四次甲基二砜四胺中毒所致顽固性癫痫对大鼠大脑皮质NMDA受体亚单位表达的影响

目的观察剧毒杀鼠剂四次甲基二砜四胺（tetramine,TET）所致顽固性癫痫（refractory epilepsy,RE）大鼠大脑皮质NMDA受体亚单位在染毒后不同时间的表达变化,研究NMDA受体亚单位表达与TET诱发癫痫及由此引发脑损伤的相关性。方法建立TET（0.4 mg/kg,ig）所致大鼠RE及脑损伤模型,采用实时荧光定量PCR及Western印迹技术,测定RE动物大脑皮质NMDA受体不同亚型在染毒后不同时间mRNA及蛋白水平的表达变化。结果大鼠TET染毒10～25 min后即出现RE,染毒后24 h,其大脑皮质出现明显病理学改变。NR2A的mRNA及蛋白表达水平在皮质出现病理学改变前即显著降低（P〈0.01）,至染毒后72 h,尚未恢复正常水平（P〈0.01）;NR2B蛋白水平的表达在病理学改变出现前未见显著性改变,至染毒后72 h,表达显著降低（P〈0.01）;但其mRNA水平在整个观测时间点未见显著性改变。结论 TET所致RE可诱发NMDA亚单位NR2A及NR2B表达下调,NR2A表达下调可能与RE发生及由此引发脑损伤的关系更为直接。     

丙泊酚对匹鲁卡品诱发癫痫持续状态大鼠海马NMDA受体2A、2B亚型表达的影响

目的建立可逆性胆碱酯酶抑制剂匹鲁卡品诱发大鼠癫痫持续状态(SE)模型,观察丙泊酚对SE大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚型(NR2A、NR2B)表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为6组(n=10):空白对照(BLK)组、SE组、丙泊酚50mg/kg(PPF)组、安定10mg/kg(DZP)组、东莨菪碱10mg/kg(SCOP)组及MK-801(2mg/kg)组。匹鲁卡品30mg/kg诱发SE模型,惊厥发作程度以Racine分级法判断,反复发作达到4～5级的大鼠纳入实验。待SE发作后30min,各实验组动物分别腹腔注射相应药物,而BLK组和SE组则注射等量生理盐水。24h后取各组大鼠大脑组织,采用免疫组化法检测SE大鼠海马NR2A、NR2B的表达情况。结果SE发作后24h,与BLK组相比,SE组大鼠海马NR2A、NR2B亚型的阳性表达量显著增加(P<0.05);与SE组相比,PPF组海马NR2B表达显著降低(P<0.05),而NR2A亚型表达无明显变化。与SE组相比,MK-801组皮层NR2A、NR2B亚型的表达显著降低(P<0.05),而DZP组、SCOP组的NR2A、NR2B亚型表达无统计学...     

成年大鼠弥漫性脑损伤后海马齿状回神经前体细胞增殖的Glu - iGlURs通路机制研究

 目的观察选择性iGluRs拮抗剂MK-801对弥漫性脑损伤后齿状回神经发生的调控作用,探讨Glu-iGluRs通路在神经发生中的角色.方法选用成年弥漫性脑损伤大鼠模型,采用BrdU标记分裂细胞及免疫组织化学方法,比较弥漫性脑损伤后2、4、6、8、12 d时MK-801干预弥漫性脑损伤组大鼠与相应对照组大鼠之间海马齿状回神经前体细胞的增殖速度.结果MK-801 1 mg/kg腹腔注射后,明显抑制了成年大鼠弥漫性脑损伤后4、6、8、12 d时齿状回神经前体细胞增殖,BrdU免疫阳性细胞数目较相应对照组明显减少(P＜0.01).结论弥漫性脑损伤后脑组织Glu-iGluRs通路的激活促进了海马齿状回神经发生,在这一过程中,NMDA受体介导的级联生物学事件可能发挥了重要作用.     

氯胺酮对强迫游泳大鼠海马谷氨酸、NR2A及NR2B的影响

目的 观察氯胺酮对强迫游泳大鼠海马组织中谷氨酸及N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚型NR2A、NR2B水平的影响.方法 雄性Wistar大鼠50只,随机均分为5组(n=10):对照组(C组)和不同剂量氯胺酮组(K1-K4组).强迫游泳15min建立大鼠抑郁模型,次日分别经腹腔注射氯胺酮2.5mg/kg(K1组)、5.0mg/kg(K2组)、10.0mg/kg(K3组)、20.0mg/kg(K4)或生理盐水1.0ml(C组),给药后30min再次强迫游泳5min,观察并记录不动时间.行为学测试后,取各组大鼠海马组织,采用ELISA法测定谷氨酸、NR2A及NR2B的含量.结果 与C组比较,K1-K4组强迫游泳不动时间减少,且与氯胺酮用量呈明显负相关(r=-0.913,P＜0.001);K1-K4组海马谷氨酸含量明显增高,NR2B含量明显减少(P＜0.01),而NR2A含量与C组比较无明显差异(P＞0.05).结论 氯胺酮具有显著的抗抑郁作用,可能与海马谷氨酸及NR2B的含量变化有关.     

多巴胺D_3受体拮抗剂Y-QA14抗精神分裂症作用的初步研究

目的研究多巴胺D3受体拮抗剂Y-QA14对精神分裂症的药理学作用。方法采用甲基苯丙胺（0.5mg/kg,i.p.）和MK-801（0.25mg/kg,i.p.）诱发高活动性、阿扑吗啡（2mg/kg,s.c.）诱发攀爬、5-羟色胺酸（5-HTP,150mg/kg,i.p.）诱发甩头等模型,评价Y-QA14潜在的抗精神分裂症作用。结果 Y-QA14（5,10,15mg/kg）本身影响小鼠自发活动不显著（P〉0.05）,但能抑制甲基苯丙胺（P〈0.01）和MK-801诱发的小鼠高活动性（P〈0.05）。Y-QA14（5,10,20mg/kg）抑制阿扑吗啡诱发的攀爬（P〈0.05）及5-HTP诱发的甩头（P〈0.001）。结论 Y-QA14对精神分裂症可能具有一定的治疗作用。     

丙泊酚对大鼠的空间学习记忆和海马NMDA受体NR2A亚基表达的影响

目的观察丙泊酚单次麻醉对成年大鼠空间学习记忆能力的影响以及海马NMDA受体NR2A亚基的变化。方法 30只SD大鼠随机分成丙泊酚组(n=15)和对照组(n=15)。给予丙泊酚50mg/kg腹腔注射作为诱导剂量,待翻正反应消失后在腹腔追加50mg/kg丙泊酚加深麻醉。对照组不予任何处理。待翻正反应恢复12h后应用Morris水迷宫评价丙泊酚对于大鼠空间学习记忆的影响。同时通过免疫荧光技术检测海马NMDA受体NR2A亚基的表达变化。结果丙泊酚组平均学习潜伏期较对照组显著缩短(P<0.05),靶象限活动时间百分比明显延长(P<0.05),丙泊酚组NMDA受体NR2A亚基的表达增加。结论丙泊酚单次麻醉后成年大鼠的空间学习记忆能力提高,这种学习记忆能力的提高可能和NMDA受体NR2A亚基的表达上调相关。     

MK-801对反复性脑缺血海马神经元损伤的保护作用

目的研究反复性脑缺血海马神经元的病理损害及其机制。方法应用^45Ca放射自显影及光镜对比观察大鼠单次性和反复性脑缺血及NMDA受体拮抗剂MK-801治疗后海马钙积聚和神经元损害的病理改变。结果反复缺血组海马异常钙积聚与迟发性神经元损害（DND）明显重于单次缺血组；MK-801显著减轻海马钙积聚与组织病理损害。结论兴奋毒机制在反复性脑缺血海马神经元损伤中起着重要作用。     

反复性脑缺血丘脑钙积聚与神经元损害

目的研究反复性脑缺血丘脑神经元的病理损害及其机制。方法 应用45Ca放射自显影及光镜对比研究大鼠单次性和反复性脑缺血及NMDA受体拮抗剂MK-801治疗后丘脑钙积聚和神经元损害的病理改变。结果 反复缺血组丘脑异常钙积聚与神经元损害明显重于单次缺血组;MK-801能显著减轻和改善丘脑钙积聚与组织病理损害。结论 反复非致死性短暂脑缺血导致丘脑腹侧神经元显著累积性损害,兴奋性氨基酸和Ca2+可能起着重要作用。     

NMDA受体NR1a与NR2A亚单位重组体在HEK-293细胞的功能表达

目的 :建立表达大鼠NMDA(N methyl D aspartate)受体NR1a与NR2A亚单位重组体的细胞模型 ,研究其生物学及药理学特性。方法 :利用脂质体转染方法将大鼠NR1a与NR2A亚单位重组体共转染到HEK 2 93细胞中 ,在细胞培养 4 8～ 72h后 ,利用膜片钳全细胞记录技术 ,观察和分析L 谷氨酸诱发的NMDA受体电流。结果 :向转染后的HEK 2 93细胞表面喷射NMDA受体激动剂L 谷氨酸可在 38%细胞上诱发出瞬时内向电流 ,该电流可被NMDA受体选择性拮抗剂D AP5 (5 0 μmol/L)完全阻断。L 谷氨酸诱发的电流具有快速失敏的动力学特征和内向整流特性 ,衰减时间常数 (τ值 )为 (5 3± 9)ms(n =2 0 )。L 谷氨酸诱发电流的EC50 值为 (8.5± 0 .5 ) μmol/L。 结论 :成功地将NR1a与NR2A亚单位转染入HEK 2 93细胞并形成NMDA受体的功能性表达 ,为进一步深入研究NMDA受体不同亚单位组成与其功能的关系及其药理学特性奠定了基础。     

前扣带回NMDA受体NR2A亚单位与睡眠剥夺模型大鼠外周疼痛感受阈值的关系

目的 观察睡眠剥夺(SD)模型大鼠外周疼痛感受阈值的改变及其中枢痛觉感受区域前扣带回兴奋性谷氨酸受体(NMDA)的表达变化.方法 80只雄性SD大鼠随机均分为4组:正常对照(Con)组,睡眠剥夺(SD)24h(SD24h)组,SD48h组及SD72h组.采用小平台水环境法制作睡眠剥夺大鼠模型,采用热敏测试仪测定各组大鼠足底热刺激缩足潜伏期以反映足部热痛阈值的变化.同时采用Western blotting和免疫荧光技术检测大鼠脑组织皮质前扣带回NR2A和NR2B蛋白的表达.结果 SD48h组及SD72h组大鼠热刺激缩足潜伏期分别为6.87±1.56s和5.18±1.15s,较对照组Con组(8.08±1.86s)有明显降低(P<0.05),而SD24h组(7.97±1.58s)与对照组无明显差异.Western blotting检测结果显示,SD48h、SD72h组大鼠脑组织ACC区域NR2A蛋白表达(0.52±0.12,0.57±0.13)较Con组(0.41±0.12)有明显上调(P<0.05),SD24h组(0.43±0.14)与对照组比较无显著性差异;而NR2B的蛋白在各组间的表达(SD24h组、SD48h组、SD72h组和Con组依次为0.68±0.19、0.76±0.18、0.74±0.16和0.74±0.19)的NR2B表达无显著差异.免疫荧光检测结果显示,与Con组(12.04±3.17)比较,SD48h组(15.19±3.56)及SD72h组(16.1±3.88)NR2A表达明显上调(P<0.01),SD24h组(12.59±2.79)无显著差异.NR2B蛋白在各组间的表达(SD24h组、SD48h组、SD72h组和Con组依次为32.51±7.45、34.1±6.78、33.59±5.85、33.04±8.57)无显著差异.结论 睡眠剥夺48h和72h后,大鼠足部痛阈下降,同时伴行脑皮质前扣带回区域NMDA受体NR2A亚单位的表达上调.     

MK-801对成年大鼠弥漫性脑损伤后海马齿状回神经发生的影响

通过观察选择性N 甲基 D 天门冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂MK 80 1对弥漫性脑损伤后齿状回神经发生的调控作用 ,探讨谷氨酸在神经发生中的作用。将 45只成年雄性SD大鼠制成弥漫性脑损伤模型 ,并随机分为MK 80 1干预组、生理盐水干预组和对照组(n =15 ) ,采用BrdU标记分裂细胞及免疫组织化学方法比较弥漫性脑损伤后 2、4、6、8、12天时大鼠海马齿状回神经前体细胞的增殖速度。结果显示 ,腹腔注射MK 80 1(1mg/kg)后明显抑制了成年大鼠弥漫性脑损伤后 4、6、8、12天时齿状回神经前体细胞的增殖 ,BrdU免疫阳性细胞数目较相应对照组明显减少 (P <0 0 1)。表明弥漫性脑损伤后脑组织NMDA受体的激活促进了海马齿状回神经发生 ,在这一过程中谷氨酸介导的级联生物学事件可能发挥了重要作用。     

系统性红斑狼疮患者CD154的表达与炎症、心肌损伤指标的关系研究

目的测定系统性红斑狼疮（SLE）合并心肌损伤患者外周血单个核细胞CD154的表达水平,并与C反应蛋白（CRP）、心肌损伤指标之间进行相关分析,探讨CD154与患者炎症状态、心肌损伤的关系。方法①32例2010年4—10月在我院门诊或住院治疗的SLE患者,男2例,女30例。②给予心脏彩超测定左房前后径（LAD）、室间隔厚度（IVST）、左心室前后径（LVDd）、左心室重量指数（LYMI）、左心室射血分数（LVEF）,心电图检查,免疫比浊法测定C反应蛋白（CRP）、全自动生化分析仪化学发光免疫分析法测定CK—MB、肌钙蛋白（cTnI）,分离外周血单个核细胞,采用流式细胞仪分析检测CD154的表达水平。③根据心脏彩超、心电图检查、CK—MBII、肌钙蛋白结果,将有心肌损伤指标阳性的患者分为A组（20例）,心肌损伤指标阴性的患者分为B组（12例）;20例健康志愿者为正常对照。④资料采用卡方检验,以Spearman相关法,即多元线性回归分析1个因变量和多个自变量之间的线性关系,P〈0．05为差异有统计学意义。结果①A组外周血单个核细胞CD154的表达水平为（29．1±10．8）％、CRP为（68．4±12．2）mg／L均明显高于B组（11．9±8．2）％、（36．9±11．5）meCL,P〈0．01;正常对照组外周血单个核细胞CD154的表达（5．9±2．2）％显著低于A、B组,P〈0．01。②A组CK-MBⅡ为（9．7±3．6n）ng／ml、cTnI为（0．43±0．21）n加nl、IVST为（11．8±3．2）mm、LVMI为（110．51±18．64）g／m^2显著高于B组CK—MBⅡ为（2．3±0．8）ng/ml、cTnI为（0．22±0．09）ng／ml、IVST（9．6±1．1）mm、LVMI（90．78±9．53）g／m2（P〈0．01）;A组LVDd（50．3±6．6）mm、LAD（32．4±5．4）mm、亦高于B组LVDd（46．4±3．1）mm、LAD（28．2±4．6）mm（P〈0．05）;A组LVEF（56．2±14．8）％显著低于B组LVEF（64．7±10．3）％（P〈0．01）。③患者外周血单个核细胞CD154的表达水平与CRP、CK—MBII、cTnI、LVDd、LVIMI、IVST、LAD呈正相关[γ=0．343,γ=0．315,γ=0．437,γ=0．364,γ=0．448（均P〈0．01）;γ=0．266,γ=0．216（均P〈0．05）];与LVEF呈负相关（γ=-0．346,P〈0．01）。结论SLE合并心肌损伤患者外周血单个核细胞CD154的表达水平,显著高于无心肌损伤患者,并与炎症、心肌损伤明显相关,提示CD154在SLE患者的心血管事件的发生发展中可能起到重要作用,可能会成为SLE患者心血管事件的重要预测指标,进一步研究可能会为SLE心肌损伤带来新的治疗方法。     

Dopamine D2/D3 receptor binding of [123I]epidepride in risperidone-treatment chronic MK-801-induced rat schizophrenia model using nanoSPECT/CT neuroimaging

IntroductionEpidepride is a compound with an affinity in picomolar range for D₂/D₃ receptors. The aim of this work was designed to investigate the diagnostic possibility of [¹²³I]epidepride imaging platform for risperidone-treatment chronic MK-801-induced rat schizophrenia model.MethodsRats received repeated administration of MK-801 (dissolved in saline, i.p., 0.3 mg/kg/day) or saline for 4 weeks. After 1-week administration of MK-801, rats in MK-801 + risperidone group received risperidone (0.5 mg/kg/day) intraperitoneally 15 min prior to MK-801 administration for the rest of 3-week treatment. We obtained serial [¹²³I]epidepride neuroimages from nanoSPECT/CT and evaluated the alteration of specific binding in striatum and midbrain.ResultsRisperidone reversed chronic MK-801-induced decrease in social interaction duration. IHC and ELISA analysis showed consistent results that chronic MK-801 treatment significantly decreased striatal and midbrain D₂R expression but repeated risperidone administration reversed the effect of MK-801 treatment. In addition, [¹²³I]epidepride nanoSPECT/CT neuroimaging revealed that low specific [¹²³I]epidepride binding ratios caused by MK-801 in striatum and midbrain were statistically alleviated after 1- and 2-week risperidone administration, respectively.ConclusionsWe established a rat schizophrenia model by chronic MK-801 administration for 4 weeks. [¹²³I]Epidepride nanoSPECT neuroimaging can trace the progressive alteration of D₂R expression in striatum and midbrain caused by long-lasting MK-801 treatment. Besides diagnosing illness stage of disease, [¹²³I]epidepride can be a useful tool to evaluate therapeutic effects of antipsychotic drug in chronic MK-801-induced rat schizophrenia model.     

Unilateral hypoxic-ischemic injury in the neonatal rat brain evaluated by in vivo MRI. Correlation with histopathology and neuroprotection by MK-801

RATIONALE AND OBJECTIVES: MRI was used for the in vivo evaluation of unilateral hypoxic-ischemic brain injury and the evaluation of MK-801 in the neonatal rat. METHODS: T2-weighted scans were obtained during the acute phase of HI injury and 3 months later. Histology was performed to correlate MRI signal changes with pathology. Finally, the effectiveness of MK-801 to limit brain injury was regionally assessed in vivo using T2-weighted MRI. RESULTS: Injury visualized by MRI at 72 hours after hypoxia correlated strongly with histopathologic analysis. Transient injury was identified. MK-801 significantly reduced the lesion extent at the level of the hippocampus. Patterns of unilateral versus bilateral neonatal brain injury were found to differ. CONCLUSIONS: The study demonstrates unique patterns of brain injury not seen in adult animal hypoxia-ischemia studies, and the sensitivity of the corpus callosum to hypoxia-ischemia. MK-801, although neuroprotective, did not offer any selective neuroprotective benefit.     

Role of NMDA receptor upon [14C]acetate uptake into intact rat brain

Objective  To clarify the role of N-methyl-d-aspartate (NMDA) receptors upon [¹⁴C]acetate uptake in the rodent central nervous system (CNS), ibotenic acid (IBO) was infused into the right striatum of the rat brain. Methods  Autoradiograms of [¹⁴C]acetate uptake in the brain for 2 h following the infusion of IBO (10 μg/μl) were obtained in both non-treated and MK-801 (1 mg/kg, i.v.) pretreated rats. The effect of MK-801 on [¹⁴C]acetate uptake in the normal rat brain was also studied. Results  Infusion of IBO significantly decreased [¹⁴C]acetate uptake in the infused side of the striatum. The expression of monocarboxylate transporter-1 was not altered, suggesting that the activity of tricarboxylic acid (TCA) cycle in glial cells might be depressed. Pretreatment with MK-801 completely blocked the decreasing effect of IBO on [¹⁴C]acetate uptake. MK-801 also increased [¹⁴C]acetate uptake in the whole brain of normal rats. Conclusions  These results indicate the important roles of NMDA receptors on [¹⁴C]acetate uptake in the intact rat brain.     

神经节苷脂联合康复干预治疗高危儿脑损伤的临床研究

目的 探讨神经节苷脂联合康复干预对高危儿脑损伤临床治疗效果.方法 采用多组对照比较法,将160例高危儿脑损伤病例,按入院先后顺序分为对照组（A组）、康复干预组（B组）、神经节苷脂组（C组）、神经节苷脂联合康复干预组（D组）,每组40例.4组均给予神经内科基础护理,A组不作其他处理;B组再给予康复干预治疗;C组再服用神经节苷脂20 mg/d,连服10 d;D组再给予B、C两组的联合治疗.对各组的临床疗效进行比较分析,并探讨年龄对治疗效果的影响.结果 A、B、C、D组总有效率分别为5%、47.5%、50%、90%,D组与其余3组比较均有显著差异（P＜0.05）,B、C组间无显著差异（P＞0.05）,但显著高于A组（P＜0.05）.患儿年龄与治疗有效率具有负相关性,年龄越小,治疗有效率越高.结论 神经节苷脂联合康复干预对高危儿脑损伤治疗效果明显,具有很好的临床应用前景.     

高压氧、山莨菪碱和地塞米松对高原冲击伤大鼠的治疗作用

目的探讨高压氧、山莨菪碱和地塞米松对高原冲击伤的治疗作用。方法 SD大鼠清醒状态下置于高原冲击伤实验平台内,减压至海拔3500m维持6h,然后用BST-Ⅰ型生物激波管致伤,冲击波超压峰值为(343.5±4.176)kPa,伤后按下述分组处理:A组为对照组,不给予任何处理,B、C、D为处理组,分别于伤后0.5h和3h给予高压氧(2个标准大气压)、山莨菪碱(1mg/kg)和地塞米松(1mg/kg)、高压氧与山莨菪碱和地塞米松联合应用处理。观察大鼠伤后6h的死亡率、动脉血气变化和肺形态学改变。结果 A、B、C、D组的死亡率分别为40.7%、17.4%、24.0%和14.3%,D组与A组比较差异显著(P<0.05);PaO2分别平均为(65.250±11.311)、(82.286±5.908)、(72.625±11.783)和(85.125±7.322)mmHg,B组、D组与A组比较P<0.01;SaO2分别平均为(90.5±4.840)%、(95.429±1.339)%、(93.625±2.925)%和(95.750±0.661)%,B组、D组与A组比较P<0.01,C组与A组比较P<0.05;肺出血和肺水肿程度,B组、D组与A组比较有所减轻,C组与A组比较有所加重。结论高压氧、山莨菪碱和地塞米松及高压氧与山莨菪碱和地塞米松联合应用对高原冲击伤大鼠的治疗有效,其中以高压氧与山莨菪碱和地塞米松联合应用效果更好。