BCR-ABL融合蛋白多样性及其与白血病表型的关系

本文报告BCR-ABL融合蛋白的变化及其与白血病表型的关系。首先报告各种BCR—ABL融合基因的结构及其转录本。可分为三种类型,即M-bcr,robcr和μ-bcr,以及它们见于那些白血病。其次报告BCR断点位置的变化,ABL的特殊断点,BCR-ABL信息RNA的拼接。BCR-ABL融合蛋白的结构与白血病表型的关系。此外BCR/ABL细胞还带有染色体的其它异常,Ph染色体的变种等。最后论述了BCR/ABL融合蛋白起源于何种细胞系,何种成熟阶段。少数文献报告此蛋白起始于多能干细胞。     

BCR／ABL阳性细胞对STI571耐药机制的研究进展

在慢性粒细胞白血病、成人急性淋巴细胞白血病以及儿童急性淋巴细胞白血病中常常发现染色体t(9;22)(q34;q11)易位。这种易位在22号染色体产生BCR／ABL融合基因，导致细胞恶性的扩增。STI571（以前称谓CGP57148B）抑制Bcr/Abl酪氨酸激酶活性。然而人们在对BCR／ABL阳性细胞研究中发现了对STI571耐药的细胞株，目前的研究认为BCR／ABL基因的扩增与过度表达是对STI571耐药的主要机制。     

慢性粒细胞白血病发病机理研究的进展

慢粒白血病(CML)最大的特点是存在特异性的Ph染色体即t(9;22)。该易位产生bcr-abl融合基因,其表达为一个具有高酪氨酸激酶活性的BCR/ABL融合蛋白,后者被认为是CML发病的分子基础。本文就ABL及BCR蛋白的正常结构和生物学活性以及CML细胞中ABL蛋白FTK的激活及其所介导的致癌信号的传导进行综述,以助进一步了解CML的发病机理。     

一步法RT-PCR检测慢性粒细胞白血病BCR-ABL融合基因

目的：建立一步法RT-PCR检测CML患者BCR—ABL融合基因的实验方法。方法：Trizol试剂提取细胞RNA,用特异引物一步法RT—PCR检测BCR—ABL融合基因．并作灵敏度试验。结果：本方法的灵敏度可达到10pg水平。对25例CML患者检测BCR-ABL融合基因,阳性率为100％．并可检测出BCR—ABL融合基因各种融合方式。结论：一步法RT—PCR检测BCR-ABL融合基因有很好的灵敏度和特异性,操作简便、快速,特别适用于临床检测。     

慢性粒细胞白血病的细胞凋亡分子机制及临床治疗研究进展

慢性粒细胞白血病(CML)以染色体移位形成BCR／ABL融合基因为标志,编码的融合蛋白 P210BCR／ABL具有较强的蛋白酪氨酸激酶活性,可激活Ras-Raf-MAPK、STAT-Bcl-XL、PI3K-AKT、 NFκB等多条信号转导途径,直接或间接作用于细胞凋亡的开关——线粒体,使BCR／ABL阳性细胞耐受凋亡,导致肿瘤疾病发生。因此诱导凋亡是目前临床治疗慢性粒细胞白血病的重要方法之一,本文就慢性粒细胞白血病的细胞凋亡分子机制,以及在此基础上临床新近发展的一些治疗策略作一简述。     

细胞凋亡在慢性粒细胞白血病中的研究进展

BCR/ABL融合蛋白抑制慢性粒细胞白血病(CGL)白血病细胞的凋亡,细胞凋亡受抑在CGL发病机制中具有重要的作用。本文简述BCR/ABL~ CML细胞凋亡过程中相关基因、蛋白及细胞周期变化。     

慢性粒细胞白血病干细胞生物学特性研究进展

慢性粒细胞白血病(CML)是一种造血干细胞(HSC)恶性克隆性疾病,其典型特征是费城染色体阳性(Ph+)并表达具有强酪氨酸激酶活性的BCR/ABL融合蛋白。近年来,BCR/ABL酪氨酸激酶的信号转导抑制剂甲磺酸伊马替尼在CML治疗中的成功应用,开辟了CML靶向治疗的新途径。然而,甲磺酸伊马替尼不能根除白血病细胞克隆,容易出现耐药与复     

慢性粒细胞白血病患者骨髓来源Flk1~+CD31~-CD34~-间充质干细胞中BCR/ABL融合基因的检测

背景:免疫表型为Flk1+CD31-CD34-的间充质干细胞体内外实验研究均证实在单细胞水平可以向造血及内皮细胞分化。目的:观察慢性粒细胞白血病患者骨髓BCR/ABL融合基因的表达情况。方法:体外培养扩增慢性粒细胞白血病患者骨髓来源原始间充质干细胞,测定其生长曲线,分析其细胞周期及免疫表型,使用RT-PCR和FISH的方法检测其BCR/ABL融合基因的表达情况。结果与结论:慢性粒细胞白血病患者骨髓来源的原始间充质干细胞呈成纤维样生长,大部分细胞处于G0/G1期,并且高表达Flk1,CD13,CD29,CD44,用RT-PCR和FISH的方法能够检测出BCR/ABL融合基因的表达。提出慢性粒细胞白血病的白血病基因转化可能发生在比造血干细胞更高的血液血管干细胞水平上。     

慢性粒细胞白血病的基因治疗策略

BCR/ABL融合基因及其表达产物p210~(BCR/ABL)对慢性粒细胞白血病(CML)的发生具有决定性作用。近年来对CML分子发病机制的深入研究,为治疗CML提供了多种思路,涌现出了包括生物治疗在内的许多新疗法,有些已进入临床试验或临床治疗。本文概述了针对CML BCR/ABL信号转导途径的各种基因治疗策略,大致可分为以下四类:抑制癌基因表达,抑制BCR/ABL信号通路下游重要分子基因表达,阻抑BCR/ABL蛋白产物的功能,免疫治疗。     

慢性粒细胞白血病患者外周血BCR/ABL融合基因表达水平及意义

目的观察慢性粒细胞白血病(CML)初发和急变患者外周血BCR/ABL基因的表达变化。方法建立实时定量RT-PCR同时检测b2a2和b3a2两种融合基因亚型,检测25例CML初发和25例CML急变患者的外周血样本中BCR/ABL融合基因的表达。结果BCR/ABL及GAPDH标准曲线的相关系数均为1.0,灵敏度为2pgRNA,根据熔解温度的不同可以区分b2a2和b3a2两种融合基因亚型。CML急变患者外周血BCR/ABL融合基因的表达水平是初发患者的4.72倍。结论本法简便、敏感、特异,可以相对定量BCR/ABL融合基因表达水平,有助于反映白血病细胞负荷,评价疗效及判断预后。     

荧光原位杂交技术检测BCR/ABL融合基因

目的建立荧光原位杂交(FISH)技术,直接原位检测间期细胞中BCR/ABL融合基因,辅助临床诊断和治疗慢性粒细胞性白血病(CML)。方法应用FISH技术检测15例CML患者骨髓培养细胞BCR/ABL融合基因,其中5例CML患者同时取骨髓直接涂片检测,5例CML患者同时取外周血浓缩单个核细胞直接涂片检测。以5例非CML患者骨髓培养细胞为阴性对照。结果15例患者骨髓标本成功培养10例,染色体分析检测到Ph1染色体8例。15例患者骨髓培养细胞FISH检测BCR/ABL融合基因阳性14例。5例CML患者同时做骨髓直接涂片FISH检测,结果阳性4例。5例CML患者同时做血标本浓缩单个核细胞FISH检测阳性2例。5例非CML患者FISH结果均阴性。结论FISH技术能直接原位检测间期细胞中BCR/ABL融合基因,且快速、可靠、成功率高,是诊断和监测CML的一项有效新技术。     

慢性髓系白血病急变期分子遗传学研究进展

9号和22号染色体相互易位产生Ph染色体及BCR-ABL融合基因,几乎在所有慢性髓系白血病（CML）出现,BCR-ABL编码的蛋白具有持续增高的酪氨酸激酶活性,使白血病细胞异常增殖。急变期是CML的晚期,在此期间常常出现其它附加染色体和分子的改变。大量研究表明,BCR-ABL基因与其他失调的基因共同作用并异常激活下游的信号传导通路,促进了疾病的进展。酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼对大多数慢性期CML患者治疗效果显著。IRIS5年的临床试验显示：用伊马替尼治疗的98%患者达血液学完全缓解,92%患者达主要细胞遗传学缓解,87%患者达完全细胞遗传学缓解。然而,仍有少数慢性期和大多数进展期患者用伊马替尼治疗疗效欠佳。在耐药机制的研究中发现ABL激酶区点突变与临床耐药关系密切。第二代酪氨酸激酶抑制剂可改善伊马替尼耐药,本文就急性变的分子机制、伊马替尼耐药等做一综述。     

BCR/ABL双色双融-荧光原位杂交技术的信号模式探讨

目的研究BCR/ABL双色双融合探针荧光原位杂交技术(dual color dual fusion BCR/ABL probe-fluorescence in situ hy-bridization,DCDF-FISH)在白血病遗传学异常检测中的常见信号模式,探讨各种信号模式与染色体异常的关系。方法采用BCR/ABL的DCDF-FISH技术和染色体核型分析技术对初诊的40例慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)、30例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)以及10例其它(包括AML和骨髓增生性疾病)患者骨髓标本进行检测,比较DCDF-FISH各种信号模式与染色体关系。结果DCDF-FISH检测见11种信号模式:2R2G为正常细胞信号模式;2R3G、3R2G及3R3G为无BCR/ABL融合基因的异常信号模式;1R1G2F、1R1G1F、1R2G1F和2R1G1F模式的核型都为t(9;22);1R1G3F核型模式为t(9;22)伴有Ph+;2R2G1F为三条以上染色体易位t(9;22;V);1R2G2F为t(9;22)伴多一条22号染色体,这些信号模式的细胞内都存在着BCR/ABL融合基因。结论BCR/ABL DCDF-FISH检测时存在着多种信号模式,明确各种信号模式的意义,对临床疾病的诊断、预后有重要指导意义。     

慢性粒细胞白血病患者骨髓来源Flk1^＋CD31^-CD34^-间充质干细胞中BCR／ABL融合基因的检测

背景：免疫表型为Flk1^＋CD31^-CD34^-的问充质干细胞体内外实验研究均证实在单细胞水平可以向造血及内皮细胞分化。目的：观察慢性粒细胞白血病患者骨髓BCPdABL融合基冈的表达情况。方法：体外培养扩增慢性粒细胞白血病患者骨髓来源原始间充质干细胞,测定其生长曲线,分析其细胞剧期及免疫表型,使用RT-PCR和FISH的方法检测其BCR/ABL融合基因的表达情况。结果与结论：慢性粒细胞白血病患者骨髓来源的原始间充质干细胞呈成纤维样生长,人部分细胞处于G0／G1期,并儿高表达Flk1,CD13,CD29,CD44,用RT-PCR和FISH的方法能够检测出BCR／ABL融合基因的表达。提出慢性粒细胞白血病的白血病基因转化可能发生在比造血干细胞更高的血液血管千细胞水平上。     

Purification of TAT-CC-HA protein under native condition, and its transduction analysis and biological effects on BCR-ABL positive cells

BCR-ABL oncoprotein is the cause of chronic myeloid leukemia. The homologous oligomerization of BCR-ABL protein mediated by BCR coiled-coil (CC) domain plays an important role in ABL kinase activation. The HIV-1 TAT peptide has been used extensively for the introduction of proteins into cells. We recombinated a TAT-CC-HA protein to interrupt the homologous oligomerization of BCR-ABL. The expression conditions for TAT-CC-HA were optimized. The TAT-CC-HA fusion protein was purified with Ni+-NTA resin. TAT-CC-HA fusion protein was added into the cultures of Ba/F3-p210, 32D-p210, K562, KU812, Ba/F3, 32D, and HL-60 cells. It was found that TAT-CC-HA could transduce into these cells. It was confirmed that TAT-CC-HA fusion protein was internalized by Ba/F3-p210, K562, and Ba/F3 cells and located in the cytoplasm observed by confocal laser scanning fluorescence microscope. The transduction of TAT-CC-HA fusion protein into K562 cells was in a dose-dependent and time-dependent manner. The result of coimmunoprecipitation assay indicated that TAT-CC-HA could interact with BCR-ABL in K562 cells. The effects of TAT-CC-HA fusion protein on cell growth and apoptosis were detected by MTT test and flow cytometry. Our findings suggested that TAT-CC-HA fusion protein could specifically inhibit the growth of BCR-ABL positive cells, and specifically induce apoptosis of BCR-ABL positive cells, while not affect the growth and apoptosis of BCR-ABL negative cells.