芪卫颗粒对2型糖尿病KK-Ay小鼠肾脏内质网应激IRE1通路的影响

目的观察芪卫颗粒对2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织内质网应激IRE1通路相关因子表达的影响。方法将12周龄的雄性KK-Ay小鼠随机分为模型组、缬沙坦组和芪卫颗粒组,每组12只;设同周龄12只雄性C57BL/6J小鼠作为正常对照组。连续灌胃12周后,检测各组空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)及24小时尿白蛋白排泄率(24 hours urinary albumin excretion rate,24h UAER); HE染色光镜下观察小鼠肾脏基本病理形态学改变; Western blot法检测大鼠肾组织GRP78、P-IER1及XBP1蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组FBG、BUN、Scr及24h UAER水平均明显升高(P 0. 05),肾脏组织中GRP78和P-IRE1及XBP1的蛋白表达水平明显升高;与模型组组比较,芪味颗粒组的FBG、BUN、Scr及24h UAER水平均明显降低(P 0. 05),肾脏组织中GRP78和P-IRE1及XBP1的蛋白表达水平明显下降(P 0. 05)。肾脏病理结构得到改善。结论芪卫颗粒可通过降低2型糖尿病KK-Ay小鼠的FBG、BUN、Scr、24h UREA,改善肾功能,缓解肾脏病理改变;芪卫颗粒可以抑制内质网应激相关因子GRP78、P-IRE1及XBP1的表达,抑制IRE1通路激活,保护DN足细胞损伤,改善肾功能。     

芪卫颗粒干预糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的作用研究＊

目的：探讨芪卫颗粒干预糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的作用机制。方法：28只8周龄KK-Ay小鼠成模后分为模型组和芪卫低剂量组、芪卫中剂量组及芪卫高剂量组,另8只C57BL/6J小鼠设为正常对照组。实验中纪录小鼠一般状况、血糖、24 h尿蛋白定量。治疗10周后检测小鼠肾功能指标血清肌酐及尿素氮,并称取小鼠肾脏,固定后行小鼠肾组织苏木精-伊红（HE）、Masson、过碘酸希夫（PAS）染色,并制作肾母细胞瘤基因（WT-1）免疫组化,结合软件分析计算小鼠肾小球足细胞数。蛋白质印迹法（Western Blot）检测小鼠肾脏中nephrin蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测nephrin mRNA的表达。结果：与模型组相比,芪卫颗粒治疗10周后小鼠体质量、血糖、24 h尿蛋白定量及血肌酐明显降低,并有效改善肾小球系膜增生等病理损害,保护足细胞数目。芪卫颗粒治疗后的nephrin蛋白表达量及mRNA表达量均显高于模型组。结论：芪卫颗粒可能通过调节nephrin表达而改善糖尿病肾病小鼠足细胞损伤。     

芪卫颗粒干预糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的作用研究

目的：探讨芪卫颗粒干预糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的作用机制。方法：28只8周龄KK-Ay小鼠成模后分为模型组和芪卫低剂量组、芪卫中剂量组及芪卫高剂量组,另8只C57BL/6J小鼠设为正常对照组。实验中纪录小鼠一般状况、血糖、24 h尿蛋白定量。治疗10周后检测小鼠肾功能指标血清肌酐及尿素氮,并称取小鼠肾脏,固定后行小鼠肾组织苏木精-伊红（HE）、Masson、过碘酸希夫（PAS）染色,并制作肾母细胞瘤基因（WT-1）免疫组化,结合软件分析计算小鼠肾小球足细胞数。蛋白质印迹法（Western Blot）检测小鼠肾脏中nephrin蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测nephrin mRNA的表达。结果：与模型组相比,芪卫颗粒治疗10周后小鼠体质量、血糖、24 h尿蛋白定量及血肌酐明显降低,并有效改善肾小球系膜增生等病理损害,保护足细胞数目。芪卫颗粒治疗后的nephrin蛋白表达量及mRNA表达量均显高于模型组。结论：芪卫颗粒可能通过调节nephrin 表达而改善糖尿病肾病小鼠足细胞损伤。     

芪卫颗粒对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织转化生长因子β1蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨芪卫颗粒对KK-Ay小鼠肾组织TGF-β1蛋白及mRNA表达的影响。方法采用自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠模型。将KK-Ay小鼠随机分为模型组、中药组、西药组,以C57BL/6J小鼠作为正常组,每组15只,连续治疗12周,用HE、PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。采用免疫组织化学法及实时荧光定量PCR法,检测肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)的蛋白及mRNA表达。结果模型组小鼠肾脏病理改变呈现肾小球肥大,系膜基质区增宽,系膜细胞增多,肾小管上皮细胞空泡样变性,肾小管扩张,灶状萎缩,偶见坏死,可见较多蛋白管型,间质内炎性细胞浸润,间质纤维化表现。肾脏细胞内的TGF-β1的蛋白及mRNA表达较正常组明显增多。经芪卫颗粒、缬沙坦处理后,小鼠肾脏病理改变较模型组明显减轻,TGF-β1的蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05)。结论芪卫颗粒可通过抑制TGF-β1的蛋白及mRNA表达起到防治糖尿病肾病的作用。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠大脑皮质内质网应激的影响

目的观察脾阴虚糖尿病大鼠大脑皮质磷酸化(p)RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、真核起始因子2α-亚单位(eIF2α)、p-eIF2α、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的变化,探讨脾阴虚糖尿病相关认知下降发病机制及滋补脾阴方药的作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、糖尿病组、脾阴虚组、脾阴虚糖尿病组(病证组)、脾阴虚糖尿病+滋补脾阴方药组(治疗组)。采用高脂喂养4周联合小剂量链脲佐菌素注射方法建立2型糖尿病模型。在此基础上采用饮食不节、劳倦过度及灌服伤阴药方法建立脾阴虚糖尿病模型。治疗组给予滋补脾阴方药灌胃,其余各组给予等体积生理盐水灌胃,连续15 d,取大脑皮质。采用Western Blot、RT-PCR方法观察PERK、eIF2α、p-eIF2α、GRP78表达变化。结果糖尿病组、脾阴虚组、病证组PERK、p-eIF2α蛋白表达及GRP78 mRNA表达较对照组增强(P0.05),糖尿病组、病证组GRP78蛋白表达较对照组增强(P0.05),治疗组上述分子表达较糖尿病组、病证组均减弱(P0.05)。结论内质网应激参与脾阴虚糖尿病相关认知下降的发病,滋补脾阴方药通过减轻内质网应激改善学习记忆障碍。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠海马内质网应激影响的研究

目的:探讨滋补脾阴方药(ZiBu PiYin Recipe,ZBPYR)对脾阴虚糖尿病大鼠海马内质网应激相关分子表达的影响。方法:高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素(streptozocin,STZ)注射建立2型糖尿病模型,在此基础上,通过复合因素造模的方法建立脾阴虚糖尿病模型,以水迷宫实验评价模型大鼠是否出现学习记忆障碍,之后观察各组大鼠海马内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)和真核转录因子2的α亚单位(eukaryotic translation initiation factor 2 subunitα,eIF2α)表达的变化。结果:ZBPYR治疗后GRP78 mRNA水平降低(P0.05),GRP78、磷酸化PERK、磷酸化eif2α蛋白水平明显降低(P0.05),与脾阴虚糖尿病组相比,差异有统计学意义。结论:滋补脾阴方药可能是通过影响内质网应激PERK信号传导改善脾阴虚糖尿病大鼠学习记忆障碍。     

祛痰通络汤对糖尿病肾病大鼠肾组织内质网应激的影响

目的观察祛痰通络汤对糖尿病肾病大鼠肾组织中内质网应激相关蛋白GRP78,Caspase12的影响。方法高糖高脂饲料联合腹腔注射STZ制备糖尿病肾病模型,随机分为正常对照组、模型组、祛痰通络汤组、四苯基丁酸组,干预8周。观察各组24 h尿蛋白定量、肌酐、肾脏病理学变化;免疫组化和Western blot检测肾组织内质网应激相关蛋白GRP78,Caspase-12的表达。结果经过祛痰通络汤治疗后,大鼠体质量上升,24 h尿蛋白定量、糖化血红蛋白、肌酐下降;病理改变减轻;模型组肾组织的GRP78、Caspase12表达明显升高;祛痰通络汤组GRP78、Caspase-12表达明显降低(均P0.05)。结论糖尿病肾病大鼠肾脏中内质网应激反应明显增强,祛痰通络汤降低内质网应激,可能是其肾脏保护作用的重要机制。     

养阴通脑颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠海马内质网应激的影响

目的探讨养阴通脑颗粒减轻脑缺血再灌注损伤的可能作用机制。方法将162只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、养阴通脑颗粒组,每组54只。模型组和养阴通脑颗粒组通过大脑中动脉局灶性栓塞手术建立脑缺血再灌注损伤模型。养阴通脑颗粒组造模成功后每12 h给予养阴通脑颗粒0.5 g/kg灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水。于造模后12、24、48、72 h观察大鼠神经功能缺损评分、大脑海马葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)蛋白及mRNA表达及真核生物翻译起始因子2α(e IF2α)、内质网源性转录因子(chop)、转录激活因子4(ATF4)mRNA表达;并于造模后72 h检测脑梗死体积及脑组织海马区病理变化。结果与假手术比较,模型组大鼠各时间点神经功能缺损评分,GRP78、PERK蛋白及mRNA表达,e IF2α、chop、ATF4 mRNA表达均明显升高,脑梗死体积明显增大(P0.01);与模型组比较,养阴通脑颗粒组各时间点神经功能缺损评分,PERK蛋白及PERK、e IF2α、chop、ATF4 mRNA表达明显降低,GRP78蛋白和mRNA表达均显著升高,脑梗死体积明显缩小(P0.05或P0.01)。结论养阴通脑颗粒可能通过调节海马内质网相关因子表达,抑制内质网应激,从而减轻脑缺血再灌注损伤。     

糖肾宁对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的观察糖肾宁对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾功能及肾组织降解酶系基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1)蛋白及基因表达的影响。方法采用自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病模型,随机分为模型组、缬沙坦组和糖肾宁组各20只,设立C57BL/6J小鼠20只为空白组;予通心络及缬沙坦干预12周后,测定各组小鼠血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatinine,SCr),采用Western Blot、Realtime-PCR、免疫组化方法检测MMP-9、TIMP-1蛋白表达或定位及基因表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠BUN、SCr均明显升高(P0.05);肾组织TIMP-1蛋白及基因表达明显升高、MMP-9蛋白及基因表达明显降低(P0.05);与模型组比较,糖肾宁组和缬沙坦组BUN、SCr均明显降低(P0.05),肾组织TIMP-1蛋白及基因表达明显降低、MMP-9蛋白及基因表达明显升高(P0.05)。结论糖肾宁能够保护自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾功能、延缓糖尿病肾病肾纤维化进展,调控糖尿病肾病肾组织降解酶系可能是糖肾宁防治糖尿病肾病的作用机制之一。     

少阴固本调枢法对糖尿病模型大鼠内质网应激通路相关分子GRP78和CHOP表达的影响

目的探讨少阴固本调枢法对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠内质网应激的改善作用。方法将造模成功的28只雄性STZ诱导的糖尿病Wistar大鼠随机分为4组:模型组、少阴固本调枢法原方比例组、少阴固本调枢法经验用药比例组及吡格列酮组;另选7只SPF级雄性Wistar大鼠为正常对照组。分别连续灌胃4周并监测血糖。4周后,心脏采血,离心取血清。取大鼠肝脏、胰腺组织。光镜下观察组织结构。Western Blot法检测肝组织中的内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)与和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,糖尿病模型组大鼠血糖、血脂及胰岛素水平明显增高(P 0. 05); GRP78和CHOP蛋白表达增加。与模型组相比,吡格列酮组和少阴固本调枢法两组血糖、血脂均有改善,GRP78和CHOP蛋白表达均有所减少。结论少阴固本调枢法对糖尿病大鼠肝脏和胰腺组织具有保护作用,并有一定的降糖降脂及改善胰岛素敏感性的作用,其机制与降低肝脏GRP78表达,拮抗CHOP,从而改善内质网应激相关。     

糖肾宁对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织血小板衍生生长因子及受体表达的影响

目的观察糖肾宁对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)、血小板衍生生长因子受体(platelet-derived growth factor receptor,PDGFR)蛋白表达的影响。方法采用自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病模型,随机分为模型组、缬沙坦组和糖肾宁组各20只,设立C57BL/6J小鼠20只为空白组;药物干预12周后,测定24小时尿微量白蛋白排泄率(urinary albumin excretion,UAER),Masson染色观察各组肾脏病理,Western Blot检测PDGF、PDGFR蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组24小时UAER明显升高(P0.05),肾组织PDGF、PDGFR蛋白表达明显升高;与模型组比较,缬沙坦组和糖肾宁组24小时UAER均有不同程度的降低(P0.05),给药组间无显著性差异(P0.05),肾组织PDGF、PDGFR蛋白表达有不同程度降低(P0.05)。结论糖肾宁能够降低自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠24小时UAER,抑制PDGF及PDGFR蛋白的过度表达,保护肾功能。     

银杏叶提取物 EGB761 对糖尿病肾病小鼠肾小管损伤及内质网应激的影响

目的探讨银杏叶提取物EGB761对糖尿病肾病(DKD)小鼠肾小管损伤及内质网应激的影响。方法将50只C57BL/6N小鼠随机分为正常组、DKD模型组、DKD+EGB761组(36 mg·kg~(-1))以及DKD+4-苯基丁酸(4-PBA)组(1 g·kg~(-1))。通过高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病小鼠模型,糖尿病模型复制成功并继续高脂饲料喂养8周后检测各组尿蛋白,阳性者给药8周,给药期间观察各组小鼠一般情况。给药8周后检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白(24 h Pro)、空腹血糖(FBG)、肾脏肥大指数;HE染色、Masson染色、PAS染色观察各组小鼠肾脏病理改变;透射电镜观察肾小球及肾小管超微结构;ELLSA法检测各组小鼠肾小管损伤标志物尿β_2-微球蛋白(β_2-MG)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的表达;以免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot)、实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime-PCR)检测肾组织内质网应激标志物GRP78、ATF6的表达。结果与正常组比,DKD模型组精神状态较差、反应迟钝、多饮多食多尿症状明显,Scr、BUN、24 h Pro、FBG、肾脏肥大指数均明显升高(P0.01),肾脏病理损伤加重,尿β_2-MG、RBP4、NGAL明显升高(P0.01),肾组织GRP78、ATF6的表达明显升高(P0.01)。与DKD模型组相比,DKD+EGB761组精神状态、反应情况及多饮多食多尿症状好转,Scr、BUN、24 h Pro、FBG水平均明显降低(P0.01),肾脏肥大指数明显降低(P0.05),肾脏病理损伤明显改善,尿β_2-MG、RBP4、NGAL表达降低(P0.05,P0.01),肾组织GRP78、ATF6蛋白的表达降低(P0.05,P0.01)。结论银杏叶提取物EGB761可以改善DKD小鼠肾功能,减少蛋白尿,减轻肾小管损伤,其作用机制可能与抑制内质网应激相关。     

鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致肝细胞损伤的保护作用研究

该研究旨在探讨鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致的肝细胞损伤的保护作用及机制。衣霉素诱导L02细胞建立内质网应激损伤模型;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致L02细胞损伤的存活率;Western blot法检测内质网应激信号通路蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)、转录因子激活蛋白4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、Bcl-2结合抗凋亡基因(Bax)的表达水平,同时检测加入内质网应激抑制剂(4-苯基丁酸)和shRNA沉默CHOP因子后上述表达情况;免疫荧光法检测L02细胞中GRP78、PERK、CHOP的表达水平。结果显示,鬼针草乙酸乙酯提取物显著提高内质网应激所致L02细胞损伤的存活率(P0.05或P0.01),并在一定范围内呈时间剂量依赖性。给药组的GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Bax表达水平显著降低(P0.05或P0.01),Bcl-2表达水平显著升高(P0.01);加入内质网应激抑制剂和shRNA沉默CHOP因子后,GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Bax表达水平显著降低(P0.01),Bcl-2表达水平显著升高(P0.01)。免疫荧光结果显示GRP78、PERK、CHOP表达情况与Western blot法检测结果一致。综上,鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致的L02细胞损伤具有显著保护作用,其机制可能与抑制内质网应激,下调PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路所介导的细胞凋亡有关。     

左归降糖益肾方对MKR糖尿病肾病小鼠足细胞葡萄糖调节蛋白78、C/EBP同源蛋白表达的影响

目的观察内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)在MKR转基因糖尿病肾病(DN)小鼠足细胞的特异性表达及左归降糖益肾方的干预作用。方法以8周龄MKR小鼠为研究对象,随机分为空白组、模型组、左归降糖益肾方组、4-苯基丁酸组、格列喹酮片+贝那普利组,以C57野生鼠为正常组,每组10只。采用高脂喂养加单肾切除复制DN模型,各给药组予相应药物灌胃30 d。采用电化学法观察小鼠空腹血糖(FBG),ELISA测定尿微量白蛋白(Um Alb),RT-PCR及Western blot检测GRP78、CHOP基因和蛋白表达,电镜观察足细胞形态结构。结果与空白组比较,模型组FBG、Um Alb明显升高(P0.01),足细胞GRP78基因及蛋白表达明显下调(P0.01),CHOP基因及蛋白表达明显上调(P0.01);与模型组比较,各给药组FBG、Um Alb明显降低(P0.01),左归降糖益肾方组、4-苯基丁酸组GRP78基因及蛋白表达明显上调、CHOP基因及蛋白表达明显下调(P0.01)。电镜观察结果显示,各给药组小鼠肾小球足细胞结构、数量及密度较模型组明显改善。结论左归降糖益肾方能改善内质网应激介导的足细胞损伤,延缓DN进展。     

茵黄合剂对17-α乙炔雌二醇诱导肝内胆汁淤积模型大鼠内质网应激标志性蛋白表达的影响＊

目的 观察茵黄合剂对雌激素诱导胆汁淤积大鼠肝脏组织内质网应激标志性蛋白CHOP、GRP78和PERK表达的影响，基于内质网应激信号通路，探讨茵黄合剂治疗妊娠期肝内胆汁淤积症的机制。方法 运用17-α乙炔雌二醇诱导形成肝内胆汁淤积症大鼠模型后，分别用高（259.2 g/kg/天）、中（129.6 g/kg/天）和低（64.8 g/kg/天）剂量的茵黄合剂干预7天，取血，检测血清总胆汁酸（total bile acid，TBA）、总胆红素（total bilirubin）等生化指标；取部分肝脏组织，分别在光学显微镜和透射电镜下观察大鼠肝脏形态和超微结构的改变；另取肝脏组织，置于液氮中保存，分别采用实时定量PCR法和蛋白免疫印迹法检测大鼠肝脏组织内质网应激标志性蛋白：C/EBP同源蛋白（C/EBP-homologous， CHOP）、葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein， GRP78）和蛋白激酶R样ER激酶（protein kinase R-like ER kinase， PERK）mRNA与蛋白表达情况。结果 不同剂量的茵黄合剂干预均可显著降低胆汁淤积模型鼠肝脏组织内质网应激标志性蛋白CHOP、GRP78和PERK mRNA和蛋白表达，降低血清总胆汁酸和总胆红素水平，减轻肝脏组织形态和超微结构损伤，与模型组比较，差异具有统计学意义。结论 茵黄合剂可能通过减少雌激素诱导肝内胆汁淤积模型鼠肝脏CHOP、GRP78和PERK的表达，缓解内质网应激，从而降低血清总胆汁酸和总胆红素水平，发挥治疗肝内胆汁淤积的作用。     

芪卫颗粒对KK-Ay小鼠肾组织TGF-β1/Smads信号转导通路的影响

目的 探讨芪卫颗粒延缓糖尿病肾病(DN)肾间质纤维化的分子作用机制.方法 自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠45只,采用高脂饲料喂养制备DN模型.将造模成功小鼠随机分为模型组、中药组[芪卫颗粒20 g/(kg·d)灌胃]、西药组[缬沙坦胶囊10mg/(kg ·d)灌胃],每组15只,另设C57BL/6J小鼠15只作为正常组,连续给药12周.采用免疫组织化学法检测各组小鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)表达,免疫印迹法检测磷酸化Smad2(P-Smad2)、磷酸化Smad3(P-Smad3)、Smad7及整合素连接激酶(ILK)的表达,实时荧光定量PCR法检测ILK mRNA表达. 结果 模型组小鼠肾组织中TGF-β、P-Smad2、P-Smad3、ILK及ILK mRNA表达较正常组明显增加(P＜0.01),Smad7表达明显下降(P＜0.01).中药组及西药组TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3、ILK及ILK mRNA表达较模型组显著减少(P＜0.05或P＜0.01),Smad7表达明显增加(P＜0.01).中药组P-Smad3表达较西药组增加(P＜0.05),其余指标两组比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 芪卫颗粒通过下调TGF-β1、P-Smad2、P-Smad3、ILK的表达,上调Smad7的表达,影响TGF-β1/Smads信号通路,从而延缓了DN肾脏纤维化的发生发展.     

糖络宁对糖尿病周围神经病变大鼠PERK-CHOP-Caspase-12通路的影响

目的观察糖络宁对糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)大鼠坐骨神经内质网应激相关PERK-CHOP-Caspase-12通路的调节作用。方法选用8周龄雄性SD大鼠,除空白对照组外,采用高脂饲料致高血脂联合链脲佐菌素腹腔注射诱导高血糖致DPN大鼠模型。将高脂高糖大鼠随机分为模型对照组、阳性药(氧化三甲胺)对照组、糖络宁低剂量组和糖络宁高剂量组,连续给药12周。给药过程中,动态监测大鼠血糖、血脂,确保糖尿病造模成功。12周后采用免疫荧光法检测坐骨神经中葡萄糖调节蛋白(glucose regulatory protein 78k D,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、蛋白激酶样内质网激酶(PKR-like ER kinase,PERK)、caspase-12和caspase-3的表达。结果与空白对照组比较,模型对照组坐骨神经中GRP78、CHOP、PERK、Caspase-12和Caspase-3的表达均显著升高(P0.01或P0.05);与模型对照组比较,糖络宁低剂量组和高剂量组GRP78表达显著升高(P0.01),CHOP、PERK、Caspase-12和Caspase-3表达明显降低(P0.01或P0.05)。结论糖络宁防治DPN的作用机制与调节坐骨神经中内质网应激相关的PERK-CHOP-Caspase-12通路相关蛋白表达而抑制细胞凋亡有关。     

黄芪甲苷对被动型Heymann肾炎大鼠PERK通路的影响

目的:观察黄芪甲苷对被动型Heymann肾炎大鼠PERK通路的影响。方法:用羊抗大鼠Fx1A抗体血清尾静脉注射制备被动型Heymann肾炎大鼠模型。40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷高剂量组和贝那普利组。造模成功后各治疗组灌胃给药4周。定期检测24 h尿蛋白定量。4周后处死所有大鼠,采血检测血清白蛋白,PASM染色观察肾组织病理学改变,免疫组化检测肾组织磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、磷酸化真核细胞翻译起始因子2α(p-e IF2α)的表达,Western blot检测肾组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达。结果:模型组大鼠24 h尿蛋白定量较正常对照组显著升高(P0.05),并随着时间推移蛋白尿逐渐增多,至4周后达到高峰。在给药4周后,与正常对照组比较,模型组大鼠肾组织p-PERK、p-e IF2α、GRP78表达明显升高,血清白蛋白明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,黄芪甲苷高剂量组及贝那普利组大鼠24 h尿蛋白显著减少,肾组织p-PERK、p-e IF2α、GRP78表达显著减少,血清白蛋白显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:黄芪甲苷可能通过抑制内质网应激(ERS)中的PERK通路缓解被动型Heymann肾炎大鼠肾脏损伤。     

芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达影响的实验研究

目的探讨芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达的影响。方法随机选取10只健康雄性SD大鼠为正常组,其余30只采用腹腔注射大剂量链脲佐菌素(60 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、西药组以及芪卫颗粒组,将西药组按缬沙坦10 mg/(kg·d)灌胃、芪卫颗粒组按生药10 g/(kg·d)灌胃,连续给药。于给药第24周检测大鼠血肌酐、血尿素氮及内生肌酐清除率;24周后将大鼠处死,采用PAS染色法将肾组织染色,在光镜下观察大鼠肾组织病理改变;采用western blot法检测肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠血肌酐、血尿素氮水平显著升高,内生肌酐清除率及足细胞nephrin表达水平显著下降(P0.05);与模型组相比,各给药组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显下降,内生肌酐清除率及nephrin表达水平明显上调(P0.05)。结论芪卫颗粒能够上调糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞nephrin的表达,减轻足细胞损伤,保护肾功能,延缓糖尿病肾病的发生发展。     

黄芪水煎剂对大鼠足肿胀的干预作用及其对内质网应激的影响

目的:研究中药黄芪对大鼠足肿胀的干预作用和内质网应激的影响。方法:大鼠足趾部注射角叉菜胶建立大鼠足肿胀模型,给予黄芪水煎剂(按生药量0.5、1、2 g/kg)及布洛芬(50 mg/kg)治疗后,观察药物对实验大鼠足肿胀的抑制作用;ELISA法检测大鼠血清中PGE_2、IL-2和TNF-α的含量,Western Blot法分析大鼠足肿胀部位软组织内质网应激相关蛋白GRP78、PERK、CHOP的表达。结果:模型组较正常对照组大鼠足部明显肿胀(P0.01),与模型组比较,黄芪水煎剂可明显抑制大鼠足肿胀;给药组血清PGE_2、IL-2和TNF-α水平显著降低(P0.01),内质网应激相关蛋白GRP78、PERK和CHOP的异常表达得到改善(P0.05)。结论:黄芪水煎剂可以通过调节大鼠血清中致炎因子的水平抑制角叉莱胶所致足部肿胀,减少参与炎症过程内质网应激相关蛋白的异常表达。