四种真皮替代物的制备和比较研究

目的 通过调整复合壳多糖真皮替代物的组分，比较不同配方获得的真皮替代物的组织学特性的异同。方法 在无菌条件下将浓缩的DMEM培养基、小牛血清、鼠尾胶原溶液、糖胺聚糖和壳多糖按比例配制成凝胶溶液，然后将成纤维细胞与上述凝胶溶液混合制成真皮替代物(替代物A)。以A为标准，缺如成纤维细胞为替代物B，缺如壳多糖为替代物C，缺如壳多糖和成纤维细胞为替代物D。比较A、B、C、D四种替代物的生物学特性，并在培养半个月时作组织学检查。结果 四种替代物以C收缩率为最大，A其次，B、D两种替代物几乎无收缩，组织学上A、C未见明显差异，B可见均匀的蜂窝状结构，D结构无序。结论 A复合壳多糖真皮替代物配方是四种真皮替代物中生物学特性最为理想的一种，可以在组织工程研究中发挥重要作用。     

胶原凝胶真皮构建及其性质测定

目的为了改进组织工程化人工皮肤的生物学性能。方法改进Hansburgh和Middelkoop制备人工真皮的方法,应用I型胶原酶和中性蛋白酶Dispase分离得到新生儿真皮成纤维细胞,并将其种植于胶原溶胀液,成功构建凝胶真皮,并检测了其力学及生物学性能。结果胎儿真皮成纤维细胞在凝胶真皮中增殖速度快、活性高、分泌细胞外基质丰富。结论凝胶真皮的生物学性能优于传统胶原海绵人工真皮。     

复方壳多糖组织工程皮肤分泌b-FGF的初步研究

目的 研究组织工程皮肤培养液中碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)的分泌情况.方法 收集复方壳多糖组织工程皮肤制备过程中复方壳多糖皮肤替代物(SE)、复方壳多糖真皮替代物(DE)、单层角质形成细胞(KC)以及复方壳多糖DE与KC在transwell内共培养的培养液样本,双抗体夹心ELISA法测定其中b-FGF分泌量.结果 b-FGF分泌量依次为单层KC＜复方壳多糖DE/KC共培养＜复方壳多糖SE＜复方壳多糖DE.结论 角质形成细胞能调控成纤维细胞分泌b-FGF能力,有利于伤口愈合.     

牙龈上皮细胞与脱细胞真皮构建组织工程牙龈的初步研究

目的:体外培养人牙龈上皮细胞,并与脱细胞真皮构建组织工程牙龈.方法:将体外培养的人牙龈上皮细胞接种于无细胞真皮支架上,液面下培养7 d后,分别进行气-液界面培养7,14和21d,并在光镜下进行组织形态学观察.结果:牙龈上皮细胞在体外具备良好的生长增殖能力,且在无细胞真皮支架上形成了复层上皮样组织结构,表层上皮细胞出现部分角化.结论:利用体外培养的牙龈上皮细胞和脱细胞真皮,可以在体外联合构建具有复层上皮细胞结构的组织工程牙龈.     

应用组织工程材料栓塞动脉瘤的初步研究

目的 探讨壳聚糖-甘油磷酸钠-成纤维细胞水凝胶作为颅内动脉瘤栓塞材料的可行性.方法 配制2%(w/v)壳聚糖与56%(w/v)甘油磷酸钠溶液,不同比例混合,测定混合液pH、37℃成胶时间及力学强度,体外观察兔皮肤成纤维细胞在不同配比壳聚糖-甘油磷酸钠水凝胶中生长状态,选择最佳比例.将Brdu标记的成纤维细胞与壳聚糖-甘油磷酸钠水凝胶混合栓塞兔颈动脉,评价组织相容性.最终栓塞兔动脉瘤模型.结果 当壳聚糖/甘油磷酸钠在7:1时,pH值为7.28,成胶时间为(260±18)s,力学强度可达14 kPa,细胞生存率最高,达(89.0±2.7)%.颈动脉栓塞,透视下可见混合物显影良好,局部组织切片显示(HE染色):1周时凝胶中散在较多细胞及钽粉,凝胶与血管壁边界较清,内皮细胞完整.4周时凝胶与血管壁边界不清,可见周边凝胶被细胞成分包绕降解.免疫荧光显示,4周标本中可见较多标记的成纤维细胞.兔动脉瘤栓塞术中见动脉瘤不显影,术后3d病理见动脉瘤被凝胶栓塞,内膜细胞形态正常,动脉壁内未见明显炎性细胞浸润.结论 短期观察,壳聚糖-甘油磷酸钠-成纤维细胞水凝胶可用于动脉瘤栓塞.     

毛囊真皮鞘成纤维细胞的培养

目的：为了解真皮鞘成纤维细胞的生物学特征。方法：采用酶消化法、组织块法分别进行毛囊真皮鞘成纤维细胞培养。结果：２种方法均获成功,培养的真皮鞘成纤维细胞具有聚集生长的特征,胞体较大,一般有２个突起;酶消化培养法操作简便、省时,但容易混 有其它成纤维细胞;组织块法培养的细胞虽然培养速度较慢,但纯度较高。结论：组织块法是进行毛囊真皮鞘成纤维细胞研究较理想的培养方法。     

脱细胞真皮基质体内转归的研究进展

脱细胞真皮基质（acellular dermal matrix,ADM）是最近几年兴起的一种天然生物材料,最初用作真皮替代物,已有ADM在神经外科、耳鼻咽喉、烧伤整形、牙周等学科领域的研究和应用报道,但对于ADM异体移植后的最终生物学转归,存在较大争议。本文着重就其异体移植后的生物学转归及其机制的研究进展作一综述。     

组织工程皮肤分泌细胞因子的初步研究

目的研究组织工程皮肤培养液中IL-1β、IL-6和IL-8的分泌情况.方法收集组织工程皮肤制备过程中单层成纤维细胞(fibroblast,FB)培养液、胶原凝胶真皮替代物(dermal equivalent, DE)、复合壳多糖DE和复合壳多糖皮肤替代物(skin equivalent, SE)培养液标本,ELISA法检测其中IL-1β、IL-6和IL-8分泌量.结果复合壳多糖真皮基质促进FB、角质形成细胞(keratinocyte KC)分泌IL-6、IL-8.SE分泌的IL-6、IL-8在DE加KC之后和SE形成分层表皮时形成两个高峰.结论 FB、KC在壳多糖组织工程皮肤中混合器官型培养时分泌IL-6和IL-8较明显,这些细胞因子可在创面愈合中发挥重要作用.     

组织工程人工真皮在32例鼻尖整形中的应用

目的：探索组织工程人工真皮在鼻尖整形中的应用方法与效果。方法：对首次行鼻尖整形者20例,已在外院采用单纯硅胶假体隆鼻术失败者12例采用组织工程人工真皮鼻尖整形手术。结果：效果良好者25例,改善者7例,有效率为100%。随访3个月～2年,鼻尖形态良好,无假体外露、鼻尖变形等并发症。结论：组织工程人工真皮在鼻尖整形中的应用效果好,不会造成因假体直接抬高鼻尖带来的诸多并发症,无排异现象,取材丰富,是较理想的材料,值得临床推广。     

组织工程人工真皮、软骨在鼻尖整形中的应用

目的探讨应用人工真皮、软骨在鼻尖整形中的手术技巧及应用价值。方法选择隆鼻术后因张力过大导致鼻尖皮肤发红、变薄或鼻尖部可见假体轮廓的57例患者及粗短鼻、朝天鼻患者16例。取出原有假体,手术根据患者的基础进行雕刻假体和人工真皮后置入鼻尖。其中42例取自体耳软骨或鼻中隔软骨作盾牌移植或延长为辅助,人工真皮作帽状移植帮助鼻尖塑形,改善鼻尖效果。结果本组73例,5例是隆鼻术后单纯行人工真皮作帽状移植患者。4例术后1以个月人工真皮几乎被吸收,鼻尖改善不明显,再次行自体软骨移植加真皮片后,效果良好;其余均取得满意的手术效果。结论组织工程人工真皮为现阶段较理想的鼻尖整形材料,适用于鼻尖皮下组织的加厚,可预防隆鼻术后鼻尖皮肤因张力过大而导致的皮肤变薄、发红等情况。真皮片亦适合多次隆鼻术后鼻尖皮肤菲薄的患者。     

壳聚糖/亚磷酸壳聚糖海绵复合人脐带间充质干细胞构建组织工程骨修复骨缺损的实验研究

目的:探索壳聚糖/亚磷酸壳聚糖海绵复合人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs)构建的组织工程骨植入动物骨缺损处的成骨能力?方法:体外构建组织工程骨;健康新西兰大白兔构造骨缺损模型兔后随机分为3组,即A:组织工程骨植入组;B:支架材料植入组;C:空白对照组,于术后4?8?12 周取骨缺损标本,进行大体标本?影像学?组织学观察成骨情况?结果:术后12周,3种检测手段均发现A组新生骨已经完全将骨缺损填充,并有部分皮质骨将骨缺损两端连接?B组虽有部分骨痂形成,但无连续骨质?C组术后仅有少量骨痂形成?A组成骨能力明显强于B?C组?结论:本实验构建的组织工程骨能修复大段的骨缺损,具有良好的成骨能力,可以作为骨移植的替代材料?     

真皮瓣修复口内粘膜缺损的实验研究及临床应用

目的 研究真皮瓣转移至口腔后的组织学变化并探讨毛发减少甚至消失的机制。方法 构建真皮瓣修复口内缺损的动物模型，常规病理观察和透射电子显微镜（TEM）观察真皮瓣转移口内后组织瓣及毛囊的组织学变化。临床采用真皮瓣修复13例恶性肿瘤术后所致口内粘膜组织缺损。结果 再生上皮在2周内完全形成，结构近似于正常皮肤组织，TEM示毛囊上皮存在局部代谢障碍表现。临床13例患者均获满意修复。结论 术后2周内是新生上皮形成的重要时期，毛囊成分的破坏可能与局部组织缺氧有关。     

血管内皮生长因子165基因修饰的人脂肪间充质干细胞与改性丝素蛋白体内构建血管化组织工程脂肪的研究

目的：探讨血管内皮生长因子165（VEGF165）基因修饰的人脂肪间充质干细胞（hADSCs）与壳聚糖修饰的丝素蛋白支架材料体内构建血管化组织工程脂肪的可行性。方法分离提取hADSCs,选取生长状态良好的第3代hADSCs,用携带重组人VEGF165基因的慢病毒进行感染（感染复数=50）。选用慢病毒感染和未感染的第3代hADSCs分别接种于支架材料上,记为实验组与对照组,同时成脂诱导5 d后,使用氯甲基苯甲酰胺标记细胞。取24只雌性Wistar大鼠,将上述实验组与对照组细胞—支架复合物移植于背部皮下,每组12只。移植后8,12周分别取材并行冰冻切片、HE染色、油红O染色及扫描电镜,同时观察支架材料的降解情况,观察移植物。免疫印迹法检测VEGF165及过氧化物酶体增殖体激活受体-γ2（PPARγ-2）蛋白的表达。结果移植后8,12周,免疫印迹法结果显示实验组移植物均表达VEGF165,对照组未见表达;实验组与对照组均表达PPARγ-2,实验组中的表达量明显多于对照组（P<0.05）。扫描电镜、油红O染色及HE染色均表明实验组与对照组生成大量脂肪样细胞,且实验组明显多于对照组（P<0.05）。结论携带重组人VEGF165基因的慢病毒感染的hADSCs与壳聚糖/丝素蛋白支架材料复合物在大鼠体内可持续表达VEGF165及PPARγ-2蛋白,能显著促进工程化脂肪组织的构建,为血管化组织工程脂肪的构建奠定了基础。     

真皮组织瓣修复口内粘膜缺损后再生上皮角蛋白表达模式的实验研究

目的观察真皮瓣移植口内后再生上皮角蛋白表达模式的变化.方法 12只成年健康家犬的右侧颊粘膜人为造成缺损,以颈阔肌真皮瓣(PMDF)立即修复,免疫组化染色观察愈合过程中组织瓣表面上皮角蛋白CK10、CK19表达模式的变化.结果真皮瓣转移后4周,再生上皮基底层及基底上层少量表达CK19;12周后再生上皮基本保持皮肤原有表达模式.结论真皮瓣转移口内后表面的再生上皮维持表皮原有结构,未发生粘膜化改变.     

中医药促进皮肤溃疡创面肉芽组织生长的实验研究近况

难愈性皮肤溃疡．是外科临床的常见病和多发病。研究发现，溃疡创面愈合包括连续而又相互重叠的3个阶段．即炎症期、肉芽组织形成期和瘢痕形成期。其中肉芽组织生长在创面修复、愈合过程中起关键性作用，肉芽组织质量直接影响着创面的修复、愈合程度及其预后。