丙泊酚对缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞c-Fos表达及LDH的影响

目的 :研究丙泊酚对缺氧 /复氧培养大鼠心肌细胞 c- Fos表达和培养基乳酸脱氢酶 (L DH)含量的影响。方法 :建立 S D大鼠心肌细胞原代培养及缺氧 /复氧模型。将培养细胞按孔随机分为 6组 : 组为对照组 , 组为缺氧 /复氧组 ; 、 、 和 组为在缺氧前 10 min开始分别加入脂肪乳、丙泊酚 2 5μmol· L- 1 、5 0μmol· L- 1 和 10 0μmol· L- 1。用免疫组化法和灰度分析观察 3种剂量的丙泊酚对复氧 2 h c- Fos表达的影响。用生化比色法测定复氧3h时培养基中 L DH含量。结果 :缺氧 /复氧使心肌细胞 L DH漏出量明显增加 (P<0 .0 5 ) ,3种浓度的丙泊酚均能明显抑制细胞 L DH释放 (P<0 .0 5 )。 组与 组相比平均灰度值明显降低 (P<0 .0 5 ) ; 、 组与 组比较平均灰度值均显著增高 (P<0 .0 5 )。结论 :3种浓度的丙泊酚均有心肌保护作用且 5 0μmol· L- 1 和 10 0μmol· L- 1 浓度的丙泊酚能明显抑制缺氧 /复氧培养大鼠心肌细胞 c- Fos表达     

姜黄素对缺氧复氧心肌细胞的保护作用及HSp70表达影响

目的：探讨姜黄素对缺氧复氧的乳鼠心肌细胞是否具有保护作用,这种保护作用是否与热休克蛋白70（HSp70）表达有关。方法：原代培养乳鼠心肌细胞,MTT法测IC50确定姜黄素浓度,建立缺氧复氧模型,分别测定各组细胞乳酸脱氢酶（LDH）活性、丙二醛（MDA）含量,缺氧/复氧细胞凋亡与坏死,并用免疫组织化学检测HSp70表达。结果：缺氧/复氧模型预先加姜黄素组较I/R组LDH活性与MDA含量下降,HSp70表达增加,细胞凋亡与坏死少。结论：姜黄素对体外培养的缺氧复氧心肌细胞具有保护和抗凋亡作用,姜黄素对缺氧复氧心肌细胞保护作用可能与HSp70表达增加有关。     

腺病毒介导的HSP70基因转染对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究热休克蛋白70(HSP70)基因转染对体外培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞,以携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的腺病毒载体(Ad.EGFP)按不同感染倍数(MOI)感染体外心肌细胞,通过荧光显微镜、流式细胞仪观察所构建腺病毒的感染力和安全性;应用含有人HSP70基因的重组腺病毒(Ad.HSP70)进行体外感染,采用ELISA法、Western印迹法及免疫组化染色法检测HSP70基因在心肌细胞中的表达情况。利用体外心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,研究HSP70基因转染对心肌细胞的保护作用。结果:原代培养获得高纯度的乳鼠心肌细胞,随着MOI值升高,Ad.EGFP的感染效率和基因表达增强,在MOI值为50时,Ad.EGFP感染心肌细胞的效率高于90%,在MOI值为200时,未见心肌细胞的生长明显受抑;ELISA法、Western印迹法证实转染的心肌细胞在正常生理状态下,可高水平表达HSP70。免疫组化染色法结果显示,表达的HSP70主要分布于心肌细胞的胞质和胞核中;利用体外的缺氧/复氧损伤模拟在体的缺血/再灌注损伤,结果显示Ad.HSP70感染组的细胞活力、MT...     

利多卡因对缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞c-fos表达及LDH释放的影响

目的:研究利多卡因对缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞LDH漏出及c-fos表达的影响。方法:建立SD大鼠心肌细胞原代培养及缺氧/复氧模型。将40孔原代培养大鼠心肌细胞分为5组,每组8孔。Ⅰ组为对照组;Ⅱ组缺氧2h复氧3h;Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组与Ⅱ组比在缺氧前开始分别加入利多卡因50μmol.L-1、100μmol.L-1和150μmol.L-1。复氧3 h时用生化比色法测定培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活力。将75孔细胞同上分为5组,在复氧2 h时用免疫组化法和图像平均灰度分析法测定c-fos的表达。结果:3种浓度利多卡因均能减少心肌细胞LDH漏出(P<0.05)。Ⅱ组与Ⅰ组比c-fos表达明显增加,Ⅵ组和Ⅴ组与Ⅱ组比较c-fos表达明显被抑制,平均灰度值差异有统计学意义(P<0.05)。结论:3种浓度的利多卡因能防治心肌细胞缺氧/复氧损伤,并且呈剂量相关性。     

液体石蜡封闭法建立大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型

目的:探讨液体石蜡封闭法建立大鼠心肌细胞H9C2缺氧/复氧损伤模型的可行性与稳定性。方法:将体外培养在六孔板中的大鼠心肌细胞H9C2随机分为对照组和实验组,对照组常规培养不做处理,实验组每孔细胞用高温灭菌的液体石蜡2mL封闭,造成缺氧环境,缺氧时间段分别为2、4、8、12h,处理结束后吸除石蜡,加入新鲜DMEM培养基,置二氧化碳培养箱中继续培养2h。超氧阴离子探针Dihydroethidium检测活性氧自由基含量变化;AnexinV/PI染色行流式细胞术检测不同时间缺氧/复氧处理后细胞凋亡率。结果:对照组细胞产生少量氧自由基;实验组随缺氧/复氧时间延长,氧自由基含量逐渐增加,缺氧2、4、8、12h细胞凋亡率分别为(0.76±0.15)%,(5.22±0.74)%,(10.36±2.07)%,(31.00±4.32)%,与对照组相比除缺氧2h组外其余三组均有显著性差异(P<0.05)。结论:液体石蜡封闭法建立H9C2缺氧/复氧损伤模型简单易行、重复性好。     

硫酸镁对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 研究硫酸镁对纯化培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用及其作用机制。方法 采用培养乳鼠心肌细胞建立缺氧／复氧损伤模型,实验分为五组：正常对照组、缺氧／复氧损伤模型组、缺氧／复氧损伤＋MgSO4（2．2、4．0、7．2mmol／L）组。分别用黄嘌呤氧化酶法测定细胞内SOD活性,硫代巴比妥酸法测定细胞内MDA含量,MTT染色法测定心肌细胞活力并测定培养液中LDH含量的变化。结果 硫酸镁能显著提高细胞内SOD的活性,降低MDA、LDH的含量并可提高心肌细胞的活力。结论 硫酸镁具有明显的抗缺氧／复氧损伤、保护心肌细胞的作用。     

葛根素对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究葛根素对培养SD乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的拮抗作用。方法:葛根素(50和100mg/L)预处理24h后作用于乳鼠心肌细胞A/R损伤模型,运用MTT法测定细胞存活率,比色法测定细胞培养液中LDH和细胞内SOD活性及MDA含量。运用流式细胞术Annexin V-PI双染法测定细胞凋亡变化。结果:与A/R模型组比较,葛根素明显提高细胞存活率,增加胞内SOD活性,降低培养液中LDH释放量和胞内MDA含量;同时降低细胞的凋亡率。结论:葛根素对A/R损伤心肌细胞具有保护作用,其机制可能与清除自由基的产生有关。     

还原型谷胱甘肽对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤LDH、MDA的影响

目的研究乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤后乳酸脱氧酶(LDH)及丙二醛(MDA)的变化及还原型谷胱甘肽(GSH)对其影响。方法乳鼠心肌细胞随机分为5组:A组为正常对照组;B组为A/R组(缺氧2h,复氧1h);C、D、E组为GSH处理组,即首先加入GSH,分别使其终浓度为40、80、160mg.L-1,然后进行A/R,于复氧后测定各组培养液中LDH水平及细胞内MDA含量和细胞活性。结果与正常对照组相比,A/R组LDH、MDA水平均显著升高(P<0.01),细胞活性显著降低(P<0.01)。与单纯A/R组比,D、E组上述变化均明显减轻(P<0.01)。结论GSH对乳鼠心肌细胞A/R损伤具有保护作用,并具有浓度依赖性。     

Effects of L-THP on Ca2+ overload of cultured rat cardiomyocytes during hypoxia and reoxygenation

Summary The effects of L-tetrahydropalmatine (L-THP) on the cultured rat cardiomyocytes during hypoxia and reoxygenation and the mechanism of L-THP treating reperfusion-arrythmias were studied. The concentration of intracellular free calcium ([Ca²⁺]_i) of single cultured ventricular myocyte was determined by using EPC-9 light-electricity measurement system. It was found that L-THP (100 μmol/L) could reduce the [Ca²⁺]_i augmentation in single cultured ventricular myocyte during hypoxia and reoxygenation. Verapamil (10 μmol/L) had the similar effect. It was concluded that LTHP could inhibit the Ca²⁺ overload of cultured rat cardiomyocytes during hypoxia and reoxygenation. This study was supported by a grant from the National Research Foundation of the Ministry of Public Health (No. 96-Q-025).     

七氟醚和缺氧预适应诱导乳鼠心肌细胞HSP70表达的改变

目的 :探讨七氟醚预适应和缺氧预适应对乳鼠心肌细胞热休克蛋白 70表达的影响。方法 :第 2代培养心肌细胞随机分为正常对照组 (C组 )、缺氧 /复氧组 (A/R组 )、缺氧预适应组 (IP组 )和七氟醚预适应组 (S组 ) ,每组均缺氧 2h ,复氧 48h。分别取复氧 0 ,1,12 ,2 4,36和 48h的细胞 ,用免疫组化染色检测HSP70 表达并进行图象分析。结果 :在各个时间点 ,S组和IP组间的HSP70 表达均显著高于A/R组和C组 (P <0 .0 1) ,A/R组的HSP70 表达略高于C组 ,S组和IP组间的HSP70 表达差异无显著性 (P >0 .0 5 )。随着复氧时间的延长 ,S组和IP组间的HSP70 表达从 1h开始增加 ,2 4h表达最强 ,与 1h相比差异具有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :七氟醚预处理和缺氧预处理均可诱导乳鼠心肌细胞HSP70 在延迟相呈高表达 ,提示HSP70 参与了七氟醚预适应和缺氧预适应的延迟保护相。     

二氯乙酸对肥大心肌细胞缺氧复氧的抗凋亡作用

目的研究缺氧复氧损伤诱导体外培养新生大鼠的肥大心肌细胞凋亡及干预糖代谢对此过程的作用.方法取体外培养的新生大鼠心肌细胞,以血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, AngⅡ)诱导其肥大,分4组:一组于3%O2、5%CO2、92%N2的培养箱中培养12、24、36 h,再恢复正常条件培养4 h,造成缺氧复氧损伤的肥大心肌细胞模型;另三组加入二氯乙酸盐(dichloroacetate, DCA)分别使其终浓度为10-3、10-4、 10-5 mmol/L,再缺氧复氧相同时间;电镜观察肥大心肌细胞及凋亡细胞的超微结构变化;Hochest33342/PI荧光染色识别凋亡细胞;TUNEL法观察心肌细胞凋亡形态学特征,并记数凋亡心肌细胞数,检测心肌细胞凋亡率.结果肥大心肌细胞在缺氧12、24和36 h后复氧4 h,TUNEL法可检测到阳性的凋亡细胞,凋亡率分别为:(19.99±4.88)%,(22.66±5.08)%和(24.47±5.74)%;肥大心肌细胞缺氧培养12、24、36 h后加入DCA10-3mmol/L再复氧4 h检测其凋亡率分别为(16.5±3.24)%, (9.7±3.52)%和(22.5±3.41)%;肥大心肌细胞缺氧培养12、24、36 h后加入DCA10-4mmol/L再复氧4 h检测其凋亡率分别(17.4±3.72)%, (20.6±3.94)%和(23.5±3.76)%;肥大心肌细胞缺氧培养12、24、36 h后加入DCA10-5mmol/L再复氧4 h检测其凋亡率分别(18.4±3.44)%, (21.3±3.77)%和(23.8±3.73)%.结论缺氧引起的心肌细胞凋亡率随着缺氧时间的延长而增高;缺氧复氧较单纯缺氧肥大心肌细胞凋亡率增加; DCA对缺氧复氧损伤引起的肥大心肌细胞凋亡有抑制作用.     

不同强度和时程应激对大鼠海马HSP70mRNA习惯化表达的影响

目的：观察重复低强度强迫游泳应激后大鼠海马HSP70mRNA表达及习惯化表达;应激强度改变对HSP70mRNA表达的影响。方法：采用反转录-聚合酶链反应（RT PCR）方法,观察重复强迫温水游泳应激导致大鼠海马HSP70mRNA表达的变化和不同应激强度对HSP70mRNA表达的影响。结果：重复强迫温水游泳可导致HSP70mRNA表达习惯化,当再给予4?℃冰水游泳应激时,可引起HSP70mRNA表达增加。结论：重复应激可以导致HSP70mRNA表达习惯化,高强度应激可以逆转低强度应激引起的习惯化效应。     

丙泊酚麻醉对肝癌射频消融术患者血清白介素和HSP70水平的影响

目的:探讨丙泊酚全身麻醉对肝癌射频消融术患者血清白介素(IL)-6、8、10和热休克蛋白70(HSP70)水平的影响。方法:择期行肝癌射频消融术的患者40例,分成2组施术,每组20例。观察组患者在全麻诱导后应用丙泊酚和瑞芬太尼维持麻醉,对照组患者在穿刺部位利多卡因局部阻滞麻醉。术中检测麻醉前、首次穿刺成功时,热封闭针道时,术后1h、24h和48h时的平均血压、心率、脉搏血氧饱和度和体温;采集患者术前,术后1、24和48h静脉血5mL,ELISA法测定血清IL-6、IL-10、IL-8及HSP70。结果:2组患者术中和术后体温、血压均升高,但观察组变化幅度小于对照组(体温:F组间=14.568,F时间=291.525,F交互=13.655,P均<0.001;血压:F组间=23.372,F时间=14.007,F交互=25.795,P均<0.001)。2组术后血清IL-6、8、10及HSP70水平亦较术前升高(F时间分别为48.793、53.721、25.970和24.779,P均<0.001),而观察组L-6、8和HSP70升高幅度小于对照组(F组间=31.953、59.836和20.479,P均<0.001)。结论:丙泊酚麻醉可减轻肝癌射频消融术患者的伤害性炎性反应。     

热处理对HeLa细胞增殖、凋亡及HSP70表达的影响

目的:通过不同温度对HeLa细胞的处理,观察细胞的存活率,细胞凋亡以及HSP70蛋白表达的变化。方法:对HeLa细胞进行培养及不同温度的热处理,采用MTT法测定HeLa细胞的存活,通过免疫组化方法检测HeLa细胞HSP70蛋白表达的变化以及DNA ladder观察HeLa细胞的凋亡变化。结果:45℃高温处理组细胞增殖的抑制最强,HSP70蛋白表达量最高,细胞凋亡程度最高,41℃次之,37℃最低。结论:高温可以增强热休克蛋白HSP70的表达,进而促进细胞的存活,抑制细胞凋亡。     

鼻咽癌放疗残灶中HSP70/HSP27蛋白的表达

目的：分析鼻咽癌原发组织HSP70/HSP27蛋白表达与放疗残灶的相关性,探讨HSP70/HSP27表达对鼻咽癌放疗残灶的预测价值。方法：应用SP免疫组织化学法检测58例鼻咽癌原发组织HSP70/HSP27热休克蛋白表达,其中规范放疗后有残存癌灶的28例鼻咽癌为实验组,随访5年无癌灶复发的30例为对照病例。结果：HSP70和HSP27在实验组阳性表达率分别为92.9％(26/28)和53.6%(15/28),而在对照组的阳性表达率为53.3％(16/30) 和53.3%(16/30),HSP70阳性表达率在两组间比较有统计学差异(P<0.05),而HSP27阳性表达率在两组间比较无统计学差异(P>0.05);HSP70和HSP27在实验组共同阳性表达率为50.0%(14/28),对照组为16.7%(5/30),两者比较有统计学差异(P<0.05);两者共同阴性表达率在实验组和对照组分别为3.6%(1/28) 和10.0%(3/30),两者相比无统计学差异（P>0.05）。结论：HSP70在鼻咽癌抗放射损伤中可能起重要作用,检测鼻咽癌组织HSP70蛋白表达对预测鼻咽癌放射后癌灶残存可能有重要价值。     

芬太尼对缺氧复氧损伤相关的心肌细胞凋亡的影响

目的观察不同剂量芬太尼对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响,在细胞水平上为临床应用芬太尼减轻心肌缺血再灌注损伤提供理论依据。方法以常规方法制备与培养心肌细胞。实验分为正常对照组（C组）、单纯缺氧复氧组（A/R组）、各试验组（F1、F2、F3、F4组）。C组不经任何处理。A/R组、各试验组均经历2h缺氧及1h复氧。缺氧前,各试验组分别给予终浓度为2、10、50、250ng/ml的芬太尼。分别以MTT快速比色法检测细胞存活情况（OD值）、流式细胞仪检测细胞凋亡率及透射电子显微镜观察细胞超微结构改变。结果各试验组OD值均显著高于A/R组,细胞凋亡率显著低于A/R组,电镜显示A/R组细胞超微结构改变呈典型的凋亡细胞形态学改变,F3组细胞形态大致正常,凋亡细胞少见。F3组（50ng/ml）在所有试验组中OD值最高,细胞凋亡率最低。芬太尼剂量在50ng/ml内,OD值与剂量呈正相关（r=0.720,P〈0.01）,细胞凋亡率与剂量呈负相关（r=-0.990,P〈0.01）。结论①芬太尼对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤有保护作用;②在一定剂量范围内芬太尼的保护效应与剂量成正相关。