125I-WH16制备及与HepG2人肝癌细胞结合特性研究

目的　研究高比活度亲肝癌肽1 2 5I WH16的制备及其与HepG2人肝癌细胞的体外结合特性。方法　采用Iodogen法碘标记WH16 ,用高效液相色谱法分离纯化并鉴定标记产物。①将1 2 5I WH16与HepG2细胞进行体外细胞量 (或保温时间 ) 计数实验 ,以得到较佳的体外结合条件 ;②比较HepG2与正常肝细胞 (L0 2 )的1 2 5I WH16平均结合计数 ,以检验其特异性 ;③1 2 5I WH16与HepG2细胞进行体外饱和结合实验 ,研究其亲和特性。结果　①1 2 5I标记率 5 0 % ,1 2 5I WH16比活度 8 2 1× 10 1 5Bq mol,放化纯 95 % ,放射性浓度 6 6 4× 10 9Bq/L ,- 2 0℃保存 2 4h后放化纯仍为 95 %。②1 2 5I WH16与HepG2细胞结合具有细胞依赖性 ,较佳保温时间为 3h;相同条件下 ,1 2 5I WH16与HepG2细胞、L0 2细胞之间平均特异性结合计数有明显差异 ;1 2 5I WH16与HepG2细胞结合具有可饱和性 ,Scatchard作图提示HepG2细胞仅含一种WH16受体 ,Kd 为 (1 4 2± 0 2 8)nmol L ,Bmax为 (12 15± 0 6 3)pmol L ;Hill系数为1 0 3,接近于 1。结论　WH16的放射性标记物在肝癌显像及生物靶向治疗中可能有潜在的应用前景。     

125I标记雄激素受体TFO抗前列腺癌细胞增殖的研究

目的探讨反基因放射治疗对雄激素受体（AR）表达和前列腺癌细胞增殖的影响。方法用Iodogen法对AR三螺旋形成寡核苷酸（TFO）进行直接^125I标记，经脂质体介导转染LNCaP前列腺癌细胞株，于转染后24和48h分别采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）方法测定癌细胞增殖活性，RT-PCR方法检测ARmRNA表达，免疫组织化学方法检测AR蛋白表达。结果^125I-TFO的标记率为63．7％，放化纯为95．6％，比活度为80．1kBq／μg。相同TFO浓度下，^125I-TFO组LNCaP细胞的AR表达水平显著低于TFO组（P〈0．01），^125I-TFO对LNCaP细胞增殖的抑制率显著高于TFO（P〈0．01）。结论反基因放射治疗对AR表达和前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显强于单纯的反基因治疗。     

125 I-NT类似物与人结肠癌细胞HT29体外结合特性研究

目的设计神经紧张肽(NT)C端六肽NT(8-13)类似物NT2Lys-Arg-Pro-Tyr-Tle-Leu,并研究高比活度125I-NT2与人结肠癌细胞HT29体外结合特性.方法采用氯胺T法对NT2进行125I标记,用Sep-Pak柱纯化,以高效液相色谱法(HPLC)检测标记产物.通过125I-NT2与HT29细胞体外结合实验条件的选择,确定细胞量、保温温度和时间,并在选定条件下进行体外受体饱和实验,研究其亲和特性.结果①125I-NT2标记率为76%,放化纯＞98%,比活度为9.71×1012Bq/mmol.②125I-NT2与HT29细胞结合具有饱和性,在细胞量、保温温度和时间分别为106个、25℃和1 h条件下,平衡解离常数(Kd)为(0.745±0.418)nmol/L,最大结合容量(Bmax)为(0.103±0.060)pmol/106 cell.结论NT2与HT29细胞具有较高的亲和力,在人结肠癌显像中具有潜在的应用前景.     

血管活性肠肽受体研究现状

血管活性肠肽(VIP)是由28个氨基酸组成的多肽,结构上属胰泌素-胰高血糖素多肽家族.血管活性肠肽受体广泛分布于人和动物的多种组织器官上.现代分子生物学方法证明,该类受体有两种亚型,即VIP1和VIP2型受体.通过对其分布、结构与功能、染色体定位及受体激动剂和拮抗剂的研究,将有助于阐明其与某些疾病的关系,并建立一种对疾病尤其是恶性肿瘤具有诊断和治疗价值的新技术.     

99Tcm标记血管活性肠肽衍生物的制备及其生物分布研究

目的观察99Tcm标记血管活性肠肽(VIP)衍生物VIPSN3在生物体内的分布和肿瘤摄取情况。方法通过化学合成法合成含SN3类配体的VIPSN3。在VIP的羧基端连接4个氨基酸(其中1个含巯基),以形成含有SN3的四齿状结构作为99Tcm的强螯合基团,即VIPSN3。引入γ氨基丁酸(Aba)作为隔离物以消除空间阻碍。采用配体交换法进行99Tcm标记,测定99TcmVIPSN3的生物活性和功能、体外稳定性及其在荷结肠癌裸鼠的体内分布,并行γ显像。结果VIPSN3纯度经HPLC分析证实>99%。99TcmVIPSN3标记率为(90±8)%,体外活性分析证实其活性损失小,标记物体外稳定。动物实验示99TcmVIPSN3从血液清除快速,经肾、膀胱排除。荷结肠癌裸鼠肿瘤在注射99TcmVIPSN3后24h显像清晰,除肾外,肿瘤摄取最高,与99TcmVIPN4相比,肾脏摄取明显减少。体内分布结果示99TcmVIPSN3注射后24h,肿瘤每克组织百分注射剂量率(%IDg)为058±015,比99TcmVIPN4(026±001)高,瘤血比值>2,瘤肌肉比值>10。结论VIPSN3具有天然VIP的生物活性,99TcmVIPSN3肾脏摄取较低,肿瘤显像清晰,是一个较有希望的肿瘤显像剂。     

~(125)I-β-CIT的制备与动物体内分布特性研究

目的　评价1 2 5 I 甲基 3β (4 碘苯基 )托烷 2 β 羧酸甲基脂 (β CIT)在体内和脑内的结合特性。方法　应用过氧乙酸标记法和氯胺 T法进行1 2 5 I β CIT标记 ,并进行动物体内分布特性研究。 结果　标记率分别为 (5 3 4± 7 9) %和 (88 4± 3 49) %。小鼠静脉注射1 2 5 I β CIT后 ,放射性主要浓聚在纹状体等脑区 ,其峰值摄取出现在药物注射后 2h。GBR12 90 9显著抑制纹状体内1 2 5 I β CIT的摄取 ,而clomipramine则显著抑制大脑皮层和海马内1 2 5 I β CIT的摄取。大鼠整体放射自显影表明 ,1 2 5 I β CIT主要通过肝胆途径代谢。结论　碘标 β CIT是一种良好的中枢多巴胺转运蛋白显像剂     

反义hTERT对胃癌细胞SGC7901 VEGF及其受体表达的影响

目的研究反义hTERT对胃癌细胞SGC7901 VEGF及其受体表达的影响,探讨其对肿瘤发展和转移的影响.方法以端粒酶逆转录酶组分hTERT cDNA为模板构建反义hTERT逆转录病毒表达载体,包装重组逆转录病毒后感染胃癌SGC7901细胞,用半定量RT-PCR检测基因转染前后VEGF-C及其受体Flt-4 mRNA表达水平的变化,免疫组化法检测VEGF-C、Flt-4蛋白表达.结果反义hTERT稳定转染后SGC7901细胞VEGF-C及其受体VEGFR-3（Flt-4） mRNA和蛋白表达均受到明显抑制.结论反义hTERT可有效抑制胃癌细胞VEGF-C及其受体Flt-4的表达,阻断肿瘤血管和淋巴途径转移.     

放射性核素标记血管活性肠肽的肿瘤受体显像

血管活性肠肽是由２８个氨基酸组成的多肽，属胰泌素－胰高血糖素多肽家族。     

^125I—AIBZM的制备及其与多巴胺受体的结合特性研究

为研究＾１２５Ｉ－ＡＩＢＺＭ与多Ｄ２受体的结合特性，通过二步合成反应制得左旋碘标主民前体ＡＢＺＭ。在室温ＰＨ值３条件下，氯胺Ｔ法制得＾１２５Ｉ－ＡＩＢＺＭ。以大鼠纹状体膜蛋白作为多巴胺Ｄ２受体制剂，用放射配基结合分析法研究＾１２５Ｉ－ＡＩＢＺＭ的结合特性，结果：碘标记前体ＡＢＺＭ白色粉状的熔点为１３５－１３７℃，并经ＨＮＭＲ确证结构。＾１２５Ｉ－ＡＩＢＺＭ标记率为９０％，放化纯度为９５％，比活率为     

肿瘤血管活性肠肽受体显像

血管活性肠肽(VIP)是一种由28个氨基酸组成具有多种功能的神经递质,能通过其受体调节正常及肿瘤细胞的增殖和分化。VPAC(VIP受体)广泛存在于各种正常和肿瘤组织中,但其在肿瘤组织中的表达密度远大于正常组织,这为放射性核素标记的血管活性肠肽受体显像奠定基础。此种显像已应用于多种肿瘤的诊断、分期、治疗方案选择与预后评价。     

125I标记Ki67多肽核酸影响肾癌细胞增殖及凋亡的实验研究

目的　观察1 2 5I标记肿瘤增殖基因Ki6 7多肽核酸 (PNAs)对人肾癌细胞生长及凋亡的影响。方法　人工合成Ki6 7基因PNAs ,氯胺T法1 2 5I标记PNAs,脂质体包裹后转导肾癌 786 0细胞系。采用免疫组织化学、Westernblot技术检测Ki6 7表达 ,绘制细胞生长曲线 ,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测肾癌细胞增殖 ,以免疫组织化学原位末端标记法 (TUNEL)法检测肾癌细胞凋亡。以PNAs作对照。结果　 2 5 9MBq L1 2 5I PNAs组肾癌细胞Ki6 7表达阳性率 [(16 1± 0 7) % ]降低 ,Ki6 7蛋白量 [(35 8± 3 6 ) % ]降低 ,与PNAs组 [(2 8 6± 0 4 ) %、(81 9± 3 2 ) % ]比较差异有显著性 (P均 <0 0 1)。细胞增殖抑制率 2 5 9MBq L1 2 5I PNAs组 [(6 0 9± 7 1) % ]与PNAs组 [(2 6 6± 3 2 ) % ]比较差异有显著性 (P <0 0 1)。凋亡细胞阳性率 2 5 9MBq L1 2 5I PNAs组 [(34 6± 1 3) % ]与PNAs组 [(16 5±1 0 ) % ]比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　1 2 5I PNAs能增强PNAs阻抑肾癌细胞Ki6 7基因表达 ,抑制增殖 ,促进凋亡作用。     

125I粒子植入治疗胃癌有效性与安全性评价

目的 探讨125I粒子组织间植人治疗胃癌的有效性及该方法能否提高患者生存率.方法 选取同时期Ⅱ、Ⅲ期胃癌患者76例,按单纯随机分为根治性手术组(34例,仅行根治性手术,D2、D3术式)和根治性手术+125I粒子组(42例,行根治性手术+125I粒子治疗).治疗效果分CR(治疗后肿瘤完全消失达1个月以上)、PR(肿瘤较治疗前缩小50％以上至少1个月)、NC和PD,CR+PR为治疗有效,据此计算有效率.随访并计算患者生存率及并发症发生情况.率的比较采用x2检验.结果 根治性手术组总有效率50.00％ (17/34),根治性手术+125I粒子组总有效率为73.81％(31/42),2组差异有统计学意义(x2=4.578,P＜0.05).根治性手术+1251粒子组3年和5年生存率分别为61.90％(26/42)和42.86％ (18/42),均高于根治性手术组[11.76(4/34)和0(0/34)；x2=19.771和19.094,均P＜0.001].2组毒性和不良反应均较少.结论 根治性手术+125I粒子植入治疗Ⅱ、Ⅲ期胃癌较单纯根治性手术更有效,能进一步提高远期生存率,不良反应少.     

125I标记反义寡核苷酸及其识别淋巴瘤细胞的实验研究

目的　探讨用1 2 5I标记免疫球蛋白重链V1家族框架区 (IgHV1FR)mRNA反义寡核苷酸(1 2 5I FR ASON)作为反义显像剂和反义治疗药物的可能性。方法　用DNA合成仪将含酪胺 (tyramine)的单体连接在 18聚体寡核苷酸的 5′端 ,再用氯胺 T法进行1 2 5I标记。用阳离子脂质体DMRIE C包裹1 2 5I ASON转导Namalwa细胞 (B淋巴瘤细胞系 )和HL 6 0细胞 (人髓系白血病细胞系 ) ,测定转导效率 ,同时比较未用脂质体情况下的转导效率。质量分数为 2 0 %聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)测定tyramine ASON与血清保温后的稳定性。结果　标记率为 80 .7% ,放化纯为 98.7% ,2 4h放化纯仍高于 90 %。脂质体介导ASON转导Namalwa细胞的效率为 (2 6 .8± 1.5 4 ) % ,是未用脂质体的近 18倍 ,转导HL 6 0细胞的效率是 (13.6± 2 .5 4 ) % ,两组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。质量分数 2 0 %PAGE于2、6和 2 4h时点未见异常条带。结论　通过连接酪胺碘标记寡核苷酸法是比较成功的方法。1 2 5I FR ASON对Namalwa细胞具有较强的特异性 ,可用于淋巴瘤反义显像和反义放射治疗的研究。     

FAU的碘化标记及其在小鼠体内的生物学分布

目的研究^125 I-氟-碘阿糖呋喃基尿嘧啶（FIAU）的性质及在小鼠体内的生物学分布。方法利用Iodogen碘化标记法对氟脱氧呋喃糖尿嘧啶（FAU）进行标记，用Sep-Pak C18反相色谱柱进行纯化；观察^125I—FIAU的标记率、放化纯、体外稳定性及其在小鼠体内的生物学分布。结果以Iodogen固相氧化法标记FAU，得到^125 I-FIAU，标记率为（63．12±5．01）％；产物经Sep—PakC18反相色谱柱纯化后放化纯为（98．60±0．52）％；^125 I-FIAU在PBS及人血清中37℃条件下稳定，24h后放化纯〉95．04％。生物学分布实验表明：标记物从小鼠血液中清除迅速，用每克组织百分注射剂量率（％ID／g）表示，0．5h为（4．33±1．00）％ID／g，2h下降为（0．77±0．06）％ID／g，至24h时基本清除完毕；肾脏是其主要排泄器官。结论Iodogen固相氧化法可以进行FAU碘化标记，得到标记率、放化纯及稳定性较好的”I—FIAU，该标记物主要经肾脏排泄。     

125I粒子不同分布组织间植入对荷人胃癌裸鼠移植瘤疗效的影响

目的 探讨125I粒子总活度相同时,不同分布的组织间植入对荷人胃癌裸鼠移植瘤疗效的影响.方法 建立人胃低分化腺癌BGC-823细胞裸鼠皮下移植瘤模型32只,按随机数字表法分为实验组和对照组.实验组植入总活度33.30 MBq125I粒子,按照植入单枚活度及分布不同分为高活度组(33.30 MBq×1枚)、中活度组(16.65 MBq×2枚)、低活度组(11.10 MBq×3枚);对照组植入空源粒子.每组8只裸鼠模型.比较实验和对照组及125I粒子不同分布状态下对移植瘤体积的抑制率、组织病理学改变、局部皮肤反应、裸鼠体质量和存活率.采用方差分析和秩和检验对数据进行统计学处理.结果 各组存活率均为100%.125I粒子植入第30天裸鼠体质量各组比较,差异无统计学意义[高、中、低活度及对照组分别为(26.44±1.07)、(26.58±0.51)、(27.15±1.37)和(26.92±0.60)g,F=2.23,P>0.05].第30天各实验组125I粒子对肿瘤体积抑制率分别为92.47%,97.15%和89.01%;平均体积各实验组[高、中、低活度组分别为(138.85±16.45)、(52.52±30.54)、(202.72±126.97)mm3]与对照组[(1843.99±447.63)mm3]比较,差异均有统计学意义(t值分别为3.092,3.376,3.269,P均<0.05),中活度组和低活度组组间比较差异有统计学意义(t=2.308,P<0.05),高活度组分别和中活度组、低活度组组间比较差异均无统计学意义(t值分别为1.300,1.007,P均>0.05).高活度组与中活度组组织病理学分级按直肠癌消退分级标准(RCRG)均为RCRG 1级;低活度组3只为RCRG 3级,4只为RCRG 2级,1只为RCRG 1级.中、低活度组均未出现放射性损伤,高活度组中4只裸鼠于125I粒子植入后9～12 d出现放射治疗肿瘤学组织(RTOG)1～2级放射性损伤.结论 125I粒子植入治疗中单源活度的选择和分布方式可直接影响疗效和放射性损伤的程度.     

人胃腺癌SGC-7901细胞与125I-叶酸体外结合特性研究

目的　探讨人胃低分化腺癌SGC 790 1细胞与1 2 5I 叶酸体外结合特性及其细胞表面存在高密度、高亲和力叶酸受体的可能性。方法　采用放射配基受体结合分析法 ,观察SGC 790 1细胞和1 2 5I 叶酸结合与时间的关系、特异结合位点及亲和程度、不同竞争剂对SGC 790 1细胞结合1 2 5I 叶酸的影响及SGC 790 1细胞内化1 2 5I 叶酸的程度。结果　SGC 790 1细胞与1 2 5I 叶酸结合具有特异性、高亲和性、饱和性、竞争性及温度依赖性 ,其最大叶酸特异结合位点Bmax为 14 3 2 6fmol 10 6 细胞 ,平衡解离常数Kd 为 2 86× 10 - 1 0 mol L ,1 2 5I 叶酸可通过叶酸受体途径内化入SGC 790 1细胞。结论　SGC 790 1细胞表面具有高密度和高亲和力的叶酸受体及可供介导叶酸靶向诊断和治疗的靶点。