COBRA1抑制雌激素受体α转录活性

目的：研究COBRA1（cofactor for BRCA1）在雌激素受体α（ERα）信号途径中的潜在作用。方法：用GST pull-down实验检测COBRA1与ERα的相互作用、定位相互作用的区域，探讨不同配体对相互作用的影响。用免疫共沉淀方法检测COBRA1与ERα在细胞内的相互作用。利用含有雌激素应答元件（estrogen responsive element，ERE）的荧光素酶（luciferase，LUC）报告基因（C3-LUC）检测COBRA1对ERα转录活性的影响。结果：在体内外，COBRA1与ERα存在相互作用，COBRA1和ERα的中间区域是它们相互作用的区域。抗雌激素可增强COBRA1与ERα的结合。COBRA1以激素依赖方式抑制ERα的转录活性。结论：COBRA1是一新型ERα共抑制因子，可能在ERα信号途径中起重要作用。     

创伤与核转录因子

许多转录因子与创伤密切相关，除了研究较多的核因子kB(NF-kB)，还有早期生长反应因子（EGR－1），活化T细胞核因子（NFAT），特殊蛋白1（SP－1）等核转录因子参与创伤反应，在创伤后的炎症，免疫反应和修复中起着重要作用。     

ERRα通过抑制TBK1活性抑制干扰素途径

目的本文拟证明TANK结合激酶1（TBK1）与雌激素受体相关受体α（ERRα）的相互作用及ERRα对TBK1活性的影响。方法通过免疫共沉淀（co-IP）方法证明TBK1与ERRα是否可以在体内外形成复合物,然后通过荧光素酶报道基因的方法研究ERRα对β干扰素（IFNβ）信号通路的影响,再用小干扰RNA构建了ERRα敲低稳定细胞系,在该细胞系中进一步检测ERRα对IFNβ信号通路的影响。结果通过内源及外源co-IP发现,TBK1与ERRα可以发生相互作用;另外,ERRα可抑制VSV病毒、polyI∶C及TBK1引起的IFNβ升高,敲低ERRα表达后,IFNβ表达水平增加。结论 TBK1与ERRα在293细胞内可以发生相互作用,ERRα抑制IFNβ途径的激活,为进一步研究ERRα在宿主先天免疫中的作用奠定了基础。     

γ射线对肺成纤维细胞中转录因子SP1,AP1和Smad3-Smad4活性的影响及意义

目的检测不同剂量γ射线照射对大鼠肺成纤维细胞（rat lung fibroblast，RLF）中转录因子SP1，AP1和Smad3-Smad4活性的影响并探讨其意义。方法进行大鼠肺成纤维细胞的原代分离培养，应用3、5和8Gyγ射线照射，通过凝胶阻滞电泳（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）、免疫印迹和免疫组织化学等方法检测照射后转录因子SP1，AP1和Smad3-Smad4活性的变化及Ⅰ型胶原和Ⅰ型组织纤溶酶原激活物抑制剂（typeⅠplasminogen activator inhibitor，PAI—Ⅰ）的表达变化。结果正常RLF中AP1和Smad3-Smad4形成弱阻滞条带，SP1无阻滞条带形成，3、5和8Gy γ射线照射后，3种转录因子所形成的阻滞条带明显增强，PAI—Ⅰ和Ⅰ型胶原的表达增多。结论一定剂量γ射线能促进大鼠肺成纤维细胞中转录因子SP1，AP1和Smad3-Smad4的活化，并进而促进PAI—Ⅰ和Ⅰ型胶原的表达。     

p53在二乙基亚硝胺诱导肝细胞转录因子AP-1活化中的作用

目的研究p53对二乙基亚硝胺(DEN)诱导肝细胞恶变过程的影响,探讨p53功能缺失与细胞恶变的关系。方法使用p53特异性抑制剂pifithrin-α(PFT-α)和(或)人p53小RNA干扰质粒sip53抑制L02细胞p53的转录活性。采用荧光素酶报告基因法检测不同时间点、不同浓度DEN对p53功能正常和缺失的L02细胞AP-1转录激活活性的影响,检测不同DEN处理时间对p53转录激活活性的影响及PFT-α对AP-1转录激活活性的影响。转录激活活性用相对荧光强度表示。结果应用PFT-α或转染sip53质粒24h后,p53的转录活性明显下降。单纯DEN处理后AP-1的相对荧光强度轻度上调,而DEN+PFT-α和DEN+sip53处理的细胞内AP-1相对荧光强度与单纯DEN处理组比较均有上调,呈现时间和浓度双重依赖性;在作用24h时点或DEN浓度为100ng/L时作用达高峰,随后回落。DEN处理后p53相对荧光强度明显上调,且存在时间依赖性,在24h达高峰,随后回落。DEN+PFT-α处理的细胞p53相对荧光强度在各时间点的变化不明显,始终保持在较低水平。以PFT-α抑制p53功能后,L02细胞内AP-1的相对荧...     

核转录因子-kB信号途径与急性脊髓损伤继发伤的研究进展

脊髓损伤是一种严重威胁人类健康的常见外伤,分原发性和继发性。脊髓损伤后继发伤往往是患者的主要损害。近年来发现核转录因子（NF-kB）信号转导途径在脊髓损伤后炎症细胞、神经元和内皮细胞中的活化,活化的NF-kB主要通过调控靶基因转录生成的产物（如细胞因子、黏附分子和诱生型一氧化氮合酶等）来参与继发损伤的过程。本文就NF-kB信号转导途径与急性脊髓损伤继发伤作一综述。     

核转录因子-κB信号途径与急性脊髓损伤继发伤的研究进展

脊髓损伤是一种严重威胁人类健康的常见外伤,分原发性和继发性。脊髓损伤后继发伤往往是患者的主要损害。近年来发现核转录因子（NF-kB）信号转导途径在脊髓损伤后炎症细胞、神经元和内皮细胞中的活化,活化的NF-kB主要通过调控靶基因转录生成的产物（如细胞因子、黏附分子和诱生型一氧化氮合酶等）来参与继发损伤的过程。本文就NF-kB信号转导途径与急性脊髓损伤继发伤作一综述。     

核转录因子Nrf2与肝脏疾病的研究进展

核因子E2相关因子2（Nrf2）是一种被基因NFE2L2所编码,然后通过抗氧化反应元件（ARE）调节细胞内广泛的抗氧化酶及Ⅱ相解毒酶的重要转录因子,属于碱性亮氨酸拉链结构,广泛表达于多物种的多个器官。人Nrf2的氨基酸残基有6个保守功能区域：Neh1-6。     

缺氧环境下的肝星状细胞中缺氧诱导因子1α与缺氧诱导因子2α对CD248表达水平影响

目的探究缺氧状态下的肝星状细胞(HSC)中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、缺氧诱导因子2α(HIF-2α)对内皮唾液酸蛋白(endosialin/CD248/TEM1)表达水平的影响。方法首先,通过对布-加综合征(BCS)患者肝组织样本进行HIF-1α、HIF-2α和CD248免疫组化染色,并通过计算HIF-1α、HIF-2α和CD248的免疫组化累积光密度(IOD)值来分析CD248与HIF-1α、HIF-2α之间表达的相关性。其次,将成功包装的HIF-1α、HIF-2α过表达慢病毒和空载慢病毒分别感染体外培养的LX-2人肝星状细胞(HSC-LX2),并使用CoCl2进行低氧诱导处理。使用β-actin作为内参基因,通过定量聚合酶链反应技术观察缺氧环境下过表达慢病毒和空载慢病毒感染的HSC-LX2细胞中CD248基因表达水平,并对数据进行统计学分析。结果通过对BCS患者肝组织样本HIF-1α、HIF-2α和CD248的IOD值进行检测,显示CD248与HIF-1α(Pearson相关系数:r=0.285,P=0.010)和HIF-2α(Pearson相关系数:r=0.382,P<0.001)的表达水平呈现显著的正相关。定量聚合酶链反应技术检测显示,与空载慢病毒感染的HSC-LX2细胞比较,HIF-1α与HIF-2α过表达慢病毒感染的HSC-LX2细胞中CD248的表达丰度均明显升高(P均<0.05)。结论在缺氧状态下的HSC中,HIF-1α、HIF-2α均可能参与调控CD248基因表达增加。     

缺氧诱导因子HIF—1α与恶性肿瘤

IBF-1α是与恶性肿瘤生长进程密切相关的转录调节因子，瘤细胞氧状态及基因变异共同调控HIF-1α表达水平及其活性。HIF—1α高表达在人体恶性肿瘤中广泛存在。HIF-1α高表达对肿瘤组织放化疗敏感性有显著影响，体外实验表明针对HIF-1α的靶向药物和基因治疗能够通过主动下调HIF-1α表达水平，抑制肿瘤细胞生长。因此研究HIF—1α对肿瘤生长、侵袭、转移、预后和诊治等方面都有重要意义。     

LRP16通过增强ERα介导的转录激活活性促进乳腺癌MCF-7细胞增殖

目的:探讨LRP16基因促进MCF-7细胞增殖的分子生物学机制。方法:(1)将ERα模式启动子调控的荧光素酶报告子(3×ERE-Luc)与ER,αLRP16真核表达载体共转染MCF-7细胞,测定3×ERE-Luc的相对荧光素酶活性;(2)将3×ERE-Luc,ERα真核表达载体、针对LRP16的小干扰RNA(LRP16-siRNA374,LRP16-siRNA668)或对照小干扰RNA(control-siRNA)共转染MCF-7细胞,测定3×ERE-Luc的相对荧光素酶活性;(3)用Northern印迹与W estern印迹方法检测抑制LRP16基因后MCF-7细胞中ERα下游靶基因对雌激素刺激的反应性。结果:(1)LRP16增强3×ERE-Luc的相对荧光素酶活性,并呈现剂量依赖性,该效应依赖于雌激素对ERα的激活;(2)North-ern印迹结果显示,抑制LRP16表达限制了雌激素对ERα下游靶基因表达水平的刺激上调,包括E2F1、视黄酸受体(RARα)、c-fos和MTA3,但没有影响组织蛋白酶D(cathepsin D)的反应性;W estern印迹结果显示,抑制LRP16限制了雌激素对细胞周期蛋白D1(cyc lin D1)的刺激。结论:(1)雌激素反应性靶基因LRP16反馈增强ERα介导的转录激活活性;(2)LRP16基因通过增强ERα介导的转录激活活性调节其下游靶基因的表达,主要通过改变cyc linD1的水平促进MCF-7细胞的增殖。     

β-七叶皂甙对脑损伤大鼠脑组织核因子-κB活性与肿瘤坏死因子-α蛋白表达的影响

目的　研究β-七叶皂甙(β-aescin)对大鼠急性脑损伤后脑组织核因子-κB(NF-κB)活性和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的影响。　方法　62只SD大鼠采用自由落体致伤法制作脑外伤模型,随机分成四组: (1)假手术对照组(A); (2)创伤组(B); (3)β-七叶皂甙治疗组(C); (4)吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC)治疗组(D)。每组分别在术后6, 24h和3d三个时相点收取脑组织标本,采用凝胶电泳迁移率分析(EMSA)测定脑组织NF-κB活性;放射免疫法测定脑组织TNF-α蛋白水平,并测定脑组织含水量及进行病理形态学观察。　结果　与假手术对照组比较,大鼠脑损伤后脑组织NF-κB活性和TNF-α蛋白水平以及脑组织含水量显著增高(P<0. 01);与创伤组比较,β-七叶皂甙和PDTC治疗组脑组织NF-κB活性(P<0. 01 )、脑组织TNF-α蛋白水平(P<0. 01)及脑组织含水量(P<0. 05)均显著降低。　结论　β-七叶皂甙可以抑制NF-κB活化,下调TNF-α蛋白表达,从而减轻脑水肿。这可能是β-七叶皂甙治疗创伤性脑水肿的分子生物学作用机制之一。     

γ射线照射后乏氧诱导因子1α对肝癌细胞存活的影响

目的 研究辐射对肝癌细胞内乏氧诱导因子1α(HIF-1α)的调节作用以及HIF-1α的变化对肝癌细胞存活的影响。方法 采用CoCl₂化学模拟乏氧预处理人肝癌HepG2细胞,经不同剂量的γ射线照射后,通过细胞集落形成实验,比较有氧及化学模拟乏氧条件下细胞存活水平的差异。同时采用RT-PCR和Western blot方法检测照射后细胞内HIF-1α在转录和翻译水平上的变化。结果 在化学模拟乏氧条件下,细胞存活分数(SF)显著增加,与有氧对照组比较差异有统计学意义,且两种不同作用条件下的SF比值(SF_CO/SF_O2)随照射剂量逐渐增加,同时,经照射后细胞内的HIF-1α表达升高,并呈剂量依赖模式,HIF-1α的表达与照射后的细胞存活水平具有较强的关联性。结论 辐射可诱导肝癌细胞内HIF-1α的表达升高,HIF-1α的表达变化可能影响细胞的存活水平。     

子宫内膜异位症核转录因子和血管内皮生长因子表达与预后的关系

目的：探讨核转录因子（NF—κB）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达与子宫内膜异位症（内异症）预后的关系。方法：采用免疫组化SP法检测83例内异症患者在位及异位组织标本中的NF—κB和VEGF的表达水平，并结合患者临床病案记录及随访资料进行分析。结果：NF—κB在内异症患者的异位和在位内膜中的表达率分别为73．49％及59．04％，VEGF表达率分别为69．88％及和55．42％。NF—κB和VEGF在两种内膜中表达一致性均良好，且两者表达具有正相关性（在位内膜：κappa=0．78，r=0．78，P〈0．01；异位内膜：κappa=0．69，r=0．67，P〈0．01）。NF—κB和VEGF高表达的异位症患者复发率明显高于低表达患者（P〈0．05）。结论：NF—κB和VEGF的表达对估计内异症的预后有重要的意义，可做作为判断内异症预后的指标。     

缺氧诱导因子-1α对肺动脉平滑肌细胞端粒酶反转录酶的转录调节作用

目的 研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对缺氧状态下大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)中端粒酶反转录酶(TERT)表达的调控作用.方法 培养大鼠PASMC,采用RT-PCR分别检测HIF-1α激动剂(CoCl2、DFX)、HIF-1α抑制剂(FAS)、代谢抑制剂(CBZ-LLL)、反义寡核苷酸等作用后及缺氧条件下HIF-1α、TERT mRNA的表达,Western blotting检测HIF-1α蛋白的表达.结果 缺氧4h条件下HIF-1α、TERT mRNA的表达量(分别为0.59±0.07、0.60±0.06)明显高于对照组(分别为0.11±0.02、0.10±0.01,P＜0.05).与对照组相比,加入DFX后,HIF-1α、TERT mRNA表达量(分别为0.52±0.06、0.45±0.04)明显升高(P＜0.05);加入CoCl2后,HIF-1α、TERT mRNA表达量(分别为0.99±0.08、0.72±0.07)也明显升高(P＜0.05).加入FAS后,HIF-1α、TERT的mRNA表达量(分别为0.09±0.01、0.13±0.01)较缺氧组(分别为0.65±0.06、0.52±0.04)明显降低(P＜0.05).加入CBZ-LLL后,HIF-1α mRNA表达量(0.09±0.01)与对照组(0.06±0.01)比较无明显差异(P＞0.05),但TERT mRNA表达量(0.82±0.07)较对照组(0.08±0.01)明显升高(P＜0.05).加入CoCl2和CBZ-LLL后,HIF-1α蛋白表达量(分别为12.0±1.1、9.0±0.8)较对照组(1.0±0.1)明显升高(P＜0.05).缺氧条件下,加入反义寡核苷酸后TERT mRNA表达量(0.20±0.01)较缺氧组(0.75±0.06)明显降低(P＜0.05),但加入错配寡核苷酸的TERT mRNA表达量(0.70±0.06)与缺氧组相比无明显差异(P＞0.05);常氧条件下,同时加入反义寡核苷酸、CoCl2后PASMC的TERT mRNA表达量(0.45±0.04)较CoCl2组(0.95±0.08)明显降低(P＜0.05).结论 HIF-1α对缺氧状态下大鼠PASMC中TERT的表达具有调控作用.     

肝组织中肝富集转录因子及其调控网络的研究进展

肝脏是机体重要的实质性器官,肝富集转录因子及其相互作用构成的复杂调控网络精确地控制着肝脏的早期发育及其各项功能的发挥.目前依据其结构特征将肝富集转录因子分为7大家族,这里着重介绍这7类肝富集转录因子的结构特征、在肝组织中的生理功能及其调控网络的新进展.     

缺氧诱导因子1α、多药耐药相关蛋白1在脊索瘤中的表达及其临床意义

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白、多药耐药相关蛋白1(MRP1)在脊索瘤中的表达水平及其与脊索瘤病理特征和放化疗抵抗之间的关系。方法收集2000年1月-2008年12月接受手术治疗的50例脊索瘤患者的肿瘤组织石蜡标本,另取15例骨软骨瘤标本作为对照。50例脊索瘤患者中男35例,女15例;年龄17～77岁,平均53.3岁;原发病例26例,复发病例24例;病理类型包括普通型48例,去分化型1例,外周型1例。采用免疫组化Envision法检测HIF-1α、MRP1蛋白表达情况,分析其与放化疗抵抗的关系,并探讨HIF-1α、MRP1表达与脊索瘤临床病理特征的关系。结果50例脊索瘤组织HIF-1α、MRP1的阳性表达率分别为80%和74%,均明显高于骨软骨瘤组织(分别为20%和27%,P<0.01)。相关性分析显示,脊索瘤组织中HIF-1α与MRP1的表达呈正相关关系(r=0.80,P<0.01)。脊索瘤组织中HIF-1α、MRP1的表达水平与患者性别、年龄、发病次数及肿瘤大小、部位、分化程度、分期、淋巴结转移均无明显关系。结论脊索瘤组织中HIF-1α和MRP1表达明显增高,且两者表达水平呈正相关,其过度表...