大鼠树突状细胞单抗生物学特性的实验研究

将分泌抗大鼠树突状细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株，接种ＢＡＬｂ／ｃ小鼠腹腔，取腹水用正辛酸沉淀法纯化得到单克隆抗体ＷＺＤ３。应用该单抗阻断试验，探讨ＷＺＤ３对树突状细胞参与的淋巴细胞转化试验及混合淋巴细胞培养的影响。实验结果显示，树突状细胞在两种反应系统中的作用受到明显抑制，其抑制程度随ＷＺＤ３稀释度的增加而降低，在淋巴细胞转化试验中的最大抑制率达９６．４％。     

CIK细胞的生物学特性及荷瘤鼠体内分布特点研究

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)在荷瘤鼠体内的分布规律。方法:用MTT比色法测定CIK细胞对Hela-luc细胞的杀伤作用。以人宫颈癌细胞Hela-luc接种BALB/c裸鼠建立动物模型。体外培养CIK细胞后以荧光染料CFSE标记,经不同途径注射入荷瘤鼠体内。用激光共聚焦显微镜和流式细胞技术检测方法分析CIK细胞在各器官的分布情况。结果:CIK细胞在体外培养14～18天时,细胞数量生长达高峰,此时CD3+CD56+T细胞的数量也达最高值。以10∶1、20∶1、40∶1的比例将效、靶细胞作用48小时后,CIK细胞对Hela-luc细胞的杀伤率分别为(24.08±3.18)%、(51.16±2.64)%、(72.14±4.21)%。CIK细胞经腹腔注射,肿瘤组织24小时达到最高(20.56%),瘤旁注射,肿瘤组织3小时达到最高(25.75%)。结论:CIK细胞在体外对宫颈癌Hela-luc细胞有较强的杀伤作用。CIK细胞在体内分布于肺、肝、肿瘤部位,其分布在各脏器中浓度规律与不同的输注途径有一定关系。针对不同解剖部位的肿瘤可以选择不同的CIK细胞输注途径以最大限度地提高疗效。     

TFPI-2对缺氧大鼠星形胶质细胞生物学特性及机制的研究

目的:研究组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)对缺氧大鼠星形胶质细胞生物学特性的影响,探讨其对大鼠星形胶质细胞缺氧保护的机制。方法:从大鼠脑组织中分离培养星形胶质细胞,将细胞作缺氧处理,分别采用qRT-PCR和Western blot法检测星形胶质细胞中TFPI-2表达水平。在星形胶质细胞中转染TFPI-2 siRNA后,采用qRT-PCR和Western blot法检测TFPI-2基因沉默效果,MTT检测星形胶质细胞增殖,流式细胞术检测星形胶质细胞凋亡情况,qRT-PCR检测星形胶质细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)mRNA表达水平。结果:Hypoxia组星形胶质细胞中TFPI-2 mRNA水平和蛋白水平明显高于Control组星形胶质细胞,转染TFPI-2 siRNA后,si-TFPI-2组星形胶质细胞中TFPI-2 mRNA和蛋白表达水平明显低于si-control组细胞,差异有统计学意义(P0. 05)。缺氧星形胶质细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中β-catenin、c-myc、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,与正常培养的星形胶质细胞比较,差异有统计学意义(P0. 05)。对缺氧星形胶质细胞敲减TFPI-2后,细胞存活率升高,细胞凋亡率和细胞中β-catenin、c-myc、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平降低,与缺氧星形胶质细胞比较,差异有统计学意义(P0. 05)。结论:下调TFPI-2可以促进缺氧星形胶质细胞增殖,抑制细胞凋亡,其作用机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

星形细胞瘤与胚脑星形细胞的电镜对比观察

用光镜及电镜观察了６０例脑星形细胞瘤及８例早期人胚脑及神经管组织。结果显示：瘤细胞超微结构可分五型，即未分化细胞、前星形细胞、星形细胞、胖细胞及瘤巨细胞。与胚脑发生中的星形细胞相比较，瘤细胞有类似发生中星形细胞相应各个阶段的分化。不同之点是瘤细胞常呈不典型性，形态畸变、染色质增多、核浆可呈不同步分化等。基于上述观察，我们对传统的星形细胞瘤命名及分类作了评价，并对分类提出看法。     

星形胶质细胞谱系及星形细胞瘤起源的研究

各种神经胶质细胞中数目最多、分布最广的星形细胞担负了神经胶质细胞的大部分功能。根据对两种神经组织标志物─ＧＦＡＰ、Ａ－２Ｂ－５抗体的反应不同，将星形细胞分为１型（ＧＦＡＰ＋Ａ－２Ｂ－５－）和２型（ＧＦＡＰ＋、Ａ－２Ｂ－５＋）。研究指出两型星细胞来源于不同祖细胞，而存在两个谱系，星形细胞胶质瘤与星形细胞具有同样的谱系源。对小胶质细胞在星形细胞发生和分化中的作用亦予以阐述。     

星形胶质细胞的神经干细胞特性

胶质细胞是脑内数量最多的细胞,它与神经元之间的相互联系是在发育期就精确建立的。不同神经元的功能已有较深入的研究,与之相比,胶质细胞仍是非常神秘的细胞,特别是星形胶质细胞,除了对神经元提供重要的结构、代谢、营养支持外,它与神经元之间复杂的相互联系仍不清楚。本文将对星形胶质细胞作为神经干细胞／祖细胞这一最新发现作一综述。     

脐带间充质细胞生物学特性及应用研究

间充质细胞是来源于中胚层的一种能自我更新和具有多向分化潜能的成体干细胞,存在于全身结缔组织和器官中。间充质细胞呈典型的成纤维状,高表达间质细胞标志蛋白CD44,CD90和CD105,不表达造血系标志蛋白CD34和CD45。间充质细胞经诱导培养不仅能分化成骨细胞,软骨细胞,干细胞,心肌细胞等,也可以分化成多巴胺能神经元等。人脐带间充质细胞与其他来源的间充质细胞相比,具有来源广,免疫原性低,避免伦理学问题等诸多优点。因此,脐带间充质细胞作为临床细胞治疗和组织再生的一个理想来源而越来越受关注。     

树突状细胞的生物学特性及临床应用

1 引言肿瘤的免疫治疗是目前肿瘤临床治疗的重要趋势，其中主动免疫的方法之一是通过注射抗原提呈细胞刺激淋巴细胞产生抗肿瘤效应。树突状细胞(Dendritic Cell, DC)被认为是最佳的抗原提呈细胞。树突状细胞在非淋巴组织内吞噬抗原物质，与MHC抗原结合，将抗原信息表达于细胞表面，通过血液或淋巴液迁徒至淋巴组织，激活初始淋巴细胞，产生免疫反应[1]。另一方面树突状细胞又具有免疫耐受功能，可用于控制免疫损伤反应。近些年，从骨髓或外周血体外诱导生成一定数量的树突状细胞供生物学研究乃至临床应用已成为现实[2，3]。树突状细胞生…     

睾丸支持细胞的生物学特性及研究进展

背景:睾丸支持细胞已成为细胞培养技术、组织工程及器官移植领域的研究热点之一,在临床移植领域中有良好的应用前景。目的:就国内外对睾丸支持细胞的生物学特性及临床应用进展作一综述。方法:应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1998-01/2009-10关于睾丸支持细胞的文章,在标题和摘要中以免疫豁免;移植;功能;研究进展或immune privilege;transplantation;function;progress of investigate为检索词进行检索。选择文章内容与睾丸支持细胞有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。初检得到215篇文献,根据纳入标准选择关于睾丸支持细胞的34篇文献进行综述。结果与结论:睾丸支持细胞具有分泌多种营养因子和免疫豁免功能,为器官移植、帕金森病及糖尿病等疾病的治疗提供了新的治疗途径,对睾丸支持细胞的研究已经取得了一系列可喜的成果,将会给人类临床事业的发展作出巨大贡献,尤其随着组织工程和器官移植研究的发展,睾丸支持细胞在临床治疗中的应用必将更加广泛。     

鼠抗人CD28分子单克隆抗体的研制及生物学特性研究

目的 制备鼠抗人CD28分子的单克隆抗体（mAb),研究其在T细胞的活化、增殖及信号传导中的作用。方法 以小鼠淋巴瘤细胞转染人CD28基因的细胞株（CD28-T）为免疫原,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,获取分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株,以体内诱生法生产腹水,并以免疫亲和层析法对其纯化,以快速定性试纸法鉴定mAb的Ig亚类,竞争抑制法分析mAb识别的抗原表位,3H-TdR掺入法研究mAb对T细胞的刺激效应,结果 成功地获得了5株分泌特异性抗入CD28mAb的杂交瘤细胞株,鉴定的1株（克隆18G8）属IgG2a,腹水效价（流式细胞仪分析）达1：2400以上,该mAb能60%阻断标准鼠抗入CD28抗体与相应抗原的结合,提示其识别的抗原表位与标准mAb不完全相同,mAb18G8可取代B7-1分子介导的协同刺激信号,促进人外周血T细胞增殖（ST=7）。结论 18G8是12株功能性mAb,具有重要的研究和应用价值。     

肝星形细胞具有干细胞样特性

肝星形细胞(hepatic stellate cells,HSC),又称Ito细胞、维生素A储存细胞、脂细胞(lipocyte)、窦周细胞(perisinusoidal cell)等,在肝纤维化的发生发展过程中处于中心地位.作为肝的一种间质细胞,HSC同时兼有成纤维细胞、脂肪细胞和肌细胞的特征,能产生多种细胞外基质( extracellular matrix,ECM)组分.既往研究过于重视HSC在肝纤维化形成中的生物学效应,忽略了其他方面的特征.近来很多研究显示HSC与干细胞(stem cells,SC)在多个方面有着惊人的相似.于是干细胞与HSC的关系以及肝纤维化形成中的干细胞机制开始受到人们的关注,现就近年国内外的相关研究进展做以下综述.     

妊娠期uNK细胞与pNK细胞的生物学特性研究

 目的：研究妊娠期子宫NK细胞（uNK细胞）与外周血NK细胞（pNK细胞）的生物学特性，比较两者在生理学功能上的差异。方法: 用免疫磁珠(MACS)技术分离并纯化pNK细胞与uNK细胞，流式细胞仪检测其纯度， MTT法检测两者的杀伤功能与增殖活性，RT-PCR技术检测uNK细胞与pNK细胞趋化、侵袭、促血管形成等生物学活性。 结果: 通过MACS技术可得到纯度较高的NK细胞，pNK细胞对K562的杀伤活性高于uNK细胞,但其增殖活性较uNK细胞低。uNK细胞与pNK细胞均能分泌一些血源性生长因子，并能表达某些趋化因子受体, 其中PIGF 及 AngⅡ mRNA 仅在uNK cells检测到。 结论: uNK细胞的功能与pNK细胞相比具有某些独特性，这可能是由于妊娠子宫独特的微环境所致。     

鼠骨髓来源的内皮祖细胞的体外培养及生物学特性的研究

培养和鉴定从鼠骨髓中分离的内皮祖细胞（EPCs），观察其在体外增殖、分化过程中相关细胞表型的变化。采用密度梯度离心方法获得鼠骨髓单个核细胞，用EGM-2培养基诱导其分化，于培养4d、7d、10d、14d、21d后用免疫荧光双标技术（CD34、VWF和FLK1）鉴定EPCs，用MTT法分析EPCs的增殖情况。于诱导分化后的1d、4d、7d、10d、14d、21d，用蛋白免疫印迹法检测VWF蛋白的水平，用实时聚合酶链式反应法检测VEGFR 2（FLK1）、VWF的mRNA表达变化，并与未诱导培养的细胞进行比较。鼠骨髓单个核细胞经诱导培养，4d细胞开始贴壁，7d细胞大多变为梭形，排列成铺路石样。MTT结果表明，10d时EPCs达到增殖高峰（P〈0．05）；免疫染色表明，培养7d的细胞约90％呈VWF—CD34双荧光阳性；蛋白免疫印迹法检测结果表明，培养1d的细胞无VWF表达，培养4d后表达逐渐增强，10～14d达到高峰，21d后减弱；实时聚合酶链式反应法检测结果表明，培养1d的细胞FLK1和VWF的mRNA表达低（P〈0．01），4d后表达逐渐增强，14d达到高峰，21d后减少，未诱导细胞无表达。试验成功地从鼠骨髓单个核细胞中分离培养出EPCs，在其体外扩增分化为成熟内皮细胞的过程中，P0～P3在1～21d期间FLK1和VWF等内皮细胞标志蛋白表达逐渐增强，P3在21d后略有下降。该细胞可作为构建血管组织工程支架的较为理想的种子细胞。     

脑内星形胶质细胞在实验室培育成功

据美国物理学家组织网5月22日报道,美国科学家在22日出版的《自然-生物技术》杂志上报告称,他们在实验室培养皿中,诱导胚胎干细胞和诱导成体干细胞成功培育出大脑内最常见的细胞——星形胶质细胞,新研究对神经系统失调等疾病的治疗具有重要意义。     

脑胶质瘤浸润淋巴细胞的生物学特性

本文应用酶消化和不连续密度梯度离心方法,从9例原发性脑胶质瘤中分离出肢质瘤浸润淋巴细胞(GIL),并对其生物学特性进行分析,结果为:GIL体外长期培养生长能力强于LAK细胞;GIL的NK活性和产生γ-干扰素能力低下,经IL-2培养激活后,NK活性和产生γ-干扰素能力显著提高;GIL中71.0±11.9痞为CD_8~+的T淋巴细胞,其中CD_8~+细胞多于CD_4~+细胞。结果表明浸润在胶质瘤内的淋巴细胞功能低下,缺乏直接和间接杀伤肿瘤细胞活性。经IL-2激活后,GIL的抗肿瘤活性显著增强,可作为免疫治疗肿瘤的效应细胞。     

胚胎肝脏原始细胞表型及生物学特性

背景:目前肝干细胞尚无特异性标志物,从胚胎中建立具有干细胞样特性的肝脏原始细胞群是鉴定及研究肝干细胞的一个可行方法。目的:观察胚胎肝原始细胞表型及生物学特性,寻找肝原始/干细胞候选细胞群。方法:酶消化法分离、培养孕13.5d的BALB/C小鼠胚胎肝原始细胞,免疫细胞化学染色及免疫荧光染色、Western blot、RT-PCR法测定AFP/Albumin/CK19/c-Met/E-cadherin等肝干细胞表面标记,以及CD45、CD14、SMA等非肝干细胞标记的表达;相差显微镜及透射电镜观察细胞形态结构;流式细胞仪测定细胞周期分布时相;表皮生长因子加二甲基亚砜诱导分化成熟后行PAS糖原染色。结果与结论:实验成功分离得到纯度较高的干细胞,原代细胞多呈集落样生长,小圆形。细胞周期测定提示细胞多数处于静止期,符合干细胞特点。透射电镜观察细胞核浆比例大,细胞器不成熟,呈现原始细胞特点。流式细胞周期测定结果S期占10.8%,G2/M期占10.6%,无异常DNA含量。PAS染色后阳性对照组肝癌细胞的糖原主要表达在靠近一侧的核周边胞质内,呈强阳性;而胚胎肝前体细胞诱导组,核浆比例大,部分细胞胞质内可见较弱的糖原表达,充满胞质。提示实验初步建立表达AFP+Albumin+CK19+c-Met+E-cadherin+标志的集落样生长的肝原始细胞群,其表达多种干细胞表型,具有未成熟肝干细胞特点,可能作为肝干细胞候选细胞。     

Th17细胞的生物学特性

近年来发现有一种不同于Th1和Th2细胞、产生IL-17的Th细胞亚群:Th17。其在促炎症反应和自身免疫病中发挥重要作用。IL-6和TGF-β的联合作用能诱导初始T细胞分化成Th17细胞。RORγt为目前已确定的Th17细胞分化所需要的特异性转录因子。了解Th17细胞分化的影响因素、产生的细胞因子、在自身免疫病中的作用以及与调节性T细胞(Treg)的相互作用关系很重要。     

自然抑制细胞的生物学特性

NS细胞属于大颗粒低密度淋巴细胞群,多数克隆的NS细胞表型为CD3~+CD4~-CD8~-,带有T细胞受体.NS细胞抑制多种免疫反应,无抗原特异性,无MHC限制,可由其分泌的抑制因子介导.已分离出一些活性相似的抑制因子,分别被命名为SIF,NSF,SF等.晚近证明,用PHA预处理的NS细胞及其培养物可促进胸腺细胞的增殖,此因子命名为TCSF.故此,NS细胞可能是处于免疫反馈循环中一重要环节上.NS细胞研究对免疫疾病的诊断和治疗有潜在的意义.