异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移及JAK2/STAT3通路的影响

 目的 探讨异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移及Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)通路的影响。方法 采用MTT法测定不同浓度的异丙酚对胶质瘤U87细胞和人正常星型胶质细胞HEB生长抑制作用,Transwell侵袭实验测定2、5、10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞体外侵袭能力的影响,划痕实验测定2、5、10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞体外迁移能力的影响,蛋白印迹法(WB)测定10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞JAK2/STAT3通路的影响。结果 与对照组相比,5、10、25、50、100 μM异丙酚均能显著抑制胶质瘤U87细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05),后续选择2、5、10 μM异丙酚进行实验。与对照组相比,胶质瘤U87细胞经2、5、10 μM异丙酚处理后,侵袭能力显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验说明,胶质瘤U87细胞经2、5、10 μM异丙酚处理48 h后,迁移能力分别降低了(19.69±2.67)%、(41.41±3.28)%、(59.75±2.91)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。且胶质瘤U87细胞中JAK2蛋白磷酸化水平、STAT3蛋白磷酸化水平明显下调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 异丙酚可能通过下调JAK2/STAT3信号传导通路相关蛋白表达,抑制胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移能力。     

腹腔镜与开腹胃癌手术腹腔冲洗液中IL-1β浓度的变化及其对腹膜间皮细胞与胃癌细胞黏附的影响

目的比较腹腔镜与开腹胃癌手术腹腔冲洗液中白介素1β(IL-1β)浓度的变化,并于体外观察其对腹膜间皮细胞与胃腺癌细胞AGS、SGC-7901黏附的影响,初步探讨腹腔镜胃癌手术对腹膜种植转移的影响。方法将39例胃癌手术患者分为开腹组(n=19)及腹腔镜组(n=20),均行远端胃癌根治术。于术前及术后24、48h分三次采集腹腔冲洗液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测腹腔冲洗液中IL-1β的浓度。同时以体外原代培养腹膜间皮细胞为实验对象,观察不同浓度IL-1β对腹膜间皮细胞与胃腺癌细胞黏附的影响。结果两组患者术后24、48h腹腔冲洗液中IL-1β水平较术前均升高,且开腹组高于腹腔镜组,差异有统计学意义(P<0.05)。在0～10ng/ml随IL-1β处理浓度的增加,人腹膜间皮细胞与胃癌细胞的黏附率逐渐升高,与未处理组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论IL-1β可特异性地增强腹膜间皮细胞的黏附能力,并促进其与胃癌细胞黏附。与传统开腹手术比较,腹腔镜胃癌手术对腹腔内免疫功能影响小,其微创优势可能在减少创伤性炎症因子介导的肿瘤腹膜转移中发挥作用。     

METTL3对肝内胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨m6A甲基转化酶样蛋白3(METTL3)对肝内胆管癌细胞系QBC939和RBE细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,以及可能的分子机制.方法 通过嘌呤霉素筛选的方法将携带METTL3基因的重组质粒转染肝内胆管癌细胞系QBC939和RBE,得到稳定过表达METTL3的肝内胆管癌细胞系;采用小干扰RNA(siRNA)瞬时敲低肝内胆管癌细胞系中的METTL3;采用Western印迹检测肝内胆管癌细胞系中METTL3蛋白的表达水平,验证过表达和敲低METTL3的效果;采用细胞增殖实验(CCK-8法)检测METTL3对肝内胆管癌细胞系增殖能力的影响,Transwell法验证METTL3对肝内胆管癌细胞系迁移和侵袭能力;采用Western印迹检测过表达或敲低METTL3后p-ERK蛋白的表达水平,Log-rank检验比较METTL3高表达组和低表达组胆管癌患者的生存期差异.结果 过表达METTL3可显著促进QBC939和RBE细胞的增殖、迁移及侵袭能力,而敲低METTL3显著抑制QBC939和RBE细胞的增殖、迁移及侵袭能力.过表达METTL3促进磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)的蛋白表达水平,而敲低METTL3则抑制p-ERK的蛋白表达水平.METTL3在肝内胆管癌组织中上调表达,且其高表达与胆管癌患者的不良预后可能相关.结论 METTL3通过促进肝内胆管癌细胞系的增殖、迁移及侵袭能力而发挥癌基因的功能.     

安罗替尼对人肾癌细胞ACHN增殖和迁移的抑制作用

目的 观察安罗替尼(anlotinib)对人肾癌细胞增殖和迁移能力的影响,探讨其抑制肾癌细胞生长、迁移能力的机制,以及在肾癌治疗领域的临床应用前景.方法 体外培养肾癌ACHN细胞,采用不同浓度(0、1.25、2.5、5和10 μmol/L)的安罗替尼处理ACHN细胞24、48和72h,MTT法检测安罗替尼对ACHN细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度(IC50);划痕修复实验检测安罗替尼对ACHN细胞迁移能力的作用,计算迁移率;克隆形成实验检测细胞贴壁后细胞的成活能力,计算克隆数目;Western印迹法检测安罗替尼对PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达和活性的影响,用灰度分析方法计算其灰度值.结果 安罗替尼能显著抑制ACHN细胞增殖,具有明显的浓度依赖性;与对照组相比,安罗替尼处理后,能明显抑制ACHN细胞的克隆形成、迁移和信号通路相关蛋白的活化(P＜0.05).结论 安罗替尼能显著抑制人肾癌ACHN细胞的增殖、克隆形成和迁移能力,其机制与PI3K信号通路的抑制相关.     

核因子E2相关因子2基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和转移的影响

 目的 探讨核因子E2相关因子2(NRF2)基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和转移的影响及其机制。方法 采用RT- PCR检测人前列腺上皮细胞株RWPE-1和前列腺癌细胞株PC-3中NRF2 mRNA的表达。采用脂质体转染法将NRF2 siRNA-1、NRF2 siRNA-2和NRF2 siRNA-3干扰序列转染至PC-3细胞后,Western blot和RT-PCR检测转染效果,并筛选出干扰效果最好的NRF2 siRNA序列。将体外培养的PC-3细胞分为Con组(未转染)、NC组(转染阴性对照)和NRF2 siRNA组(转染NRF2 siRNA-3),采用CCK-8法、平板克隆实验和Transwell实验分别检测各组细胞的增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力,Western blot检测各组细胞中细胞核增殖相关抗原(Ki67)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、N-钙黏附素(N-cadherin)蛋白的表达。结果 与前列腺上皮细胞株RWPE-1相比,前列腺癌细胞株PC-3中NRF2 mRNA的表达水平明显升高(0.84±0.05 vs 0.22±0.03,P<0.05)。NRF2 siRNA-1、NRF2 siRNA-2和NRF2 siRNA-3干扰序列均能够明显下调PC-3细胞中NRF2蛋白(0.56±0.04,0.39±0.03,0.11±0.02 vs 0.76±0.07)和mRNA(0.80±0.05,0.52±0.03,0.26±0.03 vs 1.00±0.05)的表达,且NRF2 siRNA-3的干扰效果明显大于NRF2 siRNA-1和NRF2 siRNA-2。与Con组相比,NRF2 siRNA组细胞的增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力[存活率:24 h (82.05±5.24)% vs (99.86±5.05)%,48 h (64.57±4.85)% vs (97.28±6.36)%,72 h (45.62±3.76)% vs (94.57±5.49)%;克隆形成率:(39.35±3.26)% vs (66.52±4.85)%;侵袭细胞数:42.00±5.50 vs 85.00±7.50;迁移细胞数:58.00±3.00 vs 118.50±8.00]均明显减弱,同时Ki67、CyclinD1、MMP-9和N-cadherin蛋白的表达(Ki67:0.25±0.03 vs 0.78±0.05;CyclinD1 0.41±0.03 vs 0.85±0.06;MMP-9:0.10±0.02 vs 0.89±0.07;N-cadherin:0.22±0.02 vs 0.49±0.04)均明显降低(P<0.05);而NC组与Con组间无统计学差异(P>0.05)。结论 NRF2基因沉默可抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和转移,其分子机制可能与下调Ki67、CyclinD1、MMP-9和N-cadherin蛋白的表达有关。     

酪氨酸代谢物对肺癌细胞增殖、周期及化疗药物敏感性的影响

目的 探讨4种酪氨酸代谢物对肺癌细胞增殖、周期及化疗药物敏感性的影响.方法 不同浓度的酪氨酸代谢物——酪氨酸、4-羟苯丙酮酸(HPPA)、尿黑酸(HGA)、延胡索酸(FA)分别处理A549细胞,通过高内涵实时监测肺癌细胞的增殖,流式细胞仪检测肺癌细胞周期的变化及对化疗药物的敏感性,Western印迹检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果 4种酪氨酸代谢物对A549细胞的增殖及周期均无影响.HGA可降低吉非替尼(Gefitinib)诱导的A549细胞凋亡,抑制Bax表达,同时上调Bcl-2的表达水平;FA则可增加其诱导的A549细胞凋亡,促进Bax表达,同时下调Bcl-2的表达水平.酪氨酸和HPPA对Gefitinib诱导的细胞凋亡均无明显影响.结论HGA与FA可调节肺癌细胞化疗药物的敏感性,揭示了酪氨酸代谢通路对肺癌细胞的调控作用,为肿瘤代谢异常的研究奠定了基础.     

IL-34对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的作用研究

目的 研究白细胞介素-34(interleukin 34, IL-34)在食管鳞癌中的表达及其对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 采用免疫组织化学染色检测IL-34在食管鳞癌组织标本中的表达情况,采用qRT-PCR法探究IL-34在不同食管鳞癌细胞系中mRNA表达水平。利用慢病毒感染,过表达食管鳞癌细胞系ECA-109中IL-34,高内涵筛选后通过Celigo细胞计数检测细胞增殖能力,通过流式细胞术检测细胞凋亡能力,通过划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力。结果 癌组织中IL-34水平高于正常组织,但由于临床样本过少差异无统计学意义(P>0.05);食管鳞癌细胞系中IL-34的mRNA水平显著高于正常食管上皮细胞(P<0.01)。IL-34过表达可显著减少ECA-109细胞凋亡,促进其增殖和迁移(P<0.01)。结论 IL-34在食管鳞癌中过表达,并与食管鳞癌细胞的增殖、迁移和凋亡显著相关,可能成为食管鳞癌新的标志物。     

核因子-κB/p65 siRNA对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、细胞周期及迁移能力的影响

目的 研究下调核因子-κB(NF-κB)/p65的表达对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的增殖、周期及迁移能力的影响,并探讨其相关的分子机制.方法 应用脂质体2000将NF-κB/p65 siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测p65 mRNA及其蛋白的表达,采用CCK-8试剂盒和流式细胞术分别检测NF-κB/p65 siRNA对Tca8113细胞增殖和细胞周期的影响,Boyden小室法分析其对Tca8113细胞迁移能力的影响.进一步用Real-time PCR和Western blotting技术检测细胞周期相关基因cyclin E和cdk2以及浸润转移相关因子MMP-9 mRNA和蛋白表达的变化.结果 NF-κB/p65 siRNA能有效下调舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中NF-κB/p65 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),明显抑制Tca8113的细胞增殖(P<0.05),诱导细胞静止在G0/G1期,并降低Tca8113细胞的迁移能力.NF-κB/p65转染Tca8113后的48h,cyclin E、cdk2及MMP-9的表达均显著降低(P<0.05).结论 NF-κB/p65在舌鳞状细胞癌细胞周期及浸润转移中起重要作用,这可能与相关基因表达的改变有关.     

肺腺癌中FURIN、CEACAM6和MTA2的表达及意义

目的探讨肺腺癌中弗林蛋白酶(FURIN)、癌胚抗原相关细胞黏附分子6(CEACAM6)和转移相关基因2(MTA2)蛋白的表达特征及临床意义。方法收集96例肺腺癌术后组织蜡块及临床资料作为观察组,收集正常肺组织70例作为对照组,应用免疫组化方法检测两组中FURIN、CEACAM6和MTA2的表达。结果 FURIN、CEACAM6和MTA2在两组中表达的阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组中FURIN、CEACAM6和MTA2的表达与肿瘤的最大径、脉管浸润、TNM分期和Ki67的表达密切相关。观察组中FURIN和CEACAM6、FURIN和MTA2的表达均呈正相关性。结论肺腺癌术后组织中FURIN、CEACAM6和MTA2高表达,三者对病变的进展有明显促进作用,FURIN对CEACAM6和MTA2可能有正向调节作用。     

肌细胞增强因子2D通过负向调控有丝分裂诱导基因6的表达促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721的增殖和迁移

目的观察肌细胞增强因子2D（myocyte enhancer factor 2D,MEF2D）对肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移的影响,并探究其是否通过负调控有丝分裂诱导基因6（mitogen induced gene 6,MIG6）的表达发挥作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应技术分别检测肝癌细胞中MEF2D和MIG6转录水平的表达,以MEF2D mRNA表达量作为横坐标,以MIG6 mRNA表达量作为纵坐标,制作线性相关图;用小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）在PLC/PRF5细胞中下调MEF2D和MIG6后,通过细胞增殖与毒性测定试剂盒（7Sea-Cell Counting Kit,7Sea-CCK）和细胞划痕法检测肝癌细胞增殖和迁移能力;用siRNA在PCL/PRF5细胞中下调MEF2D、用MEF2D过表达质粒在SMMC7721细胞系中上调MEF2D后,通过蛋白印迹检测法分别检测MEF2D和MIG6的蛋白质表达水平。根据实验,共分为阴性对照（negative control,NC）组、siMIG6组、siMEF2D组、si2M（同时下调MIG6和MEF2D）组、空白对照组、空载对照组、MEF2D组7组。结果肝癌细胞hcclm3、SMMC7721、PLC/PRF5、HepG2、7703、Huh7、Bel-7402中MEF2D mRNA、MIG6 mRNA表达水平呈现负相关关系（r=-0.78）。细胞增殖实验,24 h和48 h时,下调MIG6或MEF2D后,与NC组比较,siMIG6组或siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化;同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化。72 h时,各组间方差分析差异有统计学意义（F=20.68、P<0.01）;下调MIG6后,与NC组比较,siMIG6组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著增强[光密度（optical density,OD）值为3.73±0.18,t=3.84、P=0.02];下调MEF2D后,与NC组比较,siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著下降（OD=1.79±0.22,t=3.95、P=0.02）;同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力增强（OD=2.99±0.03,t=4.83、P<0.01）。细胞划痕实验,各组间方差分析差异有统计学意义（F=42.27、P<0.01）;48 h时,下调MIG6后,与NC组比较,siMIG6组中PLC/PRF5细胞迁移能力显著增强[细胞迁移率为（51±4）%,t=3.22、P<0.05）];下调MEF2D后,与NC组比较,siMEF2D组中PLC/PRF5细胞迁移能力显著下降[细胞迁移率为（19±3）%,t=7.70、P<0.01];同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞迁移能力增强[细胞迁移率为（46±3）%,t=6.99、P<0.01]。蛋白质印迹检测,下调MEF2D后,与NC组比较,siMEF2D组中PLC/PRF5细胞MIG6蛋白表达水平显著上升（t=7.86、P<0.001）;上调MEF2D后,与空载对照组比较,MEF2D组中SMMC7721细胞MIG6蛋白表达水平显著下降（t=4.61、P=0.004）。结论肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721中MEF2D和MIG6表达量呈负相关关系,MEF2D很可能通过负向调控MIG6的表达从而促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移。     

S100A4 siRNA对人胰腺癌BxPc-3细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的观察利用小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）技术下调人胰腺癌BxPc-3细胞中钙结合蛋白S100A4表达后对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法设计合成针对S100A4的特异性siRNA,转染至人胰腺癌BxPc-3细胞,以Western印迹检测转染前后S100A4蛋白表达变化;克隆形成率实验检测转染前后BxPc-3细胞增殖能力;Transwell小室模型检测转染前后BxPc-3细胞迁移和侵袭能力变化。结果 Western印迹结果显示BxPc-3细胞转染S100A4siRNA48h后,S100A4蛋白表达明显下调;Transwell小室验证转染S100A4siRNA后细胞的迁移和侵袭能力明显降低。结论本研究结果表明,S100A4表达下调后可抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,提示S100A4可以作为一个潜在的肿瘤治疗靶标。     

SCPP降解产物对血管内皮细胞迁移、增殖和F-肌动蛋白重组的影响

目的 研究骨组织工程支架材料掺锶聚磷酸钙(strontium-doped calcium polyphosphate, SCPP)的降解产物(degradation products, DPs)对血管形成密切相关的内皮细胞迁移、增殖和肌动蛋白微丝(F-actin)重组的影响,探索其对骨组织工程血管化的作用.方法 在聚磷酸钙(calcium polyphosphate, CPP)制备过程中掺锶制备SCPP多孔支架材料.生理盐水为降解介质,等离子体发射光谱检测降解液中DPs及浓度.用降解液处理脐静脉内皮细胞株ECV-304,噻唑蓝法和Millicell小室法分别检测细胞增殖和迁移.标记F-actin,荧光显微镜下观察.结果 与CPP和生理盐水组比较.结果 掺锶前后,孔隙率分别为(65±5)%和(64±5)%.SCPP各天降解液中Sr浓度为1.222～1.808 mg/L,约为CPP组的20～40倍,但Ca和P较低.SCPP组细胞增殖和迁移数显著高于CPP组和生理盐水,细胞中F-actin重组形成应力纤维数量明显增多.结论 SCPP的降解液能明显促进ECV-304的增殖.Sr是影响增殖的关键因素,SCPP降解液还能促进ECV-304的迁移,引起F-actin重组,形成与细胞迁移密切相关的应力纤维可能是促进迁移的原因之一.SCPP用作骨组织工程支架可能促进血管形成.