Bcl2-siRNA提高人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂敏感性的研究

目的 探讨Bcl2-siRNA 对人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 对顺铂敏感性的影响.方法 在人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA,48h 后加入不同浓度(0、3、6、9、12、15μg/ml) 新鲜配置的顺铂溶液,药物作用48h后,用CCK-8 法检测细胞生长抑制率.荧光实时定量PCR(Real time RT-PCR) 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2mRNA 的变化,Western Blot 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2 蛋白的变化.结果 在A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA 后,细胞Bcl-2 mRNA 降低92.6%(P<0.05),Bcl-2 蛋白表达也明显降低,同时细胞对顺铂的敏感性增加57.8%(P<0.05).结论 Bcl2-siRNA 能降低A549/DDP 中Bcl-2 mRNA 及蛋白的表达,增加A549/DDP 对顺铂的敏感性.     

8-Br-cAMP联合顺铂作用于肺腺癌细胞A549的初步研究

目的:观察8-溴-环腺苷酸(8-Br-cAMP)联合顺铂(DDP)对人肺腺癌细胞A549生长及其表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响.方法:MTT法测定不同浓度8-Br-cAMP、DDP以及两药联用处理人肺腺癌细胞A549后细胞增殖活性的差异;应用RT-PCR技术检测EGFR mRNA表达水平的变化;Western blot技术检测EGFR蛋白表达水平的变化;利用流式细胞术测定细胞周期的改变.结果:8-Br-cAMP及DDP均能抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,并呈浓度及时间依赖性;DDP联合8-Br-cAMP细胞抑制率显著高于相应浓度单药组(P<0.05),两者呈现出相加的抗瘤效果.8-Br-cAMP可下调人肺腺癌A549细胞EGFR mRNA和蛋白的表达.8-Br-cAMP将细胞周期阻滞在G2/M期(P<0.05).结论:8-Br-cAMP、DDP均可抑制A549细胞增殖.8-Br-cAMP可显著提高顺铂的细胞毒作用,增强化疗效果,并将细胞阻滞于G2/M期.8-Br-cAMP可以下调EGFR表达,可一定程度地逆转化癌细胞.     

胰岛素对人肺腺癌细胞A549化疗增敏作用机制的研究

目的探讨胰岛素对化疗药物顺铂（DDP）敏感性的影响和机制。方法选用人肺腺癌细胞A549为靶细胞,采用MTT法检测顺铂对A549细胞抑制率达30％时的药物浓度（IC30）,检测胰岛素不同浓度或作用不同时间后,对A549细胞化疗敏感性的影响。流式细胞仪检测不同加药处理组的周期时相变化情况。Western Blot印迹方法检测不同加药处理组的细胞周期蛋白CyclinA和CyclinD1的表达情况。结果顺铂的IC30约为36．87μg／mL;胰岛素（2．0～160mU／mL;8h～16h）可增强顺铂（36．87μg／mL）的细胞毒作用（P〈0.01）。流式分析显示DDP能引起A549的S期细胞阻滞,胰岛素可增加DDP对A549的S期细胞阻滞。Western Blot印迹方法检测显示单用顺铂组较对照组比较,CyclinA的表达明显增强,CyclinD1的表达变化不明显。胰岛素联合顺铂组较单用顺铂组比较,CyclinA、CyclinD1的表述变化均不明显。结论胰岛素具有化疗增效作用,胰岛素用药的时机选择是实现增效的关键。其机制可能为：胰岛素能够使A549的S期细胞比例增加,与DDP有协同作用。顺铂对人肺腺癌细胞株A549细胞周期的影响表现为S期的阻滞,CyclinA的表达增强在其作用机制上起着重要的作用。     

重组人p53腺病毒联合顺铂对肺腺癌A549细胞基因表达的影响

目的 研究重组人p53腺病毒(rAd-p53)联合顺铂对肺腺癌A549细胞基因表达的影响,探讨rAd-p53增强顺铂对A549细胞抑制作用的机制.方法 通过基因芯片检测技术,比较rAd-p53联合顺铂与单独顺铂处理后的肺腺癌A549细胞肿瘤相关基因表达的差异,采用SAM软件对结果进行分析.结果 rAd-p53联合顺铂与单独顺铂处理的A549细胞比较,15个基因表达显著上调,28个基因表达显著下调.结论 rAd-p53增强顺铂对A549细胞的抑制作用与导入外源性p53基因后,p53基因表达上调并引起调控细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡的一系列基因的表达变化.     

Bcl2-siRNA增加人肺腺癌细胞化疗敏感性的研究

目的探讨bcl2-siRNA增加人肺腺癌细胞株A549对顺铂敏感性的作用。方法在人肺腺癌细胞株A549细胞中转染bcl2-siRNA,48 h后加入不同浓度（0、0.5、1、2、3μg/mL）新鲜配置的顺铂溶液,药物作用48 h后,用CCK-8法检测细胞生长抑制率。荧光实时定量PCR（Realtime RT-PCR）检测A549细胞转染bcl2-siRNA后Bcl-2 mRNA的变化。Western Blot检测A549细胞转染bcl2-siRNA后Bcl-2蛋白的变化。结果在A549细胞中转染bcl2-siRNA后,Bcl-2 mRNA的表达下降了93.2%（P=0.037）,Bcl-2蛋白表达也明显降低。同时,细胞对顺铂的敏感性明显增加69.8%（P=0.024）。结论 Bcl2-siRNA能降低A549细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白的表达,增加A549对顺铂的敏感性。     

细胞因子联合抗癌药抑制肺腺癌细胞的研究

目的 检测白细胞介素２（ＩＬ－２）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）与顺铂（ＤＤＰ）合用对肺腺癌Ａ５４９细胞株（Ａ５４９）和耐顺铂Ａ５４９细胞株（Ａ５４９／ＤＤＰ）的细胞毒性作用。方法 采用四氯唑蓝快速比色法（ＭＴＴ法）进行体外细胞毒性实验。结果ＩＬ－２与顺铂使用后顺铂对两株细胞的毒性作用无明显变化；ＴＮＦα与顺铂用后顺铂对两株细胞的毒性作用明显增强；ＩＬ－２、ＴＮＦα与顺铂三者合用后顺铂对两株细胞的毒     

异钩藤碱脂质体逆转人肺腺癌细胞A549／DDP对顺铂耐药的研究

目的研究异钩藤碱脂质体(Isorhynchophylline Liposomes,IR-L)在体外对人肺腺癌细胞系A549/DDP对顺铂(DDP)的逆转作用。方法采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定细胞内顺铂浓度。结果IR-L无细胞毒浓度组(2.0μg/mL)使A549/DDP细胞对DDP的IC50由16.81 mg/L降至3.36 mg/L;低细胞毒浓度组(7.0μg/mL)的IC50降至2.34 mg/L;两组均明显提高DDP在A549/DDP细胞内的浓度,从0.92μg/L分别提高到4.62μg/L和6.89μg/L。结论IR能部分逆转A549/DDP细胞的MDR,其作用机制可能与增加细胞内药物浓度有关。     

MicroRNA-98对A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨MicroRNA-98（miR-98）对肺腺癌耐顺铂细胞系A549／DDP顺铂耐药性的影响。方法利用MicroRNA（miRNA）芯片及生物信息学筛选出miR-98。将miR-98质粒载体瞬时转染至A549／DDP细胞：M．rr检测细胞药物敏感性的改变。结果在A549／DDP细胞中miR-98表达水平下调。转染miR．98的A549／DDP细胞生长抑制率明显增高。结论miR-98能够增加肺腺癌耐药细胞株A549／DDP对顺铂的药物敏感性。     

CIK对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP杀伤效应及耐药逆转作用

目的探讨CIK细胞对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP体外杀伤效应及逆转作用。方法用MTT法分别检测顺铂、CIK细胞、CIK联合顺铂对人肺腺癌细胞A549及人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP的杀伤活性,计算耐药倍数,逆转倍数。结果①顺铂对人肺腺癌细胞A549及A549/DDP的50%杀伤浓度(IC50)分别为1.823g/mL、6.392 g/mL,差异有统计学意义(P<0.05),人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂的耐药倍数(IR)为3.506。②CIK对人肺腺癌细胞A549及A549/DDP均有杀伤作用,其IC50分别7.657×105个细胞/mL、7.955×105个细胞/mL,差异无统计学意义(P>0.05)。③不同浓度的CIK细胞(1×105,2×105and3×105个/mL)与人肺腺癌细胞共培养后,再加顺铂,其IC50值分别降至1.743g/mL、1.336g/mL、0.883g/mL,差异有统计学意义(P<0.05);计算逆转倍数(FR)分别为(2.369、3.091、4.677)。结论①人肺腺癌细胞A549/DDP较A549对顺铂有明显的耐药性。②CIK对人肺腺癌细胞A549及A549/DDP均有杀伤作用,杀伤效果在两种细胞中无明显差异。③无毒剂量CIK联合顺铂作用于人肺腺癌细胞A549/DDP,可以增加顺铂对耐药细胞的杀伤活性。逆转倍数随着CIK密度的增加而增大,说明CIK细胞能部分逆转耐药细胞A549/DDP对顺铂的耐药性。     

榄香烯对人肺癌A549细胞系耐顺铂细胞株多药耐药的改善作用及机制研究

[目的]探究榄香烯(elemene,ELE)对顺铂(cisplatin,DDP)耐药人肺癌A549/DDP细胞系多药耐药的改善作用及其作用机制.[方法]将A549/DDP细胞分为A549/DDP组和ELE组,以四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测24、48、72h时不同...     

肺康饮口服液对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响

目的通过观察肺康饮口服液对人非小细胞肺癌A549生长及凋亡的影响,探讨其体外的抗肿瘤效应。方法体外培养A549细胞,以不同浓度的肺康饮口服液作用为实验组,并设对照组,CCK8法测细胞增殖抑制效应,透射电镜观察药物对细胞形态学的影响,流式细胞术检测A549细胞中p53和Be1-2蛋白表达情况。结果不同浓度肺康饮口服液作用A549细胞24h增殖抑制明显（P〈0．05）,其抑制效应具有剂量依赖的特点,并可诱导A549细胞凋亡,同时上调p53基因表达、下调Bc1-2基因表达（P〈0．05）。结论肺康饮口服液可抑制A549细胞的生长且增殖抑制效应具有剂量依赖性,并可诱导肿瘤细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与细胞凋亡相关基因表达的调控有关。     

补中益气汤含药血清干扰A549/DDP生长作用的实验研究

目的从细胞水平探讨补中益气汤含药血清改善A549/DDP耐药作用并选择最佳含药血清的浓度。方法采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备高、中、低剂量补中益气汤的含药血清,分别以5%和10%的浓度作用于人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP 48 h,观察补中益气汤含药血清对A549/DDP生长的影响并通过MTT法检测各组细胞的抑制率,以此筛选出最佳含药血清浓度,计算出最佳浓度含药血清对A59/DDP的耐药逆转倍数。结果补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞有明显抑制作用,且呈浓度依赖关系。5%高剂量组对A549/DDP的抑制率高于5%中剂量组和5%低剂量组,并与5%空白血清组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。10%各剂量组对A549/DDP的抑制率与10%空白血清组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。经筛选,10%中剂量含药血清作用48 h为最佳干扰浓度,在此浓度下,A549/DDP对顺铂的IC50明显下降（P〈0.05）,对A549/DDP细胞的逆转倍数为2.46。结论 10%中剂量含药血清干扰48 h可作为后期药物实验的含药血清加药浓度及观察时间筛选的实验依据,补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP的耐顺铂作用。     

肝细胞生长因子对非小细胞肺癌侵袭和迁移的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对非小细胞肺癌(NSCLC)转移的影响及其可能的分子机制.方法 以HGF进行诱导培养NSCLC细胞株A549及其耐药株A549/DDP,应用Real time PCR及Western blot检测诱导前后细胞内上皮间质转化(EMT)相关标志物波形蛋白(vimentin)、钙黏蛋白E(E-cadhe-rin)表达的变化.将细胞种植在细胞培养板,设置未外源性添加HGF的为对照组,外源性添加HGF进行细胞培养的为HGF诱导组,应用细胞划痕以及Transwell实验检测诱导前后两株细胞迁移侵袭能力的变化.结果 HGF在A549/DDP细胞的mRNA表达水平较A549细胞显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);提高A549/DDP及A549细胞微环境中HGF水平可诱导细胞vimentin增加、E-cadherin减少,差异均有统计学意义(基因水平P<0.01,蛋白水平P<0.05).细胞划痕实验显示,A549/DDP细胞愈合较A549细胞快,差异有统计学意义(P<0.05),HGF诱导可使细胞侵袭能力增强;Transwell结果显示,HGF诱导组的A549/DDP、A549细胞相对未诱导前细胞的侵袭能力增强,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 HGF促进NSCLC细胞A549/DDP及A549的侵袭迁移,其机制可能与通过调控EMT相关基因的表达相关.     

CIK逆转耐顺铂人肺腺癌细胞对顺铂耐药与ERCC1的相关性

目的观察脐血来源的CIK细胞对A549/DDP细胞的耐药逆转作用。并探讨CIK逆转耐药机制是否与核苷酸切除修复交叉互补基因1（excision repair cross complementation group 1,ERCC1）的表达存在相关性。方法采集脐血单个核细胞经细胞因子体外诱导获得CIK细胞（cytokine induced killer cells,CIK）,MTT法检测顺铂（cisplatin,DDP）对A549细胞和A549/DDP细胞的体外杀伤作用,以及CIK细胞与A549/DDP细胞共培养前后对DDP敏感性的变化。Real-time RT-PCR法检测A549细胞、A549/DDP细胞以及CIK干预后的A549/DDP细胞中ERCC1 mRNA的表达情况。Western blot法检测A549细胞、A549/DDP细胞以及CIK干预后的A549/DDP细胞中ERCC1蛋白的表达情况。结果 A549/DDP细胞对DDP耐药,耐药指数为2.391。CIK细胞能逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性,逆转倍数为3.967。Real-time RT-PCR、Western blot测得A549/DDP细胞中ERCC1 mRNA和蛋白表达量比A549细胞高（P〈0.05）,CIK细胞共培养前后A549/DDP细胞中ERCC1 mRNA和蛋白表达量无明显变化。结论 CIK细胞能逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性,其逆转耐药的机制与ERCC1的表达无明显相关性。     

长非编码RNA BANCR逆转非小细胞肺癌细胞株顺铂耐药的研究

目的:研究长非编码RNA BANCR对人非小细胞肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP耐药性的影响及其可能的作用机制?方法:应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测耐顺铂细胞株A549/DDP及其亲本细胞株A549中BANCR的表达差异,发现BANCR在A549/DDP细胞中显著低表达?在A549/DDP细胞中过表达BANCR,分别应用MTT法?克隆形成实验?流式细胞术检测过表达后A549/DDP细胞对顺铂药物敏感性,细胞增殖能力,联合顺铂处理后细胞凋亡变化;Western blot检测过表达BANCR后A549/DDP细胞p53的表达变化?结果:BANCR在A549/DDP细胞中的表达量显著低于A549细胞(P < 0.05),在A549/DDP细胞中过表达BANCR可产生以下效应:相较于对照组,顺铂对A549/DDP/BANCR细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P < 0.05),A549/DDP/BANCR细胞的增殖能力减弱,A549/DDP/BANCR经过顺铂处理后细胞凋亡增多(P < 0.05)?Western blot结果显示,与空白对照组比较,过表达BANCR的 A549/DDP细胞p53表达水平明显升高?结论:BANCR可能通过诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调p53蛋白表达而逆转 A549/DDP细胞对DDP的耐药性?     

贝伐单抗对荷耐顺铂人肺腺癌A549/DDP裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的 探讨贝伐单抗联合或不联合顺铂对耐顺铂肺腺癌A549/DDP移植瘤生长的抑制作用.方法 建立裸鼠移植瘤模型,随机分成空白对照组(A组)、单药贝伐单抗组(B组)、单药顺铂组(C组)、联合用药组(D组)和联合半剂量组(E组)5组,连续用药4周.观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率;免疫组化法检测肿瘤组织微血管密度(MVD);RT-PCR分析各组经治疗后凋亡基因bcl-2及耐药基因(LRP、GST-Π)mRNA表达情况.结果 与空白对照组比较,经贝伐单抗治疗组(B、D、E组)抑瘤率分别为20.96%、51.67%、50.95%,联合用药组(D、E组)效果最佳.经贝伐单抗治疗组微血管密度分别为18.6±1.14、13.6±1.14、14.4±0.55,联合用药组最为显著,而单药顺铂组与对照组在抑瘤率和微血管密度表达上均无差异(P=0.632).经贝伐单抗治疗组bcl-2 mRNA表达较对照组有显著差异(P＜0.001),但三组之间无差异(P＞0.05);五组之间在LRP、GST-Π mRNA表达上无明显差异(P＞0.05).结论 贝伐单抗对荷A549/DDP裸鼠移植瘤有抑制作用,联合顺铂用药有显著协同作用,同时提高A549/DDP耐药细胞对顺铂的敏感性,其作用机制可能与抑制肿瘤微血管形成、诱导细胞凋亡增加有关.     

miR-194对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨microRNA-194(miR-194)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其可能的作用机制?方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌耐药细胞A549/DDP及其亲本细胞株A549中miR-194的表达差异,并在A549/DDP细胞中转染miR-194-inhibitor后检测miR-194的表达变化;应用MTT法?克隆形成实验?流式细胞术检测转染后A549/DDP细胞对DDP的敏感性?细胞增殖能力及凋亡变化;Western blot检测转染后A549/DDP细胞中Bax和Bcl-2的表达变化?结果:miR-194在耐药细胞A549/DDP中的表达量显著高于其亲本细胞株A549(P < 0.05),A549/DDP在转染miR-194-inhibitor 24 h后miR-194的表达水平较对照组显著下降(P < 0.05)?抑制miR-194表达后,相对于对照组,DDP对转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P < 0.05),转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞增殖能力减弱,经DDP处理后凋亡细胞增多(P < 0.05)?Western blot结果显示,与对照组相比,转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低?结论:miR-194可能通过抑制细胞凋亡,上调Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白表达而增加A549/DDP细胞对DDP的耐药性,抑制miR-194的表达可逆转A549/DDP细胞的耐药性?