慢性粒细胞白血病端粒酶活性检测的临床意义

目的 探讨端粒酶活性检测对慢性粒细胞白血病（CML）的临床意义。方法 选取20例慢性期和10例急性转化期（加速期或急变期）的CMI,病例,以良性血液病病人和正常人作对照,采用改良TRAP一银染法及亚利恩凝胶成像系统分析检测其骨髓标本内的端粒酶活性水平并随访。结果 良性血液病端粒酶阴性或低水平表达;CMI。慢性期端粒酶活性中等增高（F=36．38,q=5．84,P〈0．01）,阳性率达35％（7／20）;急性转化期时端粒酶活性较慢性期显著升高（q=12．06,P〈0．01）,阳性率达80％（8／10）。端粒酶活性水平与CML预后相关,活性高者往往预后较差。结论 端粒酶活性与CML的发生发展密切相关。端粒酶活性检测可以作为CML诊断、病程监测及预后判断的一个有用的生物学指标。     

骨髓自然杀伤细胞水平对急性髓细胞性白血病患者预后的影响

目的：探讨骨髓自然杀伤（naturalkiller,NK）细胞水平对急性髓细胞性白血病（acutemyeloidleukemia,AML）患者预后的影响。方法：研究分成AML初治组40例,缓解组20例,正常对照组20例。均抽取骨髓液2ml,采用直接免疫荧光标记法对骨髓有核细胞进行单克隆抗体（CD16＋／CD56＋）标记,应用流式细胞仪进行NK细胞数量的检测。结果：初治组患者骨髓NK细胞表达水平较缓解组显著降低（P〈0．01）。缓解组患者骨髓NK细胞表达水平仍低于对照组（P〈0．05）。不同骨髓NK细胞表达水平间原始细胞数量和AML患者疗效差异均有统计学意义（P〈0．01和P〈0．05）。结论：骨髓NK细胞表达水平可以作为AML的预后指标,亦有助于指导治疗。     

卵巢肿瘤端粒酶活性的研究

目的；研究探讨端粒酶活性与卵巢肿瘤的相关性。以及端粒酶与其临床病理特征的关系，探讨端粒酶在卵巢癌诊断中的价值，并为临床早期诊断卵巢癌提供理论依据。方法（PCR）-酶联免疫吸附测定（ELISA）法，联合聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）-银染色法进行检测。共检测34例卵巢癌组织．30例良性卵巢肿瘤组织。20例因其他岛性病变而切除的正常卵巢组织端粒酶活性，分析端粒酶活性与卵巢癌不同病理特征间的关系。结果：34例病理诊断证实的卵巢癌组织端粒酶活性阳性率85.29％。30例良性卵巢肿瘤组织端粒酶酶活性阳性率为16．67％；20例正常卵巢组织端粒酶活性阳性率为10％。卵巢癌组织端粒酶活性较正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织端粒酶活性显著增高（分别P〈0．001。P〈0．001），良性卵巢肿瘤组织与正常卵巢组织间端粒酶活性无显著差异（P〉0．05）。端粒酶表达在组织学类型、怨性程度上无显著差异（P〉0．05）,端粒酶表达在卵巢癌临床分期中有显著差异，Ⅲ、Ⅳ期端粒酶阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ期（P〈0.05）；卵巢癌术中发现有淋巴结转移者，其端粒酶活性较无转移考明显增高（P〈0．05）。结论：检测卵巢肿瘤的端粒酶活性有助于良；且有助于早期诊断井为恶性程度判断提供熏要的理论依据。     

端粒酶与端粒酶催化亚单位在乳腺肿瘤组织中的表达及其意义

目的探讨端粒酶活性与端粒酶催化亚单位（hTERT）在乳腺肿瘤组织中的表达及其意义。方法采用银染-聚合酶链反应-酶免法（TRAP-PCR—ELISA）法检测48例乳腺癌组织标本、48例相应癌旁组织标本、19例良性乳腺肿瘤组织标本、21例正常乳腺组织标本的端粒酶活性，应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测hTERT的基因表达。结果端粒酶活性表达率和端粒酶催化亚单位hTERT基因表达率分别为：乳腺癌组为85．42％和89．58％；良性乳腺肿瘤组为42．11％和31．58％；相应癌旁组为14．58％和16．67％；正常乳腺组为0．00％，0．48％。乳腺癌组、良性乳腺肿瘤组、相应癌旁组及正常乳腺组之间均有非常显著性差异（P均〈0．001）；乳腺癌组端粒酶和端粒酶催化亚单位hTERT基因表达率与良性乳腺肿瘤组呈正相关（r分别为0．7982、0．6875，P均〈0．01）。结论端粒酶活性及其催化亚单位hTERT基因表达与乳腺肿瘤的形成和发展过程有关；端粒酶活性和端粒酶催化亚单位基因表达的检测，可作为乳腺肿瘤诊断、治疗、监测、预后的重要指标，具有较重要的价值。     

支气管肺泡灌洗液端粒酶与P53基因检测在肺癌诊断中的应用

目的研究支气管肺泡灌洗液（BALF）中端粒酶活性、P53基因变异对肺癌的诊断价值。方法收集86例肺癌患者与82例肺良性疾病患者的BALF,采用端粒酶重复序列扩增法（TRAP）和PCR—SSCP法进行端粒酶和P53基因检测,同时经纤维支气管镜（纤支镜）进行活检和刷检。结果①实验组患者BALF端粒酶活性、P53基因突变率分别为82．56％和32．56％,均高于对照组的4．48％和0（P〈0．01）;②不同组织学类型肺癌患者BALF端粒酶活性阳性表达率和P53基因突变率之间差异均无统计学意义（P〉0．05）;③中央型肺癌患者BALF端粒酶活性和P53基因变异联合检测阳性率为94．34％,常规纤支镜检查阳性率为86．79％,两者差异无统计学意义（P〉0．05）。周围型肺癌患者BALF端粒酶活性和P53基因变异联合检测阳性率75．76％,高于常规纤支镜检查阳性率45．45％（P〈0．05）。结论①肺癌患者BALF端粒酶活性与P53基因变异均高于肺良性疾病患者;②端粒酶活性阳性表达率、P53基因突变率与肺癌的病理类型无关;③BALF端粒酶活性和P53基因变异联合检测对周围型肺癌的诊断有一定的实用价值。     

卵巢肿瘤端粒酶活性检测的诊断价值

目的探讨端粒酶活性检测对卵巢肿瘤的诊断价值。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）．银染色法检测34例恶性卵巢肿瘤组织、30例良性卵巢肿瘤组织、20例因其他良性病变而切除的正常卵巢组织的端粒酶活性，分析良、恶性卵巢肿瘤组及正常卵巢组的端粒酶活性表达情况。结果恶性卵巢肿瘤组、良性卵巢肿瘤组、正常卵巢组端粒酶活性的阳性率分别为85．29％、16．67％和10．00％。恶性卵巢肿瘤组端粒酶活性较正常卵巢组、良性卵巢肿瘤组显著增高（均P〈0．001）。良性卵巢肿瘤组与正常卵巢组问端粒酶活性无显著差异（P〉0．05）。结论检测卵巢肿瘤的端粒酶活性有助于良、恶性卵巢肿瘤的鉴别诊断和早期诊断。     

丁酸钠对HepG2细胞诱导凋亡的作用及机制

目的探讨丁酸钠（sodium butyrate，SB）对HepG2细胞的诱导凋亡作用及与端粒酶活性的关系。方法采用MTT法检测5mmol／L丁酸钠在不同时间对HepG2细胞的增殖抑制作用；流式细胞仪检测丁酸钠作用于HepG2细胞后的凋亡情况，及细胞周期的改变；TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性。结果丁酸钠能明显抑制HepG2细胞增殖，并且这种抑制作用具有时间依赖性。丁酸钠处理HepG2细胞48h凋亡率明显提高（P〈0．01），S期细胞比例显著下降（P〈0．05），G0／G1期细胞比例显著升高（P〈0．05）。实验组端粒酶活性为1.16±0．12，对照组端粒酶活性为3．58±0．33，实验组端粒酶活性明显降低（P〈0．05）。结论丁酸钠具有诱导HeoG2细胞凋亡的作用，其机制与抑制端粒酶活性有关。     

血管内皮生长因子在急性髓系白血病细胞中的表达

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在成人急性髓系白血病（AML）的发生发展中的作用。方法：采用志录PCR（RT－PCR）和酶联免疫吸附（ELISA）的方法研究50 AML病人及16位正常人骨髓细胞及血浆VEGF的表达。结果：部分正常人和大多数AML病人的骨髓细胞及白血病细胞系均表达VEGF。AML病人骨髓细胞VEGF表达阳性率（82％）明显高于正常人（30．76％）及骨髓移植后的AML病人（41．76％）。难治型和非难治型AML病人血浆中VEGF浓度均显著高于正常人AML骨髓移植后病人（P＜0．01）。队正常人与骨髓事AML病人血浆中VEGF浓度比较无统计学差异外（P＞0．05），另与其他两者之间均有显著性差异（P＜0．01）。难治型和非难治型白血病病人骨髓细胞分泌的VEGF分别比正常人高11．0和7．3倍，且两者之间比较有显著性差异（P＜0．01）。结论：VEGF在AML病人中存在异常表达，在AML的发病机制中可能起一定的作用，且可能成为判断AML病人预后指标之一。     

病理性瘢痕组织iNOS和5-HT表达及与其增生和痛痒的关系

目的 检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、5-羟色胺（5-HT）在病理性瘢痕及正常皮肤组织中的表达,探讨其与病理性瘢痕增生及痛痒的关系。方法 应用免疫组化技术对痛痒、非痛痒的病理性瘢痕和正常皮肤组织中iNOs、5-HT的表达及分布情况进行检测,并采用图像分析法对检测结果进行半定量分析。结果 痛痒的瘢痕组织与正常皮肤组织相比．iNOS、5-HT的表达均显著升高（F=25．47、44．92,q=4．39、4．43,P〈0．01）;非痛痒的瘢痕组织与正常皮肤组织相比．iNOS表达显著升高（q=3．96,P〈0．01）,5-HT表达差异无显著性（q=2．64,P〉0．05）;痛痒的瘢痕组织与非痛痒的瘢痕组织相比,5-HT的表达显著升高（q=3．92,P〈0．01）,iNOS的表达差异无显著性（q=2．71,P〉0．05）。结论 iNOS可能与病理性瘢痕的形成有关,其增高可能促进瘢痕的增生;5-HT可能与病理性瘢痕的临床痛痒症状有关,其增高可能导致病理性瘢痕临床痛痒症状的发生。     

原发性胃癌组织端粒酶活性的表达

目的 探讨端粒酶活性表达与胃癌各临床病理参数间的关系。方法 采用TRAP－ELISA法对32例原发性胃癌组织及对应切缘粘膜组织端粒酶活性进行定量检测。结果 32例肿瘤组织端粒酶活性明显高于切缘粘膜组织（P＜0．001）。肿块最大径≥5cm肿瘤组的端粒酶活性明显高于最大径＜5cm肿瘤组（P＜0．001）。淋巴结转移阳性组端粒酶活性明显高于淋巴结转移阴性组（P＜0．001）。早期（I、Ⅱ期）胃癌端粒酶活性明显低于晚期（Ⅲ、Ⅳ期）胃癌（P＜0．01）。结论 端粒酶活性的异常增高与胃癌的发生、发展密切相关;端粒酶活性检测可作为胃癌的诊断及预后判断的重要生物学指标。     

senex基因在急性髓系白血病中的表达及意义

目的 探讨senex基因在急性髓系白血病(AML)中的表达水平,并探讨其在AML发生发展中的意义.方法 应用实时荧光定量PCR检测senex基因在21例初诊AML患者(初诊组)、27例骨髓完全缓解的AML患者 (缓解组)、19例骨髓复发的AML患者(复发组)以及12例对照者(对照组)的骨髓单个核细胞中的表达情况,比较4组之间的基因表达水平差异,并分析senex基因表达水平与临床特征和疗效的关联性.结果 初诊组senex基因表达水平高于缓解组(4.06±2.72 vs 2.52±1.83,P=0.04)和对照组(4.06±2.72 vs 1.22±0.48,P=0.001),复发组senex基因表达水平高于对照组(3.27±2.54 vs 1.22±0.48,P=0.017),且各亚型之间以AML-M3的senex基因表达水平最高.AML患者senex基因mRNA表达水平与骨髓原始细胞比例存在相关性(rs=0.557,P=0.000).此外分析AML初诊患者的临床特征显示1次化疗缓解的患者(n=14)的senex基因表达显著低于1次化疗未缓解的患者(n=7)(1.77±1.47 vs 4.85±2.20,P=0.003),并且1次化疗未缓解的患者预后均较差.结论 senex基因的异常表达可能与AML的发生发展以及预后密切相关.     

光谱核型分析技术在白血病研究中的初步应用

目的 建立光谱核型分析技术（SKY）,并初步探讨SKY在白血病中的应用价值。方法 SKY检测2例健康志愿者建立SKY技术,并选择8例已进行R显带核型分析的白血病患者进行SKY检测,其中4例还分别进行了MLL、PML／RARa、BCR／ABL等基因的双融合荧光原位杂交（DF—FISH）检测。将R显带核型及DF—FISH结果进行比较,考察SKY技术的稳定性和可靠性。结果 10例标本的SKY分析均获成功。2例健康志愿者均示正常核型,8例白血病患者中,SKY分析分别发现9q一,t（9;22）,t（15;17）,及复杂核型47,XY,＋9？ins（1;5）（q23;q23）,t（6;7）（q23？;p13）和一些数量异常。这些结果均证实了R显带及DF-FISH的结论,并有更精确的定位和补充。结论 本研究建立的光谱核型分析技术具有较高的稳定性、可靠性和精确性,可应用于白血病的染色体研究。     

血清脂联素、瘦素和抵抗素与急性髓系白血病的相关性研究

目的:研究急性髓系白血病(AML)初诊和化疗过程中血清脂联素、瘦素和抵抗素水平的变化。方法:选取35例接受相同的化疗方案的AML患者,选取50例健康成年人作为对照组。用双抗体夹心ABC-ELISA法测定治疗过程中血清中的的脂联素、瘦素和抵抗素水平的变化,同时测定血清中的乳酸脱氢酶(LDH)浓度。结果:初诊时患者血清中的脂联素和抵抗素水平明显低于正常对照组(P<0.001),而瘦素表达差异无统计学意义(P=0.368)。经过化疗后,AML患者血清中的脂联素和抵抗素水平呈现明显上升的趋势(P<0.001),瘦素仍差异无统计学意义(P=0.849)。相关性分析显示治疗过程中的脂联素和抵抗素水平与LDH呈现明显的负相关(分别为r=-0.539,P=0.005和r=-0.587,P=0.005)。结论:AML初诊时血清中的脂联素和抵抗素水平明显降低,而且这两种脂肪素的水平随着AML治疗的进展逐渐趋于正常。不过血清中的瘦素却没有表现出与AML的相关性。     

急性髓细胞白血病患者血清sICAM-1和sVCAM-1水平变化及临床应用

目的:探讨急性髓细胞白血病(AML)患者血清细胞间黏附分子-1(ICAM-1,CD54)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1,CD106)的水平变化及其临床应用。方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定56例初诊断的急性髓细胞白血病患者治疗前、后的血清和20例正常对照组血清可溶性ICAM-1(sICAM-1)和可溶性VCAM-1(sVCAM-1)的水平。结果:AML患者化疗前血清sICAM-1和sVCAM-1水平升高,与正常对照组比较有高度显著性差异(P<0.01),缓解后降低,与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。复发患者血清sICAM-1和sVCAM-1水平升高,与缓解组及正常对照组比较有高度显著性差异(P<0.01)。M4和M5患者血清sVCAM-1水平高于其他亚型患者(P<0.05)。初发AML患者中,血清sI-CAM-1和sVCAM-1水平高者治疗效果比血清sICAM-1和sVCAM-1水平正常者较差。结论:在AML患者中,血清sICAM-1和sVCAM-1水平的变化有助于判断患者的病情进展、疗效及预后,对指导临床选择化疗方案有一定的帮助。     

N-Ras和pERK1/2在急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的:研究N Ras,pERK1 /2在急性髓系白血病(AML)中的表达,探讨Ras/MAPK信号通路在AML中的临床意义。方法:选择AML46例,应用免疫组织化学染色法检测骨髓单个核细胞N Ras,pERK1 /2蛋白表达水平。结果:初诊组N Ras和pERK1 /2的表达水平(59. 8%, 41. 9% )显著高于对照组(P<0. 05),完全缓解组N Ras和pERK1 /2的表达(28. 2%, 15. 1% )与对照组比较差异不显著(P>0. 05),初诊组N Ras和pERK1 /2的表达较完全缓解组明显增高(P<0. 05)。相关性分析结果表明N Ras与pERK1 /2的表达具有密切相关性(P<0. 01)。结论:N Ras,pERK1 /2的表达密切相关,N Ras/ERK信号传导通路参与了AML的发展过程。     

毛细支气管炎病儿IgE、IL-4与TNF测定及其临床意义

①目的　观察毛细支气管炎病儿血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素 4 (IL 4 )、肿瘤坏死因子 (TNF)的变化 ,探讨其与哮喘的关系。②方法　毛细支气管炎病儿 6 2例 ,分别于急性期、缓解期和半年后随访时取静脉血 ,采用酶联免疫吸附分析法 (ELISA)测定血清IgE、IL 4和TNF的变化 ,并与健康儿童 31例进行对比。③结果　毛细支气管炎急性期病儿IgE、IL 4和TNF不仅明显高于对照组 (F =4 .98～ 7.2 1,q =3.76～ 5 .92 ,P <0 .0 1) ,而且也高于缓解期病儿 (q=2 .83～ 4 .5 8,P <0 .0 5、0 .0 1) ,缓解期IgE、IL 4仍明显高于正常对照组 (q =2 .80、2 .87,P <0 .0 5 )。随诊时发生哮喘和毛细支气管炎反复发作的病儿上述三项指标仍明显增高 ,与正常对照组比较有显著差异 (F =4 .78～ 7.92 ,q =2 .80～ 4 .38,P <0 .0 5、0 .0 1) ,而无反复发作的病儿各项指标与对照组比较无显著性差异 (q =2 .0 3～2 .5 1,P >0 .0 5 )。④结论　IgE、IL 4和TNF与儿童毛细支气管炎发病密切相关 ,可作为预测高危哮喘转化为哮喘的客观实验室指标     

网织血小板检测方法的改良及临床应用

目的 改良网织血小板（RP）检测方法并探讨其临床应用价值。方法 以噻唑橙（TO）作为RNA的荧光染料,利用流式细胞仪检测30例正常人（正常对照组）和48例各种血小板减少症外周血中含有RNA的RP百分数及RP绝对值,后者包括原发性血小板减少性紫癜（1TP）、再生障碍性贫血病人（AA）及初治急性白血病病人。结果ITP病人RP百分数明显高于正常对照组（F=65．29,q=10．26,P〈0．01）,而RP绝对值明显低于正常对照组（F=85．07,q=19．59,P〈0．01）;AA病人RP百分数及绝对值均低于正常对照组（q=3．47、16．41,P〈0．05、0．01）;AL组病人RP百分数与正常对照组比较无明显差异（q=0．51,P〉0．05）,但其RP绝对值明显低于正常对照组（q=15．46,P〈0．01）。结论 改良了传统的网织血小板检测方法并建立了简便、稳定的检测手段,为临床各类血小板减少性疾病的诊断提供了可靠的方法。     

新单抗ZCH-7-2D3与白血病细胞的反应性及其临床意义

目的：观察新抗人白细胞分化抗原ZCH-7-2D3单克隆抗体（单抗）与白血病细胞的反应性及其在白血病免疫学诊断分型中的意义。方法：采用CD45设门和多色流式细胞术，对经30余种标准单抗业已定型的100例白血病患者新鲜的骨髓细胞或外周血标本进行流式细胞术分析。结杲：2D3抗原在急性淋巴细胞性白血病（ALL）病例中的阳性率（10／31）明显低于急性髓细胞性白血病（AML）（39／55，P〈0．01）；2D3在3例B系／髓系混合型白血病病例中均有表达，而在6例慢性粒细胞性白血病（CML）中不表达，在慢性淋巴细胞性白血病（CLL）中阳性率（3／5）与B系ALL病例中的阳性率（9／28）差异无显著意义（P=0．2389）。2D3在ALL各免疫亚型中的表达差异无显著意义（P=0．5632）；在AML各亚型中除2例AML—M6患者不表达外，其余AML亚型间无统计学意义（P〉0．05）。结论：单抗2D3主要与AML细胞反应，但在识别白血病细胞分化阶段上未发现特殊性。     

Dickkopf1(DKK-1)基因甲基化在急性白血病中的表达分析

目的探讨WNT/β-catenin通路的关键抑制因子Dickkopf1(DKK-1)基因异常甲基化与急性白血病(AL)发病机制的相关性。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测4个AL细胞系(NB4、Jurkat、Molt-4、CEM)、65例AL患者及20例正常对照骨髓单个核细胞中DKK-1基因mRNA的表达情况;采用甲基化特异性PCR(M SP)方法检测各标本及细胞系中DKK-1基因启动子区域的甲基化状态。结果与正常对照组比较,AL患者DKK-1基因mRNA表达量显著降低(P<0.05);正常对照组标本单个核细胞中不存在DKK-1基因的甲基化;DKK-1在AL患者中甲基化率为37.7%(24/65),其中急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中甲基化率为41.2%(14/34),急性髄系白血病(AML)患者中甲基化率为28.6%(10/31)。结论 DKK-1甲基化及异常表达在急性白血病中是一种较为普遍的现象,其参与了部分急性白血病的发病过程。