Evaluation of a colloidal gold immunochromatography assay in the detection of Treponema pallidum specific IgM antibody in syphilis serofast reaction patients: a serologic marker for the relapse and infection of syphilis

Syphilis remains as a worldwide public health problem; hence, it is necessary to develop a new diagnostic approach that is easier and faster than conventional tests. A new testing method to detect Treponema pallidum IgM (TP-IgM), named colloidal gold immunochromatography assay (GICA), is presented in place of fluorescent treponemal antibody absorption (FTA-Abs). TP-IgM was detected using GICA developed on syphilis-specific recombinant proteins TPN17 and TPN47. The FTA-Abs IgM test was set as the gold standard. A GICA TP-IgM test was performed to detect syphilis in 1208 patients who received recommended therapy for syphilis for more than 1 year at the Xiamen Center of Clinical Laboratory in China from June 2005 to May 2009. One hundred blood donors were set up as control. The sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value, positive likelihood ratio, and negative likelihood ratio were 98.21%, 99.04%, 93.75%, 99.73%, 102.3, and 0.018, respectively. Detection on 500 interference specimens indicated that the biological false-positive rate of the GICA test was extremely low and was free from other biological and chemical factors. The patients were divided into the following experimental groups based on the results of toluidine red unheated serum test (TRUST) and treponemal pallidum particle agglutination (TPPA): (1) the syphilis serofast reaction (SSR) group consisted of 411 cases with (+) TRUST and (+) TPPA, which exhibited no clinical manifestations of syphilis after 1 year of recommended syphilis treatment; (2) the serum cure group, which was further subdivided into group A, a group that consisted of 251 cases with (-) TRUST and (+) TPPA, and (3) group B, a group that consisted of 546 cases with (-) TRUST and (-) TPPA; and (4) the blood donor control group, which consisted of 100 healthy persons with (-) ELISA-TP and (-) TPPA. We used the FTA-Abs method and the GICA method to detect TP-IgM; the positive rate of TP-IgM in 411 SSR patients was 34.55% and 36.01%, respectively. However, in serum cure group A, the positive rate of TP-IgM was 10.36% and 11.16%, respectively. The χ(2) test revealed that there is a significant difference in the positive rate between these 2 groups (P < 0.01). The TP-IgM positive rate in the same group, as detected by the GICA method and the FTA-Abs method, had no significant difference in statistics. However, as detected by the GICA method and the FTA-Abs method, all the samples in serum cure group B and the control group were negative for TP-IgM. The TP-IgM-positive result demonstrated that active T. pallidum remained in the bodies of SSR patients. In summary, the characteristics of GICA TP-IgM correspond to that of FTA-Abs TP-IgM; this can be used as a serologic marker for the relapse and infection of syphilis in place of the conventional FTA-Abs IgM test.     

3种梅毒抗体检测方法在梅毒诊断中的应用分析

目的探讨梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)、梅毒甲苯胺红血清不加热血清试验(TRUST)和梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验(TPPA)在住院肿瘤患者梅毒诊断中的临床应用,进而优化梅毒检测流程,协助临床诊断与治疗。方法用TP-ELISA和TRUST同时对住院肿瘤患者血清中梅毒抗体进行初筛,任一方法初筛阳性者均用TPPA确认;同时对梅毒抗体阳性患者的检测结果进行回顾性分析。结果 82 026例住院肿瘤患者中,TP-ELISA阳性3 618例,TRUST阳性453例,TPPA确认阳性1 684例;阳性率分别为4.41%、0.55%、2.05%;随着TP-ELISA阳性结果S/CO值的升高、TRUST阳性效价的上升,TP-ELISA、TRUST与TPPA的阳性符合率及阳性滴度也相应增加。结论 TP-ELISA检测梅毒抗体反应阳性结果S/CO与TPPA和TRUST的阳性符合率及阳性滴度呈正相关,采用TP-ELISA联合TRSUT初筛,阳性结果进行TPPA确认的检测流程,可以有效提高梅毒诊断效能和工作效率。     

梅毒螺旋体特异性IgM抗体检测的临床评价

目的探讨梅毒螺旋体特异性IgM抗体检测在各个时期梅毒诊断中的意义。方法采用蛋白印迹法(WB)检测IgM、甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST)、梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)和暗视野检查梅毒螺旋体(TP)4种方法,对21例一期梅毒患者、8例二期梅毒患者、4例潜伏期梅毒患者、3例怀疑先天性梅毒婴儿、7例正规治疗18个月后梅毒患者及5例健康对照者进行检测分析。结果一期梅毒患者组IgM、TRUST、TPPA、TP阳性率分别为100.0%、42.9%、57.1%和66.7%。二期梅毒患者组、潜伏期梅毒、先天性梅毒患者组IgM、TRUST、TPPA阳性率均为100.0%。正规治疗18个月后梅毒患者组IgM、TRUST、TPPA阳性率分别为0、28.6%和100.0%。健康对照组IgM、TRUST、TPPA均为阴性。结论梅毒螺旋体特异性IgM抗体检测灵敏度高、特异性强,适用于未经治疗的各个时期的梅毒诊断。     

梅毒血清学检测方法的准确性评价

目的 分析常规梅毒血清学检查在临床应用中敏感性和特异性的差异。方法 36例梅毒确诊患者和372例非梅毒患者来自于皮肤科、妇科和男科,血清同时用RPR法、TPPA法、TRUST法和ELISA法进行检测;另取质控血清和1份阳性血清倍比稀释后用上述方法同时检测。结果 对确诊梅毒样本和对照样本TPPA、ELISA1、ELISA2、TRUST和RPR检测的敏感性分别为：97．2％、91．7％、86．1％、72．2％和66．7％,特异性分别为：100．0％、99．7％、99．2％、93．5％和93．0％。倍比稀释后的质控血清和阳性血清最低含量检出能力依次为：TPPA〉ELISA1〉ELISA2〉TRUST=RPR。结论 病例组成和试剂质量的差异是造成各种试剂灵敏度和特异性文献报道不一的原因。     

3种梅毒血清学诊断方法在梅毒诊治中的应用价值

目的　探讨金标法、甲苯胺红不加热血清试验 (TRUST)、明胶颗粒凝集试验 (TPPA)检测各期梅毒的价值。方法　使用上述 3种方法测定了梅毒患者和健康对照组 ,比较 3种方法的假阴性率。结果　对于 4 3例梅毒患者血清的抗体测定 ,3种方法出现的假阴性率在梅毒各期不同。结论　Ⅰ期梅毒时应同时选金标法和TPPA ,金标法比TRUST更早出现阳性 ,抗体滴度低时结果更易观察。Ⅱ、Ⅲ期梅毒时 ,可选用TRUST和TP PA ,TRUST可避免前带现象 ,又可用于梅毒疗效的监测     

两种方法联合检测梅毒螺旋体抗体的临床应用

目的探讨甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)两种方法同时用于梅毒螺旋体抗体检测的重要性和必要性。方法采用TRUST和TPPA同时检测1 994例临床输血者、手术患者及皮肤科患者的血清梅毒螺旋体抗体,阳性者再进行滴度检查。结果 TRUST阳性22例,阳性率1.1%,TPPA阳性40例,阳性率为2.0%,两种方法同时阳性18例,阳性率为0.9%。结论为尽早查出病原体,防止梅毒进一步传播,同时避免不必要的医患纠纷,对输血前筛查及疑似梅毒患者宜采用TPPA,阳性者再做TRUST检测,既提高阳性检出率,又降低假阳性率。     

ELISA和TRUST法检测磷脂类抗体在梅毒诊疗中的应用比较

目的 采用ELISA和TRUST法测定梅毒患者血清中磷脂类抗体的浓度和滴度,探讨其在梅毒诊疗中的不同作用。方法 采用梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验（TPPA）、TRUST、ELISA法抗心磷脂抗体（ACA）定量法对94例梅毒患者、32例磷脂综合征患者血清进行检测。结果 94例TPPA阳性患者中。TRUST阳性83例,ACA定量（ELISA）阳性48例。TRUST阳性率88．37％,ACA定量（ELISA）阳性率51．06％。32例磷脂综合征患者血清TRUST滴度最高为1：2。其他多数为阴性;ACA均值为235u／ml。结论 （1）ACA定量（ELIsA）作为梅毒初筛试验敏感度低于TRUST试验。（2）ELISA法测得ACA浓度和TRUST滴度与梅毒的病程呈平行关系,TRUST滴度升高表明梅毒螺旋体大量增殖,ELISA法所测ACA升高提示组织细胞破坏增加。（3）在疗效观察中,特别是晚期梅毒患者,ELISA法所测ACA浓度的敏感度高于TRUST滴度。     

TPPA在梅毒临床血清学诊断和室间质评中的应用

目的评价TRUST和TPPA在梅毒血清学诊断和室间质评中的价值。方法采用TRUST和TPPA检测80例梅毒患者和67例非梅毒患者血清;1998～1999年采用TRUST检测室间质评样本,从2000年开始采用TPPA检测室间质评样本。结果梅毒患者TRUST和TPPA阳性率分别为86.3%(69/80)与100%;TRUST在室间质评样本中的敏感性44.44%,特异性90.00%,符合率68.75%,而TPPA的敏感性、特异性、符合率达到100%。两者的敏感性存在明显差别(χ2＝9.35,P＜0.01)。结论TPPA具有很高的敏感性、特异性,可作为临床诊断梅毒的首选方法。     

不同梅毒螺旋体抗体检测方法的临床应用评价

目的通过对不同梅毒血清抗体检测试验临床应用价值的评价,为临床医师合理选择梅毒血清抗体检测方法提供依据。方法使用的梅毒血清学试验分别是:梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)、胶体金层析试验、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)。结果对该院2009年7月至2010年7月输血前、手术前患者6 539例和门诊患者714例进行TP-ELISA检测,前者阳性率为1.72%,后者阳性率为21.57%。其中207例TP-ELISA阳性的患者进行了TPPA确证,阳性率为91.8%;做胶体金层析试验快速检测,阳性率为97.1%;做TRUST检测,阳性率为19.81%。对诊断为梅毒TRUST滴度大于1∶4的17例患者进行抗梅毒治疗后,14例症状消失,复检TRUST滴度小于1∶2。结论 TP-ELISA是良好的梅毒感染筛查试验;TPPA用于梅毒感染的确证能有效排除TP-ELISA和胶体金层析试验的假阳性问题,同时检测TPPA滴度可提高梅毒感染的早期诊断率;TRUST不适合用于梅毒感染的筛查,但TRUST滴度检测有利于判断疗效。     

金标法快速梅毒血清检测的评价

目的评价金标抗密螺旋体抗体胶体金快速检测试剂盒(SD syphilis 3.0)检测梅毒螺旋体抗体的可行性。方法运用金标快速SD syphilis 3.0试验与血浆反应素环状卡片试验(TRUST)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)平行检测168份高危可疑梅毒血清。结果168份高危可疑梅毒血清中,金标快速SD syphilis3.0、TRUST、TPPA阳性检出率分别为66.08%(111/168)、61.91%(104/168)、69.05%(116/168);以TPPA结果为标准,金标快速SD syphilis 3.0试验的敏感性为93.97%(109/116),特异性为98.20%(109/111)。结论金标快速SD syphilis 3.0检测梅毒抗体操作简便,具有一定的敏感性和特异性,在排除假阳性假阴性情况下是现场检测或单个患者梅毒确诊值得推广的方法。     

两种方法联合检测对早期先天性梅毒的监控和诊治价值

目的 探讨甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST) 和明胶颗粒凝集试验(TPPA)联合检测对早期先天性梅毒的监控和诊治价值,为临床诊治早期先天性梅毒提供更有价值的实验依据.方法 采用TRUST测定梅毒血清非特异类脂质抗原,采用TPPA测定梅毒血清特异性螺旋体抗体.结果 2007～2010 年受检的1 846人次中,TPPA确证的梅毒特异性螺旋体抗体阳性94 例,检出率为5.09%(94/1 846),而TPPA和TRUST同时阳性仅28例,占总受检人数的1.52%(28/1 846),提示TPPA阳性而TRUST阴性的新生儿仍要定期观察和检查,以便得到及时的诊断和治疗.94 例确证的梅毒特异性螺旋体抗体阳性标本中,TRUST阳性28例,敏感性29.79%,TRUST检出33例阳性标本中,5例经TPPA确证为阴性,特异性为84.85%,TPPA检出梅毒的阳性率明显高于TRUST,差异有统计学意义(χ2=52.41,P＜0.01).2007 年检出新生儿血清特异性螺旋体抗体阳性20例,2008年29例,较2007年增长40.0%,2009年38例,较2008年增长31.0%.由此提示新生儿先天性梅毒其发病率呈逐年上升趋势,已经成为一个不容忽视的公共卫生问题,应该引起大家重视.结论 新生儿胎传梅毒的早期诊断、早期治疗是减少甚至杜绝对患者侵害的最有效方法.母亲在妊娠期内和新生儿出生后在临床监控中同时进行TRUST和TPPA检测,既能提高梅毒血清学的阳性检出率,减少漏检和误判,也可作为观察病程和疗效的指标,以便梅毒患者能得到及时有效的诊治.TRUST 和 TPPA联合检测为临床诊治早期先天性梅毒提供更有价值的实验室依据,更有利于梅毒的监控和诊治.     

3种方法联合检测在老年梅毒诊断中的应用价值

目的探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）梅毒筛查联合梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）在老年梅毒检测中的应用价值。方法用ELISA法作为临床标本的梅毒筛查,对筛查阳性标本进一步作TRUST和TPPA检测。结果ELISA法检出78例梅毒阳性标本,TPPA确证阳性53例,阳性符合率为67．95％（53／78）;其中51例TRUST阳性,且TPPA确证试验均为阳性;27例TRUST阴性,TPPA确证25例阳性,2例为阴性。结论ELISA法筛查梅毒在老年梅毒检测中存在着较高比例的假阳性结果,ELISA阳性标本首先应做TRUST,而对TRUST阴性标本应进一步用TPPA确证,以减少梅毒的误诊和医疗纠纷。     

梅毒螺旋体抗体筛查及其临床意义

目的研究梅毒螺旋体的感染状况，探讨梅毒螺旋体抗体筛查的现实意义。方法采用酶联免疫分析法（ELIsA）检测梅毒螺旋体抗体，阳性者再使用甲苯胺红不加热血清试验（TRusT）和梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）做进一步检测。结果5998例住院患者ELISA法共检测出阳性86例，TPPA法检测出阳性78例，TRUST法检测出阳性22例。高龄（〉70岁）患者的阳性检出率高于其它年龄组。结论住院患者常规筛查梅毒螺旋体抗体可有效检测出隐性梅毒患者，不仅可以早诊断、早治疗，减少医疗纠纷的发生，也可以预防院内交叉感染。     

全自动粒子化学发光法在梅毒抗体筛查中的应用与分析

目的评价威高Autolumis 3000微粒子化学发光分析仪在梅毒特异性抗体筛查试验中的特异度。方法对梅毒特异性抗体的检测结果进行回顾性分析。采用威高Autolumis 3000梅毒特异性抗体检测试剂,对2018年3月至2019年3月大连医科大学附属威海市立医院36854例患者的血清标本进行检测。对初筛结果阳性标本附加甲苯胺红不加热血清试验(TRUST),再采用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)进行复检,并对TPPA试验复检结果为阴性的样本采用免疫印迹法(Western blot)进行确证。采用SPSS软件进行检测结果的数据统计分析。结果36854份血清标本中,微粒子化学发光免疫法共初筛检出阳性标本544份。TRUST试验复检阳性314份,阴性230份。经TPPA试验复检后,检出阳性标本526份,阴性标本18份;对18份TPPA阴性结果的血清标本,采用Western blot试验确证,检测结果为阳性2份,不确定样本5份,阴性11份。Autolumis 3000微粒子化学发光法检测梅毒特异性抗体的特异度为99.97%。结论微粒子化学发光免疫法检测梅毒特异性抗体的特异度高,对初筛阳性标本选用TPPA试验作为补充试验进行复检,可有效提高梅毒检出的准确性。     

3种梅毒血清学方法筛查血液的效果评价

目的通过对梅毒3种方法的比较,选择适合血液筛查的最佳方法,防止梅毒经血液传播。方法用酶联免疫吸附试验双抗原夹心法（TPELISA）、甲本胺红不加热血清反应素试验（TRUST）、梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）平衡检测献血者血样2000例,TP—ELISA和TRUST阳性标本用TPPA法确证。结果2000例标本,TP-ELISA法检测阳性11例,经TPPA法确证阳性8例;TRUST法检测阳性2例,经TPPA法确证均为阳性;TPPA法检测阳性8例;TRUST与TP-ELISA法比较差异有统计学意义（P〈0．05）;TRUST法和TP—ELISA法的灵敏度分别是25％、100％。结论TP—ELISA法检测梅毒具有灵敏度高、特异性好,适合于大批量样本的集中化和自动化检测等特点,是献血者血液筛查的理想方法。TRUST法灵敏度低,漏检率高,不适于献血者血液的筛查,TPPA法只适用于梅毒阳性标本的确证。     

口岸出入境人群梅毒感染检测方法比较

目的探讨适合口岸出入境人群检测梅毒的方法。方法采用国产酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂与甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）和梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）进行血清学方法比较,采用聚合酶链反应（PCR）对梅毒患者生殖道皮损渗出液进行检测,分析其传染性。结果国产ELISA试剂与TPPA检测结果阳性符合率为96%（263/273）,2种方法对273例标本的检测结果差异无统计学意义。而TRUST和TPPA检测结果差异有统计学意义,与ELISA检测结果差异亦有统计学意义。PCR检测29例梅毒患者生殖道皮损渗出液和100例初筛阳性血清标本,生殖道皮损渗出液与临床诊断符合率为100%,血清检测结果均为阴性。结论ELISA可替代TRUST和TPPA作为梅毒感染的筛查方法。PCR不能作为出入境人员梅毒传染性判断的方法。     

抗梅毒治疗对妊娠结局及新生儿预后的影响

目的探讨抗梅毒治疗对妊娠梅毒患者的妊娠结局及新生儿预后的影响。方法对2013年1月-12月分娩的5 224例孕妇资料进行分析。所有孕妇均经过甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）进行筛查,筛查阳性者再进行滴度检测和梅毒螺旋体被动颗粒凝集试验（TPPA）确诊妊娠合并梅毒患者128例。根据其是否经产前检查并治疗分为治疗组（79例）和未治疗组（49例）,观察并比较两组孕妇的结局及新生儿情况。结果两组孕妇妊娠结局差异较大,但差异无统计学意义（χ2=3.34,P〉0.05）;而两组新生儿预后情况比较则差异有统计学意义（χ2=9.14,P〈0.05）;且两组新生儿出生后立即取静脉血做血清学检测（TPPA和TRUST）,其TPPA均为阳性,TRUST阳性85例。结论孕前、孕早期进行梅毒筛查,早期发现妊娠梅毒者进行规范的抗梅毒治疗,对降低流产、死产、胎儿畸形和新生儿先天梅毒发生率具有重要意义。     

早期皮损组织液的定量PCR检测在梅毒诊断中的价值分析

目的探讨早期皮损组织液的荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测在梅毒诊断中的价值。方法选择2014年9月至2016年9月该院收治的40例疑似梅毒患者,患者在判断为疑似病例后,于次日清晨抽取5mL静脉血送至免疫实验室,进行甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、梅毒螺旋体抗体ELISA检测;并收集皮损组织液,进行FQ-PCR检测;均采用苄星青霉素治疗3、6个月后再次检测,记录转阴率。结果 ELISA、FQ-PCR总检出率比较,差异无统计学意义[97.50%(39/40)与95.00%(38/40),P0.05];ELISA、FQ-PCR总检出率均明显比TRUST总检出率高,差异有统计学意义[97.50%(39/40)与67.50%(27/40),95.00%(38/40)与67.50%(27/40),P0.05];在治疗后3个月、6个月时,ELISA、FQ-PCR转阴率均明显高于TRUST,差异有统计学意义(P0.05),FQ-PCR转阴率和ELISA比较,差异无统计学意义(P0.05);在FQ-PCR检测结果中,治疗后TP-DNA定量平均值均得到明显降低,Ⅰ期、Ⅱ期和治疗前比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论采用早期皮损组织液FQ-PCR可有效测定梅毒螺旋体DNA,有利于梅毒诊断,临床应用价值高。     

Evaluation of three automated Treponema pallidum antibody assays for syphilis screening

The accuracy of the test is critical for the syphilis serology diagnosis. This study aims to evaluate the values of the Elecsys syphilis assay, the Architect syphilis assay, and the Mindray syphilis assay, as syphilis screening tests for pregnant women and patients with syphilis or other diseases. A reverse algorithm was used for the syphilis serology diagnosis. Serum samples (n = 584) were tested with three automated screening assays. All reactive sera by one, two, or three screening assays were further analyzed with the tolulized red unheated serum test (TRUST). Inconsistent results were confirmed by the Treponema pallidum particle agglutination assay (TPPA). The final patient diagnosis was made according to the results of syphilis serology, clinical evidence, and past medical history. The sensitivity, specificity, accuracy, and kappa value of each assay were as follows: for the Elecsys syphilis assay, 100.0%, 98.5%, 98.6%, and 0.927, respectively; for the Architect syphilis assay: 100.0%, 94.5%, 95.0%, and 0.770; and for the Mindray syphilis assay: 100.0%, 97.0%, 97.3%, and 0.862. The McNemar test showed that there were significant differences in the performance between the Elecsys syphilis assay and the Architect syphilis assay (P < 0.001), and between the Mindray syphilis assay and the Architect syphilis assay (P = 0.001). Our study demonstrated that three automated Treponema pallidum antibody assays generally showed high sensitivities and specificities, and so, they are suitable for use in screening for syphilis. The performances of the Elecsys syphilis assay and the Mindray syphilis assay are superior to Architect syphilis assay.     

不同梅毒血清学检测方法的比较及临床应用

目的 探讨3种不同的梅毒血清学检测方法在梅毒诊断和治疗中的临床价值.方法 对本院2008～2010年6 614份输血前筛查和性病门诊标本同时用梅毒酶联免疫吸附试验(ELISA)和梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)进行检测,对ELISA法和TPPA法阳性的标本再分别进行甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)检测其滴度.结果 ELISA法检测出247份阳性,TPPA法检测出244份阳性,TPPA法阳性标本ELISA法检测均为阳性,符合率为98.78%,两种方法检出率比较差异无统计学意义(P>0.05);对ELISA法阳性标本用TRUST法检测出136份阳性,符合率55.06%;TPPA法确证实验阳性的标本TRUST法检测出136份阳性,符合率55.74%;TRUST法与ELISA法和TPPA法检出率比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 由于梅毒检测方法众多,且各种方法的敏感性和特异性也不尽相同,通过对3种检测方法的比较分析,在进行梅毒的诊断和治疗中,应联合使用不同的梅毒血清学方法进行检测.