益骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞IGF-ImRNA及其蛋白表达的影响

目的:观察益骨胶囊含药血清对SD大鼠成骨细胞(OB)增殖和胰岛素样生长因子I(IGF-I)mRNA及其蛋白表达的影响。方法:(1)将40只12月龄SD雌性大鼠分为益骨胶囊灌胃组(高、中、低剂量)和蒸馏水对照组,制备含药血清和对照血清,并确定最佳灌胃剂量和最佳血清添加浓度;(2)分离、培养新生大鼠成骨细胞,传代后分为两组(含药血清组和对照组),分别在培养48、72和96 h时做相关指标的测定,采用MTT法测定OB增殖,RT-PCR法检测IGF-ImRNA的相对表达量,ELISA法检测培养上清中IGF-I的浓度。结果:在48、72和96 h时,益骨胶囊含药血清组OB增殖明显高于对照组(P<0.01),OB表达IGF-I mRNA和蛋白的量明显高于对照组(P<0.01或P<0.05)。结论:益骨胶囊含药血清具有促进成骨细胞增殖、表达IGF-I mRNA和蛋白的作用,可能是该方防治骨质疏松的机理之一。     

益骨胶囊含药血清在共育体系中对大鼠成骨细胞增殖、ALP 活性及IL-11 mRNA表达的影响

目的：观察益骨胶囊含药血清在成骨-破骨细胞共育体系中对SD大鼠成骨细胞(OB)增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性及白细胞介素-11(IL- 11)mRNA表达的影响。方法：(1)取1d龄SD大鼠颅骨分离培养OB，取5 d龄 SD大鼠四肢股骨、胫骨分离培养破骨细胞(OC)，建立细胞上清相通但细胞间不相互混杂的平 面式成骨- 破骨细胞共育体系，实验分为两组(含药血清组和对照组)。 (2) MTT法检测OB增殖，氨基安替吡啉测酚法测定ALP活性，FQ-PCR法测定IL-11 mRNA相对表达量。结果：含药血清组中OB的A值、ALP活性、IL-11/β-actin比值均高于对照组(P<0.05) 。结论：益骨胶囊含药血清在共育体系中可促进OB增殖、增强OB ALP活 性，提高IL-11 mRNA的表达。     

益骨胶囊含药血清对共育体系中成骨细胞表达骨保护素mRNA的影响

目的 观察益骨胶囊含药血清在成骨-破骨细胞共育体系中对SD大鼠成骨细胞表达骨保护素(OPG)mRNA的影响.方法 取1d龄SD大鼠颅骨分离培养成骨细胞(OB);取5d龄SD大鼠四肢长骨分离培养破骨细胞(OC).建立上清相通但细胞间不相互混杂的平面式成骨-破骨细胞共育体系,实验分为含药血清组和对照组.将10月龄SD雌性大鼠分为益骨胶囊灌胃组和生理盐水对照组,制备含药血清和对照血清.检测共育体系中成骨细胞OPG mRNA的表达.结果 含药血清组与对照组比较,OPGmRNA表达明显升高(8.2567±0.1118比3.3350±0.9854),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 益骨胶囊含药血清在共育体系中通过刺激OB表达OPG来实现对OC的活性和凋亡的调节.     

TNF-α对共育体系中成骨细胞凋亡的影响及益骨胶囊含药血清的保护作用

目的： 探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对成骨-破骨细胞共育体系中成骨细胞（OB）凋亡的影响及益骨胶囊含药血清的保护作用。方法: （1）将20只10月龄SD大鼠随机分为益骨胶囊灌胃组和生理盐水灌胃组，制备含药血清与空白血清；（2）将分离的OB与破骨细胞（OC）分别接种到共育体系中，加培养液培养后， 同时添入20 μg/L、30 μg/L、40 μg/L、50 μg/L、60 μg/L TNF-α分别作用24 h、48 h、72 h诱导OB 凋亡，用DNA电泳法确定最佳诱导方案；(3）将细胞分为TNF-α组、TNF-α+含药血清组、TNF-α+空白血清组和正常对照组，分别加入DMEM培养液、含药血清培养液、空白血清培养液、DMEM培养液，除正常对照组加入PBS外，其它各组均同时加入60 μg/L TNF-α，培养72 h后，用荧光染色法、DNA电泳法、流式细胞仪观察各组OB凋亡情况。结果: (1）60 μg/L TNF-α作用72 h后，共育体系中OB DNA电泳呈较典型的梯形改变；(2）TNF-α+含药血清组中OB DNA电泳仅出现二个条带，荧光染色可见大多数细胞均匀染色，其凋亡率（9.60%±0.26%）明显低于TNF-α组(26.90%±0.06%)与TNF-α+空白血清组(18.10%±0.06%)，P＜0.01。结论: 60 μg/L TNF-α作用72h可诱导共育体系中OB凋亡；益骨胶囊含药血清对TNF-α诱导的OB凋亡具有抑制作用。     

益骨胶囊含药血清对共育体系中破骨细胞活性和凋亡的影响

目的： 观察益骨胶囊含药血清在成骨-破骨细胞共育体系中对SD大鼠破骨细胞（OC）活性和凋亡的影响。 方法： (1)取1d龄SD大鼠颅骨分离培养成骨细胞（OB），取5d龄SD大鼠四肢股骨、胫骨分离培养OC，建立细胞上清相通但细胞间不相互混杂的平面式成骨-破骨细胞共育体系，实验分为含药血清组和对照组；（2）将10月龄SD雌性大鼠分为益骨胶囊灌胃组和生理盐水对照组，制备含药血清和对照血清；（3）重氮盐法检测抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）和光镜观察骨陷窝数；（4）光镜和荧光显微镜下观察共育体系中OC凋亡情况。 结果： 含药血清组在48 h、72 h、96 h对成骨-破骨细胞共育体系中OC分泌TRACP的活性均明显降低于对照组，OC的存活数明显低于对照组，OC的凋亡率明显高于对照组且呈明显的时效关系；所形成骨吸收陷窝的数目明显低于对照组(P<0.01)。 结论： 益骨胶囊含药血清在共育体系中能够抑制OC活性，诱导破骨细胞的凋亡。     

益骨胶囊含药血清对大鼠破骨细胞凋亡和分泌抗酒石酸酸性磷酸酶的影响

目的:观察益骨胶囊含药血清对体外培养的大鼠破骨细胞(OC)分泌抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和凋亡的影响。方法:(1)将20只12月龄SD大鼠随机分为益骨胶囊灌胃组和生理盐水灌胃组, 制备含药血清和对照血清;(2)分离培养新生SD大鼠OC, 加血清培养后, 重氮盐法检测TRAP, 倒置显微镜下观察OC存活数及荧光染色法观察OC凋亡情况。结果:与空白血清组比较, 含药血清组在24h、48h和72h时TRAP的活性均明显降低, OC存活数明显降低, 凋亡比率明显高(P<0.01或P<0.05)。结论:益骨胶囊含药血清可以抑制体外培养OC分泌TRAP, 诱导OC凋亡, 提示这可能是该方防治骨质疏松的机理之一。     

金乌骨通胶囊对成骨细胞分泌白细胞介素1，6的影响

背景：课题组以往研究发现,金乌骨通胶囊对绝经后骨质疏松症具有明显的治疗作用,但其具体的机制尚不十分清楚。 目的：观察金乌骨通胶囊含药血清对成骨细胞分泌白细胞介素1,6的影响。 方法：切除雌性SD大鼠双侧卵巢制备去卵巢血清,灌胃给予去卵巢大鼠金乌骨通胶囊制备去卵巢含药血清。取第3代生长状况良好的出生24 h内SD大鼠的成骨细胞,分别加入正常雌性SD大鼠血清、去卵巢血清和去卵巢含药血清培养72 h。 结果与结论：酶联免疫吸附法检测显示,与正常血清组比较,去卵巢血清组成骨细胞白细胞介素1、白细胞介素6的表达明显升高(P < 0.01);与去卵巢血清组比较,去卵巢含药血清组白细胞介素1和白细胞介素6的表达明显降低(P < 0.05),与正常血清组比较,则无明显差异。提示金乌骨通胶囊可能通过抑制成骨细胞骨白细胞介素1和白细胞介素6的表达来实现治防治骨质疏松症的目的。     

益骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织cbf α-1mNRA表达的影响

目的： 分析成骨细胞分化因子cbf α-1基因在去卵巢骨质疏松（OP）大鼠的表达水平，观察益骨胶囊的调节作用。方法: 将36只10月龄SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、药物组,相应干预后,留取股骨,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR技术测定cbf α-1 mRNA表达,以GAPDH基因为内参照,根据相对定量公式(2-ΔΔCt)分别计算模型组、药物组与假手术组表达差异倍数。结果: 根据相对定量公式分析显示:与假手术组相比，模型组大鼠骨组织中cbf α-1 mRNA表达下降（P<0.01）。而药物组cbf α-1 mRNA表达相当于假手术组的0.19－0.92倍(P>0.05)，明显高于模型组（P<0.05）。结论: 结果表明去卵巢OP模型大鼠骨组织cbf α-1基因表达降低，而益骨胶囊可上调cbf α-1的基因表达水平，这可能与其诱导骨髓间质干细胞分化为成骨细胞发挥其防治OP的作用有关。     

电针对大鼠脑缺血区和血清IL-6表达的调节

目的:观察脑缺血后不同时间段IL-6在脑缺血区和血清的表达及电针对其表达的调节。方法:通过大脑中动脉线栓法建立SD大鼠局灶性脑缺血模型,于造模成功后电针相应组大鼠,再利用免疫组化SP法、放射免疫分析技术,检测脑缺血及电针对IL-6表达的影响。结果:脑缺血后IL-6免疫阳性细胞在脑缺血区表达增加,3d达高峰,平均细胞数为(28.15±6.08)个/0.375mm2;血清IL-6水平也升高,1d达高峰,浓度为(103.79±13.65)pg/ml。电针可明显提高IL-6的表达。缺血 电针组与缺血组比较,缺血 电针1、3d组的IL-6阳性细胞数增加(P<0.05),缺血 电针3、7d组的血清IL-6水平升高(P<0.05)。结论:电针上调IL-6的表达,可能是电针治疗缺血性脑损伤的机制之一。     

心力衰竭患者血清IL-6和IL-6R水平的测定

据报道炎性细胞因子与心力衰竭 (ＨＦ )的发病密切相关[1] 。本文测定 3 6例ＨＦ患者血清白细胞介素 6(ＩＬ 6)和白细胞介素 6受体 (ＩＬ 6Ｒ )水平 ,旨在探讨它们之间的关系及临床意义。1　材料和方法1 1　研究对象　ＨＦ组 3 6例 ,男 2 2例 ,女 14例 ,平均年龄 ( 3 6 5± 11 3 )岁 ,其中心衰 (按ＮＹＨＡ分级 )分Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ度 3组 (表 1)。正常健康人对照组 3 0例 ,男女各 15例 ,平均年龄 ( 3 3 5± 8 9)岁。1 2　血清ＩＬ 6和ＩＬ 6Ｒ水平的测定　采用双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ ,具体操作步骤严格按说明书进行 ,ＩＬ 6和ＩＬ 6Ｒ测…     

白细胞介素-6 mRNA在内异症子宫内膜的表达变化

目的：探讨IL-6 mRNA与子宫内膜异位症发病的关系。方法：利用大鼠子宫内膜异位症（内异症）动物模型，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，检测子宫内膜白细胞介素-6（IL-6）mRNA表达情况。结果：正常对照组，各时点间（2、4、6和8周）IL-6 mRNA表达无显著差异（P>0.05）。内异症模型组,在成模后（2、4、6和8周）其在位、异位子宫内膜IL-6 mRNA的表达呈增高趋势（P<0.01）。在各时点，内异症异位子宫内膜>内异症在位子宫内膜>正常子宫内膜IL-6 mRNA的表达（P<0.01）。结论：IL-6 mRNA可能与内异症的进展有关。IL-6 mRNA可能促进异位内膜的种植和生长。     

纤维蛋白对大鼠脑血管内皮细胞白细胞介素6表达的影响

目的：观察纤维蛋白对离体培养的大鼠脑血管内皮细胞白细胞介素6（IL-6）转录及蛋白水平表达的影响。方法：大鼠脑血管内皮细胞分离后培养，加入不同浓度的纤维蛋白，通过real-time PCR检测脑血管内皮细胞中IL-6转录水平，应用酶联免疫方法(ELISA)定量检测培养基和细胞裂解液中的IL-6水平。结果：加入不同浓度（0.03 g/L、0.1 g/L、0.3 g/L和1.0 g/L）的纤维蛋白24 h后，1.0 g/L纤维蛋白组的培养基中IL-6水平显著增高（P<0.01）；然后加入1.0 g/L纤维蛋白2、4、8、24 h，培养基中的IL-6水平均显著升高（P<0.05）；而加入不同浓度的胶原蛋白不引起IL-6水平的明显变化；real-time PCR结果显示，脑血管内皮细胞IL-6 mRNA的上调呈现出剂量和时间依赖性增加。结论：纤维蛋白是血管内皮细胞活化剂，可以上调大鼠脑血管内皮细胞中IL-6的表达，在蛋白和mRNA均呈现出剂量和时间依赖性增加。     

肺炎大鼠心肌TNF-α、IL-6mRNA表达及腺苷对其影响

目的:观察金葡菌感染大鼠肺炎时心肌组织TNF-α、IL-6mRNA表达, 以及腺苷对其影响。方法:50只SD大鼠被随机分为5组, 为对照组、肺炎组和腺苷治疗A、B、C组。金葡菌经气管插管注入复制肺炎大鼠模型, 于注菌后第2、3、4d静脉点滴腺苷治疗, 每天90min, 剂量分别为50、100、150μg·kg^-1·min^-1。第5d处死大鼠, 立即取心脏液氮保存, 心肌组织用于病理检测和采用RT-PCR方法检测TNF-α、IL-6mRNA的表达。结果:(1)肺炎组心肌中TNF-α、IL-6mRNA的表达显著高于对照组(均P<0.01);(2)腺苷治疗B、C组心肌中TNF-α、IL-6mRNA的表达低于肺炎组(P<0.01), 且治疗C组心肌IL-6mRNA表达低于治疗B组(P<0.01);而A组心肌中TNF-α、IL-6mRNA的表达与肺炎组无明显差异(P>0.05);(3)腺苷治疗可以减轻心肌的病理损伤(P<0.01)。结论:金葡菌感染大鼠肺炎可致心肌损害, 细胞炎症因子IL-6和TNF-α参与心肌损伤的发生和发展, 外源性腺苷治疗可抑制炎症因子TNF-α、IL-6的分泌, 从而有利于减轻炎症和保护心肌。     

几种中药有效成分对大鼠系膜细胞IL-6 mRNA表达的影响

目的与方法:体外培养大鼠系膜细胞,以脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激后,分别加入补肾活血泄浊汤有效成分川芎嗪、大黄素、灵芝多糖,应用Northern杂交技术,观察上述几种中药有效成分对系膜细胞IL-6基因表达的影响,以探讨补肾活血泄浊汤治疗肾小球肾炎的机制。结果:川芎嗪、大黄素、灵芝多糖均可抑制IL-6基因的表达,以大黄素最为显著。结论: 结果提示补肾活血泄浊汤可能通过抑制IL-6基因的表达,从而减轻系膜细胞增生。     

IL-6和IL-8 mRNA在变态反应性哮喘患者BAL细胞的表达

目的：测定IL-6和IL-8 mRNA在变态反应性哮喘患者支气管肺泡灌洗（BAL）细胞中的表达。方法：采用原位杂交技术，测定变态反应性哮喘患者BAL中表达IL-6和IL-8 mRNA的阳性细胞数。结果：全部哮喘患者BAL细胞对IL-6和IL-8 mRNA探针杂交均呈阳性（阳性率分别为14/14和14/14）。变态反应性哮喘患者BAL中表达IL-6和IL-8 mRNA阳性细胞数明显多于对照（P<0.01）。结论：变态反应性哮喘患者BAL细胞中IL-6和IL-8 mRNA表达增加。     

杂色曲霉素对小鼠脾细胞IL-4 mRNA表达和蛋白分泌的影响

目的：探讨杂色曲霉素（ST）对体外培养的小鼠脾细胞IL-4 mRNA表达及其蛋白分泌的影响。 方法： 分别采用半定量RT-PCR及ELISA方法，研究5种不同剂量ST（0.125 mg/L、0.25 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L）预处理2 h、12 h对小鼠脾细胞IL-4 mRNA表达及其蛋白分泌的影响，观察ST对IL-4影响的时效及量效关系。 结果： ST预处理2 h，较小剂量ST（0.125、0.25、0.5 mg/L）处理组小鼠脾细胞IL-4 mRNA的表达高于对照组，以0.5 mg/L组表达最高；当ST预处理达到12 h时，较小剂量ST处理组IL-4 mRNA表达均低于对照组，其中以ST 0.125、0.25 mg/L组降低最明显。而大剂量ST（1 mg/L、2 mg/L）处理2 h及12 h对小鼠脾细胞IL-4 mRNA表达均低于对照组。在蛋白水平上的改变与mRNA水平变化相似。 结论： ST对小鼠脾细胞IL-4 mRNA表达的影响与其剂量和作用时间有关，既可表现为抑制作用，也可表现诱导作用。     

氯诺昔康对胆囊切除术患者围手术期IL-2、IL-6及IL-10水平的影响

目的 通过观察胆囊切除术患者围手术期使用氯诺昔康后血清中白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素10（IL-10）水平的变化,探讨氯诺昔康对机体细胞免疫功能的影响.方法 择期行开腹胆囊切除术患者40例,术前常规使用鲁米那加阿托品.随机双盲分为A、B两组,每组20例.A组在麻醉前静脉滴注氯诺昔康8mg,术后以芬太尼行静脉自控镇痛（PCIA）;B组关腹结束即刻静脉滴注氯诺昔康8mg,术后以芬太尼行PCIA.两组分别于麻醉用药前（T1）、关腹结束后即刻用药前（T2）、术后6小时（T3）、术后24小时（T4）抽取外周静脉血,测定各个时点血清炎性细胞因子IL-2、IL-6及IL-10水平.结果 两组患者T1时点血清IL-2、IL-6、IL-10浓度差异无统计学意义（P＞0.05）,T2、T3、T4时点的IL-2、IL-6浓度B组显著高于A组,差异有统计学意义（P＜0.05）;在T2、T3、T4时点的IL-10水平B组显著低于A组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 术前使用氯诺昔康,较术后使用更能减轻麻醉手术等因素对细胞免疫功能的抑制,并能有效抑制应激反应,有利于术后恢复.