额叶皮质损伤对大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响

本实验探讨了前额叶皮质局限性损伤对大鼠学习、记忆功能及基底前脑胆碱能神经元的影响。用外科手术造成大鼠一侧前额叶皮质局限性损伤后不同时间、用Ｙ型迷宫检测学习、记忆功能、用组织化学技术检测基底前脑含乙酰胆碱酸酶（ＡChE)活性神经元。实验观察到前额叶皮质损伤后１周,动物学习,记忆功能有所障碍,损伤同侧的基底前脑胆碱能神经元有所减少,但均无统计学意义,损伤后２,３,４周,动物学习、记忆障碍明显,损伤同侧基底前脑胆碱能神经元明显减少（Ｐ＜0.05),且两者变化相平行。结果表明单侧前额叶皮质局限性损伤不仅可引起动物学习、记忆功能障碍,且可引起同侧基底前脑胆碱能神经元丢失,且两者发展相平行,提示基底前脑胆碱能神经元逆行性变性在动物额叶皮质损伤引起的学习、记忆障碍中起作用。     

尼古丁对培养大鼠基底前脑胆碱能神经元生长存活及TrkA表达的影响

目的 探讨不同浓发的尼古丁对原代培养的大鼠基底前脑胆碱能神经元的高亲和力神经生长因子受体(TrkA)表达的影响，结合细胞形态学观察和四甲基偶氮唑盐(MTT)实验了解TrkA表达变化对细胞生长的影响。方法 运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑胆碱能神经元并进行鉴定，用0．01，0．1，1，10和100μmol／L五个终浓度的尼古丁对原代培养细胞进行干预，观察细胞的形态变化，MTT实验观察细胞的活力．提取细胞总RNA行RT-PCR观察神经元TrkA mRNA表达的变化，免疫细胞学化观察TrkA表达的变化；用10μmol／L终浓度的尼古丁以不同的时间(分别为8，24，48h)进行干预，观察不同时间干预下上述指标的变化。结果 在0．01～10μmol／L浓度范围内的尼古丁呈剂量依赖性地增加神经元TrkA的表达，100μmol／L浓度的尼古丁则引起TrkA表达的下降，前浓度范围的尼古丁可以剂量依赖性地增加原代培养的神经元细胞突起数量、平均突起长度和最长突起长度，增加MTT法测得的OD值，100μmol／L终浓度尼古丁则产生相反的作用。结论 在一定浓度范围内，尼古丁可以增加原代培养的胆碱能神经元TrkA表达，对神经元可能具有营养作用。     

不同浓度的Aβ(25～35)对原代培养的大鼠基底前脑胆碱能神经元生长存活及TrkA表达的影响

阿尔茨海默病(AD)是一种中枢胆碱能神经系统退行性变引起的以进行性痴呆为主要临床特征的老年性疾病。Aβ聚集形成纤维样的堆积是AD共同特点，也是AD最重要的病理变化。肌碱能神经元的减少和缺失继而引起脑内乙酰胆碱递质的减少是导致AD患者认知功能减退的一大主要原因，目前胆碱能神经元缺失和减少的原因和机制尚不清     

人神经生长因子对大鼠中枢胆碱能神经元损伤后作用的实验研究

目的　研究人神经生长因子（ Ｈ Ｎ Ｇ Ｆ） 对大鼠中枢胆碱能神经元轴突切断后的保护作用。方法　向双侧海马伞切断所致的痴呆大鼠脑室内注入 Ｈ Ｎ Ｇ Ｆ, 采用穿梭箱训练, 检测大鼠学习记忆功能恢复状况, 对脑内隔斜带复合体（ Ｓ Ｄ Ｂ） 中隔区（ Ｍ Ｓ） 胆碱能神经元采用胆碱乙酰基转移酶（ Ｃ Ｈ Ａ Ｔ） 免疫组化法观察其存活状态。结果　 Ｈ Ｎ Ｇ Ｆ 组大鼠术后两周内穿梭箱回避次数高于对照组（ Ｐ＜ ００１） , 回避潜伏期短于对照组（ Ｐ＜ ００１） 。免疫组化及图像分析显示, 其胆碱能神经元存活状态优于对照组。结论　 Ｈ Ｎ Ｇ Ｆ 对大鼠中枢胆碱能神经元损伤具有短期保护作用; 减缓轴突切断引起的退行性变, 对痴呆大鼠学习记忆功能恢复有促进作用。     

人参皂甙对老龄大鼠基底前脑-皮质胆碱能系统TrkB蛋白表达的影响

目的探讨老龄大鼠基底前脑-皮质胆碱能系统TRKB蛋白表达的老龄性变化,同时对比观察人参皂甙对其改变的影响。方法选用WISTAR♀大鼠30只,随机分为3组(N=10):青年组、老龄组、给药组(第17个月始饲以人参皂甙至25-27月龄)。采用WESTERN BLOT技术结合图像分析对基底前脑、海马结构和大脑皮质进行定量研究。结果老龄组基底前脑、海马结构和大脑皮质TRKB蛋白表达分别较青年组下调了61％、99．7％和57．7％ (P<0．01),但给药组上述3个脑区的TRKB蛋白表达较老龄组有所回升,分别较老龄组上调了65％、78．5％和 22．6％(P<0．01)。结论老龄组基底前脑-皮质胆碱能系统TRKB蛋白表达较青年组下调,而人参皂甙可明显上调该3个脑区TRKB蛋白的表达。     

基底前脑Nestin+胆碱能神经元能较好耐受秋水仙素的细胞毒性

微管破坏剂秋水仙素注射于SD大鼠侧脑室,拟观察其对基底前脑不同类型神经元数量的影响,寻找抗损伤能力更强的神经元。与正常大鼠相比,1d后Nestin+胆碱能神经元数量下降,3d后Nestin+胆碱能神经元数量开始增加,至14,28d时增加达到峰值。而Nestin-胆碱能神经元、细小清蛋白神经元和胆碱乙酰转移酶神经元在注射秋水仙素后,数量逐渐下降。提示Nestin+胆碱能神经元对秋水仙素神经毒性具有较好的耐受性。     

神经生长因子缓释微球植入后阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元的变化

背景：已有研究表明,神经营养因子对中枢和周围神经损伤后的存活修复有促进作用。然而,神经生长因子是大分子蛋白类物质,生物半衰期很短,很难透过血脑屏障,寻找有效的神经营养因子投递系统至关重要。 目的：观察了神经生长因子微球对阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元的保护作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2005-11/2006-07在广州医学院神经生物学实验室完成。 材料：采用双乳化技术制备神经生长因子缓释微球。28只SD大鼠,随机分为3组：正常对照组8只,模型对照组8只,神经生长因子缓释微球植入组12只。 方法：模型对照组和神经生长因子缓释微球植入组左侧穹隆海马伞切断制备阿尔茨海默病模型,正常对照组不做任何处理。神经生长因子缓释微球植入组切断后即刻行基底前脑注射神经生长因子缓释微球。正常对照组和模型对照组注射等量生理盐水。 主要观察指标：注射4周后,利用免疫组化法观察各组大鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元变化。 结果：28只大鼠均进入结果分析。模型对照组损伤侧的内侧隔核和斜角带核的神经生长因子受体阳性神经元大量减少,分别减少59.7%和54.4%;神经生长因子缓释微球植入组损伤侧的内侧隔核和斜角带核细胞数分别减少17.9%和19.8%,明显高于模型对照组损伤侧的神经生长因子受体阳性神经元存活数（P < 0.05）。 结论：神经生长因子缓释微球植入对阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元有明显的保护作用。     

何首乌对KA致大鼠脑胆碱能纤维损伤的保护作用

目的 :观察海人藻酸 (KA)对大鼠脑乙酰胆碱能神经元毁损后 ACh E纤维的数目和形态的改变 ,以探讨何首乌 (PMT)对胆碱能纤维的保护作用及机制。方法 :采用兴奋性神经毒素海人藻酸 (KA)损伤基底前脑 (BF) Meynert核团 ,内侧隔核 (MS)及斜角带核 (DB) ,建立毁损模型 ,用何首乌喂饲毁损实验组 ,使用组织化学方法显示乙酰胆碱能纤维的改变及可能的用药后保护和活化作用。结果 :何首乌喂饲组 (A组 )比非何首乌喂饲组 (B组 ) ,其投射到海马及大脑皮质的 ACh E纤维数目多 ,纤维形态无破坏 ,差异有显著性 (P<0 .0 1)。结论 :何首乌对大鼠脑胆碱能神经投射纤维有保护作用     

Meynert核注射β-淀粉样蛋白后大鼠脑NGF、BDNF神经元的表达变化及其机制

目的:探讨Meynert核注射β-淀粉样蛋白(Aβ)后大鼠脑神经生长因子(nerve growth factor，NGF)和脑源性神经营养因子(brain derived neurotropic factor，BDNF)免疫反应性神经元的表达变化及其可能机制。方法将1μL Aβ1-40(10μg／μL)在立体定向仪下注入大鼠右侧Meynert核，分别于1、4周时测定其学习记忆能力和脑组织中NGF、BDNF免疫反应阳性神经元的表达。结果：Aβ1-40注射1周后，实验组出现学习记忆障碍，呈渐进性加重，4周时更为显著。在Meynert核及其周边、海马区和额、顶部皮层区，对照组有少量NGF、BDNF免疫反应阳性神经元分布，染色较浅；而实验组在1周时，较对照组无明显变化，4周时实验组NGF、BDNF免疫反应阳性神经元表达数量显著增加，以海马区最为显著，皮层区次之。结论：皮层和海马至基底前脑神经元的NGF、BDNF运输障碍，使基底前脑的神经元缺乏神经营养，致神经元变性及死亡，可能是阿尔茨海默病(Alzlaeimer disease，AD)学习记忆障碍和痴呆形成的重要因素之一。     

体外培养大鼠脑皮质神经元离心损伤模型的建立

目的建立体外培养大鼠脑皮质神经元离心损伤模型，观察离心损伤后神经元的形态学变化和培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的含量变化。方法把培养神经元的六孔培养板的孔内，置入与孔大小相当的200目钢网，并在钢刚上放置6g重物，通过变速离心培养板，造成神经元损伤的作用。使用倒置相差显微镜，电镜观察损伤后神经元的形态改变，并测量培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的含量变化。结果光镜可见神经元破碎、轴索肿胀、轴索球、轴索部分崩解。电镜可见细胞骨架发生变化。从神经元损伤15min后，培养上清液中LDH活性增高。损伤组LDH升高有两个时相，第一峰在30min出现，第二峰在72h出现，损伤后30min，24h，48h，72h，损伤组与对照组同时间相比，LDH含量均有显著统计学意义（P〈0．01），第一峰值可能是原发性损伤造成的细胞膜破损，LDH释放量升高引起的，第二峰值可能是继发性损伤导致细胞膜破损，LDH漏出所引起的。结论实验建立的神经元损伤模型操作简便，能较好地模拟脑外伤。     

弥漫性脑损伤诱发的前脑胆碱能神经元变化

目的 本实验通过实验性研究,以了解弥漫性脑损伤（ＤＢＩ）是否引起胆碱能神经元的显性减少。方法 采用Ｍａｒｍａｒｏｕ打击装置建立ＤＢＩ动物模型,行胆碱酯酶组织化学染色以显示基底前胆碱能神经元。结果 ①基底前脑胆碱能神经元在重伤组、轻伤组、对照组有显差异（Ｐ〈０．０１）;②损伤后二周组神经元减少与一周组比较有显差异（Ｐ〈０．０１或Ｐ〈０．０５）。结论 ①在本实验所观察到的ＤＢＩ后基底前脑胆碱能神     

NGF Amplifies Expression of NGF Receptor Messenger RNA in Forebrain Cholinergic Neurons of Rats

In order to study the ligand-mediated regulation of NGF receptors in vivo, we assessed NGF receptor mRNA in the septal area of both neonatal and adult rats following intraventricular NGF administration. In neonatal rats NGF treatment, in comparison with cytochrome c, elicited a pronounced augmentation in the level of NGF receptor mRNA. A similar effect was also observed following continuous intraventricular NGF infusion in young adult rats. In addition, in this latter case, the increase in NGF receptor mRNA was associated with an increase in NGF receptor-related immunoreactivity, most likely associated with the cholinergic neurons, in the septal area. These results show that NGF itself may regulate expression of NGF receptor mRNA and corresponding protein levels in forebrain cholinergic neurons and suggest that NGF effects in the CNS may be mediated by an up-regulation of NGF receptors.