毒死蜱致大鼠空间记忆损伤及ERK/CREB信号途径抑制

目的探讨有机磷杀虫剂毒死蜱(chlorpyrifos,CPF)长期染毒对大鼠空间记忆的影响及其可能机制。方法选择不引起大鼠出现全身系统毒性的CPF剂量(1,5,10 mg/kg)对大鼠连续染毒12周,利用Morris水迷宫评价大鼠的空间记忆功能,利用Western印迹检测CREB信号通路的蛋白表达。结果 CPF染毒大鼠到达平台的潜伏期呈剂量依赖性增加;随着染毒剂量的增加,大鼠海马CREB及ERKⅠ/Ⅱ磷酸化蛋白逐渐减少,而CaMKⅡ磷酸化蛋白、PKA蛋白表达没有明显改变。结论 CPF长期染毒能够诱发大鼠空间记忆的损伤,ERK/CREB信号通路的抑制可能是参与该变化的重要信号途径。     

脱氧佛波醇乙酸酯通过激活PKC/ERK通路诱导急性髓系白血病细胞分化

目的研究脱氧佛波醇乙酸酯（12-deoxyphorbol 13-acetate,Prostratin,DPA）对人急性髓系白血病（AML）细胞株HL-60、NB4和U937细胞分化的影响,并证明其通过激活蛋白激酶C/胞外信号调节激酶（PKC/ERK）通路诱导细胞分化。方法 1μmol/L DPA作用HL-60细胞3 d后观察细胞形态的改变;不同剂量的DPA作用HL-60、NB4、U937细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞分化表面标志变化;Western印迹检测ERK蛋白磷酸化的改变;流式细胞仪检测丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）抑制剂和PKC抑制剂对细胞分化表面标志的影响;Western印迹检测MEK抑制剂和PKC抑制剂对ERK蛋白磷酸化的影响。结果 DPA可诱导HL-60细胞出现白血病细胞分化的形态。DPA剂量依赖性地诱导AML细胞CD11b表达。DPA在诱导分化剂量范围内可剂量依赖性地引起ERK磷酸化。MEK化学小分子抑制剂U0126可完全抑制DPA引起的ERK磷酸化和CD11b表达;PKC非选择性抑制剂GFX可完全抑制DPA引起的ERK磷酸化和CD11b表达。结论 DPA其通过激活PKC/ERK通路能够明显诱导白血病细胞分化。     

弥漫性脑损伤细胞外信号调节激酶1/2信号通路的激活及意义

目的探讨弥漫性脑损伤（DBI）时细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）信号通路激活特点及特异性阻滞剂U0126对损伤神经元的作用。方法制作大鼠DBI模型，Western blot法检测损伤脑组织磷酸化ERK1／2的表达，免疫组化法检测磷酸化ERK1／2、神经元特异性磷酸烯醇化酶（NSE）表达，透射电镜下观察U0126对损伤神经元的作用。结果DBI后磷酸化ERK1／2表达显著增高，持续高水平表达至72h。U0126剂量依赖性抑制磷酸化ERK1／2表达。U0126组12～24h时相点NSE较DBI组明显增高。透射电镜显示U0126组神经元损伤较轻。结论大鼠DBI后ERK1／2通路被过度和持久激活，阻滞其过度激活可减轻继发性神经元损伤。     

miR-34 a通过ERK1／2通路部分逆转CEES染毒对角质形成细胞迁移的抑制

目的：研究半硫芥（2-氯乙基乙基硫醚,2-chloroethyl ethyl sulfide ,CEES）染毒对角质形成细胞迁移的影响以及miR-34a作用机制。方法体外建立CEES染毒HaCaT细胞模型,采用化学合成miR-34a抑制物转染HaCaT细胞沉默miR-34a,荧光显微镜观察细胞转染效率,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western 印迹检测细胞分化标志物K5和K10、ERK1／2总蛋白及磷酸化水平改变。结果采用0．5 mmol／L CEES染毒后HaCaT细胞迁移显著降低。细胞形态、干性标志物K5和分化标志物K10没有明显变化。 miR-34 a沉默可以增加细胞迁移能力,迁移相关的信号蛋白ERK1／2通路激活,ERK1／2信号通路抑制剂U0126使用后可以显著降低细胞迁移。结论 miR-34 a沉默可以显著增加角质形成细胞迁移,并部分逆转CEES的抑制作用,miR-34a沉默可能部分是通过ERK1／2信号通路激活引起染毒细胞迁移增加。     

回转模拟失重对心肌成纤维细胞生长因子及ERK信号传导的影响

目的研究回转模拟失重条件下,心肌成纤维细胞中某些生长因子表达与分泌的变化,以及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路的活化状态.方法通过新生大鼠原代培养获取心肌成纤维细胞,利用水平回转器模拟失重效应,对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子β1(TGFβ1)的表达进行蛋白质印迹(western blotting)分析,以放射免疫检测方法测定细胞培养上清液中血管紧张素II(Ang II)浓度的变化;利用western blotting对ERK1/2及磷酸化ERK1/2分别进行检测并分析其活化状态. 结果与对照组比较,回转后心肌成纤维细胞的bFGF表达增加,TGFβ1表达没有明显变化,Ang II分泌增加;ERK1/2表达总量增加,但其磷酸化水平下降.结论不同的生长因子对回转模拟失重有不同的响应;作为生长因子的重要下游信号通路,ERK1/2的活化受到抑制.     

CREB1蛋白在大鼠急、慢性吗啡依赖和戒断中的表达变化

目的 研究急、慢性吗啡依赖和戒断对大鼠脑组织cAMP反应元件结合蛋白（CREB1）的表达调节作用。方法 雄性SD大鼠36只，随机分为急性对照组、急性吗啡依赖组、急性吗啡戒断组、慢性对照组、慢性吗啡依赖组、慢性吗啡戒断组，每组6只。采用免疫组化方法测定不同脑区和核团CREB1蛋白表达水平。结果 急性吗啡依赖和戒断抑制蓝斑CREB1蛋白表达。慢性吗啡依赖和戒断增加皮质、海马、蓝斑等脑区核团CREB1蛋白的表达，但是在慢性吗啡依赖和戒断时，伏隔核CREB1蛋白表达下降。结论 急、慢性吗啡依赖和戒断时CREB1在大鼠皮质、海马、下丘脑、蓝斑、伏隔核等脑区的表达存在差异，可能与介导阿片类药物依赖信号转道通路的反应性不同有关。     

血管生成素通过ERK信号通路促进HeLa细胞的增殖

目的通过细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路及NF-кB信号途径探讨血管生成素(angiogenin,Ang)对HeLa细胞的促增殖及抗凋亡作用机制。方法用不同浓度的重组人Ang刺激HeLa细胞,MTT法分析Ang对HeLa细胞的促增殖作用,蛋白质印迹实验检测ERK信号通路相关分子的表达情况。U0126抑制ERK信号通路,检测Ang诱导的ERK1/2的磷酸化及c-myc的表达情况,同时检测Ang对细胞增殖的影响。敲低Ang的表达,检测细胞的凋亡情况。双荧光素酶报告基因检测Ang对NF-κB报告基因的激活。蛋白水平检测Ang刺激的HeLa细胞后,NF-κB通路相关分子的表达。结果 Ang能促进HeLa细胞增殖,ERK1/2的磷酸化水平及c-myc的表达随重组人Ang浓度的升高而增加。U0126能抑制Ang诱导的ERK1/2的磷酸化、c-myc的上调及细胞的增殖。Ang的低表达促进HeLa细胞的凋亡,但不影响NF-κB报告基因的激活及NF-κB通路上相关分子的表达。结论 Ang能够促进HeLa细胞增殖,并通过活化ERK通路促进细胞的增殖,但其抑凋亡作用与NF-κB通路无关。     

阿魏酸钠对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡作用的影响

目的探讨MEK/ERK信号转导通路是否参与了阿魏酸钠（SF）对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡作用。方法以谷氨酸诱导大鼠皮层神经元凋亡为模型。采用Westernblot观察Bcl-2、caspase-3、磷酸化ERK1/2表达的改变。结果阿魏酸钠能够显著降低谷氨酸诱导的神经细胞caspase-3的表达,提高Bcl-2、磷酸化ERK1/2的表达。PD98059可以减弱SF的保护作用。结论 MEK/ERK1/2通路参与阿魏酸钠对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡。     

创伤后单核巨噬细胞集落刺激因子调控新生血管化的分子机制

目的 观察创伤愈合过程中单核巨噬细胞集落刺激因子(granuiocyte/macrophage colony - stimulating factor,GMCSF)经ERK通路活化核因子(nuclear factor,NF) - Κb诱导创伤后人皮肤成纤维细胞（human dermal fibroblasts,HDFs）生成血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),并探讨相关机制。方法 分离培养创伤部位HDFs,并用GMCSF处理。作用不同时间后,采用RT - PCR和ELISA分别检测HDFs VEGF Mrna和蛋白水平;应用GMCSF作用HDFs后,采用Western blot观察ERK磷酸化水平的改变;进一步应用ERK通路特异性抑制剂PD98059预处理HDFs。再用GMCSF刺激已预处理过的细胞,收集细胞和上清液,采用Western blot检测VEGF蛋白水平的变化;进一步通过抑制ERK信号通路,采用免疫荧光检测NF - Κb的活化。另外,应用核质抽提试剂盒分离胞质和胞核,采用Western blot检测NF - Κb的活化。结果 随着GMCSF浓度的增加,VEGF Mrna及蛋白水平也逐步增加,呈一定的剂量依赖性;GMCSF作用于HDFs 2 h后,VEGF Mrna水平开始升高,至4～6h达到峰值。GMCSF能够显著活化ERK磷酸化过程;与GMCSF组相比,ERK信号通路特异性抑制剂PD98059能显著抑制GMCSF诱导VEGF的表达(P＜0.05)。免疫荧光和Western blot结果显示,抑制ERK后NF - Κb的活化受到显著抑制。结论 GMCSF可通过ERK信号通路活化NF - Κb从而诱导HDFsVEGF的表达。     

咖啡酸苯乙酯靶向调控人结肠癌HT-29细胞FAK-ERK信号通路的研究

目的探讨咖啡酸苯乙酯（caffeic acid phenethyl ester,CAPE）对结肠癌HT-29细胞FAK-ERK信号转导通路中相关蛋白表达的作用,寻找其作用靶点,试图阐明CAPE抗肿瘤作用的分子机制。方法用不同浓度CAPE处理HT-29细胞,利用Hoechst33258染色法和流式细胞术,检测细胞凋亡的发生。应用Western印迹法分析不同浓度CAPE对HT-29细胞中黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）和细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulatedkinase,ERK）蛋白表达的影响。结果 Hoechst33258染色发现CAPE作用后凋亡细胞数量增加。流式细胞仪细胞凋亡率分析显示,0,2.55,.0,7.5和10μg/ml处理HT-29细胞24 h后,细胞凋亡率上升,呈剂量依赖性。Western印迹结果显示,在0～10μg/ml范围内不同浓度CAPE作用于HT-29细胞24 h后,FAK、ERK蛋白表达随CAPE浓度的增加而下调。结论 CAPE可诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡,其作用机制可能与CAPE抑制FAK-ERK信号转导通路的激活有关。     

α-硫辛酸对糖尿病大鼠认知能力的影响

目的检测α-硫辛酸对糖尿病大鼠认知能力的影响情况,探讨α-硫辛酸对糖尿病大鼠学习与记忆影响的机制。方法Wistar大鼠共30只,随机分成3组,对照组10只,治疗组10只,糖尿病组10只。糖尿病大鼠模型用链佐菌素（STZ）制模。12周后,Morris水迷宫测试其学习记忆能力,western blotting检测各组NF—kB蛋白水平表达,TUNEL法检测大鼠海马神经元凋亡情况。结果糖尿病组大鼠学习成绩降低（P〈0．05）,TUNEL阳性细胞增多（P〈0．05）,NF-kB蛋白水平表达增加（P〈0．05）,甜硫辛酸治疗组大鼠较糖尿病组学习成绩升高（P〈0．05）,TUNEL阳性细胞减少（P〈0．05）,NF-kB蛋白水平表达减少（P〈0．05）。结论NF-kB蛋白的表达增高可能与糖尿病大鼠海马神经元凋亡及认知功能障碍有关。α-硫辛酸可能通过降低NF-kB的表达,从而对糖尿病大鼠学习与记忆障碍有一定程度的改善。     

急进高原致大鼠空间记忆能力障碍的研究

目的：探讨急进高原对于大鼠空间记忆能力的影响。方法：48只SD大鼠随机分为3组：平原组（对照组）、急进海拔4000m组（4km组）、急进海拔6000m组（6km组）。根据大鼠Morris水迷宫定位导航训练在急进高原饲养之前和之后,将实验分为两部分（每部分实验使用不同的大鼠）,统计分析各实验组大鼠逃避潜伏期、游泳总路程、60s内穿越平台次数和目标象限滞留时间,并分别与对照组进行比较。结果：当大鼠Morris水迷宫定位导航训练在急进高原饲养之前时,急进高原饲养后,6km组大鼠较对照组60s内穿越平台次数显著减少（P〈0.05）,目标象限滞留时间显著缩短（P〈0.01）。当大鼠Morris水迷宫定位导航训练在急进高原饲养之后时,6km组大鼠较对照组第7天平均逃避潜伏期和平均游泳总路程显著缩短（P〈0.01、P〈0.05）;空间探索测试中,6km组大鼠较对照组60s内穿越平台次数显著减少（P〈0.05）,目标象限滞留时间显著缩短（P〈0.01）。结论：急进海拔6000m以上将导致大鼠空间记忆能力障碍。     

Reduction of vesicular acetylcholine transporter in beta-amyloid protein-infused rats with memory impairment

The aim of this study was to investigate spatial memory and quantitative acetylcholine transporter autoradiography using a high-sensitivity imaging plate system in rats treated with beta-amyloid protein, a model of Alzheimer's disease. An eight-arm radial maze was used to evaluate spatial memory. The performance of the eight-arm radial maze task was impaired in beta-amyloid protein-treated rats. In the parietal cortex, [3H]-vesamicol binding to the vesicular acetylcholine transporter was significantly lower in beta-amyloid protein-treated rats than in vehicle-treated rats, and was significantly correlated with the mean number of correct selections in the maze task of the first 5 days in the post-operative state. These results indicate that the reduction in [3H]-vesamicol binding to vesicular acetylcholine transporter is related to memory impairment induced by beta-amyloid protein. Beta-amyloid protein-infused rats with spatial memory impairment may be useful for the development of new radiolabelled vesamicol analogues for the objective evaluation of Alzheimer's disease.     

海马区c-fos基因表达在大鼠脑创伤后认知功能障碍中的作用

目的 探讨大鼠脑创伤后海马区c-fos基因表达及对学习记忆功能的影响.方法 建立Marmarou大鼠脑创伤模型,采用分子原位杂交技术和Morris水迷宫分别观察大鼠伤后海马区c-fos基因表达变化及空间学习记忆能力的改变. 结果 伤后30 min海马区神经元即出现c-fos mRNA的表达,1～3 h达高峰,伤后24 h表达基本消失;Morris水迷宫实验,大鼠伤后存在空间学习记忆功能障碍.结论 脑创伤可引起c-fos基因在海马区的表达上调,通过介导延迟性神经元细胞死亡,影响细胞间的信息传递,参与认知功能的损害.     

二甲双胍改善高脂饮食诱导的大鼠学习记忆障碍

目的探讨二甲双胍（metformin,MET）对高脂饮食诱导的大鼠学习记忆障碍的影响。方法30只sD大鼠,随机分为普通饲料饲养组（Control组）和2个高脂饲料饲养组（highfatdiet,HFD）,共4周,后2组中又分为仅用HFD组及HFD＋MET组。MET浓度为2ms／ml,连续给药4周后尾尖取血检测大鼠空腹血糖及糖耐量,并测定大鼠焦虑样行为和学习记忆的变化,方法包括高架十字迷宫实验、敞箱实验、水迷宫实验、被动回避实验。结果HFD导致大鼠糖耐量降低,而MET处理可以改善大鼠糖耐量;HFD与HFD＋MET处理不影响大鼠的自主活动性,也不诱导大鼠出现焦虑样症状;在水迷宫实验的探索阶段,相对于HFD组,MET＋MET组大鼠穿越平台次数显著增加,第1次到达平台时间缩短,在目标象限探索时间缩短;在被动回避实验中,其逃避潜伏期较HFD组显著延长,进入暗箱次数减少。结论MET对高脂饮食诱导的学习记忆障碍有一定的改善作用。     

针刺对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力及SOD、MDA的影响

目的研究针刺四关、足三里穴对D-半乳糖和亚硝酸钠致阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）模型大鼠学习记忆能力及超氧化物歧化酶（super oxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）的影响。方法选取SD级雄性大鼠40只,随机分为模型组、对照组、针刺组和空白组各10只。空白组不给予治疗造模,其余各组每天腹腔注射D-半乳糖（120 mg/kg）和亚硝酸钠（90 mg/kg）造模,连续注射6周。造模21 d后针刺组予针刺四关、足三里穴干预治疗,对照组给予盐酸多奈哌齐混悬液（0.45 mg/kg）灌胃治疗。3个疗程后,采用Morris水迷宫测试四组大鼠的学习记忆能力,通过ELISA检测脑组织SOD、MDA的活性。结果治疗后,针刺组和对照组与模型组大鼠比较平均逃避潜伏的时间减少（P〈0.01）;大鼠的穿环次数提高（P〈0.05）;针刺组SOD活性为（86.23±2.54）U/mg和对照组脑组织SOD的活性（85.70±4.02）U/mg显著高于模型组（64.97±4.27）U/mg（P〈0.01）,MDA含量低于模型组（P〈0.01）。结论针刺四关穴、足三里穴可改善大鼠的学习记忆能力,提高SOD活性,减少MDA含量,具有抗氧化,保护神经细胞的作用,从而延缓衰老的发生。     

在慢性应激小鼠模型上评价胍丁胺的抗抑郁作用及机制

目的在小鼠慢性应激抑郁动物模型上评价胍丁胺的抗抑郁作用及其作用机制。方法以慢性应激抑郁模型检测胍丁胺的抗抑郁活性，以western blot方法检测脑源性神经营养因子（brain—derived neurotrophic factor，BDNF）、细胞外信号调节激酶（extracellular signal—regulated kinase，ERK）、cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element—binding protein，CREB）的表达。结果慢性应激导致小鼠探究行为和自发活动减少，表现为测定时间内的活动总路程和活动时间明显减少，新奇抑制摄食潜伏期延长，伴随给予胍丁胺（10、20mg·kg^-1，灌胃）和阳性对照药丙咪嗪（10mg·kg^-1，灌胃）均能够逆转这种改变。同时慢性应激导致海马BDNF、pERK、pCREB表达下调，伴随给予胍丁胺或丙咪嗪可逆转之。结论胍丁胺在慢性应激小鼠抑郁模型上具有抗抑郁作用，此作用与上调海马BDNF及其上、下游信号通路相关激酶，即神经营养通路密切相关。     

运动对出生后多次异氟烷处理不同性别大鼠空间认知功能的影响及其分子学机制

目的 探讨运动对出生后多次异氟烷处理不同性别大鼠空间认知功能的影响及其分子学机制。方法 出生后7 d SD大鼠110只,按随机数字表法将大鼠分为正常对照组(n=28)、运动组(n=30)、异氟烷组(n=26)和异氟烷运动组(n=26)。新生大鼠和母鼠单笼饲养,21 d后按雌雄分笼。异氟烷组和异氟烷运动组在生后7、9、11 d进行异氟烷处理。运动组和异氟烷运动组从21 d开始进行规律运动。规律运动6周后,测试雌雄大鼠在八臂迷宮、Morris水迷宫中的表现,随后取大鼠海马组织行免疫组织化学染色及Western Blot分析,测定脑源性神经营养因子(BDNF),Ki-67的阳性表达。结果 各组大鼠在八臂迷宫训练阶段,各组大鼠的总耗时随训练次数增多呈下降趋势,且差异具有统计学意义(P<0.05);组间比较发现：与正常对照组相比,异氟烷组训练次数与总耗时降低趋势的稳定性较差;与非运动组相比,运动两组的下降趋势稳定,总耗时逐渐减少。在八臂迷宫测试阶段,与正常对照组相比,异氟烷组大鼠的参考记忆错误次数增多,总耗时延长,以雌鼠更为明显,差异具有统计学意义(P<0.05);与非运动组雄鼠相比...     

银杏内酯 B 对急进高原致大鼠空间记忆障碍的保护作用

目的探索银杏内酯B对大鼠急性低压低氧所致大脑空间记忆形成与保持能力的影响。方法80只SD大鼠随机分为5组：平原组（对照组,n=16）、急进海拔6000m组（6000m组,n=16）、急进海拔6000In不同剂量银杏内酯B给药组（6000m＋3、6、12mg·kg^-1组,每组n=16）。实验分为两部分,实验Ⅰ：大鼠急进高原损伤在Morris水迷宫定位导航实验与空间探索实验之间,实验Ⅱ：大鼠急进高原损伤之后进行Morris水迷宫定位导航实验和空间探索实验。两部分实验使用不同的大鼠,统计分析各实验组大鼠逃避潜伏期、游泳总路程、60S内穿越平台次数和目标象限滞留时间。结果实验Ⅰ中,预先给予6、12mg·kg^-1银杏内酯B组大鼠较6000m组60s内穿越平台次数显著增多（P〈0．05）,目标象限滞留时间显著增长（P〈0．05、P〈0．01）,而给予3mg·kg^-1剂量组较6000m组无显著性差异（P〉0．05）。实验Ⅱ中,预先给予6、12mg·kg^-1银杏内酯B组大鼠较6000m组第7天平均逃避潜伏期显著缩短（P〈0．05、P〈0．01）,平均游泳总路程显著缩短（P〈0．05、P〈0．01）,60s内穿越平台次数显著增多（P〈0．05、P〈0．01）,目标象限滞留时间显著增长（P〈0．05）,而给予3mg·kg^-1剂量组较6000m组无显著性差异（P〉0．05）。结论银杏内酯B可有效改善急进高原大鼠空间记忆的形成与保持能力。     

多奈哌齐与维拉帕米对大鼠阿尔茨海默病的干预研究

目的探讨多奈哌齐与维拉帕米对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力、脑组织一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)浓度的影响。方法 SAD大鼠40只,随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐组和联合用药组。采用5μl Aβ1-40(2μg/μl)右侧海马区立体定向微量注射法制备大鼠AD模型,通过Morris水迷宫和三筒互通脑功能仪检测大鼠学习记忆变化,采用生化方分光光度法检测大鼠海马及大脑皮层中NO、NOS的含量。用多奈哌齐与维拉帕米以灌胃方法对模型大鼠进行干预,观察其实验效果。结果模型组较假手术组学习记忆能力显著降低,海马及大脑皮层NO、NBOS含量显著升高;多奈哌齐组和联合用药组较模型组学习记忆能力有所升高(P<0.05),海马及大脑皮层NO含量及NOS活性均有所降低(P<0.05)。其中联合用药组有些指标与模型组有差异显著(P<0.01)。结论用Aβ1-40右侧海马区立体定向微量注射法可建立AD动物模型,多奈哌齐与维拉帕米可改善AD模型大鼠的学习记忆,降低海马及大脑皮质NO和NOS含量,并且两药联合使用效果显著。