与假手术组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。VD模型组表现出明显的学习记忆障碍,与假手术组相比差异有统计学意义（P＜0.01）;与VD模型组比较,穴位埋线组大鼠学习记忆能力显著提高（P＜0.01）,CA1区凋亡细胞明显减少（P＜0.01）,可见一定数量的Bcl-2 mRNA阳性细胞表达,而Bax mRNA阳性细胞表达较少。 结论 穴位埋线可通过上调VD大鼠海马CA1区Bcl-2 mRNA的表达、下调Bax mRNA 的表达,抑制海马神经细胞凋亡,改善VD大鼠学习记忆能力。     

颈动脉狭窄影响大鼠认知功能及海马神经元凋亡

目的:研究改善颈动脉狭窄对大鼠认知功能、海马神经元凋亡及bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法:采用SD大鼠制作颈动脉狭窄模型,2周后将颈动脉狭窄解除,4周后各组采用Morris水迷宫检测记忆能力、HE染色观察神经元形态学变化、TUNEL法观察海马神经元凋亡、免疫组织化学检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:对照组与假手术组比较,大鼠记忆能力明显下降(P<0.01),神经细胞凋亡率明显增高(P<0.01),Bcl-2和Bax免疫阳性细胞数增多(P<0.01),改善狭窄组较对照组记忆能力明显改善(P<0.01),神经细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05),Bcl-2免疫阳性细胞数明显增多(P<0.05),Bax免疫阳性细胞数明显减少(P<0.05).结论:改善颈动脉狭窄可提高大鼠海马Bcl-2蛋白的表达,抑制海马神经细胞凋亡,改善认知功能障碍.     

菩人丹超微粉对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的: 探讨菩人丹超微粉(PRD)对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法: 36只Wistar大鼠随机分为3组,正常对照组、糖尿病模型组和PRD治疗组,每组12只。糖尿病模型组和PRD治疗组大鼠均采用链脲佐菌素连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。模型成功建立后,PRD治疗组大鼠给予PRD灌胃3个月。采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测大鼠视网膜神经细胞的凋亡;SP免疫组织化学染色法检测视网膜B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原2(Bcl-2)、B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原相关X蛋白(bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2、bax和caspase-3 mRNA的表达。结果: 糖尿病模型组与正常对照组比较,大鼠视网膜神经细胞凋亡指数、Bax、 caspase-3蛋白及mRNA的表达均明显升高(P＜0.01),Bcl-2蛋白及mRNA的表达、Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.01);PRD治疗组与模型组比较,大鼠视网膜神经细胞凋亡指数、bax、caspase-3蛋白及mRNA的表达均明显降低,Bcl-2 蛋白及mRNA的表达、Bcl-2/Bax比值显著升高(P＜0.01)。结论: PRD可通过上调Bcl-2的表达及下调Bax及caspase-3的表达,抑制糖尿病大鼠视网膜神经细胞的凋亡,发挥对糖尿病视网膜的保护作用。     

脑室注射链脲佐菌素对大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响

目的 观察App17肽对脑室注射链脲佐菌素的大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响,探讨胰岛素信号转导通路障碍对神经元存活的作用.方法脑室注射链脲佐菌素(STZ)制作大鼠痴呆模型.3周后,皮下注射App17肽.4周后取脑组织做Bcl-2、Bax、CytoC免疫组织化学染色及Western blotting半定量分析.结果 模型组大鼠海马内Bax、CytoC阳性反应神经元细胞数目多,胞质深染,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P＜0.01);模型组大鼠海马内Bcl-2阳性细胞数目少,胞质染色淡,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P＜0.01).Western blotting半定量分析可见、Bcl-2、Bax、CytoC出现清晰的条带,组间可见较明显的差异(P＜0.01).结论 脑室注射STZ的大鼠海马内促进凋亡的Bax、CytoC表达增加;抑制凋亡的Bcl-2表达降低.App17肽可影响上述蛋白的表达,使之接近正常.胰岛素信号转导通路对神经元存活有一定作用.     

Ⅰ型糖尿病脑病模型大鼠空间学习记忆以及海马齿状回细胞凋亡和Bax与Bcl-2蛋白表达的变化

目的探讨1型糖尿病脑病海马齿状回细胞凋亡、Bax与Bcl-2蛋白表达、空间学习记忆之间的相互关系。方法通过腹腔注射链脲佐菌素(溶于柠檬酸缓冲液)建立1型糖尿病脑病模型大鼠,通过腹腔注射柠檬酸缓冲液建立载体模型大鼠。应用Morris水迷宫、TUNEL技术、Bax与Bcl-2免疫组化方法,观察各组大鼠海马齿状回颗粒下区(SGZ)、颗粒细胞层(GCL)的Bax、Bcl-2、TUNEL阳性细胞和空间学习记忆的变化。结果糖尿病脑病组大鼠的SGZ、GCL的Bax阳性细胞数、TUNEL阳性细胞数、水迷宫的逃避潜伏期和游泳距离均明显高于载体模型组或正常对照组大鼠的对应指标(P<0.01);而糖尿病脑病组大鼠的Bcl-2阳性细胞数则明显低于载体模型组或正常对照组大鼠(P<0.01),但以上各组3类阳性细胞的形态和分布却均无明显差异。结论体内长期缺乏胰岛素可打破凋亡基因Bax与抗凋亡基因Bcl-2的蛋白表达水平之间原有的正常动态平衡状态,致使海马齿状回的细胞倾向于多发生细胞凋亡事件,这可能是引发1型糖尿病脑病神经发生障碍及空间学习记忆异常的一个因素。     

西酞普兰对慢性应激大鼠额叶皮质神经细胞Bcl-2、Bax表达及凋亡的影响

目的： 探讨西酞普兰对慢性应激大鼠额叶皮质神经细胞Bcl-2、Bax表达及凋亡的影响。方法: 将24只雄性SD大鼠随机分为对照组、慢性应激组、西酞普兰+慢性应激组，每组8只，采用免疫组化检测Bcl-2、Bax表达水平，TUNEL法检测细胞凋亡,尼康图像分析（NIS DR）软件测量分析Bcl-2、Bax、TUNEL阳性细胞数量及灰度值(gray value)。结果: 各组大鼠每周体重基本呈自然增长趋势，差异无统计学意义（P>0.05）。组内额叶皮质的阳性细胞数和灰度值比较（除Bcl-2灰度值外），差异均显著（P<0.05）。慢性应激组与对照组比较：额叶皮质神经细胞Bcl-2阳性细胞数量减少（30.63±10.75 vs 11.50±4.24），Bax阳性细胞数量增多（48.88±6.55 vs 65.13±15.05）、表达增强（155.21±8.55 vs 148.91±4.47），TUNEL检测阳性细胞增多（16.94±6.46 vs 31.69±19.89）、表达增强（152.56±5.28 vs 141.91±10.38），差异显著（P<0.05）；西酞普兰+慢性应激组与应激组比较：Bcl-2阳性细胞数量增多（27.00±9.89 vs 11.50±4.24），Bax阳性细胞数量减少（50.56±12.70 vs 65.13±15.05），TUNEL检测阳性细胞减少（17.31±5.41 vs 31.69±19.89），差异有统计学意义（P<0.05）。结论: 慢性应激影响大鼠额叶皮质神经细胞Bcl-2、Bax表达水平，促进细胞凋亡；西酞普兰可调节慢性应激大鼠额叶皮质神经细胞Bcl-2、Bax表达水平，拮抗细胞凋亡。     

大鼠血管性痴呆模型动物中海马神经元凋亡和蛋白表达的研究

目的:观察不同时点分别结扎左、右颈总动脉建立大鼠血管性痴呆模型中海马CA1区神经元凋亡和Bcl-2及Bax蛋白表达的影响,探讨其在血管性痴呆发病过程中的作用。方法:采取间隔3 d分2次结扎双侧颈总动脉建立血管性痴呆模型,术后4周用TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡,用免疫组织化学法检测其Bcl-2及Bax蛋白表达。结果:模型组大鼠海马CA1区可见大量凋亡神经元;模型组Bcl-2及Bax蛋白表达明显增加,与假手术组比较差异均有显著意义(P<0.05)。结论:此血管性痴呆模型大鼠中海马CA1区神经元大量凋亡丢失,可能是导致血管性痴呆的病理基础。     

糖调节受损大鼠学习记忆能力下降与海马神经细胞凋亡有关

目的探讨糖调节受损大鼠海马神经细胞凋亡与学习记忆能力的关系。方法用高脂高糖饲料饲养法建立糖调节受损大鼠模型;用Morris水迷宫法检测学习记忆能力;用TUNEL法检测海马神经细胞凋亡数目;用免疫组化和原位杂交技术检测海马神经细胞Bcl-2/Bax和Bcl-2 mRNA/Bax mRNA的表达。结果与NGT组相比,IGR组学习记忆能力下降(P0.05),海马神经细胞凋亡数增高(P0.05),Bcl-2、Bcl-2 mRNA表达减少(P0.05),Bax与Bax mRNA表达增加(P0.05)。IGR组学习、记忆能力与Bcl-2阳性表达呈正相关(P0.05),与Bax阳性表达呈负相关(P0.05)。结论糖调节受损与大鼠学习记忆能力下降有相关性,海马神经细胞凋亡可能是其重要机制之一。     

褪黑素对1型糖尿病脑病大鼠学习记忆和海马齿状回细胞凋亡及Bax与Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨褪黑素治疗对1型糖尿病脑病空间学习忆忆、海马齿状回细胞凋亡以及凋亡相关基因Bax与Bcl-2蛋白表达的影响。方法将成年健康雄性Wistar大鼠随机分成4组(每组均为12只大鼠):1型糖尿病脑病组、载体模型治疗组、褪黑素治疗组、正常对照组。通过腹腔注射链脲佐菌素(55mg/kg,溶于柠檬酸缓冲液中),建立1型糖尿病脑病模型;通过对该脑病模型大鼠腹腔注射褪黑素(200μg/kg,溶解于乙醇生理盐水中),建立褪黑素治疗模型;分别通过对大鼠腹腔注射等体积的柠檬酸缓冲液、乙醇生理盐水,建立载体治疗模型;但未对正常对照组大鼠进行过任何处理。应用Morris水迷宫、Bax、Bcl-2、TUNEL反应技术,观察各组大鼠空间学习记忆、海马齿状回的颗粒下区(SGZ)和颗粒细胞层(GCL)的细胞凋亡及Bax与Bcl-2基因的蛋白表达程度。结果1型糖尿病脑病大鼠在水迷宫的逃避潜伏期和游泳距离均比其它各组的对应指标明显延长(P<0.01),该脑病组大鼠海马齿伏回的SGZ和GCL的Bax阳性细胞数、TUNEL阳性细胞数也均比其它各组的对应指标明显升高(P<0.01),但该脑病组SGZ和GCL的Bcl-2阳性细胞数则明显低于其它各组的相应指标(P<0.01)。应用褪黑素治疗该脑病组大鼠30d后,可将1型糖尿病脑病组大鼠的以上各项指标逆转至接近正常水平(P<0.01)。结论褪黑素治疗不仅可纠正因1型糖尿病脑病大鼠海马齿状回凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bcl-2蛋白质表达水平比例异常而引发的细胞凋亡,还可改善该脑病的空间学习记忆障碍,提示褪黑素在防治该脑病中具有一定的功效。     

17-β雌二醇提高巯醇抗氧化物（酶）治疗脊髓损伤的作用 

目的 探讨17-β雌二醇治疗脊髓损伤的分子机制,为临床应用雌激素治疗脊髓损伤提供理论依据。 方法 成年雄性SD大鼠180只,采用改良的Allen法构建大鼠急性脊髓挫伤模型后经17-β雌二醇治疗,采用化学比色法测定脊髓组织中丙二醛（MDA）和内源性巯醇抗氧化物（酶）：还原型谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量;免疫组织化学分析凋亡相关因子Caspase-3、Bcl2和Bax蛋白的表达变化。 结果 17-β雌二醇治疗组与脊髓损伤组比较,BBB评分明显增加;在多个时间点MDA含量明显降低;巯醇抗氧化物（酶）GSH、SOD和GSH-Px含量显著增加;Caspase-3和Bax表达的阳性细胞数明显减少;Bcl2表达的阳性细胞数明显增加（P<0.05）。 结论 大剂量的17-β雌二醇治疗可能通过调控内源性巯醇抗氧化物（酶）,提高肢体运动功能,抑制细胞凋亡,从而减轻脊髓损伤程度。     

天麻素对老年痴呆动物模型的抗氧化作用及其机制

目的构建β-淀粉样肽(1-40)(Aβ1-40)联合D-半乳糖(D-gal)致痴呆模型,探讨天麻素抗氧化的分子机制。方法成年雄性SD大鼠36只,侧脑室注射Aβ1-40联合腹腔注射D-gal构建SD大鼠痴呆模型,并同时给予天麻素预防性治疗,采用Morris水迷宫实验(MWM)进行行为学检测,用化学比色法检测大脑皮质过氧化氢(H2O2)及还原型谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽还原酶(GR)的含量。用免疫印迹法检测大脑皮质中p38和P-p38的含量。结果痴呆模型组与对照组比较:逃避潜伏期明显延长(P0.05),在第Ⅲ象限逗留的时间明显减少(P0.05),跨越平台次数明显减少(P0.05),皮质H2O2的含量增加,皮质GSH和GR的含量降低(P0.05),P-p38表达增加(P0.05);而天麻素治疗后:与痴呆模型组相比,大鼠逃避潜伏期明显缩短(P0.05),在第Ⅲ象限逗留的时间明显增加(P0.05),跨越平台次数明显增加(P0.05),皮质H2O2的含量减少,皮质GR和GSH的含量升高(P0.05),P-p38表达减少(P0.05)。p38的表达在3组之间无差异(P0.05)。结论天麻素影响了痴呆模型大鼠皮质部分内源性巯醇抗氧化物(酶)如GSH和GR的含量,抑制了H2O2的产生,影响了P-p38的表达,对改善学习记忆能力,对抗大鼠神经系统的退行性变有一定的作用。     

慢性脑血流低灌注对大鼠脑内β-淀粉样肽的影响

目的 研究慢性脑血流低灌注对大鼠脑内β-淀粉样肽(Aβ)及淀粉样前体蛋白(APP)表达和分布的影响. 方法双侧颈总动脉结扎大鼠制作慢性脑血流低灌注动物模型,应用免疫组织化学方法检测皮质和海马CA1区APP、Aβ1-40、Aβ1-42的表达与分布;刚果红染色检测血管的淀粉样变;放射免疫分析法检测手术后10d、30d、90d和180d大鼠脑皮质及海马的Aβ含量;免疫印迹法检测大脑皮质和海马的APP含量. 结果 免疫组织化学染色显示低灌注90d模型组海马CA1区APP、Aβ1-40的表达较对照组明显增加(两者均P<0.05),低灌注180d模型组皮质和海马CA1区APP、Aβ1-40和Aβ1-42的表达均增加(除皮质Aβ1-40P<0.01外,其余均P<0.05);Aβ1-40阳性反应产物均匀分布于胞质内,Aβ1-42阳性反应产物在神经元胞质内呈颗粒状聚集.刚果红染色显示,术后180d脑实质内小血管发生淀粉样改变.放射免疫分析法和免疫印迹法结果显示,大鼠术后90d海马Aβ和APP含量开始增高(两者均P<0.05),180d皮质Aβ和APP的含量增高(Aβ P<0.05,APP P<0.01). 结论 慢性脑血流低灌注可引发大鼠脑内Aβ含量的升高,可能在阿尔茨海默病(AD)早期发病过程中有重要意义.     

咪达唑仑对凝聚态Aβ25～35诱导的大鼠PC12细胞Tau蛋白过度磷酸化和凋亡蛋白的影响

目的 探讨咪达唑仑对凝聚态Aβ25～35诱导的大鼠PC12细胞Tau蛋白过度磷酸化的影响及凋亡相关蛋白表达的变化.方法 将培养的PC12细胞随机分为4组:对照组(C组);10μmol/L Aβ25～35(A组);20μmol/L咪达唑仑(M组);咪达唑仑和Aβ25～35(MA组),作用时间均为6小时.四甲基偶氮唑盐(M...     

罗格列酮对OLETF大鼠肺组织TGF-β1/Smad信号转导途径的影响

目的 探讨罗格列酮对自发性2型糖尿病Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty(OLETF)大鼠肺组织转化生长因子(TGF)-β1 /Smad信号转导途径的影响.方法 OLETF大鼠16只,分为未治疗的OLETF组和接受罗格列酮治疗组(OLETF/L组)各8只,设Long Evans Tokus...     

褪黑素对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力及海马CA3区神经元的保护作用

目的 观察褪黑素(MT)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆及海马CA3区神经元的保护作用.方法 随机将60只雄性Wistar大鼠分为正常对照组、AD模型组与MT治疗组.采用右侧海马CA1区注射β-淀粉样蛋白1～40(Aβ1～40)构建AD动物模型,MT治疗组以MT(10mg/kg·d)腹腔注射,正常对照组与AD模型...     

阿尔茨海默病患者外周血Aβ抗体和细胞因子的变化

目的 探讨阿尔茨海默病（AD）患者外周免疫功能的变化。 方法 以2006-06～2007-04广州市老人院29例AD患者作为观察对象,其中轻中度AD患者19例,重度10例;对照组19例为同期健康老人。用夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定外周血Aβ抗体以及抗原特异性细胞因子的水平;流式细胞术(FACS)检测外周血淋巴细胞亚群变化;酶联免疫吸附斑点试验（ELISPOT）检测抗原特异性细胞因子的分泌细胞频数。 结果 轻中度和重度AD组患者外周血Aβ₄₂抗体水平较对照组有不同程度的下降(分别为P<0.05,P<0.01)。AD组CD8较对照组显著升高（P<0.05）; CD4较对照组显著降低（P<0.05）; 轻中度和重度AD组之间CD8、CD4及CD4/ CD8差异均无统计学意义(P>0.05)。AD组外周血单核细胞(PBMC)培养上清IFN-γ的含量较对照组降低（P<0.05）,以重度AD组更明显。ELISPOT检测结果,AD组每4×10⁵个PBMC中分泌IFNγ的细胞频数较对照组显著减少（P<0.01）,以重度AD患者更为明显。 结论 AD患者外周血Aβ抗体水平下降;淋巴细胞亚群失调,特异性细胞免疫功能受损。     

雌激素改善卵巢切除合并慢性铝中毒对大鼠心脏Cx43表达和金属元素变化的影响

目的 探讨雌激素治疗卵巢切除合并慢性铝中毒大鼠,对心脏间隙连接蛋白43(Cx43)表达和金属离子含量的影响. 方法 40只6月龄雌性SD大鼠,随机分为卵巢假切除组(Sham组),卵巢切除组(OVX组)、卵巢切除合并慢性铝中毒组(OVX+Al组)和卵巢切除合并慢性铝中毒及尼尔雌醇灌胃组(OVX+Al+E2组).于术后3个月,利用离子体发射光谱仪测定心脏金属元素含量,采用免疫组织化学和图像分析法观测心肌细胞Cx43表达.结果 1. Cx43表达:Sham组心房肌Cx43遍布于心肌细胞侧面连接和端闰盘处.心室肌分布于心肌闰盘处.OVX组心房肌的Cx43颗粒部分由细胞侧-侧连接处移至闰盘处或杂乱排列,心室肌Cx43由闰盘处移至细胞侧-侧连接处或杂乱地无序排列,少部分出现在细胞质中,OVX+Al组Cx43排列类似于OVX组,且更加紊乱.OVX+Al+E2组心房肌Cx43回复正常分布,但心室肌未发现回复.2.图像分析结果,各组大鼠心肌细胞Cx43的面积构成比比较无显著差异.3.金属元素含量:在Sham组,金属元素在心脏含量的排列顺序如下:Mg＞Ca＞Fe＞Zn＞Al＞Si＞Cu＞Mn＞Se和Cd.各组间比较具有显著差异的是:与Sham组比较,OVX组Zn降低;OVX+Al+E2组Al、Cd、Si、Se均升高;OVX+Al组与OVX组比较,Si升高、Zn降低.OVX+Al+E2组与OVX+Al组比较, Cd、Mn、Se升高. 结论雌激素改善卵巢切除及加铝后引起的心脏金属元素含量改变和心肌细胞间隙连接蛋白Cx43重构.     

β淀粉样蛋白1～42与D-半乳糖联合作用建立复合阿尔茨海默病样模型

目的 探讨β淀粉样蛋白1～42(Aβ1-42)及D-半乳糖(D-gal)联合应用构建复合阿尔茨海默病(AD)样模型的可行性.方法 采用44只2月龄雄性SD大鼠,共分4组,即腹腔及侧脑室注射生理盐水的假手术组,腹腔注射D-gal或侧脑室注射Aβ1-42分别建立的D-gal组和Aβ1-42组,腹腔注射D-gal联合侧脑室注...