雷公藤内酯醇前药MC002在大鼠体内药代陛别差异研究

目的研究雷公藤内酯醇前药MC002在♀♂大鼠体内代谢是否存在差异。方法两组实验各设♀♂对照。♀♂SD大鼠静脉注射给予MC002 0.75 mg.kg-1,于不同时间点采集全血样品,另♀♂SD大鼠静脉注射给予MC0020.75 mg.kg-1,于5、15、30、90 min后采集各组织样品。样品用乙酸乙酯提取后,LC-MS/MS方法测定,DAS2.0计算药代动力学参数。结果 MC002在♀♂大鼠体内均迅速转化为代谢产物PG490,♀♂大鼠的AUC分别为（8046.2±634.75）和（5604.0±1140.9）μg·min·L-1,CL分别为（0.089±0.01）和（0.128±0.02）L·min-1·kg-1,两组参数统计学上有显著性差异（P〈0.05）,♀♂大鼠组织内浓度变化趋势相同,给药后5 min各组织药物浓度均达到最大值。结论 MC002在大鼠体内迅速转化为活性代谢产物PG490,PG490在大鼠体内代谢呈现出较明显的性别差异,总体表现为♀大鼠血中药物暴露高,代谢慢。♀♂大鼠组织中药物浓度变化趋势无明显差别。     

雷公藤内酯醇对胆囊癌GBC-SD细胞株增殖与凋亡的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇(TP)对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞株增殖和凋亡的影响.方法 体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞,分别加入0、5、10、20、50、100ng/ml(终浓度)TP,24、48、72h后采用MTT测定细胞生长抑制率,倒置相差显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布情况.结果 随剂量增加和作用时间延长,TP对GBC-SD的增殖抑制作用增强.TP不仅能引起细胞形态的变化,而且能诱导GBC-SD细胞凋亡,改变细胞周期分布.结论 TP能诱导胆囊癌细胞凋亡,并抑制其增殖,从而发挥抗肿瘤作用.     

LC-MS／MS法测定大鼠全血中前药MC002活性代谢产物雷公藤内酯醇浓度

目的建立测定大鼠全血中前药MC002的活性代谢产物雷公藤内酯醇（TP）血药浓度的方法。方法样品用乙酸乙酯萃取,采用LC-MS／MS方法,正离子检测方式,TP分子离子峰m／z361,二级离子碎片m／z128,Xcalibur1．4 SR1采集分析数据。结果TP在10～4000ng·mL^-1范围内有良好的线性关系（r=0．9956,n=5）,批内及批间精密度RSD〈8．2％,准确度95．7％～108．5％,低、中、高3种浓度方法绝对回收率（63．5±4．5）％,（55．6±5．4）％和（58．8±7．4）％。结论该方法首次建立了检测大鼠全血中前药MC002活性代谢产物TP的LC—MS／MS方法,灵敏度高,线性范围宽,可用于临床前MC002大鼠体内的药物代谢研究。     

血啉甲醚与血浆蛋白的结合

为研究血啉甲醚（ＨＭＭＥ）与小鼠血浆的蛋白结合率及ＨＭＭＥ与血浆蛋白的结合参数，用平衡透析法测定蛋白结合率，ＨＭＭＥ浓度用标准曲线法求出。ＨＭＭＥ血浆浓度在１９４μｇ／ｍｌ～２９７６μｇ／ｍｌ时血浆蛋白结合率为９３５％～７６３％，血浆蛋白结合参数：最大结合力（β）为８７×１０－６ｍｏｌ／ｇ；解离常数（Ｋｄｐ）为４２４×１０－５ｍｏｌ／Ｌ；结合常数（Ｋ）为２８４×１０４Ｌ／ｍｏｌ；结合部位数（Ｎ）为１４９２。表明ＨＭＭＥ与小鼠血浆蛋白具有单一类型的结合部位，药物血浆浓度升高结合率下降。     

硝呋莫司与大鼠犬猴和人血浆蛋白结合率的测定

目的建立硝呋莫司与SD大鼠、比格犬、食蟹猴和人血浆蛋白结合率的测定方法,计算硝呋莫司与4个不同种属的血浆蛋白结合率。方法采用体外快速平衡透析法,将透析后的血浆和缓冲液分别加入对应的空白基质,用乙酸乙酯萃取后采用HPLC法测定。结果硝呋莫司在样品中的线性范围为0.1⁵μg·ml^-1,在不同血浆中的色谱方法专属性良好,提取回收率为（73.64±1.00）%^81.20±0.66%。硝呋莫司在人、犬、大鼠、猴中的血浆蛋白结合率范围为46.0%⁵8.2%、40.7%⁴2.6%、38.7%⁴3.8%、30.8%⁴2.8%。结论硝呋莫司与4种血浆蛋白的结合率中等,且在不同种属的血浆蛋白结合率随药物浓度不同存在一定种属差异。     

雷公藤内酯醇诱导人脉络膜黑色素瘤株OCM-1凋亡的机制研究

目的探讨雷公藤内酯醇(TPL)对人脉络膜黑色素瘤株OCM-1增殖的影响,分析其诱导人OCM-1细胞凋亡的作用机制。方法将OCM-1细胞分为对照组和实验组,实验组加入20μl不同终浓度(5、10、20、40、80、160nmol/L)的TPL,对照组加入等量无血清RPMI 1640培养液,分别作用24、48、72h。采用MTT法检测TPL对OCM-1细胞增殖的影响,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化,流式细胞术检测不同浓度TPL诱导后OCM-1细胞的凋亡比例,Western blotting检测TPL诱导后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、survivin及caspase-3的表达。结果 TPL可抑制OCM-1细胞增殖,48h及72h的IC50值分别为56.14±6.72、15.57±4.28nmol/L。TPL诱导OCM-1细胞后,在瑞氏-吉姆萨染色中可观察到凋亡小体。流式细胞术在不同浓度TPL诱导后的OCM-1细胞中均检测到亚二倍体凋亡峰。TPL诱导OCM-1细胞凋亡过程中,Western blotting检测显示Bax蛋白表达上调(P<0.01),Bcl-2、survivin蛋白表达下调(P<0.01),并可检测到活化的caspase-3。结论 TPL可抑制人OCM-1的增殖并诱导其凋亡,Bax、Bcl-2、survivin及caspase-3蛋白在其中可能具有重要作用。     

血浆纤维结合蛋白含量变化对妊娠期孕妇的影响

近年研究发现，妊高征妇女的血液处于高凝状态，是加重患者病情和影响预后的重要因素之一。由于血浆纤维结合蛋白（Fibronectin，Fn）具有维护凝血和纤溶的动态平衡等作用，故我们对妊高征患者血浆Fn含量进行了动态检测，旨在探讨Fn在妊高征病程发展中的作用。     

雷公藤内酯醇对人宫颈癌CaSki细胞株的体外作用研究

目的探讨雷公藤内酯醇(TPL)对人宫颈癌CaSki细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT比色法检测不同浓度(0、5、10、20ng/ml)TPL作用24、48、72h后对CaSki细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,细胞免疫化学法检测Ki-67及p53蛋白表达的改变。结果倒置相差显微镜观察可见TPL处理后细胞皱缩变圆变粗糙,体积缩小,且不断地脱落悬浮于培养液中,数量减少,细胞间隙增大,且随药物浓度增加及作用时间延长,这种变化趋于明显。5、10、20ng/ml TPL在体外对CaSki细胞的生长具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖方式(P<0.01)。免疫细胞化学检测显示TPL作用后CaSki细胞Ki-67及p53蛋白表达下调,且呈剂量、时间依赖方式(P<0.01)。结论 TPL可抑制CaSki细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制癌细胞Ki-67及p53蛋白表达有关。     

妊娠高血压综合征患者血浆D-二聚体和纤维结合蛋白变化的研究

近年研究发现 ,妊娠高血压综合征 (简称妊高征 )患者体内血液凝血与纤溶系统平衡失调 ,血管内皮细胞受损[1] 。为此 ,我们对 3 0例妊高征患者血浆Ｄ 二聚体 (ＤＤ)纤维结合蛋白 (Ｆｎ)含量进行了检测 ,旨在探讨凝血纤溶在妊高征发病过程中的作用。1　资料与方法1.1　对象1.1.1　观察组 :1998- 0 6～ 2 0 0 0 - 0 7在我院妇产科住院的妊高征患者共 3 0例 ,按乐杰主编的全国统编教材《妇产科学》(第 4版 )妊高征诊断标准分类[2 ] ,轻、中、重度各 10例 ,平均年龄 ( 2 5 .7± 5 .6)岁 ,平均孕龄 ( 3 5 .3± 3 .1)周。1.1.2　对照组 :随机选择同…     

急性颅脑损伤患者血浆D-二聚体和纤维结合蛋白变化的初步研究

业已发现 ,颅脑损伤后出现的凝血机能异常是加重脑损伤程度和影响患者预后的重要因素之一[1 ] 。笔者对颅脑外伤患者血浆Ｄ -二聚体 (ＤＤ)和纤维结合蛋白 (Ｆｎ)水平进行了动态检测 ,探讨凝血纤溶功能在脑损伤病程中的变化。一、临床资料与方法1.一般资料 :1999年 1月～ 2 0 0 0年 12月在我科住院的 90例急性颅脑损伤患者为病例组 ,男 5 6例 ,女 34例 ;年龄 15～ 6 0岁 ,平均 32 .6岁。患者均在伤后 2 4ｈ内入院 ,经头颅ＣＴ检查确诊 ,符合国内颅脑损伤诊断标准[2 ] 。根据患者入院时格拉斯哥昏迷评分 (ＧＣＳ) ,分为轻 (13～ 15分 )、中 (…     

反式曲马朵及其活性代谢物氧去甲基曲马朵对映体的血浆蛋白结合

目的：研究反式曲马朵(trans T)及其活性代谢物氧去甲基曲马朵（M1)对映体的血浆蛋白结合。方法：大鼠腹腔注射单剂量盐酸trans T,1h后取血,离心超滤法制备血浆超滤液,高效毛细管电泳法测定血浆及其超滤液中trans T和M1对映体的浓度,配对t-检验比较对映体间的浓度与血浆蛋白结合率。结果：血浆中（＋）－trans T的总浓度和游离浓度均高于（-)-trans T,( )-trans T的血浆蛋白结合率低于（-)-transT.M1两对映体的总浓度,游离浓度和血浆蛋白结合率无明显区别,结论：trans T与血浆蛋白结合具有立体选择性,M1与血浆蛋白结合的立体选择性不明显。     

丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白1基因的克隆化与序列分析

目的 对命名为F蛋白结合蛋白1(FBP1)的未知基因,克隆其全长基因并进行生物信息学分析.方法 应用酵母双杂交技术得到FBP1,应用分子生物学技术克隆FBP1的基因编码序列.结果 经酶切和测序鉴定,结果完全正确,成功克隆了FBP1的基因编码序.结论 FBP1通过与F蛋白结合,在病毒蛋白与宿主细胞蛋白相互作用过程中发挥重要作用.     

军事飞行员冠状动脉粥样硬化患者血清RBP4水平分析

目的 分析军事飞行员冠状动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)患者血清视黄醇结合蛋白4(rentinol binding protein 4,RBP4)水平变化,探讨RBP4与军事飞行员冠状动脉粥样硬化发病风险相关性.方法 收集军事飞行员冠状动脉粥样硬化50例作为AS组,健康军事飞行员200名作为健康组,收集健康地勤人员200例作为对照组,通过酶联免疫吸附法测定各组血清RBP4.结果 对照组、健康组及飞行员AS组血清RBP4平均水平依次升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 血清RBP4可以作为提示军事飞行员冠状动脉粥样硬化发病风险的指标之一,值得进一步深入研究.     

噬菌体表面展示技术筛选乙型肝炎病毒前S1蛋白结合蛋白基因

目的 以乙型肝炎病毒(HBV)前s1蛋白为靶蛋白,寻找其相应的结合蛋白。方法 应用T7 cDNA文库噬菌体展示技术克隆与前s1蛋白具有结合作用的蛋白序列,命名为前s1结合蛋白(PreS1BP)。将推断的氨基酸序列在蛋白质库中进行搜索,自GenBank中获得结合蛋白的cDNA和基因组的全长序列。结果 初步确定PreS1BP即为神经胶质瘤抑制基因区候选基因2(GLTSCR2),cDNA长为1436核苷酸,基因位于第19号染色体长臂13.3区(19q13.3),长度11445碱基对(bp),位于19号染色体10403483～10414989,PreS1BP基因含有13个外显子,具有12个内含子。结论 应用T7 cDNA文库噬菌体展示技术和生物信息学方法获得了HBV PreS1BP基因。     

乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白1的克隆及原核表达

目的 对应用酵母双杂交技术及生物信息学技术筛选得到的乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白1(HBEBP1)进行克隆,并诱导其在大肠埃希菌BL21中的表达.方法 应用反转录PCR(RT-PCR)技术,以HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得HBEBP1基因片段,连接到pGEM-T载体,双酶切鉴定及测序正确后克隆至原核表达载体pET-32a( )中,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达以获得HBEBP1融合蛋白,并通过SDS-PAGE及Western blot证实融合蛋白的特异性.结果 RT-PCR扩增获得大小为372bp的HBEBP1基因片段,插入至原核表达载体pET-32a( )中,转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导后,成功获得大小约为33kD的重组蛋白,Western blot证实其具有良好的特异性.结论 构建了pET-32a( )-HBEBP1原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达了HBEBP1融合蛋白,为研究HBEBP1蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了基础.     

Evidence for weak protein binding of commercial extracellular gadolinium contrast agents

It is widely assumed that commercial extracellular gadolinium‐based contrast agents do not bind to proteins. Here, nuclear magnetic relaxation dispersion was used to characterize the interaction between the contrast agents gadodiamide and gadopentetate dimeglumine and the proteins human serum albumin, chicken egg white lysozyme, egg white proteins, or milk proteins. In all cases, contrast agent relaxivity was increased at all field strengths measured (0.0002 to 1.4 T) when protein was added. A distinct peak in relaxivity was observed between 0.5 and 0.7 T that is consistent with fractional protein binding and that could not be attributed to changes in solution viscosity. This peak was observed for gadodiamide with all four protein solutions and for gadopentetate dimeglumine with lysozyme, human serum albumin, and milk proteins. Protein binding was both contrast agent and protein dependent. For gadodiamide, the highest affinity was to egg white and milk proteins, while gadopentetate dimeglumine interacted most strongly with lysozyme. Protein binding was estimated at 30–40% for a 0.7 mmol/kg solution of gadodiamide in egg white or milk proteins. These results have implications for the accurate determination of contrast agent concentration in vivo. Weak protein binding may be an additional discriminating factor in understanding differences in the toxicokinetics of contrast agents. Magn Reson Med, 2010. © 2010 Wiley‐Liss, Inc.     

大鼠创伤性脑损伤后脑组织钙周期素结合蛋白的表达及意义

目的 探讨大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后脑组织中钙周期素结合蛋白(calcyclin binding protein,CacyBP)的表达规律及意义.方法 雄性SD大鼠60只,按随机数字表法分为正常对照组(10只)和TBI组(50只);采用头颅侧向旋转致伤方法制作TBI模型,并按伤后大鼠处死时间分为6,24,72 h、7,14 d共5个亚组,每组10只.采用免疫组化方法检测CacyBP在大鼠脑组织中的表达变化规律和分布情况.CacyBP阳性结果判断标准以细胞浆内出现棕黄染色颗粒为阳性,反之为阴性.结果 大鼠脑组织中CacyBP主要分布在海马、齿状回及皮层下神经元的胞浆中.与正常对照组的CacyBP高表达比较.TBI后6 h,其表达量明显减少,为最低值(P<0.01),随后表达量逐渐递增,至损伤后14 d其表达量恢复高值,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 在TBI后,CacyBP出现一个表达低峰,提示在不同机制影响下其可能对脑损伤的发生、发展发挥重要作用.

Abstract：

Objective To investigate the expression and significance of calcyclin binding protein (CacyBP)in the brain of rat model of traumatic brain injury(TBI).Methods Sixty 60 male SD rats were divided randomly into normal control group (n=10) and TBI group (n=50).The TBI model was created by using lateral head rotation device and subdivided into 6 h,24 h,72 h,7 d and 14 d group (10 rats per group).The expression and distribution of CacyBP in the rat brain was investigated immunohistochemically.The presence of the brown stained particles was considered as"positive"and lack of the stained particles ag"negative". Results CacyBP was mainly distributed in the hippocampus,dentate gyrus and cortical neuron cytoplasm.Compared with the high level expression of CacyBP in the normal control group,the expression of CacyBP was decreased to the lowest in the rat brain at 6 h post TBI (P<0.01),became stronger gradually at 24 hours and recovered to normal at day 14,with no statistical difference compared with normal control group (P>0.05). Conclusion The lowest level expression of CacyBP after TBI indicates that CacyBP may play an important role in development of brain injury under effect of difierent mechanisms.     

大肠杆菌错配识别蛋白MutS的表达与活性鉴定

目的构建表达错配识别蛋白MutS,并进行错配识别活性鉴定。方法在大肠杆菌中表达MutS蛋白,并纯化获得目的蛋白;利用凝胶滞缓实验对错配识别活性进行验证,并计算MutS蛋白降低的错配率。结果纯化的MutS蛋白具有错配识别活性,并能降低DNA双链的错配率。结论表达纯化的MutS蛋白在体外具有特异性识别、结合含有错配碱基DNA双链的生物活性,从而有助于合成生物学的发展。