2,5-己二酮对SK-N-SH细胞中神经生长因子表达水平的研究

目的分析2,5-己二酮对人SK-N-SH细胞中神经生长因子表达水平变化的研究,探讨正己烷中毒的分子机制。方法分别以0、10、20、40 mM的2,5-己二酮持续染毒12 h后,以Q-PCR及Western Blot方法检测各组人SKN-SH细胞中神经生长因子的变化趋势。结果 2,5-己二酮染毒后,人SK-N-SH细胞神经生长因子mRNA及其蛋白表达水平均明显下调,可见染毒后SK-N-SH后细胞分泌的神经生长因子是降低的。结论 2,5-己二酮可以引起人SK-N-SH细胞NGF表达水平降低,说明NGF表达降低在2,5-己二酮对人SK-N-SH细胞的早期毒性及慢性毒作用机制中起着重要作用。     

神经生长因子对2,5-己二酮致运动神经元线粒体功能损伤的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)对2,5-己二酮所致运动神经元细胞线粒体功能损伤的影响。方法用10mmol/L和20mmol/L2,5-己二酮给运动神经元VSC4.1细胞处理12h后,检测VSC4.1细胞活性,NGF的蛋白表达以及线粒体膜电位的变化;20mmol/L2,5-己二酮与VSC4.1细胞作用12h后,去除2,5-己二酮加入不同浓度的NGF,检测细胞活性和线粒体膜电位的变化。结果10mmol/L和20mmol/L2,5-己二酮与运动运动神经元VSC4.1细胞共同培养12h后,细胞活性分别下降了17%和23%;VSC4.1细胞内NGF的表达分别下降了33.5%和34%;线粒体膜电位由39.36分别下降到29.57和23.80。VSC4.1细胞与2,5-己二酮作用12h后用50ng/ml和100ng/mlNGF处理,细胞的活性增加了6.38%和23.40%;细胞线粒体膜电位也由26.03增加到30.18和31.50(P<0.05)。结论NGF可以通过改善线粒体膜电位来修复2,5-己二酮导致的运动神经元线粒体功能损伤。     

小鼠2.5 s神经生长因子对2,5-己二酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的 建立神经生长因子（NGF）对2,5-己二酮（HD）诱导的PC12细胞凋亡保护作用的模型,并探讨其作用机制.方法 以PC12细胞为神经元的细胞模型,将HD和不同浓度的NGF加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐检测细胞活性,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测p53蛋白表达,比较各组间的差异.结果 随NGF浓度增加,细胞存活率升高,差异有统计学意义（P＜0.01）;DNA断裂减少;细胞凋亡率减小（P＜0.01）;p53表达量下降（P＜0.05）.结论NGF对PC12细胞可能具有直接的神经营养作用,且可保护PC12细胞免于2,5-HD诱导的损伤以及具有抗凋亡作用.     

2,5-己二酮对大鼠神经组织中低分子量神经丝降解的影响

目的 研究2,5-己二酮(HD)对大鼠神经组织中低分子量神经丝(NF-L)降解的影响,探讨正己烷中毒性神经病发生的可能机制.方法 雄性Wistar大鼠50只随机分为1、2、3、4周染毒组和对照组,每组10只.经腹腔注射HD(400 mg/kg)染毒动物,剂量为,建立正己烷中毒性神经病模型.电子显微镜观察大鼠坐骨神经的超微结构变化,步态评分评价大鼠周围神经病症状的进展,免疫印迹法(Westem blot)检测坐骨神经和脊髓组织中NF-L降解率的变化.结果 HD染毒2周后,大鼠逐渐出现肌力降低、步态异常等表现,至染毒4周结束时大鼠呈现轻中度瘫痪,电子显微镜观察显示坐骨神经出现退行性病变.与对照组相比较,2、3、4周染毒组大鼠坐骨神经上清和沉淀组分中NF-L降解率均呈进行性下降,其中上清NF-L降解率分别下降25.8％、70.4％和69.7％,沉淀中NF-L降解率分别下降14.7％、64.6％和67.3％,差异均有统计学意义(P＜0.01).在脊髓组织中,与对照组相比较,1周染毒组脊髓上清中NF-I,降解率下降33.87％,4周染毒组脊髓上清中NF-L降解率升高16.2％,1、2周染毒组脊髓沉淀中NF-L降解率分别下降46.3％和13.0％,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 HD染毒显著抑制了坐骨神经中NF-L的降解,这可能与正己烷中毒性神经病轴突中NF变性堆积有关.     

2,5-己二酮染毒对大鼠坐骨神经和大脑皮质神经细胞粘附因子表达的影响

目的初步观察2,5-己二酮(2,5-hexanetione,HD)染毒大鼠中毒性周围神经病变时坐骨神经和大脑皮质中神经细胞粘附因子(neural cell adhesion molecule,NCAM)蛋白的表达变化。方法 9周龄(体重280～310 g)SPF级Wistar雄性大鼠分为3组,每组23只,每日经腹腔注射染毒给予HD(低剂量组100 mg/kg,高剂量组300 mg/kg),连续8周,每周5次,对照组给予等体积生理盐水。处死各组10只动物并分离、冻存坐骨神经和大脑皮质运动代表区,采用免疫组化方法检测NCAM的蛋白表达。另取3只分离坐骨神经用于电镜观察。剩余动物停止染毒、自然恢复8周后取材。结果染毒后高剂量组动物第4周起动物后肢热痛觉阈值升高,染毒8周后高剂量组动物后肢全部瘫痪,低剂量组动物后肢肌力下降,步态异常。电镜观察染毒组动物坐骨神经髓鞘形态异常。对于坐骨神经,染毒8周时低、高剂量组中NCAM表达量分别为对照组的144%和85%,染毒终止、恢复8周后为166%(P<0.05)和145%。对于大脑皮质,染毒8周时与染毒终止、恢复8周时各剂量组蛋白表达与对照组差异无...     

2,5-己二酮对小鼠视网膜损伤的实验研究

目的 研究2,5-己二酮(2,5-HD)对小鼠视网膜组织形态学的影响及对视网膜组织的脂质过氧化作用,揭示正己烷对视网膜损伤的发病机制.方法 48只昆明种小鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和2,5-HD染毒组.空白对照组12只,不做任何处理;阴性对照组12只,腹腔注射生理盐水;2,5-HD染毒组24只(分为2、4和8周染毒组),腹腔注射质量分数为2.5％的2,5-H-HD溶液,剂量为400 mg/kg,每日给药1次.光学显微镜下观察2,5-HD对视网膜组织的病理形态学影响;并且测定视网膜组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量.结果 空白对照及阴性对照组小鼠视网膜结构正常.2,5-HD染毒8周组光感受器内外节分界不清,排列疏松紊乱;外丛状层呈疏松网状结构,染色不均;神经节细胞层可见胞核深染固缩坏死.随着2,5-HD染毒时间的延长,SOD活力逐渐降低,MDA含量增加,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 2,5-HD可造成小鼠视网膜组织损伤,脂质过氧化作用是致视网膜损伤的机制之一.     

大蒜油拮抗2,5-己二酮对大鼠神经组织的氧化损伤的效果

目的 探讨大蒜油对2,5-己二酮(2,5-hexanedione,2,5-HD)导致的大鼠神经组织氧化损伤的拮抗作用和对周围运动神经毒性的影响.方法 Wistar雄性大鼠40只,随机分为正常对照组、模型组、人蒜油低、高剂量组,每组10只.模型组及大蒜油低、高剂量组分别给予2,5-HD 300ms/ks腹腔注射,正常对照组给予生理盐水,5次/周,持续6周.大蒜油低、高剂量组提前1周分别给予40和80mg/kg大蒜油灌胃,持续至实验结束.测定后肢撑力指数和平衡指数等神经行为学指标,实验结束取脑、脊髓和坐骨神经分别测定丙二醛(MDA)、还原型谷胱廿肽(CSH)含量、总抗氧化能力(T-AOC)和抑制羟自由基能力.结果 与第0周比较,后肢撑力指数第4周模型组升高44%,大蒜油低剂量组升高50%,大蒜油高剂量组升高49%,但3组间差异无统计学意义(P>0.05);第4周模型组平衡指数降低30%,大蒜油低剂量组降低45%,大蒜油高剂量组降低68%,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.01).大蒜油低、高剂基组大鼠在第4周即出现运动异常,较模型组人鼠提前1周;各组步态评分,模型组,大蒜油低、高剂量组均明显高于对照组,且大蒜油高剂量组高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05).在大脑、脊髓和坐骨神经中,与正常对照组相比,模型组人鼠MDA含量升高,抑制羟自由基能力降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,大蒜油低、高剂量组在各神经组织中MDA含量均明显降低,抑制羟自由基能力明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 大蒜油可拮抗2,5-HD所致的大鼠神经组织氧化损伤,但并末改善2,5-HD导致的周围运动神经损伤,提示氧化-抗氧化损伤不是2,5-HD中毒性神经病的主要机制.     

2,5-己二酮染毒对大鼠坐骨神经雪旺氏细胞中S100β的影响

目的观察2,5-己二酮(2,5-hexanedione,HD)染毒致中毒性周围神经病变大鼠坐骨神经雪旺氏细胞中S100β蛋白与mRNA表达变化。方法将9周龄SPF级Wistar雄性大鼠分为3组,每组23只。HD低剂量和高剂量组经腹腔注射染毒给予100 mg/kg和300 mg/kg HD,连续8周,每周5次;对照组给予等体积生理盐水。各组处死10只大鼠并分离坐骨神经,采用免疫组化方法检测S100β蛋白表达和实时定量聚合酶链式反应方法观察mRNA表达,另取3只大鼠分离坐骨神经用于电镜观察。其余30只大鼠停止染毒、自然恢复8周后取材。结果染毒8周后高剂量组动物后肢全部瘫痪,低剂量组动物步态异常如后肢肌力下降。电镜观察染毒组动物坐骨神经髓鞘的形态异常。低、高剂量组中S100β表达量分别为对照组的92%和79%,染毒终止、恢复8周后为149%(P<0.05)和119%。染毒8周时S100βmRNA表达水平均降低,为对照组的0.65倍(P<0.05)和0.56倍(P<0.05),染毒终止、恢复8周后分别为1.46倍和0.87倍。结论 HD染毒大鼠中毒性周围神经病变坐骨神经雪旺氏细胞中S100β蛋白和mRNA表达发生变化,S100β蛋白参与了中毒性周围神经病变发生。     

尿中2,5-己二酮气相色谱测定方法探讨

目的建立用10?AP不锈钢柱有效分离尿中2,5-己二酮测定的气相色谱方法。方法将尿样经盐酸水解,乙醚萃取,在气相色谱仪上用10?AP不锈钢柱,在柱温165℃恒温,FID检测器260℃,进样器250℃条件下,以保留时间定性,峰高定量能够准确测量尿中2,5-己二酮的含量。结果方法的最低检出浓度为0.286mg/L,线性范围1.9￣113.4μg,线性回归系数r=0.9991,精密度RSD<10%,平均回收率94.1%￣97.7%。结论本方法能够有效分离和准确测定尿中2,5-己二酮的含量,方法灵敏度和准确度满足工作要求。     

尿中2,5-己二酮的毛细管柱气相谱测定法

目的 探讨毛细管柱气相色谱法测定尿中的2,5-己二酮。方法 尿样经酸化后,用乙酸乙酯萃取,然后用毛细管柱气相色谱测定尿中的2,5-己二酮。结果 应用毛细管柱气相色谱测定尿中2,5-己二酮的方法线性范围为0.25-50μg/ml,相对标准偏差（RSD）为6.39%-7.11%,加标回收率为90.27%-106.4%,最低检出限为0.021μg/ml。结论 毛细管柱气相色谱法测定尿中2,5-己二酮线性范围宽,灵敏度高,可靠性好,具有一定的实际应用价值。     

雌激素对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞合成NGF及COX-2的影响及传导通路研究

目的 观察雌激素(E2)对子宫内膜异位症(EMs)患者在位子宫内膜间质细胞(ESC)合成神经生长因子(NGF)及环氧化酶-2(COX-2)的影响,以及阻断核因子-κB(NF-κB)信号通路后ESC合成NGF及COX-2的变化,探讨雌激素导致EMs患者疼痛的可能信号传导通路.方法 体外分离培养42例EMs患者在位ESC,用10-8 mol/L E2(E2组)、25 μmol/L NF-κB抑制剂(PDTC)+ 10-8mol/L E2(E2+PDTC组)处理细胞24h后,采用Western blot及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测ESC合成NGF、COX-2蛋白及mRNA水平的变化.结果 E2组NGF、COX-2的蛋白及mRNA均高于对照组,差异均有统计学意义(t值分别为4.745、6.317、3.465、5.443,均P＜0.05).E2+ PDTC组NGF、COX-2的蛋白及mRNA均低于E2组,差异均有统计学意义(t值分别为3.675、5.319、7.132、8.514,均P＜0.05),但仍高于对照组,差异均有统计学意义(t值分别为3.526、4.733、4.261、5.513,均P＜0.05).结论 在体外,雌激素可促进EMs患者在位ESC中NGF、COX-2表达,PDTC可部分抑制这种作用,说明NF-κB通路参与了雌激素调节EMs在位ESC中NGF、COX-2表达调控,阻断和调控NF-κB信号通路的活性可能为治疗EMs提供新策略.     

早期触摸和环境刺激对新生鼠脑神经生长因子及酪氨酸激酶受体A的影响

目的探讨早期触摸和环境刺激对新生鼠额皮质、海马神经生长因子（nerve growth factor,NGF）及酪氨酸激酶受体A（tyrosine kinase receptor A,Trk A）的影响。方法60只正常新生鼠被随机分为干预组与对照组。对干预组进行早期触摸14d,随后置于丰富环境14d。其NGF含量及Trk A表达,分别采用ELISA和免疫组织化学方法进行检测。结果在额皮质和海马,干预组大鼠NGF含量分别为（2343.58±133.15）pg/g和（1547.42±65.32）pg/g,Trk A阳性细胞数分别为（80.56±20.12）/HF和（66.42±21.83）/HF;而对照组NGF含量分别为（2174.70±165.21）pg/g和（1475.23±76.72）pg/g,Trk A阳性细胞数分别为（63.50±18.23）/HF和（50.45±17.28）/HF。干预组NGF含量和Trk A阳性细胞数均明显高于对照组（P〈0.05）。结论脑组织内NGF的含量和Trk A表达的提高,可能与早期触摸和环境刺激促进脑发育有关。     

人参皂苷Rb1对周围神经损伤后大鼠背根神经节神经生长因子及其受体酪氨酸激酶A表达的影响

目的 观察人参皂苷Rb1对周围神经损伤后大鼠背根神经节神经生长因子(nerve growth factor, NGF)及其受体酪氨酸激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)表达的影响。 方法 将SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、甲钴胺组(10.8 mg/kg)、人参皂苷Rb1低剂量组(25 mg/kg)、人参皂苷Rb1高剂量组(50 mg/kg)。采用神经夹持损伤法建立周围神经损伤模型,造模完成后灌胃给药,持续14 d。末次给药后,采用光热耐痛阈测定法评价大鼠的感觉恢复情况,Western-blotting法检测大鼠背根神经节NGF及其受体TrkA蛋白表达情况,RT-PCR法检测基因表达情况。 结果 与假手术组比较,模型组大鼠对热痛感觉的灵敏度下降(11.23±2.11 vs. 7.14±0.67,P<0.01),背根神经节NGF及其受体TrkA蛋白和基因表达均显著下调(0.34±0.05 vs. 0.87±0.11,0.31±0.04 vs. 0.79±0.10,P<0.01);给予高剂量的人参皂苷Rb1干预后,模型大鼠的热痛感觉恢复良好,数值为(8.36±0.92)(P<0.01),背根神经节NGF、TrkA的蛋白和基因水平均得到回升,分别为(0.65±0.07)、(0.70±0.08)(P<0.01)。 结论 人参皂苷Rb1能通过提高背根神经节NGF及其受体TrkA的表达,维持神经元存活,促进受损神经修复,改善周围神经损伤后大鼠的感觉功能。     

赤霉素对雌性大鼠早期生长发育及胰岛素样生长因子表达水平的影响

目的探讨植物生长调节剂赤霉素对雌性SD大鼠生长发育及胰岛素样生长因子(IGF-1)表达水平的影响。方法选择刚断乳雌性SD大鼠40只,随机分为4组,即对照组,低、中、高赤霉素剂量组,分别按照0、2、100和200mg/kg赤霉素剂量经口灌胃,连续15天,每天记录身长、体重、阴道开口情况。染毒结束,剖杀受试动物,获得肝脏、卵巢、子宫,计算脏器系数。提取肝组织RNA进行RT-PCR,检测肝内IGF-1、胰岛素样生长因子捆绑蛋白(IGFBP-1)基因的表达水平。结果各组间大鼠的身长、体重,阴道开口时间,子宫、卵巢的脏器系数差异无显著性(P>0.05),肝组织内IGF-1、IGFBP-1平均表达水平差异亦无显著性(P>0.05),但高剂量组部分样本出现IGF-1、IGFBP-1表达强度倒置的现象。高剂量组动物的肝脏系数小于对照组(P<0.05)。结论在0～200mg/kg剂量范围赤霉素接触对雌性SD大鼠生长发育、肝脏内IGF-1及其捆绑蛋白的表达影响不明显,但200mg/kg剂量的赤霉素摄入可能对其肝脏产生损伤。     

GH对创伤与感染SD大鼠IGF-1水平及营养代谢的影响

目的　探讨创伤与感染及外源性生长激素对SD雄性大鼠血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及营养代谢的影响。　方法　SD雄性大鼠60只，随机分成生长激素治疗组和对照组(各30只)，复制成腹腔感染动物模型，治疗组术后第1天开始给予GH0.5U     

Enhancing Effect ofMycoleptodonoides aitchisoniion Synthesis of Nerve Growth Factor and Releasing Dopamine in the Rat Brain

Abstract

The effects of edible mushroom Mycoleptodonoides aitchisonii on the synthesis of nerve growth factor (NGF) and neurotransmitter metabolism in rat brain were examined in Wistar strain rats fed a controlled diet for 14 days. Then each brain was dissected to detect the levels of neurotransmitters and NGF in various regions. Dopamine concentration in the cerebral cortex was 1.5-fold significantly increased in the M. aitchisonii feeding group than the control group. However, NGF concentration of the M. aitchisonii feeding was significantly low. NGF concentration in this remaining area of brain from where the cerebral cortex, striatum, hippocampus, cerebellum, hypothalamus and amygdala were removed was significantly higher in the M. aitchisonii feeding. At the same time, in the striatum, the dopamine metabolite DOPAC was significantly increased in the M. aitchisonii feeding. Thereafter, we measured dopamine release from striatal slices using aqueous extract of M. aitchisonii, there was an enhancing effect on dopamine release. These results suggested that M. aitchisonii has enhancing effect on the synthesis of NGF and catecholamine metabolites in the rat brain.     

锰对大鼠生精上皮细胞色素C和波形蛋白表达及对生精功能的抑制效应

目的 研究氯化锰对大鼠生精细胞细胞色素C(cytochrome-c,cyto-c)和支持细胞波形蛋白(vimentin,VM)表达的影响及对生精功能的抑制效应.方法 将雄性SD大鼠随机分为空白对照、低剂量和高剂量组,8只/组.MnCl2组分别染锰4和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,取睾丸采用免疫组织化学(SABC)法检测生精细胞cyto-c和支持细胞VM表达,测定睾丸脏器系数,取附睾检测精子数量和精子畸形率.结果 与空白对照组比较,各染锰组生精细胞cyto-c阳性率由80％下降至60％,VM阳性率由50％下降至2％,睾丸脏器系数由1.2％下降至1％,精子数量由1.1×107ml下降至0.2×107/ml,精子畸形率由28‰上升至64‰,且均呈一定的时间-效应关系和剂量-效应关系.各组大鼠精子数量与cyto-c和VM阳性率均呈正相关.结论 锰可诱导大鼠cyto-c和VM表达,抑制生精功能.     

慢性铅暴露对大鼠GAP-43蛋白表达和学习记忆影响

目的 探讨发育期慢性低浓度铅暴露对大鼠学习记忆及脑海马神经生长相关蛋白(GAP-43)表达影响.方法 30只孕鼠随机分为3组,自受孕1 d起,分别给予蒸馏水,0.05%,0.2%醋酸铅饮水,断乳后仔鼠自行饮用含铅水,至出生后28 d;生后56 d用水迷宫方法测试仔鼠学习记忆行为改变;蛋白印迹实验(Western blot)方法检测脑海马GAP-43蛋白表达.结果 发育期慢性低浓度铅暴露可致大鼠空间学习记忆能力下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);生后1、3、7、14、21、28 d,0.05%,0.2%醋酸铅组脑海马GAP-43表达量分别为(0.258±0.089)、(0.832±0.021)、(0.806±0.047)、(0.933±0.010)、(0.593±0.004)、(0.437±0.015)和(0.115±0.010)、(0.590±0.018)、(0.680±0.027)、(0.703±0.004)、(0.450±0.014)、(0.325±0.007),均明显低于对照组(P<0.05).结论 铅致仔鼠空间学习能力下降,与脑海马GAP-43蛋白表达水平下降有关.     

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂对SiO2所致肺上皮间质转化的体外干预

目的观察表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)对二氧化硅(Si O2)所致肺上皮细胞间质转化的影响,并探讨表皮生长因子受体(EGFR)信号通路在肺纤维化上皮间质转化中的作用。方法体外制备矽肺细胞模型,用EGFR-TKI干预染尘肺上皮细胞。实验分为正常对照组(Si O2粉尘浓度为0μg/ml)、模型组(Si O2粉尘浓度为200μg/ml)、低剂量干预组(A1组,EGFR-TKI浓度20μmol/L)、中剂量干预组(A2组,EGFR-TKI浓度40μmol/L)、高剂量干预组(A3组,EGFR-TKI浓度80μmol/L),干预48 h后,于倒置光学显微镜观察细胞形态学改变,并收集不同时段细胞,用RT-PCR检测E-cadherin、α-SMA、EGFR mRNA表达水平,细胞免疫荧光方法检测蛋白表达的变化。结果 EGFR-TKI干预,上皮细胞转化停滞,表现为纤维状伪足变短,呈类圆形;E-cadherin mRNA和蛋白表达无明显变化,模型组、A1组、A2组、A3组之间差异无统计学意义(P0.05);α-SMA mRNA、EGFR mRNA和其蛋白表达逐渐下降,各组之间差异具有统计学意义(P0.05)。结论 EGFR-TKI能抑制上皮间质转化,其机制可能与下调α-SMA表达和抑制EGFR活性有关。由此推测,抑制EGFR信号通路的活化可能为临床治疗肺纤维化提供新的思路和途径。