HE染色切片褪色后免疫组织化学染色抗原修复方法

经甲醛固定的组织,由于各种交联键的形成,引起蛋白质的空间结构的改变,最终导致部分或全部的抗原决定簇被封闭,从而影响免疫组织化学检测的敏感性。因此,进行免疫组织化学检测时,绝大多数抗体需要进行抗原修复,以达到最理想的检测效果。为了防止脱片,用于免疫组织化学检测的组织切片几乎都是硅化玻片捞贴的,而普通玻片（即未经APES胶或多聚赖氨酸处理的玻片）捞贴的并已做HE染色的组织切片能否用于免疫组织化学检测？其处理方法与硅化玻片捞贴的组织切片是否一致？我们在这方面做了些尝试,现总结如下。     

免疫组织化学染色的定量方法研究

本文提出阳性单位新概念，用于定量表达免疫组化阳性反应程度。本文将排除了切片或涂片本底因素后的纯免疫组化反应程度按灰度图像分为０（白）到１００（黑）个等级，第一等级定义为１个阳性单位，导出公式如下：１．ＰＵ＝１００（Ｇａ－Ｇｂ）／Ｇｍａｘ；ｂ．ＰＵ＝１００（ＧＡ－ＧＢ／（ＡＡａ．Ｇｍａｘ）。式中Ｇａ，Ｇｂ分别为待测结构α和背景β的平均灰度，ＧＡ为含有α和β的Ａ区域的平均灰度；Ｇｍａｘ为检测仪器的最大     

组织标本固定方法与免疫组织化学染色效果的关系

免疫组织化学技术是免疫学与分子生物学技术和病理形态学相结合的一门新兴学科 ,它是用已知抗体 (或抗原 )检测组织细胞中的未知抗原 (或抗体 )的技术。具有操作简单 ,敏感性高 ,特异性强 ,能将形态和机能密切结合起来等优点 ,已广泛用于病理诊断 ,鉴别诊断及组织胚胎 ,神经解剖等相关学科的研究之中。由于免疫组织化学试剂商品化进程加快 ,特别是即用型试剂和试剂盒的使用 ,使抗体的质量控制有可能规范化、标准化。然而在实际工作中 ,显示抗原抗体结合反应质量不稳定的情况时有发生 ,虽然影响免疫组织化学染色结果的因素较多 ,但作者认为如…     

影响免疫组织化学染色结果的各种因素

影响免疫组织化学染色结果的各种因素倪灿荣随着标准化免疫组化试剂的商品化，敏感而特异的方法的不断推出，使得我国免疫组化有了今天大的发展。由于免疫组化要靠人工去完成，存在经验和理解上的差异；另外，免疫组化的试剂远没有达到标准化。例如同一种抗体，使用相同的...     

免疫组织化学标记结果的判断方法

免疫组织化学在肿瘤病理诊断和鉴别诊断中广泛应用 ,但对其标记结果的认定判断尚不一致 :同一染色切片 ,有的说是阳性 ,也有的说是阴性 ;或同一阳性结果 ,可有不同程度的判断结果 ;在阳性程度划分上也分歧较大 ,而且因判断标准不同 ,得出的结果则相反。这是目前免疫组织化学检测中十分重要的问题。目前对免疫组化染色阳性标准尚不一致 ,有的以阳性细胞数目计算 ,有的以染色强度判断 ;具体在阳性细胞百分率和阳性程度认同上也存在的差异 ,给临床医师对其结果的理解带来了困难。肿瘤病理诊断以 ( - )、( )表示免疫组化结果 ,临床医师不难理…     

免疫组织化学三重染色技术

免疫组织化学三重染色技术是一种可以在同一张组织切片上显示3种抗原的技术方法。该法既可用于常规病理诊断,亦可进行科研课题的研究,因此具有很强的实用价值。     

免疫组织化学方法辅助诊断双癌

传统的病理诊断主要依赖于光镜下组织形态学改变。随着技术的进步及对疾病认识的深入 ,对肿瘤来源和分化的不断探讨 ,普通光镜下ＨＥ切片的观察有时难以做出满意的诊断 ,因而不能满足当今病理诊断的要求。一些新技术如电子显微镜、免疫组织化学以及基因分析等的应用能使我们在不同角度上对疾病有更深刻的认识 ,因而它们也在现代病理诊断中占有越来越重要的地位。我们仅介绍实际工作中应用免疫组织化学方法辅助诊断的一个实例 ,供大家参考。临床病史 :患者女 ,5 2岁。绝经 4年 ,阴道流血 7个月 ,下腹持续性坠胀感 1个月 ,伴排便困难及体重下…     

组织固定对免疫组织化学染色的影响

影响免疫组化染色结果的因素较多 ,从组织离体到取材前对组织进行预处理能大大改善免疫组化结果。作者在这方面进行了摸索 ,现将有关体会介绍如下。1　材料与方法1 1　 标本　所有组织均选用 1999年 4～ 7月本校附属湘雅医院外科手术切除的乳腺癌、肝癌及肺癌根治术标本各 2 0例。每例标本均见明显的肿块。1 2　组织处理方法　手术标本从外科送病理科后立即从肿块中央切开 ,把组织分为两部分 ,一部分置原固定液中 (组织离体后已置固定液中 )不作任何处理 (未处理组 ) ;另一部分按下列方法进行处理 (处理组 ) :(1)用脏器刀将组织切开 ,每刀之…     

网状纤维和α-平滑肌肌动蛋白/ED-1免疫组织化学双重染色方法

在同一张组织切片上探讨两种或两种以上的组织成分或抗原成分的相互关系时,可以采用双重染色方法。网状纤维是构成组织的网状支架,广泛分布于实质性脏器中,其中最丰富的区域是肝、脾、淋巴组织、骨髓、基底膜和血管等处。网状纤维染色方法是一种组织化学方法,利用此方法可以显示和判定病变组织支架的破坏情况及纤维组织的增生情况。免疫组织化学是利用抗原抗体反应来定位组织和细胞中的某种抗原或抗体成分的一种方法。网状纤维和免疫组织化学双重染色方法的应用可以阐明网状纤维和所要观察的免疫组织化学阳性蛋白或细胞之间的关系。此方法已得到一些同行专家的认可怛引。     

免疫组织化学染色的干扰因素及其处理

免疫组织化学（IHC）技术在病理工作中已得到广泛应用,成为当前病理工作中不可或缺的手段,在疾病诊断、判断预后、指导临床治疗、了解发病机制和检测病原体等方面起着重要的作用。但是免疫组化是一种多步骤、多因素决定的实验方法,存在很多干扰因素,甚至会出现不理想的染色结果,从而导致误判和误诊。为了制作出优良的IHC切片,提高病理诊断水平,病理技术人员和病理医生都应该了解IHC的原理和技术,提高制片水平和判断能力。本文就IHC染色的干扰因素及其处理方法进行分析和总结。     

弹力纤维染色与免疫组织化学双重染色技术

我们采用Gomori醛品红弹力纤维染色法和免疫组织化学SP法结合的双重染色方法 ,可同时显示血管壁上的弹力纤维和某些抗原成分 ,效果满意 ,介绍如下。一、材料与方法1.材料 :大鼠髂动脉粥样硬化标本 35份 (例 ) ,经 4 %甲醛固定 ,常规脱水、石蜡包埋 ,切片厚 5 μm。2 .试剂 :(1)醛品红染液 :碱性品红 0 .5g ,70 %乙醇10 0ml,浓盐酸 1ml,三聚乙醛 1ml,将碱性品红溶于 70 %乙醇 ,然后加入浓盐酸混合均匀后 ,加入三聚乙醛 ,轻轻摇动使混合均匀 ,于室温下静置 2d ,成熟时呈深紫色。过滤于小口砂塞瓶 ,置冰箱备用。 (2 ) 70 %乙醇。 (3)免疫组织…     

弹性蛋白免疫组织化学染色与醛复红弹性纤维染色方法的比较

传统的显示弹性纤维的Gomori醛复红染色法(简称醛复红法)步骤简单、结果稳定,故使用较为广泛。弹性蛋白免疫组织化学染色法特异性强,但需要昂贵的抗体,且操作过程耗时长。我们发现,这两种方法的染色结果具有相同性,又具有一定的差异,特作此比较。     

原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法的研究

介绍一种用原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法在同一切片中显示生长抑素ｍＲＮＡ和相对应的生长抑素。同时还比较了六种不同固定液对原位杂交组织化学和原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法的影响。结果表明Ｚａｍｂｏｎｉ氏固定液用于原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法最佳，而４％多聚甲醛磷酸缓冲液用单纯原位杂交最佳。原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法显示的下丘脑室周核生长抑素免疫反应阳性神经元均含有相应生     

TUNEL与免疫组织化学双染色技术的应用

TUNEL作为一种敏感性高、使用方便的检测细胞凋亡的技术方法早已被广泛应用。但是,我们在实际工作中往往还要使用多种其他技术方法展开多层次的研究,以解决凋亡细胞的组织来源、形态学定位和其调节机制等诸多问题。对此,笔者参考文献[1,2],在同一组织切片上进行TUNEL和免疫组织化学双重染色,获得了比较理想的结果。     

指甲油替代免疫组织化学PAP笔的使用方法

免疫组化染色时 ,应用免疫组织化学ＰＡＰ笔在组织周围画圈 ,以便在染色操作过程中比较方便地逐步滴加抗体 ,一是保证足够的抗体均匀地滴加在组织上 ,避免组织因抗体弥散流失而影响染色结果 ,二是节约试剂 ,降低成本。然而ＰＡＰ笔国内没有厂家生产 ,全需购买国外生产的产品 ,价格比较昂贵 ,并且时常受到生产、订货等一些环节因素的影响 ,而导致国内市场缺货 ,给免疫组织化学染色操作带来不便。我们在免疫组织化学染色操作中使用指甲油来代替ＰＡＰ笔 ,使用效果较好 ,价廉物美 ,有推广应用价值。现介绍如下。　　购买优质的无色 (浅色 )指甲…     

免疫组织化学染色中不同返蓝液效果评价

<正>免疫组化是通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,利用带显色剂标记的特异性抗体(或抗原)对组织细胞内相应的抗原(或抗体)进行定性、定位、定量检测的一项技术[1-2],是病理科最常用的确诊疾病和诊断疑难病例的一种辅助检测手段[3-4]。免疫组化操作步骤包括抗原修复、抗体孵育、DAB显色、苏木精复染、分化、返蓝等[5-7],每一步都会影响切片的评片等级(如优秀、良好、合格及不合格),良好及以上的评片标准中不仅要求抗原定位准确、阳性着色与背景对     

免疫组织化学抗原修复处理方法的改进

免疫组织化学抗原修复处理方法的改进韩昱晨贾心善（中国医科大学分子病理研究室沈阳１１０００１）免疫组化染色的成败，很大程度上取决于组织内抗原的保存及暴露，在用１０％福尔马林固定组织时，由于蛋白质的交联反应而导致了组织内蛋白抗原被封闭，以致影响抗原的显露...     

提高免疫组织化学表达肿瘤基因效果的方法

用免疫组化方法检测肿瘤基因 ,阳性率偏低的主要因素是ＤＮＡ双股螺旋没解开 ,碱基对不能外露。根据原位杂交技术 ,用盐酸水解蛋白质 ,高温使ＤＮＡ解链 ,快速冷却让自由单链成线团结构 (变性 ) ,再用氢氧化铝钾修复和聚集抗原 ,造就了抗原与抗体在分子表面互补性结合的环境。结果显示免疫组化法表达的肿瘤基因有较高的阳性率 ,特别是阳性物质如ＥＲ、ＰＲ受体 ,ｐ16、ｐ5 3蛋白 ,Ｋｉ6 7,ｃ ｍｙｃ等能准确的表达于细胞核。1　材料与方法1 1　材料　　 80例乳腺癌 ,5 0例肝癌 ,4 0例大肠癌 ,均属我院手术切除标本 ,常规 10 %福尔马林液固定…