糖基化终末产物上调大鼠心脏微血管内皮细胞NF-kB和COX-2表达

目的研究糖基化终末产物（AGEs）对大鼠心脏微血管内皮细胞因子kB（NF-kB）和环氧合酶2（COX-2）表达的影响,探讨AGEs与糖尿病血管病变间的关系。方法体外培养大鼠心脏微血管内皮细胞至亚融和状态时,以不同浓度糖基化白蛋白BSA-AGEs与之作用不同时间后,检测内皮细胞NF-kB及COX-2蛋白的表达。结果25、50、100、200mg／LBSA-AGEs作用后,NF-kB和COX-2蛋白表达呈剂量依赖性增多,100mg／LAGEs作用6、12、24、48h,NF-kB和COX-2蛋白表达呈时间依赖性增多。结论BSA-AGEs可促进体外培养微血管内皮细胞NF-kB和COX-2的表达,其作用可能与NF-kB的活化有关。     

普罗布考对大鼠心脏微血管内皮细胞RAGE表达的影响

目的 观察普罗布考对大鼠心脏微血管内皮细胞糖基化终末产物（AGEs）受体（RAGE）表达的影响.方法 体外原代培养心脏微血管内皮细胞.空白组加无血清培养液培养,AGEs组加AGEs（100 mg/L）孵育,普罗布考（5、10 μmol/L）组用普罗布考（5、10 μmol/L）分别作用细胞30 min后,加入AGEs（100 mg/L）再孵育24 h.各组分别作用于心脏微血管内皮细胞24h,免疫组化法和Western blot法检测RAGE蛋白表达.结果 AGEs组与空白组RAGE蛋白表达比较,P＜0.05;普罗布考10μmol/L组与AGEs组比较,P＜0.05.结论 普罗布考能够抑制AGEs诱发的心脏微血管内皮细胞RAGE的表达,从而抑制氧化应激的发生.     

普罗布考对糖基化终末产物引发心脏微血管内皮功能紊乱的作用

目的:观察普罗布考（probucol）对糖基化终末产物（AGEs）作用后的心脏微血管内皮细胞iNOS表达的影响。方法: 原代培养心脏微血管内皮细胞,AGEs（100 mg/L）体外模拟高糖环境,在probucol(5 μmol/L,10 μmol/L,20 μmol/L) 作用后,检测ROS、NO和iNOS变化情况。结果: 与AGEs组比较,probucol组中ROS蛋白表达降低,NO生成增加,而 iNOS蛋白表达降低,且显示有浓度依赖性。结论: probucol可能通过对抗氧化应激的途径,缓解AGEs引发的心脏微血管内皮功能障碍。     

α-硫辛酸抑制糖基化终末产物诱导血管内皮细胞凋亡的研究

目的研究α-硫辛(ALA)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导血管内皮细胞凋亡的抑制作用及机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,加不同培养液孵育60 min,以人血清白蛋白(HSA)培养液作为对照组,以AGEs-HSA 200 mg/L培养液体外培养60 min为AGEs-HSA组,以ALA 200 μg/ml加入200 mg/L AGEs为ALA组,采用Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,Western blot法检测NF-κB p65核蛋白表达,ELISA法测定天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性。结果 AGEs以浓度依赖方式促进内皮细胞凋亡。与对照组比较,AGEs-HSA组细胞NF-κB p65蛋白表达量明显减低,caspase-3活性明显增高(P0.05);与AGEs HSA组比较,ALA组内皮细胞凋亡明显减少,NF-κB p65蛋白表达量明显增加,caspase-3活性明显降低(P0.05)。结论 ALA可能通过增加NF-κB表达,抑制caspase-3激活的AGEs诱导内皮细胞凋亡。     

苯磺酸左旋氨氯地平对AGEs诱导内皮细胞MCP-1分泌的影响

目的 观察钙通道阻滞剂苯磺酸左旋氨氯地平(SHD)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)分泌的影响,为高血压并糖尿病患者的治疗提供依据.方法 取以胶原酶消化、分离并经内皮细胞表面抗原Ⅷ因子免疫组化鉴定的脐静脉内皮细胞,按2×106/mL种植在6孔培养板中,在无血清培养基中静止24h后随机分为空白对照组、牛血清白蛋白(BSA)对照组、AGEs组及SHD组,其中空白对照组不加干预因素,BSA对照组予50 mg/L BSA,AGEs组分别予25、50、100 mg/L的AGEs共培养24h；SHD组分别加入2.5、5.0、10.0 mg/L的SHD培养1h,而后加入100 mg/L的AGEs共同孵育24h；用ELISA检测细胞内MCP-1分泌,蛋白免疫印迹法测定NF-κB p65蛋白表达.结果 ①AGEs处理后人脐静脉内皮细胞分泌MCP-1增加,且存在浓度梯度效应,其中AGEs组50、100 mg/L处理者与空白对照组和BSA对照组比较P均＜0.05；SHD处理后AGEs诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1分泌减少,且存在浓度梯度效应,其中SHD组SHD质量浓度为5.0、10.0 mg/L者与空白对照组和BSA对照组比较P均＜0.05.②AGEs组质量浓度为25、50、100 mg/L者NF-κB p65蛋白表达量分别是空白对照组的1.24倍、3.10倍和4.05倍,其中50、100 mg/L者与空白对照组比较P均＜0.05；与AGEs组相比,SHD组NF-κB p65蛋白表达降低,且存在浓度梯度效应,SHD组SHD质量浓度为2.5、5.0、10.0 mg/L者分别降低1.08倍、1.74倍和2.94倍,其中5.0、10.0 mg/L者与AGEs组比较P均＜0.05.结论 SHD可通过下调NF-κB表达抑制AGEs诱导的人内皮细胞炎性因子MCP-1分泌,此为其在高血压并糖尿病患者治疗中的应用提供了依据.     

吡咯烷类对糖基化终产物诱导的老年大鼠内皮细胞纤连蛋白mRNA表达的影响

目的观察抗氧化剂吡咯二硫代氨基甲酸乙酯(PDTC)对糖基化终末产物(AGEs)诱导的老年大鼠内皮细胞核转录因子(NF-κB)活性、活化蛋白(AP-1)组成成分c-jun和纤维连接蛋白(Fn)mRNA表达的影响。方法取24月龄的SD大鼠主动脉内皮细胞进行原代培养,再给予不同剂量AGEs及PDTC继续培养并分为5组,采用荧光免疫化学法检测细胞NF-κB活性和RT-PCR检测细胞c-jun和Fn mRNA的表达。结果不同剂量AGEs组中,NF-κB活性呈浓度依赖性上升, AGEs 25 mg／L组和50 mg／L组分别为(0．25±0．02)％和(0．42±0．03)％,与未给AGEs对照组(0．04±0．01)％比较,差异有统计学意义(P<0．05);AGEs还上调了Fn mRNA和c-jun mRNA的表达(P<0．05)。给予PDTC干预后,抑制了AGEs诱导的NF-κB激活,干预后AGEs 25 mg／L组和50 mg／L组NF-κB分别为(0．21±0．01)％和(0．22±0．01)％,与干预前比较,差异有统计学意义(P< 0．05);PDTC干预后,AGEs诱导的c-jun和Fn mRNA的表达均有所下调。结论抗氧化剂PDTC通过抑制NF-κB和c-jun途径,下调了AGEs诱导的血管基底膜Fn的表达。     

糖基化终末产物对视网膜微血管内皮细胞核因子κB活化的影响及辛伐他汀的保护作用

目的探讨糖基化终末产物对大鼠视网膜微血管内皮细胞核因子κB活化的影响及辛伐他汀的保护作用。方法体外培养大鼠视网膜微血管内皮细胞,制备糖基化终末产物—糖基化白蛋白。应用荧光显微镜观察核因子κB的活化。并观察给予辛伐他汀后视网膜微血管内皮细胞M atrigel上管腔形成的变化及单核细胞趋化蛋白1的表达。结果视网膜微血管内皮细胞无糖基化白蛋白刺激时,核因子κB主要表达在细胞浆;糖基化白蛋白刺激后核因子κB主要表达在核内,作用30 min时达高峰。糖基化白蛋白作用下管腔形成明显增多,单核细胞趋化蛋白1的表达明显增加,加入辛伐他汀后管腔形成明显减少,单核细胞趋化蛋白1的表达明显下降。结论糖尿病视网膜病变中糖基化终末产物发挥重要作用,核因子κB的活化是其关键环节;辛伐他汀可以减少糖基化白蛋白诱导的管腔形成及单核细胞趋化蛋白1的表达。     

丹参酮ⅡA对内皮细胞环氧合酶2表达的影响及相关机制

目的　探讨丹参酮ⅡA对主动脉内皮细胞环氧合酶2（COX-2）表达的影响及相关机制。方法　体外培养人主动脉内皮细胞株并分为三组：血管紧张素Ⅱ（100　nmol/L）组、血管紧张素Ⅱ（100　nmol/L）＋丹参酮ⅡA（1　μmmol/L）组及对照组,共培养10　min、1　h及2　h后分别收集细胞,运用实时荧光定量PCR检测COX-2　mRNA的表达量,Western　blot检测COX-2、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）、核因子κB（NF-κB）及磷酸化NF-κB（p-NF-κB）蛋白表达的变化。结果　在血管紧张素Ⅱ的作用下,内皮细胞内COX-2　mRNA和蛋白表达水平明显增加（P<0.01）,且p-p38MAPK和p-NF-κB水平也同步提高（P<0.01）。加用丹参酮ⅡA处理后,内皮细胞COX-2　mRNA和蛋白表达水平显著下降（P<0.01）,p-p38MAPK和p-NF-κB水平也受到明显抑制（P<0.01）。结论　丹参酮ⅡA明显抑制主动脉内皮细胞COX-2的表达,其机制可能与抑制p38MAPK、NF-κB的磷酸化有关。     

银杏叶提取物对肾间质成纤维细胞中糖基化终产物诱导的血管生成素及其受体表达的影响

目的:观察糖基化终末产物(AGEs)对肾间质成纤维细胞中血管新生关键调节因子血管生成素(Ang)1、2及其受体酪氨酸激酶受体2(Tie-2)表达的影响,探讨其可能的机制以及抗氧化剂银杏叶提取物(EGb)的干预作用。方法:选择正常大鼠肾间质成纤维细胞系(NRK-49F)为研究对象,以低糖DMEM培养液培养细胞作对照,分别用含AGEs(400mg/L)和高糖(25mmol/L)的DMEM培养液体外培养24h,用抗氧化剂EGb(100mg/L)预处理后再分别加入AGEs和高糖继续培养。采用实时定量PCR检测Ang-1、Ang-2、Tie-2,核因子κB(NF-κB)及其抑制物(I-κB)mRNA表达水平,Westernblot检测蛋白表达水平。二乙酰二氯荧光素(DCFH)染色后荧光倒置显微镜及流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果:与对照组相比,AGEs和高糖组细胞内ROS水平明显升高;且Ang-1及NF-κBmRNA和蛋白表达显著增高,I-κBmRNA和蛋白表达显著下降,Ang-2和Tie-2表达则无明显变化。EGb预处理后可降低细胞内ROS水平及Ang-1和NF-κB表达水平,提高I-κB表达水平,而对Ang-2和Tie-2表达无影响。结论:AGEs可通过增强细胞内氧化应激,抑制I-κB表达而激活NF-κB,上调Ang-1表达,参与糖尿病肾病(DN)血管新生的调控。EGb可通过减少氧化应激,上调I-κB表达,抑制NF-κB途径而下调Ang-1表达,在防治DN方面有良好的应用前景。     

辛伐他汀减轻糖基化终末产物对内皮细胞环氧化酶2表达的影响

目的 探讨辛伐他汀对糖基化终末产物（AGEs）诱导内皮细胞环氧化酶2（COX-2）表达的影响。 方法 体外以不同浓度的糖基化白蛋白（AGE-BSA）、辛伐他汀单独或联合作用于人脐静脉内皮细胞,检测细胞COX-2 mRNA的表达及培养上清液中前列腺素E2（PGE2）的含量。 结果 AGE-BSA诱导内皮细胞COX-2 mRNA的表达,作用呈剂量和时间依赖方式。辛伐他汀可降低AGE-BSA诱导的COX-2 mRNA表达及PGE2产物浓度。 结论 AGEs促进内皮细胞COX-2表达,辛伐他汀可减轻此作用。     

环氧合酶-2、核因子-κB在胃癌、癌前病变中的表达及尼美舒利逆转其表达的实验研究

目的探讨环氧合酶（COX）-2、核因子（NF）-κB在胃癌及异型增生中的表达，并研究尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2、NF-κB表达的影响。方法采用免疫组化Powervi-sionTM两步法对84例胃癌和54例胃异型增生组织中COX-2、NF-κB的表达进行检测；在体外实验中对人胃癌SGC-7901细胞采用细胞培养，MTT法检测不同浓度尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用，免疫组化、Western blot方法检测药物对COX-2、NF-κB表达的影响。结果COX-2、NF-κB在胃癌中的阳性表达率分别为66．67％、59．52％，均高于异型增生（P〈0．05），COX-2表达与肿瘤的大小、淋巴转移呈正相关（P〈0．05），并与NF-κB的表达相关（P〈0．05），COX-2与肿瘤浸润深度正相关（P〈0．05）。体外实验中结果显示尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞生长并具有浓度、时间依赖性；与阴性对照组相比，药物作用48h后尼美舒利100、200 μmol／L组COX-2、NF-κB蛋白表达明显减弱并具有剂量依赖性（P〈0．05），COX-2、NF-κB之间正相关（P〈0．05）。结论COX-2、NF-κB与胃癌的发生转移相关，并且NF-κB蛋白作为上游调控因子调节COX-2的表达。尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖，抑制COX-2、NF-κB的表达在其抑制肿瘤机制中可能具有一定作用。     

脂多糖诱导肺微血管内皮细胞炎性损伤机制的探讨

目的 探讨脂多糖诱导的肺微血管内皮细胞( PMVECs)炎性反应及可能的机制.方法 分离培养SD大鼠肺微血管内皮细胞,将其分为对照组和LPS (0.01、0.1、1、10 mg/L)干预组.酶联免疫吸附法检测细胞间黏附分子-1( ICAM-1),放射免疫法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8 (IL-8)的水平,实时荧光定量PCR检测TLR-4 mRNA的表达;蛋白质免疫印迹法检测核转录因子-κB (NF-κB)抑制蛋白IκB-α和NF-κB p65蛋白水平以及免疫细胞化学染色(NF-κB p65)观察NF-κB的活性变化.结果 与对照组比较,LPS组分泌的细胞因子显著增加并呈剂量依赖性;以10 mg/L的LPS刺激PMVECs,3种细胞因子于2、6和12 h均升高;ICAM-1、TNF-α于2h达分泌高峰,IL-8于12 h达分泌高峰;2 h TLR-4 mRNA表达明显增高达峰值,并持续12 h(分别为4.34±1.42、3.62+1.45和3.32±1.36),均高于对照组(1.00±0.00),差异有统计学意义(均P＜0.05);LPS刺激0.5、2、6和12 h后,NF-κB的活性显著增加,表现为抑制蛋白IκB-α迅速降解,p65蛋白同步释出并转入细胞核内.结论 LPS刺激PMVECs释放细胞因子,其效应并呈剂量依赖性,可能是通过激活TLR-4-NF-κB信号通路诱导了PMVECs的炎性损伤.     

PCKS9通过TLR4/NF-κB/COX-2途径调节单核-内皮细胞黏附性

目的探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是否通过人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/环氧合酶2(COX-2)途径调节单核-内皮细胞黏附性。方法氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理HUVECs,real-time PCR与Western blot法检测PCSK9、TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达;ox-LDL处理后,用人重组PCSK9蛋白孵育或PCSK9 siRNA转染HUVECs,检测TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达;ox-LDL处理后,用人重组PCSK9蛋白与TLR4抑制剂瑞沙托维(TAK-242)或NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)共同孵育HUVECs,检测NF-κB p65与COX-2的mRNA和蛋白表达;COX-2抑制剂(NS398)与人重组PCSK9蛋白先后处理HUVECs后,加入THP-1单核细胞检测单核-内皮细胞黏附性。结果 ox-LDL上调HUVECs的PCSK9、TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达(P均0.05);人重组PCSK9蛋白在ox-LDL基础上上调TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达(P均0.05);PCSK9 siRNA转染可抑制ox-LDL对TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);TAK-242抑制人重组PCSK9蛋白对TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);PDTC抑制人重组PCSK9蛋白对NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);NS398可抑制人重组PCSK9蛋白的促单核-内皮细胞黏附作用(P均0.05)。结论 PCSK9可通过TLR4/NF-κB/COX-2途径调节单核-内皮细胞黏附性。     

葡萄籽原花青素对糖尿病大鼠心肌糖基化终末产物受体和结缔组织生长因子的影响

目的 探讨葡萄籽原花青素(GSPE)对糖尿病大鼠心肌糖基化终末产物受体(RAGE)、核转录因子κB(NF-κB)和结缔组织生长因子(CTGF)的影响.方法 将链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠30只随机分为两组,糖尿病未治疗组(糖尿病1组)和糖尿病GSPE治疗组(糖尿病2组,每日给予GSPE 250 mg/kg灌胃)各15只;正常大鼠20只随机分为正常对照组(对照l组)和正常GSPE治疗组(对照2组,每日给予GSPE 250 mg/kg灌胃)各10只,24周后采血检测空腹血糖(FBG)、糖基化终末产物(AGEs),免疫组织化学染色和Western blot测定心肌NF-κB蛋白的表达,并应用Westernblot测定各组心肌RAGE和CTGF的蛋白表达变化.结果 糖尿病1组FBG、血清AGEs含量较对照1组显著升高(P＜0.05),经GSPE治疗后,血清AGEs含量显著降低(P＜0.05),而FBG降低差异无统计学意义;糖尿病1组心肌组织RAGE、NF-κB和CTGF蛋白表达较对照1组显著升高(P＜0.05),GSPE能够显著抑制RAGE、NF-κB和CTGF蛋白表达.结论 GSPE对糖尿病心肌病具有保护作用,其可能机制与抑制糖尿病大鼠AGEs-RAGE、NF-κB和CTGF的表达有关.     

辛伐他汀减轻糖基化终末产物对内皮细胞环氧化酶2表达的影响

目的探讨辛伐他汀对糖基化终末产物(AGEs)诱导内皮细胞环氧化酶2(COX-2)表达的影响。方法体外以不同浓度的糖基化白蛋白(AGE-BSA)、辛伐他汀单独或联合作用于人脐静脉内皮细胞,检测细胞COX-2mRNA的表达及培养上清液中前列腺素E2(PGE2)的含量。结果 AGEBSA诱导内皮细胞COX-2mRNA的表达,作用呈剂量和时间依赖方式。辛伐他汀可降低AGE-BSA诱导的COX-2mRNA表达及PGE2产物浓度。结论 AGEs促进内皮细胞COX-2表达,辛伐他汀可减轻此作用。     

咖啡酸苯乙酯对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子分泌的抑制作用

目的研究咖啡酸苯乙酯(CAPE)对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子分泌的影响及其可能机制。方法用不同浓度CAPE预处理THP-1源性巨噬细胞2 h,再用40 mg/L ox-LDL处理24 h,ELISA检测炎症因子TNF-α,IL-6以及MCP-1的分泌情况;用40 mg/L ox-LDL分别处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,Westernblot检测细胞COX-2蛋白表达的情况;最后,采用Western blot分析CAPE对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达、IκB-α降解及其NF-κB核转位的影响。结果 40 mg/L ox-LDL可诱导THP-1源性巨噬细胞TNF-α,IL-6以及MCP-1分泌增多,而CAPE明显抑制了ox-LDL诱导的细胞炎症因子分泌,呈浓度依赖性(P<0.05);随着ox-LDL处理时间的延长,THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达逐渐增高,以24 h最为明显(P<0.05),而CAPE能抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达上调,并可抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞IκB-α降解及其NF-κB核转位。结论 CAPE对ox-LDL诱导的巨噬细胞炎症因子分泌应具有抑制作用,作用机制可能与其抑制NF-κB激活,下调COX-2蛋白表达有关。     

戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖的影响及其调控机制

目的 探讨戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖、核因子(NF)-κΒ、环氧合酶(COX)-2表达的影响.方法 将常规培养的人肾小管上皮细胞分为正常糖、高糖和高糖加200 μmol/L戊地昔布组,72 h后收集细胞,采用流式细胞术检测细胞的增殖指数(PI);免疫细胞化学检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和NF-κB蛋白的表达变化,流式细胞术检测肾小管上皮细胞中NF-κB和COX-2蛋白的表达情况.结果 (1)与正常糖组比较,高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达增强和PI升高(P＜0.01或P＜0.05);而戊地昔布能够降低高糖培养的肾小管上皮细胞PCNA的表达和PI(P＜0.01).(2)正常糖组,NF-κB主要表达在肾小管上皮细胞的细胞浆内,而高糖组NF-κB表达增强,阳性表达主要定位于肾小管上皮细胞的细胞核内;高糖能够上调肾小管上皮细胞NF-κB活化和COX-2蛋白的表达(P＜0.01);高糖加戊地昔布组NF-κB及COX-2表达均降低(P＜0.01).(3)NF-κB和COX-2呈显著正相关;同时COX-2蛋白表达与PI呈显著正相关(P＜0.01).结论 降低NF-κB活化、下调COX-2蛋白表达从而降低肾小管上皮细胞增殖可能是戊地昔布保护糖尿病时肾脏损伤的机制之一.     

己酮可可碱对人食管癌EC9706细胞增殖及NF—κB p65、COX-2、Ki-67蛋白表达的影响

目的探讨己酮可可碱（PTX）对肿瘤细胞的增殖抑制作用及机制。方法体外培养人食管癌EC9706细胞,用不同质量浓度的PTX进行干预,采用MTT法检测细胞增殖抑制率（IR）,免疫组化染色SP法检测核转录因子-κB（NF—κB p65）、环氧化酶-2（COX-2）、Ki-67蛋白表达。结果PTX处理后EC9706细胞IR明显升高,NF-κB P65、COX-2蛋白及Ki-67蛋白表达明显下降（P〈0．05）,且呈时间-浓度依赖性。结论PTX可抑制EC9706细胞增殖,可能机制为下调NF-κB、COX-2及Ki-67蛋白表达;此为PTX治疗食管癌提供了理论依据。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠心脏微血管内皮细胞血管形成及血管内皮生长因子受体1的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子对诱导大鼠心脏微血管内皮细胞形成管腔样结构的影响,以及对血管内皮生长因子受体Flt-1的作用。方法分离、培养大鼠心脏微血管内皮细胞。应用Matrigel检测不同浓度碱性成纤维细胞生长因子作用后心脏微血管内皮细胞形成管腔的情况。逆转录聚合酶链反应检测各组血管内皮细胞Flt-1mRNA的表达量。结果应用Matrigel可诱导心脏微血管内皮细胞管腔样结构形成,随着碱性成纤维细胞生长因子浓度升高(0、51、0和20μg/L),管腔样结构形成的数量逐渐增多,当碱性成纤维细胞生长因子浓度达到40μg/L时管腔样结构的数量有所减少(P<0.05)。Flt-1 mRNA的表达量随碱性成纤维细胞生长因子作用浓度的升高(0、5、10和20μg/L)而逐渐增高,当碱性成纤维细胞生长因子浓度达到40μg/L时其mRNA水平有所降低(P<0.05)。结论应用Matrigel可在体外诱导培养的大鼠心脏微血管内皮细胞形成管腔样结构。碱性成纤维细胞生长因子对大鼠心脏微血管内皮细胞形成管腔样结构有促进作用,并在一定范围内呈剂量依赖性关系。碱性成纤维细胞生长因子影响大鼠心脏微血管内皮细胞膜受体Flt-1的表达,在一定范围内亦呈剂量依赖性,且这种剂量依赖性同微血管内皮细胞管腔样结构形成的数量一定范围内呈现一致性。     

α-硫辛酸对2型糖尿病大鼠大脑皮质的保护作用

目的探讨α-硫辛酸对2型糖尿病(T2DM)大鼠大脑皮质的保护作用及机制。方法 SD大鼠随机分为5组:对照组、糖尿病模型组、α-硫辛酸低、中、高剂量组。对照组大鼠给予普通饮食1个月后腹腔注射等体积的不含链脲佐菌素(STZ)柠檬酸缓冲液,实验组大鼠给予高脂高糖饮食1个月后腹腔注射小剂量的STZ 30 mg/kg,建立T2DM模型。α-硫辛酸低、中、高剂量组分别按15、30、60 mg/kg灌胃12 w。检测血糖和糖化血红蛋白、糖基化终末产物(AGEs)等血清指标;光镜下观察大脑皮质形态学变化;免疫组织化学法核因子(NF)-κB、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、糖基化终末产物受体(RAGE)的含量变化;Western印迹法测定NF-κB、RAGE的蛋白表达情况。结果与对照组比较,糖尿病模型组大鼠血糖值和血清糖化血红蛋白及AGEs含量明显增高(P<0.05),光镜下大鼠皮质神经元数目减少并出现退行性变,脑皮质中NF-κB、GFAP、RAGE蛋白表达显著增加(P<0.05);与糖尿病模型组比较,α-硫辛酸中剂量组血糖、血清糖化血红蛋白及AGEs含量明显降低(P<0.05),光镜下大鼠皮质神经元数目增多,病变有所改善,α-硫辛酸中剂量组NF-κB、GFAP、RAGE表达分别为2.26、160.12、2.87明显减少(P<0.05)。结论α-硫辛酸对糖尿病大鼠大脑皮质有保护作用,其机制可能与抑制血糖、糖化血红蛋白及血清中的AGEs,下调NF-κB、GFAP、RAGE的表达,改善大脑退行性病变有关。