大鼠肝细胞线粒体周围内质网的体视觉分析

目的：D直细胞与其周围内质网的结构关系,方法：使用钻占石刀对肝组织进行连续切片,电镜下观察线粒体及其周围内质网的三维结构。对肝细胞细胞器,特别是线粒体及其周围内质网进行体视学分析。结果：几乎所有的线粒体都在内质网的包绕下工作,在整个肝细胞内有26％的RER的32％的SER贴附近线粒体的周围。结论：肝细胞线粒体通常在内质网在包绕下执行生理功能,二者是结构和功能紧密联系的整体。     

大鼠肝细胞线粒体三维结构的观察与重建

为深入研究大鼠肝细胞线粒体形态特征,本研究以钻石刀连续超薄切片,通过电子显微观察大鼠肝细胞线粒体的三维结构,对特殊形态的线粒体进行三维结构重组。结果表明：球形,椭球形,盘状及杆状等小型线粒体约占线粒体总数的５３．８％,而分枝形及各种不规则形的线粒体约占４１．６％。     

关于正常大白鼠肝细胞的粗面内质网和巨大线粒体连通的观察

本文报道一例正常大白鼠肝细胞的粗面内质网和巨大线粒体连通的现象。该线粒体具备巨大线粒体的主要特征:较大的体积,特殊排列的线粒体嵴和特有的包涵物—基质颗粒和晶体,本例还含有糖元,可能来自粗面内质网。在该巨大线粒体的断面上,有四条粗面内质网和它连接,其中至少有两条和它明显相通。这种连通的意义不明,但可能提示它们之间有某种特殊功能联系。     

HAD对创伤失血性休克大鼠肝细胞线粒体功能的保护作用

目的 探讨高渗醋酸酐（ＨＡ／Ｄ）对大鼠创伤失血性休克后肝细胞线粒体功能的影响。方法 大鼠６４只,随机分为正常对照组、休克末组、生理盐水（ＮＳ,４ｍｌ．ｋｇ＾－１体重）治疗后３０、６０、１２０ｍｉｎ组及ＨＡＤ（４ｍｌ．ｋｇ＾－１体重）治疗后３０、６０、１２０ｍｉｎ组,每组８只,股骨骨折加股动脉放血制作创伤失血性休克模型,各 运行至实验时限后活杀,取肝组织测定测定细胞线粒体呼吸控制率（ＲＣＲ）、腺苷二     

N-乙酰半胱氨酸对脂多糖诱导大鼠肝细胞内质网应激的抑制作用

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠肝细胞内质网应激的影响.方法:培养大鼠肝细胞系BRL细胞,用NAC或LPS分别或共同处理BRL细胞,其中共同处理时把NAC加入培养液中预处理1h再给予LPS处理肝细胞.用锥虫蓝拒染法检测细胞存活率;Hoechst33258染色荧光显微技术检测肝细胞凋亡的形态学变化;免疫印迹法检测内质网应激标志蛋白GRP78及凋亡相关蛋白CHOP、Caspase-12和Caspase-3的表达.结果:与溶剂对照组比较,LPS能时间依赖性地引起肝细胞细胞活力显著降低和细胞凋亡增多,诱导内质网应激标志蛋白GRP78表达明显上调;NAC预处理抑制LPS引起细胞存活率降低和细胞凋亡增多,并且能显著抑制LPS诱导的GRP78及凋亡相关蛋白CHOP、Caspase-12和Caspase-3表达上调.结论:NAC通过阻断LPS诱导的肝细胞内质网应激而减轻肝细胞损伤.     

γ射线照射大鼠肝细胞内线粒体降解过程的超微酶细胞化学观察

采用电镜酶细胞化学方法观察了γ射线照射后大鼠肝细胞内自噬体的一系列变化特征，特别是线粒体的降解，及此过程中自噬体的形成和自噬体与溶酶体之间的相互关系，结果显示，照射后大鼠肝细胞产生大量自噬体，受体线粒体被自噬后，溶酶体参与其降解过程。     

宁心红杞胶囊对老龄雌性大鼠卵泡颗粒细胞线粒体及滑面内质网的影响

目的研究宁心红杞胶囊对老龄雌性大鼠卵巢颗粒细胞线粒体以及滑面内质网的影响。方法以自然衰老雌性大鼠为实验模型,以补佳乐(戊酸雌二醇片)为阳性对照药物,按临床等效剂量胃饲宁心红杞胶囊大、中、小剂量8周后,取卵泡颗粒细胞,电镜下观察线粒体以及滑面内质网并摄片,以病理图像分析软件对线粒体、滑面内质网数密度、周密度、面密度指标进行图像分析处理。结果用药后颗粒细胞线粒体和滑面内质网数量和形态上都有所改善,与模型组相比,线粒体及滑面内质网的数密度、周密度、面密度和平均面积都有显著增加(P<0.05)。结论宁心红杞胶囊能够增加卵泡颗粒细胞中线粒体和滑面内质网数量,并改善其形态。     

梗阻性黄疸大鼠肝细胞线粒体DNA损伤的定量研究

目的:对梗阻性黄疸大鼠肝细胞线粒体DNA损伤进行定量研究,探讨其与线粒体功能损伤的关系.方法:48只健康Wistar大鼠随机分为假手术组和梗阻性黄疸组,梗阻性黄疸组用胆总管双重结扎并切断制成胆道梗阻模型.Estabrook氧电极法测定线粒体呼吸控制率(RCR)和磷氧比值、Kimmich法测定肝组织内ATP含量以评价肝细胞线粒体功能,并利用荧光定量PCR方法,对各组大鼠肝细胞总mtDNA、缺失型mtDNA进行相对定量检测.结果:相对于假手术组,梗阻性黄疸组RCR、磷氧比值及肝组织ATP含量明显减少(P＜0.01),细胞内总mtDNA拷贝数减少(P＜0.01);假手术组内未检测出缺失型mtDNA,梗阻性黄疸组存在着缺失型mtDNA;随着梗阻时间的延长,梗阻性黄疸组RCR、磷氧比值及肝组织ATP含量逐步降低,总mtDAN拷贝数逐步减少(P＜0.01),缺失型mtDNA在总mtDNA中的百分比逐步增加(P＜0.01),其变化与线粒体功能损害相一致.结论:大鼠梗阻性黄疸肝细胞mtDNA损伤是导致线粒体功能损伤的重要因素.     

IL-1β诱导大鼠肝细胞NO产生增多及线粒体膜电位降低

目的: 观察体外培养的大鼠肝细胞在促炎细胞因子IL-1β刺激下一氧化氮(NO)的产生和线粒体膜电位的变化,探讨两者之间的关系.方法: 原位胶原酶灌注法分离和培养原代大鼠肝细胞后,分别用生理盐水、脂多糖(LPS)(10 mg·L-1)、IL-1β(1 nmol·L-1)及LPS(10 mg·L-1)联合IL-1β(1 nmol·L-1)刺激肝细胞,并分别在刺激后6、12、24、48 h留取细胞和上清液,采用分光光度法测定上清液NO的含量,采用荧光探针JC-1结合流式细胞仪检测肝细胞线粒体膜电位的变化.结果: IL-1β刺激后肝细胞产生NO增加而线粒体膜电位降低,两者均呈时间依赖性,并在24 h达峰值;LPS对肝细胞NO的合成没有直接诱导作用,与IL-1β联合刺激也没有协同作用.结论: IL-1β诱导肝细胞过度产生NO从而抑制线粒体呼吸功能可能是炎症应激下肝损伤的潜在机制之一.     

内质网、线粒体与脑缺血再灌注

内质网和线粒体是细胞内合成、分泌、加工和运输蛋白质等物质以及维持机体能量代谢稳定的重要场所,然而在面临创伤、缺血、缺氧等环境因子超负荷作用时,又通过复杂的病理生理过程最终导致细胞凋亡,甚至死亡。脑卒中是临床上的常见病,脑缺血再灌注损伤是影响卒中患者治疗效果的首要因素之一,是医务工作者及患者所共同面临的棘手问题。目前,线粒体和内质网应激途径在诱导细胞凋亡及抗细胞凋亡研究中的地位日趋明显,内质网应激与线粒体通路及其在脑缺血再灌注损伤中的研究具有重要意义。     

内质网与细胞凋亡

内质网 (endoplasmicreticulum ,ER)广泛存在于真核细胞中 ,是调节蛋白质合成及合成后折叠、聚集的场所 ,是调节细胞的应激反应及细胞钙水平的场所 ,也是胆固醇、类固醇及许多脂质合成的场所。ER应激在细胞凋亡中起重要作用 ,现就ER应激在细胞中的作用、ER应激与Ca2 + 水平的调节及与相关凋亡蛋白之间的关系等方面进行综述。     

内质网应激在小鼠急性肝损伤中的作用机制

目的：探讨内质网应激在四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠急性肝损伤中的变化及作用机制。方法C57BL／6小鼠30只,随机分为模型组和对照组各15只,模型组给予20％ CCl4（0．1 mL／10 g）腹腔注射制备小鼠急性肝损伤模型,对照组给予橄榄油溶液腹腔注射（0．1 mL／10 g）作为正常对照。采用病理染色观察小鼠肝组织病理形态学和肝细胞内质网应激相关蛋白以及凋亡蛋白的表达情况,采用蛋白质印迹法测定小鼠肝脏内质网应激相关蛋白以及凋亡相关蛋白的表达变化趋势。结果CCl4腹腔注射后8 h,模型组小鼠肝脏出现明显的损伤,肝组织 GRP78蛋白以及 cleaved caspase －12表达量显著升高（P ＜0．05）,cleaved caspase －3表达量亦显著升高（P ＜0．05）;TUNEL 法检测结果均显示模型组肝脏有严重损伤,大量肝细胞发生凋亡,凋亡指数较对照组明显升高（P ＜0．05）,而 PCNA 染色显示模型组肝细胞增殖指数明显少于对照组（P ＜0．05）;相蛋白质印迹显示,模型组内质网应激相关蛋白以及凋亡蛋白表达量均明显升高,同时伴有线粒体细胞色素 c 的释放,而促细胞增殖蛋白p －Akt、PCNA 表达量明显降低。结论内质网应激反应介导的线粒体细胞凋亡通路参与了 CCl4诱导的小鼠急性肝损伤的发病过程。     

姜黄素对内质网应激诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的 探讨姜黄素对内质网应激(ERS)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 建立衣霉素诱导ERS的肝损伤模型,测定肝损伤小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平、肝匀浆中还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量及肝指数.实时荧光定量PCR法检测小鼠肝组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78/Bip) mRNA表达及半定量免疫组化法检测肝组织GRP78/Bip蛋白水平,并行肝组织病理学检查.结果 姜黄素能降低衣霉素诱导ERS肝损伤小鼠血清中ALT、AST水平和肝组织匀浆中MDA含量;提高肝组织匀浆中SOD、GSH活性;同时姜黄素能明显抑制肝组织中GRP78/Bip mRNA和蛋白的表达.HE染色结果显示姜黄素能明显改善模型组小鼠肝脏组织病变范围与程度,使炎细胞浸润减少.结论 姜黄素可能通过抗氧化作用对ERS诱导的肝损伤小鼠发挥保护作用.     

内质网应激在UCH-L1抑制剂诱导细胞凋亡中的作用

目的探讨内质网应激(ERS)在泛素羧基末端水解酶-1(UCH-L1)抑制剂导致的细胞损伤过程中的作用。方法采用50μmol/L的UCH-L1抑制剂处理人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞。于处理前(对照组)和处理后不同时间点(2、4、6、12、24h),分别采用MTT比色法和Western blotting法检测细胞活力和ERS相关蛋白Bip/Grp78、Xbp-1、p-eIF2α及其促凋亡转录因子CHOP/Gadd153的表达。结果MTT比色法检测发现,50μmol/LUCH-L1抑制剂处理后4h,SK-N-SH细胞活力下降43.1%(P<0.05),且随处理时间的延长继续呈现显著下降趋势(P<0.01)。Western blotting检测显示,经50μmol/LUCH-L1抑制剂处理后,SK-N-SH细胞ERS相关蛋白Bip/Grp78、p-eIF2α和Xbp-1表达分别于处理后2、4、6h时显著增加;转录因子CHOP/Gadd153表达则在处理后2h和4h时略有增加,6h后达到高峰。结论在UCH-L1抑制剂诱导的细胞凋亡过程中,ERS是导致细胞损伤的路径之一。     

内质网应激对T细胞抗肿瘤功能调控的研究进展

内质网应激参与肿瘤的发生与发展,近年来,内质网应激对T细胞发育和功能调控的研究也逐渐深入。肿瘤微环境中浸润的T细胞内质网应激的发生加剧T细胞的耗竭,损害T细胞抗肿瘤免疫功能。内质网应激抑制剂的使用可以减轻T细胞的耗竭程度,改善肿瘤微环境中T细胞的抗肿瘤功能。此外,一些时钟基因如Per1和Per2的下调也促进了T细胞耗竭的进展,而内质网应激通路的效应分子能够调控生物钟网络中Per基因家族的转录,增强T细胞的免疫功能。本文就内质网应激调控T细胞的抗肿瘤功能进行论述,为肿瘤免疫治疗提供新策略。     

大鼠脑皮质内质网应激及凋亡相关因子在控制性低血压中的变化

目的探讨在不同程度控制性低血压中大鼠脑皮质神经元内质网应激（ERS）及凋亡的变化。方法24只SD雄性大鼠随机
均分为A组（对照组）、B组（70 mmHg）、C组（50 mmHg）、D组（30 mmHg)四组。大鼠麻醉后用硝普钠复合艾司络尔诱导控制性
低血压,达到目的血压后维持60 min。对照组无降压,各组大鼠最终补液量相等。控制性低血压完成后12 h断头取脑,western
blot法检测脑皮质中Bax、Bcl-2、GRP78、CHOP、caspase-12表达,RT-PCR法检测脑皮质GRP78 mRNA表达,TUNEL法检测皮
质神经元凋亡。结果与A组比较,C组及D组中ERS相关因子GRP78 mRNA,GRP78、CHOP、caspase-12蛋白表达明显增加且
组间有统计学差异（P<0.05）,在B组未见明显变化（P>0.05）;与A组比较,C组及D组中凋亡细胞数明显增加,Bax表达上调,
Bcl-2表达下调（P<0.05）,在B组未见明显变化（P>0.05）。结论轻度的控制性低血压（70 mmHg）不会引起脑皮质神经元损伤,
而程度较重的控制性低血压（低于50 mmHg）可以诱导脑皮质神经元ERS及凋亡。
     

大黄素诱导对内质网应激相关蛋白表达及肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的研究大黄素对肝细胞癌Hep G2细胞作用后内质网应激(ERS)相关蛋白表达的影响。方法采用不同浓度大黄素(0、10、50、100μmol/L)处理Hep G2细胞48 h,通过四甲基偶氮唑蓝比色法测定大黄素对肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞术检测大黄素对Hep G2细胞的凋亡率,采用蛋白印迹法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)及caspase-12活化断裂后产生的活性片段的表达。结果大黄素以浓度依赖的方式抑制Hep G2细胞的增殖,促进细胞凋亡。大黄素处理Hep G2细胞后,内质网分子伴侣蛋白GRP78的表达明显增高;内质网相关凋亡分子CHOP和caspase-12的含量也显著增高,caspase-12活性增强。结论大黄素可能通过内质网应激相关途径诱导Hep G2细胞凋亡。     

内质网应激在氟中毒大鼠肾损害中的作用

目的：　初步观察内质网应激在氟中毒大鼠肾组织中的变化,探索内质网应激在氟中毒肾损伤机制中的作用。方法：　48只Wistar 大鼠按体重平均分成4组：常食对照组、常食加氟组、低钙对照组和低钙加氟组;分别给予常食和低钙饮食,加氟组大鼠饮水中投氟化钠（NaF）（221 mg•L-1）3个月。实验结束后,取一侧肾脏制作病理切片,在光镜下观察形态学变化。取各组大鼠50 mg肾组织抽提总RNA,利用RT-PCR技术分析内质网应激相关基因Grp78、Xbp1、CHOP和PDI的表达水平。结果：光镜下可见,常食加氟组大鼠肾组织以近端小管和远端小管上皮细胞水肿和空泡变性为主;低钙加氟组大鼠肾组织近端小管和远端小管上皮细胞呈现水肿和空泡变性,伴有散在的坏死、轻度再生修复和肾间质充血;常食对照组和低钙对照组大鼠肾组织无明显变化。RT-PCR产物经半定量分析显示,低钙加氟组和常食加氟组大鼠肾组织Xbp1的表达较相应对照组明显增强（P<0.05）,低钙加氟组大鼠肾组织Grp78 mRNA表达较常食加氟组和低钙对照组明显增强（P<0.05或 P<0.01）;而低钙加氟组大鼠肾组织PDI的表达较常食加氟组明显下降（P<0.05）。各组大鼠肾组织CHOP表达差异无显著性（P>0.05）。结论：过量氟可造成肾组织损伤,低钙营养进一步加剧了氟对肾的损伤作用,而内质网应激很可能参与该损伤机制。