羊膜对角膜成纤维细胞CTGF表达及凋亡的影响

目的观察羊膜对在其基质面生长的角膜成纤维细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达以及凋亡的影响。方法将传代的家兔角膜成纤维细胞接种于羊膜基质面，培养5d后，用RT-PCR检测角膜成纤维细胞CTGF mRNA表达的变化；用流式细胞仪观察羊膜对IL-1诱导的角膜成纤维细胞凋亡的影响。结果在羊膜基质面培养的角膜成纤维细胞，其CTGF／GAPDH像素比值较对照组低，与对照组比较有明显统计学差异（P〈0．05）；羊膜能降低IL-1诱导的角膜成纤维细胞凋亡率，与对照组比较有明显统计学差异（P〈0．01）。结论羊膜不仅抑制体外培养的角膜成纤维细胞CTGF mRNA的表达，而且能抑制角膜成纤维细胞的凋亡，可能部分解释羊膜减轻角膜基质损伤修复反应和抗眼表瘢痕形成的机制。     

羊膜移植对兔角膜碱烧伤基质TGF—β1mRNA表达的影响

目的 观察兔角膜重度碱烧伤后羊膜移植对兔角膜碱烧伤基质TGF-β1mRNA表达的影响。方法 将18只新西兰白兔随机分成3组,每组6只,所有兔眼建立重度碱烧伤模型,左眼羊膜移植,右眼作为对照。分别观察1月、2月、3月。结果 1月时,羊膜移植组中基质TGF-β1mRNA的表达低于对照组。2月、3月时,两组中基质TGF-β1mRNA的表达无明显差异。结论 羊膜移植治疗兔角膜重度碱烧伤,早期可降低基质TGF-β1mRNA的表达,起到部分减轻基质浑浊的作用。     

结缔组织生长因子与转化生长因子及Smad信号通路在兔角膜创伤愈合中的作用

目的探讨结缔组织生长因子（CTGF）与转化生长因子β1（TGF-β1）在兔角膜创伤愈合过程中的表达和对创伤愈合的作用,并对二者之间的相互作用及与此有关的Smad信号传导通路作初步研究。方法选择Albino纯种白兔26只,随机分为4组：（1）空白对照组：2只兔（4只眼）,未做任何处理。（2）单纯角膜创伤组：又分术后2、6h,1、3、7、21d亚组,每个亚组2只兔（4只眼）。（3）TGF抗体组：颞侧球结膜下注射15．5μg TGF抗体,又分为3、7、21d亚组,每个亚组2只兔（4只眼）。（4）Smad4抗体组：颞侧球结膜下注射20μg Smad4抗体,又分为3、7、21d亚组,每个亚组2只兔（4只眼）。实验眼首先行直径3mm、包含约0．05mm实质层的板层角膜切除术,然后TGF抗体组术眼球结膜下注射TGF-β1抗体,Smadd抗体组术眼球结膜下注射smad4抗体,用免疫组织化学和mRNA原位杂交方法分别检测CTGF、TGF-β1、纤维粘连蛋白（FN）在术后2、6h、1、3、7、21d的表达和Ⅰ型胶原、CTGF mRNA在术后6h、3、7、21d的表达及角膜纤维细胞活化增生情况。结果（1）正常兔眼角膜未发现CTGF蛋白和mRNA的表达。TGF-β1蛋白在正常角膜上皮中有表达。（2）术后6h角膜纤维细胞开始活化,创伤后TGF-β1在上皮和实质中的表达显著增加,同时CTGFmRNA表达上调;术后3dTGF-β1蛋白、CTGF及Ⅰ型胶原mRNA的表达到高峰;术后7d,3者在上皮中表达明显,TGF-β1蛋白在实质中表达减少;术后21d,绝大多数纤维细胞恢复到伤前状态,CTGF蛋白和mRNA在上皮中偶见表达。（3）TGF抗体使实质中的TGF-β1、CTGF、FN表达减少,同时下调上皮中CTGF mRNA的表达。（4）Smad4抗体抑制实质层TGF的表达,而对CTGF表达无影响。结论创伤能引起TGF-β1蛋白、CTGF蛋白及mRNA的表达增加,Ⅰ型胶原和FN蛋白合成增加。TGF-β1促进角膜纤维细胞活化,上调CTGF的表达;CTGF主要调节Ⅰ型胶原和FN生成,从而影响角膜伤口愈合和瘢痕形成;这两种调节作用可能不通过Smad通路传导。（中华胺群杂志,2006,42：918-924）     

TGF-β2反义寡核苷酸对兔角膜基质创伤修复的影响

目的:探讨TGF-β2反义寡核苷酸对兔角膜基质成纤维细胞转化、增殖的作用,揭示其对角膜创伤修复的影响。方法:新西兰大白兔28只,双眼均制备角膜基质创伤模型,右眼为实验组,用浸有TGF-β2反义寡核苷酸的8-0薇乔缝线缝合角膜创口;左眼为对照组,用普通8-0薇乔缝线缝合角膜创口,分别于4,7,14,21d处死动物,取角膜后行免疫组化(α-SMA和PCNA)染色和电镜观察。结果:术后各时间段均发现,实验组α-SMA和PCNA阳性的成纤维细胞数明显少于对照组,但成纤维细胞的超微结构实验组和对照组比较无明显区别。结论:TGF-β2反义寡核苷酸可抑制兔角膜基质成纤维细胞转化、增殖,为调控角膜基质伤口修复提供了一个新的途径。     

结缔组织生长因子对角膜成纤维细胞α5β1整合素表达的影响

目的 :观察结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor,CTGF)对体外培养的角膜成纤维细胞α5β1整合素表达的影响。方法 :体外培养兔角膜成纤维细胞 ,经 0 .5、5、5 0和 5 0 0ng/mlCTGF处理 2 4h后 ,用免疫组化染色检测角膜成纤维细胞α5β1整合素的表达情况。结果 :与对照组相比 ,0 .5、5、5 0和 5 0 0ng/ml的CTGF能呈剂量依赖性地促进角膜成纤维细胞α5β1整合素的表达 (P <0 .0 1)。结论 :一定浓度的CTGF能促进角膜成纤维细胞α5β1整合素的表达 ,它可能参与角膜基质损伤修复过程中角膜成纤维细胞与细胞外基质以及角膜成纤维细胞之间的黏附和角膜成纤维细胞的移行过程。     

羊膜上皮细胞培养液抑制角膜基质细胞凋亡的实验研究

目的 对羊膜上皮细胞培养液抑制由肿瘤坏死因子(TNF-α)诱发的角膜基质细胞凋亡进行研究。方法 体外培养兔角膜基质细胞(RCK),30ng/ml TNF-α诱发角膜基质细胞凋亡。实验分为对照组、羊膜上皮细胞培养液组(羊膜组)和阴性对照组。应用FITC-dUTP-TUNEL和DAPI染色检测RCK细胞凋亡发生率,分别测定经24h培养后各组细胞凋亡特异性DNA梯形降解。Western blot检测细胞凋亡保护性因子Bcl-2、促进因子Bax在经羊膜上皮细胞培养液处理后于细胞中表达强度及Bcl-2/Bax比值变化。结果 羊膜上皮细胞培养液明显抑制由TNF-α诱发的兔角膜基质细胞凋亡,DAPI染色显示24h对照组,羊膜培养液组和阴性对照组细胞凋亡发生率分别为:42.4％±4.3％,2.2％±0.3％和2.7％±0.4％。DNA降解实验显示羊膜上皮细胞培养液明显抑制TNF-α诱导的DNA片段降解。Western blot显示羊膜上皮细胞培养液明显刺激RCK细胞Bcl-2蛋白的表达和分泌。结论 羊膜培养液中可能释放的多种细胞因子对TNF-α诱发的角膜基质细胞调亡具有明显的抑制作用,其作用机制之一是刺激Bcl-2在RCK细胞的表达,并使Bcl-2/Bax比值上调。     

羊膜对准分子激光屈光性角膜切削术后角膜组织表达TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白的影响

目的:观察羊膜移植对准分子激光屈光性角膜切削术(photorefractive keratectomy,PRK)后角膜组织表达转移生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Ⅰ、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响,探讨羊膜移植减轻瘢痕形成的部分机制.方法:对10只新西兰白兔双眼行PRK,术后1眼立即行角膜表面羊膜移植术,另眼作为对照.于术后4周进行免疫组织化学染色检查.结果:羊膜移植组角膜上皮和基质中角膜基质细胞及胶原纤维TGF-β1表达较对照组明显减弱,前角膜基质表达Ⅲ型胶原和FN亦明显较对照组减弱.角膜基质Ⅰ型胶原表达两组间无明显差异.结论:羊膜能抑制PRK后角膜组织TGF-β1、Ⅲ型胶原和FN的表达,羊膜移植后瘢痕形成轻可能部分与羊膜调节组织TGF-β1、Ⅲ型胶原和FN的表达有关.眼科学报2000;16:239～242.     

层黏连蛋白对人翼状胬肉成纤维细胞生长的抑制作用

目的:探讨层黏连蛋白对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响.方法:体外培养的第3代翼状胬肉成纤维细胞,接种于层黏连蛋白包被培养皿(Ln组)和空白培养皿(对照组)中,倒置显微镜观察细胞生长状态,MTT法检测细胞增殖状态,作出生长曲线;免疫荧光法检测α-SMA在细胞内的表达;RT-PCR法检测TGF-β1和cytokeratin mRNA的表达水平.结果:Ln组成纤维细胞数量少于对照组;3～7 d,Ln组A570明显低于对照组(0.20 vs 0.28,0.22 vs 0.30,0.28 vs0.34,0.31 vs0.36,0.33 vs 0.36,P＜0.05);α-SMA在对照组细胞内表达良好,在Ln组的表达受到抑制;与对照组相比,Ln组TGF-β1 mRNA的表达下降,cytokeratin mRNA表达增加.结论:层黏连蛋白能抑制翼状胬肉中成纤维细胞的增殖.     

TGF-β2特异性siRNA载体干扰人结膜囊成纤维细胞表达的研究

目的:探讨人转化生长因子TGF-β2特异性siRNA真核表达载体转染人结膜囊成纤维细胞后对其TGF-β2mRNA表达的影响。方法:体外分离并培养人结膜囊成纤维细胞,在培养后传代3次的细胞以TGF-β2特异性siRNA真核表达载体进行转染,并以未转染细胞作为对照。转染后分别于24,48和72h收集细胞,采用RT-PCR技术检测TGF-β2特异性siRNA真核表达载体对TGF-β2mRNA表达的影响。结果:分离的人结膜囊成纤维细胞于接种约4h左右开始贴壁,同时细胞变长成为梭形,表现出明显的成纤维细胞特性,约36h后达到融合状态;RT-PCR结果示:与对照组相比,转染24,48和72h后的细胞TGF-β2表达抑制率分别为17.40%,52.80%和79.20%,抑制效率呈现随时间延长有所加强的趋势。结论:TGF-β2特异性siRNA真核表达载体能抑制人结膜囊成纤维细胞TGF-β2mRNA的表达。     

角膜内皮细胞高表达TGF-β1的免疫学作用

目的探讨TGF-β1基因转染角膜内皮细胞后表达产物的免疫学活性。方法分别用RT-PCR、Western blot、免疫组织化学法检测pSecTag2-TGF-β1MP质粒转染角膜内皮细胞48h后TGF-β1基因的表达,ELISA法检测TGF-β1浓度;MTT法检测其对ConA诱导的淋巴细胞转化反应的影响;用流式细胞仪法检测其对淋巴细胞凋亡以及淋巴细胞CD3 、CD4 、CD8 、CD25 、CD69 、CD71 亚群分化的影响。结果从mRNA转录和蛋白质水平均证实TGF-β1基因在角膜内皮细胞获得高效表达。瞬时转染48h角膜内皮细胞培养上清中TGF-β1的表达为(98±3)pg/ml,高于对照组。在其作用下淋巴细胞活化增生受抑制;出现明显的亚二倍体峰;CD25 、CD69 、CD71 阳性细胞比率下降。结论基因转染角膜内皮细胞高表达TGF-β1,可抑制淋巴细胞的活化增生,促使淋巴细胞凋亡。     

低剂量TGF-β1维持三维培养模型中牛角膜基质细胞生长和缓解细胞外基质纤维化的作用

背景 转化生长因子(TGF)-β1在角膜损伤修复过程中发挥重要作用,不同剂量的TGF-β1对角膜细胞外基质(ECM)的合成具有不同影响,从而影响瘢痕形成的程度.既往研究多集中于高质量浓度TGF-β1对二维培养的角膜基质细胞的影响,而低质量浓度TGF-β1对角膜基质细胞ECM合成的影响鲜见研究.目的研究低质量浓度TGF-β1对体外三维培养的角膜基质细胞生长状况及ECM合成的影响. 方法 采用两步胶原酶消化法从新鲜牛眼中分离牛角膜基质细胞并置于含体积分数10％胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基,利用Pellet体外三维培养模型对牛角膜基质细胞进行培养.将细胞分为0.25 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组和0.50 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组,分别于培养后48 h、1周、2周、3周观察Pellet培养模型的形态变化.于培养后3周采用苏木精-伊红染色法对Pellet培养模型进行常规组织形态学检查,采用钙黄绿素-AM/碘化丙啶法(Calcein-AM/PI法)于激光扫描共焦显微镜下检查角膜基质细胞的死亡率;采用实时荧光定量PCR及免疫荧光细胞化学法分别检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)和ColⅢmRNA及其蛋白的相对表达量;采用实时荧光定量PCR法检测细胞中角膜蛋白(KERA)mRNA和基膜聚糖(LUM)mRNA的表达.结果 培养后48 h、1周、2周和3周Pellet细胞均成团生长.苏木精-伊红染色可见,Pellet球内均有大量红色淡染的胶原纤维以及大部分正常的成纤维细胞和少量坏死的成纤维细胞,坏死细胞可见细胞形态破坏,呈均质红染,且0.25 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组和0.50 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组培养细胞形态无明显差别.0.25 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组和0.50 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组细胞死亡率分别为(33.60±1.65)％和(30.90±0.78)％,差异无统计学意义(t=0.144,P=0.887).0.25 ng/ml TGF-β1+5％FBS组Pellet培养模型中α-SMA、FN、ColⅢ蛋白表达量均低于0.50 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组,差异均有统计学意义(tα-SMA=4.622,P=0.010;tFN=2.973,P=0.040;tCol Ⅲ=7.845,P＜0.001),0.25 ng/ml TGF-β1 +5％ FBS组Col Ⅰ的表达量明显高于0.50 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组,差异有统计学意义(tColⅠ=4.022,P=O.016).在转录水平和蛋白表达水平,0.25 ng/ml TGF-β1 +5％ FBS组ColⅢ/Col Ⅰ比值均低于0.50 ng/ml TGF-β1+5％FBS组,差异均有统计学意义(tmRNA=-3.039,P=0.038;t蛋白=3.215,P=0.032).培养后48 h、1周、2周Pellet培养模型中KERA mRNA和LUM mRNA均呈阳性表达,0.25 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组LUM mRNA相对表达量随培养时间延长而逐渐增加;0.50 ng/ml TGF-β1 +5％ FBS组LUM mRNA相对表达量于培养后1周时达峰值.2个组Pellet培养模型中KERA mRNA相对表达量均在培养后1周达峰值. 结论 低剂量的TGF-β1既能够维持Pellet体外三维培养模型中角膜基质细胞的生长并合成ECM,也使ECM组成成分的合成倾向于正常状态,以减少瘢痕化修复的趋势.     

原代培养兔晶状体上皮细胞的环境和细胞状态的变化

目的:探讨体外原代培养的兔晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)分泌活性转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)和异常表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的状况变化方法:体外原代培养兔眼LEC,当细胞接近融合时转板培养,观察细胞转板培养后1,6,12d的状态变化,并采用ELISA法检测各时项培养液上清中TGF-β1的水平,免疫细胞化学和计算机图像分析统计各时项细胞中α-SMA的表达水平。结果:转板培养12d的细胞活性TGF-β1的水平明显高于转板培养1和6d的水平(均P<0.05),同时转板培养12d的细胞表达α-SMA的水平分别明显高于转板培养1和6d的水平(P<0.05);而且α-SMA的表达量随着TGF-β1水平的升高而升高,两者高度正相关(r=0.995,P<0.01)。结论:原代培养的LEC活性TGF-β1逐渐增多,向表达有α-SMA的肌成纤维细胞转分化。     

损伤相关性角膜基质混浊的研究进展

细胞凋亡、生长因子、炎细胞及细胞因子与损伤引起的基质混浊密切相关.在损伤愈合早期抑制角膜细胞的凋亡可减轻基质混浊,而在中后期适当地促进肌成纤维细胞及炎细胞的凋亡也有助于减轻基质混浊.目前研究发现,在众多的TGF-β信号转导通路中,Smad通路与角膜损伤后基质混浊有关.FAK、uPA/uPAR、EMMPRIN和CTGF作为TGF-β的下游活化产物均参与了角膜成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化,其中FAK起负性调控作用,而后三者则起正性调控作用.炎症反应及其他参与损伤愈合的因素也是引起基质混浊的原因.阐明这些因素的作用机制,诱导其向着有益于损伤愈合的方向发展也是目前研究的主要内容.     

TGF-β1、VEGF在兔角膜缝线后新生血管形成中的表达及意义

目的 探讨角膜组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、血管内皮细胞生长因子(vescular endothelium growth factor,VEGF)与角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)形成的相关性.方法 双侧角膜缝线制备兔角膜新生血管模型.33只兔随机分为正常对照组(3只)、实验组(15只)和实验对照组(15只);实验组兔行单纯角膜缝线,实验对照组兔术后隔日结膜下注射一定量地塞米松.术后每日观察CNV生长情况并记录,分别于术后1 d、4 d、7 d、14 d、21 d检测角膜组织中TGF-β1、VEGF阳性表达情况.结果 缝线后各时间点,实验对照组CNV面积、角膜组织炎症细胞浸润程度及TGF-β1、VEGF的表达情况与实验组相比明显受到抑制(P＜0.05).角膜组织中TGF-β1、VEGF的表达与CNV面积存在显著的相关性.结论 CNV的形成与炎症反应密切相关,TGF-β1、VEGF可能参与了CNV的形成过程,地塞米松可能通过抑制角膜炎症反应及TGF-β1、VEGF等细胞因子的表达进而抑制CNV的生长.     

羊膜对兔角膜上皮细胞影响的实验研究

目的 :观察羊膜对在其上皮面培养的兔角膜上皮细胞增生的影响。方法 :将兔角膜上皮细胞原代培养后 ,接种于羊膜上皮面 ,并用MTT自动比色法分别于接种后 1、3、5、7天检测羊膜对兔角膜上皮细胞增生的影响。结果 :接种后 1 ,3,5天 ,羊膜对兔角膜上皮细胞有明显的促增生作用 (P <0 0 5)。结论 :羊膜有促进兔角膜上皮细胞增生的作用 ,可用做角膜表面结构重建的理想材料。     

角膜内皮细胞稳定表达转化生长因子-β1对小鼠脾脏淋巴细胞细胞因子表达的调控

目的探讨转化生长因子-β1(tromsforming growth factor-β1,TGF-β1)基因转染角膜内皮细胞后表达产物对小鼠脾脏淋巴细胞细胞因子表达的调控作用。方法利用脂质体介导法将TGF-β1基因转染入培养的兔角膜内皮细胞中,并用药物筛选抗性细胞克隆。用免疫组化法检测外源基因的稳定表达。ELISA法检测转染细胞培养上清中TGF-β1表达量,用RT-PCR检测小鼠脾脏淋巴细胞IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6mRNA的表达。结果免疫组化染色显示基因转染后筛选出的克隆细胞TGF-β1蛋白表达均为阳性,胞浆呈棕色着色。转染细胞培养上清中TGF-β1的表达量为(597±7)pg/ml,高于对照组。基因转染组淋巴细胞IL-2、IFN-γ、TNF-αmRNA的表达量明显低于正常对照组(P<0.05);IL-4、IL-6mRNA的表达量明显高于正常对照组(P<0.05)。结论TGF-β1基因转染角膜内皮细胞后高表达TGF-β1,致使淋巴细胞发生免疫偏离,作为组织工程角膜种子细胞移植后具有抑制角膜移植免疫排斥反应的潜在可能性。     

羊膜移植对大鼠角膜碱烧伤后基质金属蛋白酶的影响

目的探讨羊膜移植对大鼠角膜中度碱烧伤后角膜上皮细胞和基质成纤维细胞中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)变化的影响。方法将12只SD大鼠随机分成2组，每组6只，分别作为碱烧伤后1d组和14d组。在2组中，所有大鼠角膜建立中度碱烧伤模型，左眼行羊膜移植，右眼作为对照。应用免疫组化法，分别观察碱烧伤后1d和14d实验组与对照组中MMP-9和MMP-2表达的变化。结果碱烧伤后1d，实验组与对照组中，角膜上皮细胞内的MMP-9和MMP-2的表达与正常角膜上皮细胞内的MMP-9和MMP-2的表达相比明显升高，但两组间的表达差异无显著性；而2组成纤维细胞内的MMP-9和MMP-2的表达与正常成纤维细胞内的MMP-9和MMP-2的表达相比明显升高，两组间的表达差异无显著性。碱烧伤后14d，2组中角膜上皮细胞内的MMP-9和MMP-2的表达与碱烧伤后1d情况相似，两组间的表达差异无显著性；2组成纤维细胞内的MMP-9和MMP-2的表达与碱烧伤后1d组相比明显升高，并且实验组中的MMP-9和MMP-2的表达与对照组相比也有明显升高。结论碱烧伤后大鼠角膜上皮细胞和基质成纤维细胞中的MMP-9和MMP-2的表达都有升高。羊膜移植能增强MMP-9和MMP-2在成纤维细胞中的表达，提示羊膜在加快角膜碱烧伤后的重塑中起一定作用。     

兔角膜重度碱烧伤后羊膜移植的疗效观察

目的 观察兔角膜重度碱烧伤后羊膜移植的疗效。方法 将18只新西兰白兔随机分成3组，每组6只，所有兔眼建立重度碱烧伤模型，左眼羊膜移植，右眼作为对照。分别于1，2，3个月，通过光镜，电镜以及原位杂交方法观察角膜情况。结果 1个月时，羊膜移植组上皮细胞修复优于对照组，基层浸润轻于对照组，基质中TGF－β1mRNA的表达低于对照组，而新生血管增生情况两者无差别。2个月时，除上皮细胞修复羊膜移植组优于对照组外，其他与对照组相比无差异。3个月组情况与2个月组相似。结论 羊膜移植治疗兔角膜重度碱烧伤，早期可促进角膜上皮细胞修复，并能部分减轻基质浸润。     

兔Epi-LASIK术后早期角膜创伤愈合反应的研究

目的 通过比较Epi-LASlK、PRK两种术式,探讨上皮瓣保留对早期角膜创伤愈合反应的影响.方法建立兔上皮瓣下角膜磨镶术(Epi-LASIK)、PRK模型,检测术后角膜基质炎性细胞数量、角膜基质细胞数量、白细胞介素1(IL-1β)、转化生长因子(TGF-β2)的表达来探讨角膜创伤愈合反应.结果 Epi-LASIK术后1 d、3 d角膜基质炎性细胞数量明显比PRK少,差异有统计学意义(P<0.05);Epi-LASIK术后1 d、3 d角膜基质细胞数量与正常对照比较差异无统计学意义(P>0.05);Epi-LASIK、PRK角膜上皮层TGF-β2、IL-1β表达差异均无统计学意义(P>0.05);Epi-LASIK术后1d、3 d角膜基质TGF-β2、IL-1β表达明显比PRK弱,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Epi-LASIK由于上皮瓣的物理屏障作用,减轻了Epi-LASIK术后早期角膜创伤的过度反应,有利于其正常修复.     

汉防己甲素对人眼Tenon囊成纤维细胞表达细胞凋亡蛋白和转化生长因子的影响

背景 汉防己甲素(Tet)对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(TCFs)有抑制效应,但其作用机制尚不完全明确. 目的 观察Tet对体外培养的人眼TCFs中bax、bcl-2、转化生长因子β2(TGF-β2)蛋白表达的影响,探讨其可能的作用机制. 方法 收集健康供体眼球巩膜组织,用组织块培养法培养、分离TCFs,并进行传代,将第3代细胞以1×105个/ml的密度接种于培养板,采用光学显微镜和免疫组织化学法对培养细胞进行鉴定.培养24 h后,用培养液稀释Tet至浓度为1×10-5 mol/L,并加入培养孔中,对照组用1640培养液,继续培养24 h后冲洗固定,采用TUNEL法检测细胞的凋亡情况;采用免疫组织化学法检测bax、bcl-2、TGF-β2蛋白在TCFs中的表达.结果 培养的细胞形态学呈现成纤维细胞的特征,vimentin染色呈阳性反应.Tet组出现大量的TUNEL阳性细胞,而对照组TCFs未见明显凋亡细胞核出现.免疫组织化学检测表明,Tet组TCFs中bax、bcl-2、TGF-β2蛋白的表达率(A值)分别为0.577±0.009、0.430±0.012、0.341±0.017,对照组分别为0.320±0.015、0.819±0.021、0.624±0.014,Tet组bax的表达明显升高,bcl-2和TGF-β2的表达明显下降,差异均有统计学意义(t=33.277、-35.356、-28.093,P＜0.01).结论 Tet通过上调人眼Tenon囊成纤维细胞中bax的表达,下调bcl-2、TGF-β2的表达,从而抑制TCFs的增生.