人脐带间充质干细胞对脐血CD34~+细胞在NOD/SCID小鼠体内造血重建的影响

目的 探讨人脐带间充质干细胞对脐血CD34~+细胞在NOD/SCID小鼠体内造血重建的影响.方法 将3.5×10~5个脐血CD34~+细胞单独(单移植组)或与5.0×10~6个人脐带间充质干细胞共同(共移植组)输入经~(137)Cs 3.0Gy照射后的NOD/SCID小鼠体内,观察移植后6周内小鼠外周血象的变化情况.于移植后第6周处死小鼠,采用流式细胞术检测小鼠骨髓、脾脏及外周血人源细胞(hCD45~+)含量,并分别检测小鼠骨髓中人源淋巴系(CD3/CD19)、粒系(CD33)、单核系(CD14)、血小板(CD61)、红系(CD235a)等各系血细胞比例,比较间充质干细胞共移植对CD34~+细胞植入率的影响.结果 移植后3周,两组小鼠外周血象开始有不同程度恢复;移植后6周,共移植组外周血白细胞和血小板计数均已达高峰,明显高于单移植组(P<0.05),两组小鼠的红细胞计数差异无统计学意义(P>0.05).移植后6周,共移植组骨髓及外周血中人源细胞hCD45~+CD34~+比例分别为(42.66±2.57)%和(4.74±1.02)%,明显高于单移植组的(25.27±1.67)%和(1.19±0.54)%(P=0.006).移植后6周,共移植组小鼠骨髓内的CD19~+、CD33~+、CD14~+、CD61~+和CD235a~+细胞比例均明显高于单移植组(P<0.05),CD3~+T淋巴细胞比例明显低于单移植组(P=0.003);CD19~+B淋巴细胞得到优势扩增,明显高于其他各系血细胞比例(P<0.05).结论 脐带间充质干细胞与脐血CD34~+细胞共移植可促进造血干细胞的植入,缩短CD34~+细胞移植后造血恢复时间.     

补肾解毒方与健脾解毒方含药血浆对慢性乙肝病毒感染不同免疫状态患者外周血T细胞功能的影响

目的 比较补肾解毒方和健脾解毒方对慢性乙肝病毒(HBV)感染不同免疫状态患者外周血T淋巴细胞(Ts)功能的影响.方法 选择36例湖南中医药大学第一附属医院2010年6月～2011年5月门诊慢性HBV感染患者,根据患者免疫状态分为免疫耐受组(18例)、免疫清除组(18例),另选择10名健康人作健康组.分别采集抗凝外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),进一步分离提取培养T细胞,采用大鼠补肾解毒和健脾解毒药物血浆进行干预.检测T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+以及CD28+分子的表达,观察T细胞培养上清液IFN-γ的水平.结果 健脾解毒药物血浆与补肾解毒药物血浆干预后CD3+、CD4+、CD8+以及CD28+分子表达率升高,且补肾解毒组的CD28+表达率的提高优于健脾解毒组(P＜0.05).两组含药血浆干预后T细胞分泌的IFN-γ水平较干预前升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 补肾解毒法和健脾解毒法都能促进慢性HBV感染患者T细胞功能的恢复,且两种含药血浆对慢性HBV感染免疫耐受期患者T细胞功能的影响更为显著.     

川芎嗪对小鼠外周血造血干细胞动员作用的研究

目的:探讨川芎嗪对小鼠外周血造血干细胞的动员作用及其对小鼠外周血细胞和骨髓基质细胞粘附分子的影响.方法:30只BALB/c小鼠,随机分为3组,川芎嗪组(50 mg·ks-1·d-1)、rhG-CSF组(250μg·kg-1·d-1)、生理盐水组,腹腔注射dl-7,每日1次,第8天,采用外周血WBC、MNC计数、流式细胞术、造血祖细胞体外培养、免疫细胞化学等检测各组给药后对外周血WBC、MNC、CD34+细胞、CD49d阳性胞、CFU-GM、CFU-MK、CFU-E的产率及小鼠骨髓基质细胞VCAM-1阳性细胞百分率的影响.结果:川芎嗪组给药第7天外周血WBC、MNC数量达到高峰,分别为给药前的3.2倍和3.9倍;川芎嗪组外周血CD34<+>、CD49d阳性细胞及骨髓基质细胞VCAM-l阳性细胞百分率分别为(0.86±0.42)%、(12.91±2.84)%和(48.47±7.87)%,均明显高于生理盐水组(P<0.05);川芎嗪组CFU-GM、CFU-MK和CFU-E产率分别为(11.70±3.23)%、(11.20±2.88)%和(24.50±8.io)%,均明显高于生理盐水组(P<0.01).结论:川芎嗪对小鼠外周血造血干细胞有一定的动员作用,且这一作用可能与其上调小鼠外周血细胞和骨髓基质细胞粘附分子的表达有关.     

扶正与祛邪法对HBV慢性感染患者外周血DCs介导的T淋巴细胞的影响

目的 比较健脾法、补肾法与解毒法对慢性乙肝病毒(HBV)感染患者外周血树突状细胞DCs介导的T淋巴细胞的影响.方法 分别收集10例HBV慢性感染免疫耐受期、免疫清除期患者和8例健康人的抗凝外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),体外培养DCs,用大鼠健脾、补肾、解毒药物血浆进行干预,并建立DCs、T细胞相互作用的模型,检测T细胞的表面分子CD8+CD28+、CD8+PD-1受体的表达.结果 经补肾药物血浆(六味地黄丸)、健脾药物血浆(四君子汤)、解毒药物血浆(甘露消毒丹)处理,HBcAg负载的DCs孵育的T淋巴细胞,CD8+CD28+表达率升高,CD8+PD-1受体表达率降低.结论 补肾、健脾、解毒法在一定程度上都能通过恢复慢性HBV感染免疫清除期、免疫耐受期患者外周血DCs的功能,以恢复其下游的T淋巴细胞的功能.相比而言,补肾法最优,健脾法次之,再次是解毒法.     

补肾解毒方对小鼠胸腺、脾脏及外周血白细胞、淋巴细胞的辐射防护作用

目的探讨自拟中药补肾解毒方对小鼠胸腺、脾脏、白细胞及淋巴细胞的影响。方法将90只清洁级小鼠随机分为空白对照组、辐射模型组、氨磷汀阳性对照组、补肾解毒方预防组、补肾解毒方防治结合组。造模前各组分别进行相应处理。除空白对照组外,其余4组小鼠均接受剂量为6 Gy的~(60)Coγ射线的辐射;并于辐射后第1天、第7天、第14天分批处死小鼠,记录小鼠体质量及胸腺、脾脏质量,计算脾脏指数和胸腺指数;眼球采血并采用全自动生化仪测定外周血白细胞、淋巴细胞总数。结果 (1)辐射后第1天,与空白对照组相比,各组小鼠胸腺指数、脾脏指数均明显下降(P0.01);辐射后第7天,补肾解毒方预防组和补肾解毒方防治结合组胸腺指数明显高于辐射模型组(P0.05或P0.01);辐射后第14天,补肾解毒方预防组、补肾解毒方防治结合组胸腺指数、脾脏指数高于氨磷汀阳性对照组和辐射模型组(P0.01或P0.05)。(2)辐射后第1天,与空白对照组相比,各组小鼠白细胞、淋巴细胞均明显下降(P0.01);辐射后第7天,补肾解毒方预防组和补肾解毒方防治结合组淋巴细胞数量明显高于氨磷汀阳性对照组(P0.05);辐射后第14天,补肾解毒方预防组、补肾解毒方防治结合组小鼠白细胞、淋巴细胞明显高于辐射模型组和氨磷汀阳性对照组(P0.01或P0.05)。结论补肾解毒方能够促进辐射后胸腺和脾脏的恢复,提高外周血白细胞和淋巴细胞总数,具有良好的辐射防护作用。     

左归补髓生血方对再生障碍性贫血小鼠骨髓有核细胞凋亡的影响

目的 观察左归补髓生血方治疗小鼠再生障碍性贫血的疗效及其对骨髓中有核细胞凋亡的影响。方法 将40只SPF级ICR小鼠随机分正常组、模型组、西药组、中药组。采用二甲磺酸丁酯和环磷酰胺交替给药12 d的方法复制再生障碍性小鼠模型。观察外周血细胞计数以及骨髓组织形态学变化,采用TUNEL法检测各组小鼠骨髓中有核细胞凋亡。结果 与正常组比较,模型组小鼠外周血白细胞、红细胞、血小板计数和血红蛋白浓度明显减低（P＜0.05）,骨髓有核细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）;光镜下可见小鼠骨髓增生极度减少,红系、粒系、巨核细胞系均明显减少。与模型组比较,中药组以及西药组外周血红细胞、白细胞、血小板计数和血红蛋白浓度明显升高（P＜0.05）,骨髓有核细胞凋亡率明显降低（P＜0.05）;光镜下可见骨髓中造血组织比例增多。结论 左归补髓生血方可以有效升高再生障碍性贫血小鼠外周血细胞计数,抑制骨髓中有核细胞的凋亡。     

补肾益髓法对辐射损伤小鼠造血生长因子的影响

目的探讨补肾益髓法的代表药益髓生血颗粒促进骨髓造血的机制。方法 78只雄性昆明种小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组、益髓生血颗粒高、中、低剂量组,每组13只。采用60Co-γ射线全身一次性照射造成小鼠骨髓急性损伤模型。以益髓生血颗粒高、中、低3个剂量及重组人粒细胞刺激因子分别作用于骨髓急性损伤小鼠14 d后,采用放射免疫法检测外周血及骨髓中干细胞因子(SCF)、白细胞介素-3(IL-3)、粒-单系祖细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒系祖细胞集落刺激因子(G-CSF)的含量。结果与模型组相比,益髓生血颗粒高剂量组血中GM-CSF、骨髓中IL-3和SCF含量明显升高(P0.05),中剂量组血中GM-CSF、骨髓中IL-3含量明显升高(P0.05),低剂量组血及骨髓中GM-CSF、骨髓中IL-3和SCF含量明显升高(P0.05)。结论补肾益髓法可增加辐射损伤小鼠骨髓微环境中造血生长因子GM-CSF、IL-3、SCF的含量,从而有效促进髓系造血。     

健脾补肾活血方及其拆方对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓造血细胞凋亡的影响

目的:采用细胞培养方法,从细胞凋亡角度探讨健脾补肾活血方对再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)模型小鼠的疗效及其促进骨髓造血的作用机制。方法:复制AA小鼠模型并制备AA小鼠血清,以健脾补肾活血方及其拆方灌胃大鼠制备含中药血清,共同培养正常小鼠骨髓造血细胞,24 h后采用流式细胞仪和透射电镜观察细胞的凋亡情况。结果:AA小鼠血清能诱导正常小鼠骨髓造血细胞发生凋亡,经健脾补肾活血方及其拆方的药物血清作用后,各组小鼠骨髓造血细胞的凋亡率均下降,其中,补肾方的疗效优于健脾方和活血方,健脾补肾活血方(全方)的效果最好。电镜观察造血细胞超微结构的结果亦表明补肾方的作用较好,但以全方作用最佳。结论:健脾补肾活血方及其拆方均可不同程度地降低骨髓细胞凋亡率,可促进骨髓恢复造血功能。     

巨细胞病毒感染对重型β-地中海贫血儿童异基因造血干细胞移植后早期T细胞亚群的影响

目的探讨巨细胞病毒(CMV)对儿童重型β-地中海贫血(地贫)儿童异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)后180 d外周血T细胞亚群的变化。方法对我院儿科造血干细胞移植中心2010年1月～2011年1月儿童重型地贫Allo-HSCT 35例病例半年后的T细胞亚群进行分析,比较有CMV(13例)和无CMV感染组(22例)在造血干细胞移植后早期T细胞的变化。结果半年内有CMV组CD8+比率高于无CMV感染组,但CD4+比率低。在CMV感染组伴随CD8+CD28+细胞比率降低,CD8+CD28-细胞比率和CD8+比率升高,同时发现CD8+与CD8+CD28-细胞比率呈线性相关性。结论重型β-地中海贫血儿童在异基因造血干细胞移植后,CMV感染后会导致CD8+CD28-细胞堆积,是构成CD8+细胞升高的主因,且两者比率呈线性相关。     

大蒜素对小鼠外周血淋巴细胞的影响

目的探索大蒜素对小鼠外周血淋巴细胞的影响。方法将40只清洁级昆明小鼠随机分为生理盐水对照组[0.1 mL生理盐水/(10 g·bw)]、大蒜素低剂量组[100 mg/(kg·bw)]、大蒜素中剂量组[200 mg/(kg·bw)]和大蒜素高剂量组[400 mg/(kg·bw)],每组10只,每天灌胃1次,灌胃容量0.1 mL/10 g,连续灌胃14 d后,随机选取8只,采用摘眼球的方式进行取血,制取为单细胞悬液,用流式细胞仪进行检测,分析大蒜素对于小鼠外周血中的CD4~+T细胞、CD8~+T细胞及CD4~+/CD8~+值及淋巴细胞周期的影响。结果高剂量组及中剂量组与对照组相比淋巴细胞亚群和周期均出现了显著性差异,CD4~+T细胞、CD4~+/CD8~+值相对提高,CD8~+T细胞值降低(P0.05);G_2/M期及S期的细胞的比例增加,G_0/G_1期的细胞的比例降低(P0.05)。结论大蒜素具有一定的免疫调节功能,尤其中、高浓度的大蒜素通过对外周血淋巴细胞周期的阻滞作用,使外周血淋巴细胞处于较高的增殖状态,促进淋巴细胞亚群的分化,激化小鼠的免疫功能,对小鼠的细胞免疫和体液免疫功能具有增强作用。     

补肾生血药干预不同时间对环磷酰胺所致骨髓抑制小鼠细胞周期与细胞增殖的影响

目的 观察补肾生血药干预不同时间对环磷酰胺诱发骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期及细胞增殖的影响.方法 52只雄性BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、补肾生血药低剂量组、补肾生血药高剂量组.先预防用药3 d,补肾生血药低剂量组、高剂量组灌胃不同剂量补肾生血药,其余组灌胃蒸馏水.第4～6天造模,除空白对照组...     

Panaxdiol Saponins Component Promotes Hematopoiesis and Modulates T Lymphocyte Dysregulation in Aplastic Anemia Model Mice

Objective: To investigate the potential efficacy of panaxadiol saponins component (PDS-C) in the treatment of aplastic anemia (AA) model mice. Methods: Totally 70 mice were divided into 7 groups as follows: normal, model, low-, medium-, high-dose PDS-C (20, 40, 80 mg/kg, namely L-, M-, H-PDS-C), cyclosporine (40 mg/kg), and andriol (25 mg/kg) groups, respectively. An immune-mediated AA mouse model was established in BALB/c mice by exposing to 5.0 Gy total body irradiation at 1.0 Gy/min, and injecting with lymphocytes from DBA mice. On day 4 after establishment of AA model, all drugs were intragastrically administered daily for 15 days, respectively, while the mice in the normal and model groups were administered with saline solution. After treatment, the peripheral blood counts, bone marrow pathological examination, colony forming assay of bone marrow culture, T lymphocyte subpopulation analysis, as well as T-bet, GATA-3 and FoxP3 proteins were detected by flow cytometry and Western blot. Results: The peripheral blood of white blood cell (WBC), platelet, neutrophil counts and hemoglobin (Hb) concentration were significantly decreased in the model group compared with the normal group (all P<0.01). In response to 3 dose PDS-C treatment, the WBC, platelet, neutrophil counts were significantly increased at a dose-dependent manner compared with the model group (all P<0.01). The myelosuppression status of AA was significantly reduced in M-, H-PDS-C groups, and hematopoietic cell quantity of bone marrow was more abundant than the model group. The colony numbers of myeloid, erythroid and megakaryocytic progenitor cells in the model group were less than those of the normal mice in bone marrow culture, while, PDS-C therapy enhanced proliferation of hematopoietic progenitor cells by significantly increasing colony numbers (all P<0.01). Furthermore, PDS-C therapy increased peripheral blood CD3+ and CD3+CD4+ cells and reduced CD3+CD8+ cells (P<0.05 or P<0.01). Meanwhile, PDS-C treatment at medium- and high doses groups also increased CD4+CD25+FoxP3+ cells, downregulated T-bet protein expression, and upregulated GATA-3 and FoxP3 protein expressions in spleen cells (P<0.05). Conclusion: PDS-C possesses dual activities, promoting proliferation hematopoietic progenitor cells and modulating T lymphocyte immune functions in the treatment of AA model mice.     

rhBMP-2对再生障碍性贫血小鼠骨髓造血恢复的促进作用

探究了人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)对再障小鼠的治疗作用。采用5-FU联合白消安建立小鼠再障模型,通过干预rhBMP-2进行治疗。考察了各实验组小鼠白细胞数、骨髓单核细胞数、体重、存活率、脾系数、粒系-巨系细胞集落(CFU-GM)数以及骨髓单核细胞中CD34⁺细胞比例,进行股骨、脾脏HE切片分析。结果表明,相较于再障对照组,rhBMP-2治疗组小鼠的白细胞数、存活率、CFU-GM集落数及骨髓单核细胞数显著提高,并且骨髓单核细胞中的CD34⁺细胞含量也提高,显著改善脾脏功能和缓解骨髓抑制,证实rhBMP-2能够促进再障小鼠造血损伤的修复。     

中药外用联合解毒消疣方治疗尖锐湿疣临床研究

目的:探讨派特灵联合解毒消疣方治疗尖锐湿疣的临床疗效。方法:将90例尖锐湿疣患者按数字随机表法分为观察组和对照组,每组45例,观察组采用派特灵联合解毒消疣方治疗,对照组采用派特灵治疗,治疗后比较两组患者临床疗效、外周血CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+及CD_4~+/CD_8~+变化情况,观察不良反应。结果:观察组痊愈率高于对照组,复发率低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。治疗后观察组CD_3~+、CD_4~+及CD_4~+/CD_8~+高于对照组,CD_8~+低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:派特灵联合解毒消疣方治疗尖锐湿疣治愈率高,复发率低,安全性好,临床疗效显著。     

补肾益金汤对慢性阻塞性肺疾病稳定期患者免疫功能的影响

目的:观察以补肾健脾活血法为组方原则的补肾益金汤对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)稳定期患者免疫功能的影响。方法:30例中医辨证属脾肾两虚、痰瘀互阻证的COPD稳定期患者,口服补肾益金汤,疗程3个月。测定患者用药前及用药1个月、3个月的T细胞亚群、免疫球蛋白、细胞因子,并与正常组30例比较。结果:治疗前COPD稳定期患者CD_3~+、CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+显著低于对照组(P0.01),CD_8~+显著高于对照组(P0.01);IgG、IgA、IgM、IL-2显著低于对照组(P0.01),肿瘤坏死因子-α显著高于对照组(P0.05)。治疗1个月、治疗3个月与治疗前比较,上述各项指标均有明显改善(P0.05)。结论:补肾益金汤能明显提高COPD稳定期患者的免疫功能。     

Exonuclease-1缺失延缓端粒酶缺失小鼠造血微环境的衰老

目的 研究Exo-1对端粒酶缺失小鼠造血微环境衰老的影响.方法 以端粒酶基因敲除小鼠( Terc-/-)和Exo-1基因敲除小鼠(Exo -1-/-)杂交,并进一步互交产生第三代端粒酶基因敲除小鼠(G3Terc -/-)以及第三代Terc和Exo-1双基因敲除小鼠(G3Terc-/- Exo-1-/-).以CD45.1野生型小鼠的骨髓细胞为供体,以2月龄G3Terc-/-或G3Terc-/- Exo-1-/-小鼠为受体,进行骨髓移植.在受体小鼠9月龄时,取骨髓、脾脏、胸腺、外周血等组织器官的细胞进行流式分析,研究G3 Terc-/-和G3Terc-/-Exo -1-/-受体小鼠中的野生型供体来源的造血干细胞的发育分化.结果 同G3Terc-/-小鼠相比,G3Terc-/- Exo-1-/-双基因敲除受体小鼠骨髓中野生型供体来源的B220+细胞比例升高,前体B细胞的比例也明显升高;脾脏B220+细胞的比例明显升高;胸腺发育正常;外周血中B220+细胞比例升高.结论 Exo-1缺失延缓了端粒酶基因敲除小鼠造血系统微环境的衰老,从而逆转了端粒功能障碍引起的骨髓造血干细胞发育分化异常.     

生血汤治疗急性髓系白血病化疗后白细胞减少症临床研究

目的:观察生血汤治疗急性髓系白血病化疗后白细胞减少症的临床疗效。方法:选择120例急性髓系白血病化疗后白细胞减少症患者为研究对象,按抽签方式分为两组,各60例。对照组采用常规对症治疗,研究组在对照组的基础上加用生血汤治疗。比较两组治疗前后中性粒细胞计数、白细胞计数、中医证候积分及感染率、抗生素使用时间,评价临床疗效。结果:研究组有效率、感染率、抗生素使用时间分别为95.00%、25.00%、(7.50±1.56)d,均优于对照组的78.33%、51.67%、(12.56±1.83)d,差异均具有统计学意义(P0.05);化疗后第10天、第20天,研究组中性粒细胞计数、白细胞计数较对照组均明显上升,差异具有统计学意义(P0.05);与治疗前比较,研究组与对照组中医证候积分均明显下降,且研究组下降幅度更大,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:生血汤治疗急性髓系白血病化疗后白细胞减少症,临床疗效显著,可提高中性粒细胞计数、白细胞计数,促进患者造血功能恢复,降低感染率。     

再生障碍性贫血患儿外周血T淋巴细胞亚群分析

目的 探讨再生障碍性贫血 (AA)患儿的免疫学发病机制。方法 采用流式细胞仪检测32例AA初诊患儿及20例健康儿童 (对照组 )外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞。 结果 AA患儿CD8 +T淋巴细胞、CD4+ /CD8+ 比值与对照组比较差别均有非常显著性意义 (t=3.73, -4.70,P<0.01) ;重型AA(SAA)与慢性AA(CAA)患儿T细胞亚群比较差别均无显著性意义 (均P>0.05)。 结论 AA患儿存在T淋巴细胞亚群紊乱 ,CD8+T淋巴细胞增多及CD4 +/CD8+比值降低可能是其重要的免疫学发病机制。     

补肾活血方对免疫性卵巢早衰小鼠外周血抗透明带抗体的影响

目的研究补肾活血方对免疫性卵巢早衰小鼠外周血抗透明带抗体(AzpAb)的影响,为临床上运用中医药预防和治疗卵巢早衰提供实验依据。方法以小鼠透明带3为抗原,皮下多点注射免疫Balb/c雌性小鼠,建立免疫性卵巢早衰模型。以补肾活血方低、中、高剂量进行治疗,并设倍美力为对照,ELISA法测定血清AzpAb含量。结果与空白组比较,模型组AzpAb表达水平显著升高,2组比较差异有高度统计意义(P0.01);与模型组比较,补肾活血方各剂量组、倍美力组AzpAb表达水平均显著降低(P0.01);与倍美力组比较,高剂量组AzpAb表达水平有所降低,但2组比较无统计意义(P0.05),中、低剂量组显著高于倍美力组(P0.01);补肾活血方各剂量组比较,高剂量组较中、低剂量组表达显著降低(P0.01)。结论补肾活血方能显著下调免疫性卵巢早衰小鼠外周血AzpAb表达的升高。     

Detection of lymphocyte subsets and regulatory T cells in peripheral blood of patients with acute leukemia and its clinical significance

Objective To study the changes of lymphocyte subsets and regulatory T cells in peripheral blood of patients with acute leukemia (AL) and its clinical significance.Methods The different levels of periph...