阿魏蘑菇提取物对肿瘤细胞p53表达的影响

目的 探讨新疆阿魏蘑菇提取物对体外培养的肿瘤细胞p53蛋白表达的影响，从细胞凋亡角度研究其抗肿瘤机制。方法 采用肿瘤细胞体外培养技术及流式细胞技术，观察阿魏蘑菇不同剂量的水提物及醇提物对体外培养的4种肿瘤细胞p53蛋白表达的影响。结果 MTT实验结果显示，受试物对4种类型肿瘤细胞均具有较强的杀伤作用，尤其以0．1g／m1剂量组为明显；HT实验结果表明，经受试物处理后，4种类型肿瘤细胞均观察到细胞核固缩，DNA浓缩并向核膜靠拢形成浓染致密颗粒，并有典型凋亡小体出现。提示，受试物可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用；流式细胞仪检测结果显示，受试物处理后，4种类型肿瘤细胞p53蛋白表达水平均有不同程度的上调，尤其以醇提物作用24h后对Q3细胞p53蛋白表达水平的影响最为明显。结论 阿魏蘑菇提取物中的各组分可协同作用诱导肿瘤细胞促凋亡基因的表达，从而达到抗肿瘤的目的，有关阿魏蘑菇通过何种途径提高p53蛋白表达水平尚待深入探讨。     

新疆天然植物黑加仑对食管癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察新疆天然植物黑加仑水提物对食管癌细胞的影响及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度(10-1、10-2、10-3g/ml)黑加仑水提物作用不同时间(12、24、36h)对人食管癌细胞株Eca109的细胞存活量的影响,以大鼠正常肝细胞(BRL)为正常对照细胞株;用Bradford法测定肿瘤细胞蛋白质合成的变化;采用流式细胞技术(FCM)观察黑加仑作用后肿瘤细胞周期变化及凋亡情况;通过倒置显微镜观察细胞的形态变化。结果:黑加仑水提物10-1g/ml组对人食管癌细胞株Eca109作用24h后,癌细胞的生长和蛋白合成均有明显抑制作用(P<0.05),对正常肝细胞的存活量及蛋白合成均无影响;流式细胞仪检测二倍体峰前出现凋亡峰,细胞凋亡率为49.6%;并且癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态。结论:黑加仑水提物可通过诱导细胞凋亡而抑制人食管癌细胞株Eca109细胞的生长。     

鼠妇水提物和醇提物的体外抗肿瘤活性研究

目的:研究鼠妇不同提取物的体外抗肿瘤活性。方法:将鼠妇药材分别进行水提,醇提,通过体外培养人胃癌细胞株BGC823,人白血病细胞株K562,人食道癌细胞株TE13,用MTT法测定鼠妇醇提物和水提物对体外肿瘤细胞的生长抑制作用。结果:鼠妇水提物和醇提物均能明显抑制肿瘤细胞的生长(P<0.05),与水提物相比,醇提物显著抑制肿瘤细胞生长(P<0.05)。结论:鼠妇醇提物具有更显著的抗肿瘤作用。     

新疆阿魏菇粗提物抗肿瘤效应研究

研究新疆阿魏菇粗(水、醇)提物中可能的抗肿瘤有效成分,探讨粗提物抗肿瘤作用的分子生物学机制。方法: 采用天然植物化学分离、分析及鉴定技术,对阿魏菇醇提物进行了有效成分的初步分离、鉴定;运用形态学观察、流式细胞技术及RT-PCR技术,从诱导肿瘤细胞凋亡角度探讨粗提物抗肿瘤机制。结果: 1. 分离所得组分1号、2号及3号结晶可能为同一种物质─山梨醇,4号组分为一氨基酸混合物;2. 分离组分的体外抗肿瘤作用明显低于粗提物;3. 荧光染色实验结果显示,不同剂量的阿魏菇粗提物分别作用12及24 h后,四种类型肿瘤细胞的凋亡细胞百分比均明显高于阴性对照组(P<0.05, P<0.01);4. 流式细胞术及RT-PCR实验结果,(1)阿魏菇醇提物及水提物作用后,Q3、Hela细胞P53蛋白表达水平明显上调,尤以Q3细胞醇提物作用24h最为明显;(2)以-actin的表达及表达量作为内对照,四种类型肿瘤细胞均出现P53蛋白表达水平的提高,p53基因、fas基因mRNA表达水平亦上调(P<0.05, P<0.01)。结论: 阿魏菇粗提物可能通过诱导促进肿瘤细胞凋亡基因(p53基因、fas基因)的转录及表达而发挥抗肿瘤作用,至于p53、fas基因通过何种途径促进肿瘤细胞凋亡,尚待进一步探讨。     

杏多糖与阿魏菇醇提物对食管癌细胞凋亡及其调控影响的体外实验研究

目的观察杏多糖与阿魏蘑菇醇提物对食管癌细胞Eca9706的凋亡作用及其作用机制。方法采用体外细胞培养,以免疫细胞化学和分子生物学技术观察10^-1g/ml杏多糖与阿魏蘑菇醇提物对食管癌细胞细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响。结果免疫细胞化学结果显示,食管癌细胞经两种受试物处理24h后,Bax的表达较处理前有所增加;Bcl-2表达未见下降,反而有增高的趋势。经HE染色,在光学显微镜下可见,经10^-1g/ml的杏多糖与阿魏蘑菇醇提物干预后的食管癌细胞出现了凋亡细胞的形态学特征;TUNEL测试结果显示食管癌细胞核的DNA断裂片段较处理前增多;琼脂凝胶电泳显示一片模糊的弥散带。结论10^-1g/ml的杏多糖与阿魏蘑菇醇提物可促进食管癌细胞抑癌基因Bax的表达,并促进细胞的凋亡。     

阿魏蘑菇提取物抗肿瘤作用的实验研究

目的系统测试阿魏蘑菇提取物抗肿瘤的效应,探讨其抗癌机制。方法应用MTT法检测提取物对泌尿生殖系统中4个肿瘤细胞株生长的抑制作用;分别检测提取物对S180小鼠实体瘤生长的抑制率和S180小鼠腹水瘤小鼠的生命延长率;以肿瘤细胞凋亡为切入点,研究提取物抗肿瘤机制。结果提取物高浓度具有明显抑制肿瘤细胞生长作用(P<0.01),极低浓度未见抑制肿瘤细胞生长作用。阿魏蘑菇提取物高中低剂量均有抑制S180实体瘤小鼠肿瘤生长的作用,均可明显延长S180腹水瘤小鼠的生存时间,且其延长小鼠生存时间呈剂量依赖关系。形态学观察发现提取物诱导了4种肿瘤细胞的凋亡;提取物诱导4种肿瘤细胞早期凋亡率明显高于未处理肿瘤细胞;提取物处理T24细胞后,baxc、aspase-3蛋白表达明显增强,bcl-2表达降低。结论阿魏蘑菇提取物有抗肿瘤作用,其机制可能与下调bcl-2表达和上调bax的表达,从而高表达caspase-3诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

新疆阿魏菇提取物对不同肿瘤细胞p53、fas基因表达的调节

目的 从细胞凋亡角度探讨新疆阿魏菇提取物抗肿瘤机制。方法 采用肿瘤细胞体外培养技术及RT—PCR技术，观察阿魏菇不同剂量的水提物及醇提物对体外培养的四种肿瘤细胞p53及fas基因表达的影响。结果 以β—actin的表达及表达量作为内对照，四种类型肿瘤细胞均出现不同程度的p53基因、fas基因表达水平的上调。结论 受试物可能通过诱导促进肿瘤细胞凋亡基因(p53基因、fas基因)的转录及表达，从而发挥抗肿瘤作用。     

吐鲁番无核白葡萄抑癌作用及其相关成分分析

目的 :　研究吐鲁番无核白葡萄的体外抑癌效果并检测几种相关的功效成分含量。方法 :　以吐鲁番无核白葡萄提取物作为受试物 ,采用体外细胞培养技术 ,观察不同浓度白葡萄提取物 (1 0 -1kg/L～ 1 0 -6kg/L)对四株肿瘤细胞即人胃癌细胞 MGC- 80 3、人肺腺癌细胞 SPC- A- 1、宫颈癌细胞 Hela、人肝癌细胞 Q3 及一株正常大鼠肝细胞 BRL等五株细胞生长的影响。分别用ELISA-结晶紫法和 Bradford法测定细胞存活量和活细胞蛋白含量两项指标 ,各实验组均设置空白对照 ;用原子荧光光谱及紫外分光光度法测定其中与抑癌相关的成分维生素 C、多糖、黄酮及硒的含量。结果 :　吐鲁番无核白葡萄对所检测的四株肿瘤细胞存活量的抑制作用显著 (P<0 .0 5 ) ;同时对 SPC- A- 1、Q3 和 Hela三株肿瘤细胞蛋白合成的抑制作用显著 (P<0 .0 5 )。吐鲁番无核白葡萄中维生素 C、多糖及黄酮含量分别为 5 1 .8mg/kg、6 8.1 mg/kg及 45 .6 mg/kg,硒小于方法的最低检测限 1 .1× 1 0 -3 mg/kg。结论 :　吐鲁番无核白葡萄有一定的体外抑癌效果 ,可能与所含有的维生素 C、多糖及黄酮等成分有关。     

褐藻糖胶对人白血病细胞株K562凋亡的影响

目的探讨海带提取物褐藻糖胶对体外培养的人髓系白血病细胞株K562生长的影响．从细胞凋亡角度研究其抗肿瘤机制。方法采用肿瘤细胞体外培养、单细胞凝胶电泳、凋亡细胞DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞技术．观察不同剂量褐藻糖胶对体外培养的白血病细胞株K562细胞的影响。结果噻唑蓝（MTT）实验结果显示，褐藻糖胶对K562细胞均具有较强的杀伤作用，尤其以1g／L剂量组为明显。单细胞凝胶电泳实验结果表明，褐藻糖胶对肿瘤细胞DNA有明显损伤作用．尤其以1g／L剂量组的影响最为明显。DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测结果显示．经褐藻糖胶处理后，肿瘤细胞洲亡率上升，其中1g／L剂量组较为明显。提示褐藻糖胶可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。结论褐藻糖胶可通过诱导肿瘤细胞凋亡，从而达到抗肿瘤的目的。     

松针不同提取部位体外抗肿瘤作用的实验研究

[目的]探讨松针不同提取部位的体外抗肿瘤作用. [方法]采用系统溶剂萃取法将松针醇提物进行部位分离,得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水提取部位,通过四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察各提取部位对人肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2,人乳腺癌细胞株MCF-7,人前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖的影响.采用流式细胞术分析药物对肿瘤细胞细胞周期分布的影响,初探松针抗肿瘤作用机理. [结果]石油醚部位对肿瘤细胞增殖的抑制作用较强,在一定剂量范围内呈现出时间和剂量依赖性;乙酸乙酯部位的作用次之;正丁醇和水部位的抑制作用不明显.4种细胞中SMMC-7721细胞对松针提取物最敏感,该细胞经0.8 mg·ml-1石油醚提取部位处理24 h、48 h和72 h后,细胞的凋亡百分率分别为15.43%、20.73%、13.47%,细胞周期被阻滞在G2-M期. [结论]石油醚部位在体外对肿瘤细胞增殖呈现出较强的抑制作用,其抑制SMMC-7721细胞增殖的机制可能与松针提取物的细胞毒作用、诱导细胞凋亡和抑制细胞分阶段分裂有关.     

β-胡萝卜素和亚硒酸钠体外抗肿瘤作用的实验研究

方法：采用细胞株体外培养技术，研究β－胡萝卜素和亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）单独／联合对人肝癌细胞株（Ｑ３）和人膀胱癌细胞株（Ｔ２４）生长的影响。以小鼠成纤维母细胞（３Ｔ３）为正常对照细胞株。实验分为：１．β－胡萝卜素组：剂量为３、３０、１００μｍｏｌ／Ｌ，溶剂对照为ＤＭＳＯ；２．亚硒酸钠组：剂量为０．１５、１．５、５．０μｍｏｌ／Ｌ，溶剂对照为生理盐水；３．β－胡萝卜素和亚硒酸钠联合组：剂量为１．５＋０．１５、１５＋１．５、５０＋５．０μｍｏｌ／Ｌ，溶剂对照为ＤＭＳＯ和生理盐水。各实验组均设空白组。分别在实验后２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ观察细胞成活率和活细胞蛋白质含量的变化。结果：１．β－胡萝卜素各剂量组对两株肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用；２．亚硒酸钠对两株肿瘤细胞的抑制作用较弱，但随作用时间延长和剂量的增加其抑制作用明显增强；３．β－胡萝卜素和亚硒酸钠对Ｑ３细胞株的抑制作用比Ｔ２４细胞株强；４．β－胡萝卜素和亚硒酸钠联合对Ｑ３和Ｔ２４细胞的抑制作用结果提示两者有相加效应。     

乙醇诱导人脐静脉内皮细胞损伤及ADMA/NOS/NO信号机制

目的探讨乙醇诱导人脐静脉内皮细胞损伤效应及ADMA/NOS/NO信号机制。方法用不同浓度的乙醇与人脐静脉内皮细胞共培养,观察细胞形态和活性,通过检测细胞上清液丙二醛（MDA）、非对称性二甲基精氨酸（AD-MA）、一氧化氮（NO）的含量和一氧化氮合酶（NOS）的活性等指标,观察乙醇对人脐静脉内皮细胞损伤的量-效关系（乙醇处理细胞24 h）和时-效关系（终浓度为100 mmol/L的乙醇分别于处理0、3、6、12、24、48 h后观察检测指标）。实验分为正常对照组（加入与处理组等体积的D-Hank’s液,乙醇浓度为0 mmol/L）、乙醇处理组（终浓度分别为25、50、100、200mmol/L的乙醇）、乙醇＆VitC组（乙醇终浓度为100 mmol/L,VitC终浓度为100 mg/L）和阳性对照组（终浓度为500μmol/L的过氧化氢）。结果50-200 mmol/L乙醇能显著改变细胞形态、降低细胞活性（OD值：0.91±0.10-0.58±0.04,细胞生长抑制率：0.00±0.00-35.57±3.13,P〈0.01）;能显著性诱导内皮细胞MDA升高（258.72±7.36-524.07±8.25,P〈0.01）。50-200 mmol/L的乙醇还能显著性诱导：内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性下降（6.27±0.10-0.47±0.23,P〈0.05）及总NOS活性下降（10.69±0.54-3.77±0.32,P〈0.05）;NO含量降低（191.61±7.96-88.38±5.07,P〈0.05）。而且上述生物学效应均具有显著的时间依赖性,各处理组间两两比较也具有显著性（P〈0.05或P〈0.01）。100 mmol/L乙醇处理时细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性及ADMA含量最高,且分别在处理后24 h到达最高峰。VitC均能扭转上述生物学效应,且具有显著性（P〈0.01）。结论50-200 mmol/L的乙醇能显著诱导人脐静脉内皮细胞损伤;ADMA在乙醇诱导人脐静脉内皮细胞损伤中有着重要作用。     

Anthocyanin-rich extract from Aronia meloncarpa E induces a cell cycle block in colon cancer but not normal colonic cells

Anthocyanin-rich extracts, potent antioxidants and commercially available food coloring agents, have been reported to inhibit growth of various cancer cell lines. We investigated the effect of semipurified anthocyanin-rich extract from fruits of Aronia meloncarpa, on normal colon and colon cancer cell lines. A 24-h exposure to 50 mg monomeric anthocyanin/ml of Aronia extract resulted in 60% growth inhibition of human HT-29 colon cancer cells. The treated cells showed a blockage at G1/G0 and G2/M phases of the cell cycle. The cell cycle arrest coincided with an increased expression of the p21WAF1 and p27KIP1 genes and decreased expression of cyclin A and B genes. Prolonged exposure to the extract resulted in no further change in the cell number, indicating a cytostatic inhibition of cell growth. NCM460 normal colon cells demonstrated <10% growth inhibition at the highest concentration of 50 mg/ml extract. A 35% decrease in the cyclooxygenase-2 gene expression was observed within 24 h of exposure of HT-29 cells but did not translate into decreased protein levels or protein activity. These results support the need for further research to identify the specific component(s) in this extract that suppress cancer cell growth and the genes affected by these natural compounds.     

Actinidia arguta (Hardy Kiwi) Root Extract Exerts Anti-cancer Effects via Mcl-1-Mediated Apoptosis in Cholangiocarcinoma

Cholangiocarcinoma (CCA) is a highly aggressive and chemoresistant liver malignancy. Thus, identification of strategies to overcome insensitivity to apoptosis and growth inhibition is a growing focus of research in this malignancy. This study evaluated the potential anti-cancer effects of an ethanol extract from the Actinidia arguta (Hardy Kiwi) root (RAE) on CCA. Our data demonstrated that RAE decreased cell viability and induced apoptosis by activation of Caspase 3, Caspase 8, and Poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) in two CCA cell lines. RAE induced a decrease in Mcl-1 in cultured CCA cells and in xenograft CCA tumors. Administration of RAE every other day led to significant growth inhibition in tumor burden xenograft CCA mice. Western blotting analysis of paired human CCA and normal adjacent tissues from the same patient revealed that CCA tissues exhibited significantly higher Mcl-1 expression than normal tissues. Taken together, our findings demonstrated the anti-cancer effects of RAE on CCA both in vitro and in vivo. These data suggest that RAE may be a promising anti-CCA agent and could be beneficial in the treatment of CCA through the targeting of Mcl-1.     

Cytotoxic effect of buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench) hull against cancer cells

Buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench) hull was extracted with 70% ethanol and then further fractionated with n-hexane, chloroform, ethyl acetate, and water stepwise. In the in vitro test (SRB assay), hexane and ethyl acetate fractions showed higher inhibition effects against MCF-7 cells than other samples at the 1 mg/mL level: 89% and 93.2%, respectively. They also displayed higher inhibition rates against Hep3B cells of 83.6% and 75.3%, respectively, at 1 mg/mL. The ethyl acetate fraction yielded the highest inhibition rate against A549 cells with the level of 0.25 mg/mL, but it showed a lower inhibition rate than the hexane and chloroform fractions at higher levels of sample, i.e., 0.75 and 1.0 mg/mL. All samples showed higher inhibition effects against AGS human gastric carcinoma than any other cancer cells. The inhibition rates against HeLa cells were 81.2% and 82.0% for the chloroform and butanol fraction with 0.5 mg/mL, respectively. However, all samples yielded an inhibition rate of less than 35% against normal cells, at all treatment levels, except the ethanol extract. All extracts at doses of 25 and 50 mg/kg showed decreases of more than 20% and 42%, respectively, in tumor formation in sarcoma-180 implanted mice except for the aqueous fraction. From these results, it is suggested that buckwheat hull possesses anticancer properties against a variety of different cancer cell lines.