壳聚糖/碳纳米管修饰电极电化学免疫传感器用于甲胎蛋白检测

目的构建壳聚糖/碳纳米管(CNT)修饰电极电化学免疫传感器用于甲胎蛋白(AFP)检测的新技术。方法采用壳聚糖/CNT复合物修饰玻碳电极,通过共价键合方式将AFP抗体固定在修饰电极表面,固定抗体的电极与AFP、辣根过氧化物酶(HRP)标记的AFP抗体反应,构筑夹心型免疫复合结构。HRP催化TMB底物产生电流信号,电流信号大小与AFP浓度成正相关,实现对AFP的高灵敏检测。结果该电化学免疫传感器可以准确检测AFP标准样品,也可用于检测血清中AFP的浓度。结论壳聚糖/CNT修饰电极构建的用于AFP检测的电化学免疫传感器具有较高的灵敏度和准确性。     

乙肝病毒表面抗原浓度与AFU及AFP的相关性研究

目的 探讨乙肝病毒表面抗原（HBsAD浓度与α—L-岩藻糖苷酶（AFU）及甲胎蛋白（AFP）的相关性。方法收集240例HBsAg阳性病例的血清,根据HBsAg定量的不同浓度分为1组（0．5ng／ml-150ng／ml）、2组（151ng／ml-300ng／ml）、3组（301ng／ml-450ng／ml）、4组（〉450ng／ml）,每组60例,正常对照组60例,分别检测AFU、AFP,对其结果进行分析。AFU检测采用速率法,HBsAg检测采用时间分辨免疫荧光法,AFP检测采用化学发光法。结果1组的AFU与AFP呈正相关（r=0．310,P〈0．05）,2组的AFU与AFP也呈正相关（r=0．298,P〈0．05）,3组和4组的AFU与AFP之间无相关性（分别r=0．298,r=-0．067,P〉0．05）;各HBsAg浓度组与对照组AFU比较差异无统计学意义（F=1．719,P〉0．05）,而与对照组AFP比较差异有统计学意义（F=3．000,P〈0．05）;各组AFU阳性率随HBsAg浓度升高无升高趋势（X^2=1．44,P〉0．05）,而AFP阳性率随HBsAg浓度升高呈升高趋势（X^2=8．28,P〈0．005）结论对HBsAg高浓度的HBV感染者同时检测AFP和AFU对观察肝脏损害的演变过程有重要的临床价值。     

甲胎蛋白单克隆抗体酶联免疫诊断试剂盒的研制及应用

目的 为研制一种特异性强、灵敏度高、操作简便快速的甲胎蛋白（AFP）单克隆抗体酶联免疫诊断试剂盒，用于定量检测血清中的AFP。方法 将自行研制的AFP单克隆抗体（AFP-McAb）标记辣根过氧化物酶，AFP多抗（AFP-PcAb）包被微孔反应板，研制成AFP单克隆抗体酶联免疫诊断试剂盒。血清中的AFP与包被于微孔板上的AFP多抗结合，再与AFP酶标抗体结合，在TMB底物液作用下形成肉眼可见的蓝色。结果 该诊断试剂盒对305份临床病人血清进行了检测，结果与放射免疫法相比总符合率为98．6％；对215份临床病人血清进行检测，结果与化学发光法相比总符合率为99．0％；灵敏度达10ng／ml。结论 该试剂盒检测AFP特异性强、灵敏度高、操作简便、结果准确，具有临床推广应用价值。     

液相芯片技术定量检测人血清CEA、AFP和NSE

目的建立利用液相芯片技术定量检测人血清中癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和神经原特异性烯醇化酶（NSE）的反应模式,并对该方法各项指标进行评价。方法制备抗体交联微球及生物素标记抗体,用双抗夹心法检测临床血清标本。结果同时检测CEA、AFP和NSE时的线性范围分别为0．078-200ng／ml、0．025-25U／ml、0．146．75ng／ml,最低检测限分别为39．1pg／ml、0．016U／ml、0．073ng／ml,分析内精密度〈10％,分析间精密度〈15％。检测CEA、AFP、NSE的灵敏度分别为97．2％、100％、93．5％,特异度分别为96．4％、97．7％、97．0％,准确度分别为96．9％、98．4％、95．3％。检测结果与化学发光免疫分析法（CLIA）呈显著的等级相关关系,而且仅需1μl标本,3h就可以完成检测。结论液相芯片技术具有可联合检测多项指标、高通量、线性范围宽、灵敏度高、重复性好和节省样品和时间等优点。具有极大的临床应用潜力。     

抗人AFP单克隆抗体酶联免疫检测法的建立及其应用

报道用抗人甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(McAb)标记辣根过氧化物酶(HRP),以纯化之免抗人AFP多克隆抗体包被徽孔条板,建立用于检测血清中AFP的酶联免疫法。结果表明:该方法具有特异、敏感(10ng/ml)、重复性好(变异系数<10％)和简便等优点。在204例临床血清标本的检测中,本方法与放射免疫法(RIA)的结果相符合。     

压电石英晶体甲胎蛋白免疫传感器的实验研究

目的　构建一种新型压电甲胎蛋白 (AFP)免疫传感器。方法　AT切向、基频 10MHz的石英晶体用金属夹具和乳胶套圈固定组成检测池 ,抗人AFP单克隆抗体采用巯基化方法固定在金膜电极表面制成抗体敏感膜 ,构成压电AFP免疫传感器。结果　构建的压电AFP免疫传感器对AFP的响应特性良好 ,其线性检测范围为 2 0～ 10 0 0ng ml ,癌胚抗原(CEA)、前列腺特异抗原 (PSA)、人绒毛膜促性腺激素 (hCG)等对AFP的检测基本无干扰 ;传感器可再生后重复使用 5次 ;68例临床标本检测结果与放射免疫检测法符合 ,两种方法的相关系数为 0 92 ,P <0 0 1。结论　研制的压电AFP免疫传感器是一种灵敏度高、特异性好、不需标记、操作简单、省时、能重复使用和实时在线检测AFP的新方法 ,对比实验表明其检测结果准确 ,能用于临床实验诊断 ,具有临床推广价值。     

四种方法检测甲胎蛋白的比较

目的：比较时间分辨荧光免疫法（TRFIA）、微粒子化学发光法（CLA）、放射免疫法（RIA）和酶免疫法（EIA）四种方法检测甲胎蛋白（AFP）的线性、重复性、准确性和对比试验。方法：用不同浓度AFP分别进行了线性、精密度和回收试验。结果：TRFIA、CLA、RIA、和EIA四种方法的线性范围分别为1～1000ng／ml，1～1000ng／ml，10～400ng／ml和10—300ng；平均批内CV分别为3．75％、2．88％、5．08％和6．78％：平均批间CV分别为4．56％、3．45％、5．88％和7．72％；平均回收率分别为96．8％、97．1％、95．4％和92．6％。对比试验为TRFIA与CLA的相关系数r=0．991．TRFIA与RIA的相关系数r=0．963、TRFIA与EIA的相关系数r=0．843。结论：TR—FIA法和CLA法是目前检测AFP理想的定量方法。     

用液相芯片技术定量测定人血清CEA、AFP和HBsAg

【目的】采用液相芯片技术同时定量测定人血清中癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和乙肝表面抗原（HBsAg），并对该方法进行评价。【方法】制备抗体交联微球及生物素标记抗体，用双抗体夹心法对临床血清标本进行测定。[结果]同时检测CEA、AFP和HBsAg时的线性范围分别为0．032-200ng／mL、0．022-55U／mL、0．26—1000ng／mL，最低检测限分别为8．90pg／mL、0．013U／mL、0．24ng／mL，批内变异系数（cv）〈9％，批间CV〈14％。检测CEA、AFP、HBsAg的灵敏度分别为96．4％、95．8％、92％，特异度分别为95．6％、94．2％、100％，准确度分别为96％、95％、96％。其检测结果与化学发光免疫分析法（CLIA）或时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）之间呈显著的等级相关关系。该方法仅需1μL标本，3h即可完成检测。【结论】液相芯片技术具有可联合检测多项指标、高通量、线性范围广、灵敏度高、重复性好、节省样品和时间等优点，具有临床应用潜力。     

监测AFP/ALB比值变化在肝癌诊断与预后的临床探讨

目的：探讨肝病病人中甲胎蛋白（AFP）与白蛋白（ALB）比值的变化,以期为肝癌的诊断、预后提供一定的实验基础。方法：采用日立7170A全自动生化分析仪检测病人肝功能,采用ELISA法检测病人AFP,其值大于等于900者均记为900ng／ml,计算AFP／ALB比值（AFP单位为ng／ml,ALB单位为g／L;二者只为数值之比,勿需换算单位）。所有肝癌病例进行半年追踪随访。结果：肝癌与肝炎及肝硬化病人AFP／ALB相比二者明显不同,即肝癌病人中AFP／ALB比值明显上升（P＜0．01）,经临床结合影像及病理诊断证实：AFP≥200ng／ml,AFP／ALB≥22者,或AFP≥500ng／ml、AFP／ALB＞15者,均为肝癌患者,肝癌患者经半年随访发现,若AFP／ALB＞30者均发生了肝癌转移或术后复发。结论：肝癌诊断AFP检测中,使用动态观察AFP值及AFP／ALB,比单独检测AFP有意义,并在一定程度上可判断预后复发及转移情况。AFP／ALB比值界值判定有待进一步大量实验论证。     

原子荧光光谱法同时测定水质中砷和硒

目的 探讨同时测定水质中砷和硒的检测方法。方法 选择最佳分析条件，对灯电流、酸度、抗干扰离子等进行研究。结果 方法检出限砷为0．19ng／ml，相关系数0．9995；硒为0．11ng／ml，相关系数0．9993；两精密度均在6．0％以内，砷、硒加标回收率均在93．5％～111．0％之间。结论 该法适用于水质中砷硒的同时测定。     

基于多壁碳纳米管-壳聚糖-硫堇纳米复合物修饰甲胎蛋白免疫传感器的研究

目的采用多壁碳纳米管-壳聚糖-硫堇(MWCNT-CS-THi)纳米复合物及半胱氨酸盐酸盐共修饰于玻碳电极表面固载抗体制得高灵敏甲胎蛋白免疫传感器。方法先在玻碳电极表面滴涂一层MWCNT-CS-THi纳米复合物,随后利用壳聚糖和硫堇分子中大量的正电荷氨基固定纳米金(GNPs)并吸附半胱氨酸盐酸盐(CH),最后用戊二醛(GA)交联甲胎蛋白特异性抗体制得电流型免疫传感器。结果在最佳实验条件下,该传感器响应的峰电流值与甲胎蛋白抗原(AFP)浓度在0.1～200.0ng/ml的范围内保持良好的线性关系,检测下限为0.07ng/ml。结论成功建立了甲胎蛋白免疫传感器,该方法制备简单,线性范围宽,检测下线低。     

基于碳纳米管修饰的无酶型新型甲胎蛋白安培免疫传感器研究

目的构建新型甲胎蛋白安培免疫传感器。方法首先在玻碳电极(GCE)表面修饰一层羧基化碳纳米管(CNTs),然后利用带负电荷的DNA分子和带正电荷的硫堇之间的静电作用,层层自组装修饰硫堇以增强检测信号,然后利用硫堇的氨基固定纳米金,以便固定抗体,最后利用牛血清白蛋白封闭未结合位点。结果修饰的碳纳米管能够显著地提高电极的导电性,利用层层组装技术修饰了5层硫堇。在优化的条件下(pH7.0,温浴时间25min),制作的甲胎蛋白免疫传感器线性范围在0.5～25ng/ml内,检测限0.02ng/ml。结论成功利用层层自组装技术构建新型基于碳纳米管修饰的无酶型甲胎蛋白安培免疫传感器,该传感器灵敏度高,特异性好,有望成为原发性肝癌早期诊断的新方法。     

基于CdTe量子点和磁性纳米材料构建的夹心型电化学免疫传感器

目的 制备新型夹心型电化学免疫传感器,并研究该传感器的性能. 方法 以甲胎蛋白（AFP）作为检测模型,以磁性微球为一抗固定载体,CdTe量子点作为二抗标记物,通过碳二亚胺交联法制备AFP一抗固化的免疫磁珠和AFP二抗固化的CdTe量子点,通过夹心免疫分析模式和电化学溶出伏安法建立新型高灵敏电化学免疫传感器,并采用红外光谱、紫外光谱及电化学方法对该传感器进行表征. 结果 该电化学免疫传感器对AFP抗原检测的线性范围为1～200 ng/mL,检测限为0.025 ng/mL. 结论 该电化学免疫传感器仪器简单、操作便捷、检测结果稳定,并具有较高的灵敏度.     

基于Au_(nano)-PB、AEAPS-Dextran-Fe_3O_4和Au_(nano)修饰的前列腺特异性抗原电流型免疫传感器的研究

目的采用普鲁士兰-纳米金(Au_(nano)-PB)、氨基硅烷化-葡聚糖-四氧化三铁纳米复合物(AEAPS-Dextran-Fe_3O_4)及纳米金(Aunano)共修饰于氧化铟锡(ITO)电极表面固载抗体制得高灵敏前列腺特异性抗原电流型免疫传感器。方法先将ITO电极表面滴加适量Au_(nano)-PB,随后将AEAPS-Dextran-Fe_3O_4滴涂在ITO玻璃电极的Au_(nano)-PB膜上,然后通过静电吸附Au-nano并固定前列腺特异性抗体(anti-PSA),制得电流型免疫传感器。结果在最佳实验条件下,该传感器响应的峰电流值与前列腺特异性抗原(PSA)浓度在该传感器(0.8～20)ng/mL及(20～170)ng/mL的范围内保持良好的线性关系,检测下限为0.6ng/mL。结论成功建立了前列腺特异性抗原免疫传感器,该方法制备简单,操作便捷,检测下限低。     

3个肿瘤标志物联合检测液相芯片系统的建立

目的 探讨建立多个肿瘤标志物联合检测的luminex液相芯片检测方法.方法 应用配对好的AFP、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth facto,VEGF)、细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN/CD 147)3对单克隆抗体建立3个肿瘤标志物联合检测的luminex液相芯片检测体系并评估其敏感性,交叉反应并将其应用于血浆样本的检测.结果 3对抗体在luminex液相芯片系统中无交叉反应,敏感性分别为AFP 64 pg/ml、CD147 40 pg/ml、VEGF4 pg/ml.应用该体系检测了40例HCC患者,分别为AFP[6.5 (2.8,240.0)]ng/ml,CD147 (4.11 ±0.90) ng/ml,VEGF[40 (20,50)]pg/ml;40例健康对照组,分别为AFP [0.3 (0.1,1.0)]ng/ml,CD147(2.98±0.80)ng/ml,VEGF[10(0,10)]pg/ml.3个肿瘤标志物在肝癌患者外周血中的浓度显著高于正常对照组(P＜0.05).结论 成功建立高敏感性的3个肿瘤标志物联合检测的液相芯片检测体系.     

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的 研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果 试剂盒的可测范围为1~1 000U/ml, 灵敏度为0.17U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3.3%~5.9%,3.7%~ 6.5%。与CEA、CA12-5、CA19-9、CA15-3、白蛋白无交叉反应。稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7d。426份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0~12U/ml。用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测60份血清标本,其相关系数为0.995。结论 试剂盒各项指标(灵敏度、精密度、特异性、稳定性、准确度)均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

抗人小扁豆凝集素结合型甲胎蛋白异质体单克隆抗体的研制和初步应用

采用细胞融合技术制备抗人小扁豆凝集素结合型甲胎蛋白异质体单克隆抗体,建立单克隆抗体“双位点夹心”ELISA血清学检测方法。通过对69例原发性肝细胞癌、67例良性肝病、30例妊娠妇女和30例健康成人血清检测结果分析,表明该方法操作简便,结果准确,重复性好,不仅假阳性率低,并适用于低浓度甲胎蛋白原发性肝细胞癌的早期诊断,使良、恶性肝病的鉴别诊断率明显提高,具有较高的临床实用价值。     

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒.方法采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA 试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价.结果试剂盒的可测范围为l～1 000 U/ml,灵敏度为0.17 U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3.3%～5.9%,3.7%～6.5%.与CEA、CA12-5、CA19-9、CA15-3、白蛋白无交叉反应.稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7 d.426份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0～12 U/ml.用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测60份血清标本,其相关系数为0.995.结论试剂盒各项指标(灵敏度、精密度、特异性、稳定性、准确度)均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒.