单独抗-HBc阳性隐匿性HBV检测方法研究进展

正隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)是HBV感染的一种特殊形式,指血清HBsAg阴性,肝脏组织HBV DNA阳性,伴或不伴血清HBV DNA阳性的HBV感染。国内报道OBI在献血者及健康人群中的发生率为0.010 6%~2.710 0%~[1]。OBI患者能够经输血、器官组织移植等传播HBV,合并OBI可能会对丙肝患者的治疗效果造成影响或引发肝癌。研究显示,作为OBI血清学表现形式之一,单独抗-HBc阳性患者HBV DNA     

HBV DNA阳性献血者感染标志物定量分析

目的 探究乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）阳性献血者感染标志物含量特征。方法 收集2019年9月至2021年5月金华市中心血站HBV DNA阳性献血者标本,运用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）定量检测乙肝五项和实时荧光PCR技术定量检测HBV DNA,并按照HBsAg阴性和HBsAg阳性进行分组比较感染标志物含量。结果共检测46 324例标本,发现HBV DNA阳性124例,阳性率0.27%,平均HBV DNA浓度（1.82±0.94）lgIU/mL。其中,HBsAg阴性组64例、HBsAg阳性组60例。HBsAg阴性组HBcAb阳性率为93.75%,主要以HBeAb(+)+HBcAb（+）及单独HBcAb（+）血清学模式为主,HBcAb平均浓度9.01(6.10,11.51)PEIU/mL,HBsAb平均浓度为3.18(1.06,14.86)mIU/mL,HBV DNA平均浓度为1.33(0.90,1.70)lgIU/mL。HBsAg阳性组HBcAb阳性率为100%,主要以HBeAb(+)+HBcAb（+）模式为主,HBcAb平均浓度14.85(9.90,18.48)PEIU/m...     

郑州市某民办学校学生HBsAg阳性率和抗-HBs水平分析

目的了解近年来乙肝疫苗普遍接种后,郑州市某民办学校学生的 HBsAg 阳性率和抗-HBs 水平状况。方法对2003～2004年郑州市民办某小哈佛双语学校465名5～15岁入学新生进行了血清免疫检测(HBsAg 和抗-HBs)。结果 HBsAg 阳性率为0．4%(2/465),较1992 年有大幅度下降,2003～2004年0～6岁年龄组未检出;抗-HBs 阳性率为58．5%(272/465),较 1992年河南省调查的抗-HBs 阳性水平有大幅度提高。结论抗-HBs 阳性率随年龄增大而降低,而 HBsAg 阳性率则随年龄增大而升高,提示加强接种疫苗的重要性。     

HBsAg阴性、HBV DNA阳性献血者病毒感染特征研究

目的了解上海地区献血人群中血清HBsAg阴性、HBV DNA阳性感染的流行率、病毒血清学和分子生物学特点。方法选取HBsAg阴性、核酸筛查确认为HBV DNA阳性的献血者血清标本,采用酶联免疫法（ELISA）检测病毒血清标志物抗-HBc和抗-HBs;PCR扩增HBV S区基因片段,对扩增后的产物进行测序分析后,将产物序列与Genbank中HBV序列进行Blast比对,获得标本HBV毒株的基因型;采用DNAMAN软件进行蛋白表达分析,确定标本毒株的血清型,并与Genbank中野生型HBV序列进行比较,获得S区基因编码蛋白突变情况。结果上海地区HBsAg阴性献血人群HBV DNA阳性感染率约为0.045%。18例HBsAg阴性、HBV DNA阳性标本血清病毒载量均低于200IU/ml,且大部分低于20IU/ml;其中14例（77.8%）病毒血清标志物为抗-HBc和/或抗-HBs阳性。18例样本全部为B和C基因型,主要为adw和adr血清型。14例血清抗-HBc和/或抗-HBs阳性样本中,13例样本发生了S蛋白氨基酸突变,其中8例B基因型较多发生Q101K/H、M103T/I、F134L、D144A突变,5例C基因型较多发生S114T/A、T118K/R、K141T、S143T突变;4例血清阴性样本中,均未发生S区蛋白位点突变。结论上海地区献血者存在HBsAg阴性、HBV DNA阳性感染者,其血清病毒载量低,感染病毒全部为B和C基因型,主要为adw和adr血清型;其中大部分为隐匿性HBV感染,少数可能为窗口期感染;隐匿性HBV感染病毒多发生S蛋白氨基酸位点突变。     

72例HBs—Ab单项阳性合并HBV—DNA阳性的临床分析

目的 了解乙肝表面抗体（HBs—Ab）单项阳性时HBV—DNA含量及其复制情况，明确其是否具有传染性，探讨其可能意义。方法 采用ELISA法检测乙肝病毒标志物（HBV—M）1486例，然后用荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）技术检测HBV—DNA，同时常规检测肝功能。结果 共检测出单项HBs—Ab（＋）72例，HBV—DNA阳性率为22．22％（16／72）。14例既往有乙肝疫苗注射史，HBV—DNA阳性率为0％；58例未注射乙肝疫苗，HBV—DNA阳性率为27．59％（16／58）。HBV—DNA（＋）的16例中定量小于105cop／mL占68．75％（11／16），105—107cop／mL的占31．25％（5／16），〉107cop／mL的为0。结论 注射乙肝疫苗组单项HBs—Ab（＋）确为机体产生的保护性抗体。未注射乙肝疫苗组单项HBs-Ab（＋）病例中大部分HBV复制停止．HBs—Ab也确为机体产生的保护性抗体；但有少数病例HBV仍呈低、中度复制，具有一定的传染性，可能成为隐匿感染源，在选择血源和器官移植供体时应引起高度重视。     

献血人群血清anti-HBC和HBV DNA检测的意义

目的探讨无偿献血者乙型肝炎病毒核心抗体与隐匿性感染的关系。方法收集无偿献血者样本9 100份,采用ELISA法进行HBsAg和anti-HBC血清学筛查,对anti-HBC阳性血清PCR检测乙肝病毒核酸。结果 911份（10.01%）标本为anti-HBC阳性,其中820份（90.01%）HBsAg阴性,34例血清HBV DNA阳性。结论常规检测对于献血者筛查具有重要意义。     

HBsAg阴性HBV DNA阳性样本300例补充试验结果分析

目的 分析乙肝表面抗原（HBsAg）阴性乙肝病毒DNA(HBV DNA)阳性标本的补充试验结果。方法 选择2013年至2021年间的献血者样本,用酶联免疫吸附试验（ELISA）法筛查,无反应性标本用核酸检测技术（NAT）方法检测,对HBV DNA检测呈反应性的部分样本再进行乙肝五项进行补充试验。结果 对498 279份ELISA阴性的样本进行NAT检测,共检出HBV DNA阳性886例,隐匿性乙肝（OBI）检出率为1.78‰,对其中300份样本进行乙肝五项补充试验,发现抗-HBc阳性27例,抗-HBe、抗-HBc两项阳性62例,HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性11例,抗-HBs、抗-HBc阳性163例,抗-HBs阳性10例,五项全阴共有27例。结论 献血者中存在血清学阳性OBI和血清学阴性OBI,补充试验对指导献血者就医,提升血站服务具有重要意义。     

乙肝病毒表面抗原与表面抗体同时阳性者HBV DNA检测

乙型肝炎的恢复期表面抗原（ＨＢｓＡｇ）消失后，表面抗体（抗－ＨＢｓ）开始出现。５０％的自限性ＨＢＶ感染者，其ＨＢｓＡｇ消失到抗－ＨＢｓ出现之间的间隔可达数月，传统观念认为抗－ＨＢｓ与ＨＢｓＡｇ难以同时出现。随着检测手段的提高，近年来同时检测的报导不少...     

隐匿性HBV感染献血者随访复查及归队可能性探讨

目的了解隐匿性HBV感染献血者的转归情况及回归献血的可能性。方法对部分隐匿性HBV感染献血者进行随访,复检HBsAg、HBV DNA及抗-HBs和抗-HBc等。结果共有51名OBI献血者完成随访复检,平均年龄为41.68±7.71岁;其中34名出现HBV DNA转阴(66.7%),平均年龄(34.88±9.05)岁;17名献血者随访时持续HBV DNA阳性,平均年龄(44.88±4.81)岁,P0.05。男性OBI献血者出现HBV DNA转阴的比例(64.3%)与女性(77.8%)的差异无统计学意义;随访前体内是否抗-HBs阳性与随访时是否HBV DNA转阴没有必然联系。所有随访的献血者HBsAg持续阴性、ALT正常且无不适症状。结论 OBI献血者在随访的病程中存在较高比例的转阴率,是否可以归队献血需要经过严格的复检。     

抗-HIV 阳性献血者合并 HBV、HCV、TP 感染情况分析

目的：了解南宁市献血人群中人类免疫缺陷病毒（HIV）感染情况及 HIV 感染合并乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）以及梅毒螺旋体（TP）感染的情况。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对南宁市2011年1月至2012年12月230636例献血者血液标本进行乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、抗-HCV、抗-HIV 及 TP 检测,并将抗-HIV 反应标本送南宁市疾病预防控制中心（CDC）做确证实验;统计分析抗-HIV 确证阳性献血者合并感染 HBV、HCV 和 TP 的情况。结果230636例无偿献血者标本中抗-HIV 确证阳性标本95例,HIV 感染率为0．041％;95例抗-HIV 确证阳性标本中合并 HBV 感染1例（1．05％）,合并 HCV 感染6例（6．32％）,合并 TP 感染20例（21．05％）。结论南宁市无偿献血人群中的 HIV 感染率远高于国内其他一些地区;抗-HIV 阳性献血者的 HCV、TP 感染率明显高于抗-HIV 阴性献血者,合并 HBV 的感染率则无显著性差异。     

上海地区无偿献血者乙肝病毒核酸检测分析

目的了解无偿献血者乙肝病毒核酸筛查(NAT)阳性人群特点,为血液安全策略提供参考。方法无偿献血者血液经Murex和科华HBsAg ELISA试剂检测,结果为阴性的血液使用cobas TaqScreen MPX试剂进行HBV DNA,HCV RNA,HIV RNA 3项联合核酸检测。对于MPX反应性标本,使用COBAS AmpliPrep/TaqMan进行核酸鉴别试验,同时使用罗氏ECL电化学发光检测系统进行乙肝补充血清学试验。结果 2011年11月1日～2012年1月31日3个月共有献血者86 375人(次),其中有63 351人(次)为初次献血者,HBsAg反应性为1.04%,23 024人(次)为重复献血者,HBsAg反应性为0.46%,两者差异有统计学意义(χ2=63.63,P0.05)。84 990份HBsAg、抗-HCV、抗-HIV1/2阴性血液进行MPX核酸检测,共发现52例(0.060%)HBV DNA阳性,均为低拷贝,含量为(20～200)IU/ml间,其中32例(0.051%)来自初次献血者,20例(0.087%)来自重复献血者,两者比例差异无统计学意义(χ2=3.65,P0.05),没有发现HCV RNA与HIV RNA阳性。结论重复献血者HBsAg反应性比率低于初次献血者;HBsAg阴性献血者HBV DNA阳性率为0.060%,重复献血者HBV DNA阳性率与初次献血者比较,两者差异无统计学意义;开展HBV核酸检测能够进一步保障血液安全。     

HBV DNA PCR检测在HBsAg阴性献血人群中的应用

目的 探讨HBsAg阴性献血者HBV DNA榆测的应用价值,评估核酸检测的必要性.方法 采用PCR检测HBsAg阴性献血者HBV DNA.采用8人份混合血样测定,超离心浓缩病毒,磁珠法提取病毒核酸.如HBV DNA为阳性,则进一步检测乙型肝炎病毒血清标志物5项.结果 HBVDNA检测限量为25 U/ml,23 225份标本中有4份为HBV DNA阳性,检出率为0.17‰.进一步检测其他HBV感染的血清学指标,发现这4份标本中有2份为抗HBe和抗HBc阳性,1份为抗HBc阳性,1份为抗HBs、抗HBc阳性.对HBV DNA的定量测定表明,其含量在50～200 U/ml.结论 现行的2次酶联免疫技术的血液筛查存在HBV漏检,有必要在现有的血液筛查模式中增加抗HBc检测,或增加病毒核酸筛查.     

Two HBV DNA+/HBsAg− blood donors identified by HBV NAT in Shenzhen, China

Background

In order to further improve blood safety, mini-pool (MP) nucleic acid testing (NAT) was implemented to screen samples negative for hepatitis B surface antigen (HBsAg), anti-hepatitis C virus (anti-HCV), anti-human immunodeficiency virus (anti-HIV), syphilis (anti-Treponemal antibody) and with normal ALT.

Study design and methods

From August 2006 to February 2008, 41,301 donations were screened using commercial HIV/HCV RNA and HBV DNA Real-Time PCR NAT assays in pools of 8. Reactive pools were re-tested as individual samples using the appropriate screening test and confirmed using an alternate commercial NAT assay. Donors reactive on both NAT assays were considered ‘confirmed’ positive for the virus concerned and recalled for additional follow-up testing and counseling.

Results

Of the 41,301 samples screened, no HIV or HCV RNA-positive/seronegative donations were detected but two HBV DNA positive/HBsAg negative blood donors (Donors 1 and 2) were identified. Their respective hepatitis immunological markers were: Donor 1 - anti-HBc positive/anti-HBe positive/HBeAg negative/ALT normal and HBV DNA viral load of 112 IU/ml; Donor 2 - anti-HBc positive/anti-HBe negative/HBeAg negative/ALT normal and HBV DNA viral load 2750 IU/ml.

Conclusions

MP NAT identified two HBsAg negative donors with presumed occult infection but no HIV or HCV seronegative/NAT positive (yield) donors. The HBV yield rate of 1 in 20,650 (95%CI - 1 in 5663 to 1 in 75,303) is comparatively high, exceeds the predicted rate based on previous modeling for the population and demonstrates the incremental blood safety value of NAT in countries where HBV is highly epidemic. The low viral load of the two yield samples underscores the importance of optimizing the sensitivity of the HBV NAT assay selected for screening.     

HBsAg阴性献血者人群HBV感染的检测和输血残余风险分析

目的 了解献血人群乙型肝炎病毒(HBV)感染状况和血液经酶免疫法(EIA)筛查乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)后经血传播HBV感染的残余风险.方法 采用国产和进口两种EIA试剂对献血者血液进行HBsAg筛查,罗氏诊断COBAS Ampliscreens NAT血筛系统检测EIA检测合格标本中HBV DNA,对HBV DNA阳性标本进行半套式PCR检测,并对PCR扩增产物进行测序和病毒基因亚型分析.结果 共筛查1998～2008年的献血者232 305例,发现HBsAg阳性2 999例,阳性率为1.3%;对2002～2007年EIA检测合格的113 639例献血者血液标本进行NAT检测,检测出13份HBV DNA阳性、HBsAg阴性的献血者血液,HBV残余风险高达1.1/10 000.结论 EIA筛查后血液安全性有了很好的保障,经血传播HBV残余风险依然处于较高的水平,NAT应用对提高血液安全,降低输血传播HBV残余风险意义重大.     

梧州市血液检测阳性无偿献血者的分布情况

目的：了解梧州市血液检测阳性的无偿献血者的分布情况。方法对梧州市2010～2012年108879例无偿献血者的丙氨酸氨基转移酶（ALT）、乙肝表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒抗体（抗‐HCV）、人类免疫缺陷病毒抗体（抗‐HIV）、梅毒抗体（抗‐TP）检测结果进行回顾性统计分析。结果108879例无偿献血者中,5项检测指标的总阳性率为6．01％（6548/108879）,其中ALT阳性率为4．86％、HBsAg阳性率为0．57％、抗‐HCV阳性率为0．20％、抗‐HIV阳性率为0．07％、抗‐TP阳性率为0．59％。男性和女性之间ALT、HBsAg和抗‐HCV阳性率差异有统计学意义（P＜0．05）。ALT、抗‐TP阳性率最高的年龄组均为18～30岁,抗‐HCV阳性率最高的是大于30～40岁组。结论加大无偿献血宣传力度,做好献血前咨询,选择低危献血人群,对保证血液质量,减少输血传播疾病有重要意义。     

Lack of correlation between HBsAg and HBV DNA levels in blood donors who test positive for HBsAg and anti-HBc: implications for future HBV screening policy

BACKGROUND: Studies showing a significant correlation between hepatitis B surface antigen (HBsAg) and hepatitis B virus (HBV) deoxyribonucleic acid (DNA) levels have focused on the HBV seroconversion window period. STUDY DESIGN AND METHODS: HBsAg levels relative to HBV DNA results in 200 HBsAg-positive, anti-hepatitis B core antigen (HBc)-reactive blood donations were analyzed using quantitative polymerase chain reaction (PCR) (detection limit 400 copies/mL), two research PCR assays with increasing sensitivities (65 copies/mL and 1.3 copies/mL, respectively), and a quantitative HBsAg assay; HBsAg and HBV DNA levels were correlated with HBV serologic profiles; and the potential for replacing HBsAg screening with nucleic acid testing (NAT) was analyzed. RESULTS: Serologic profiles for over 90 percent of the donor samples were consistent with chronic HBV infection. Correlation between HBsAg and HBV DNA concentrations was weak (correlation coefficient = 0.33). Thirty-six percent (72/200) of donor samples had DNA levels under 400 copies per mL. Retesting of the 72 samples by more sensitive PCR assays showed that 60 out of 200 (30%) were positive by PCR with sensitivity of 65 copies per mL, whereas 6 out of 200 (3%) required PCR sensitivity of 1.3 copies per mL for positivity. Three percent (6/200) were negative by all three NAT assays. CONCLUSIONS: HBV DNA levels in HBsAg-positive, anti-HBc-reactive blood donations can be extremely low. About 6 percent of donations would be negative by current minipool HBV NAT methods. About 3 percent of donations would remain undetected by sensitive single-donor NAT. These results indicate caution in any consideration of dropping HBsAg screening.