重组病毒／家蚕细胞系统稳定高效表达HBeAg基因的研究

以ＨＢｅＡｇ基因置换家蚕核多角体病毒中多角体蛋白基因编码序列，获得高效表达ＨＢｅＡｇ的重组病毒ｒＢｍＨＢｅ。在重组病毒复制过程中，家蚕ＢｍＮ细胞的病理变化与野型生型病毒的感染相同，但不能形成多角体。     

杆状病毒在家蚕体内表达乙肝表面抗原的研究

报道了将乙型肝炎病毒（ａｄｒ亚型）Ｓ区基因（共６８１ｎｔ）克隆于家蚕核型多角体病毒的基因组中，并将其导入家蚕细胞，通过多轮筛选得到纯的重组家蚕杆状病毒，用该病毒接家蚕，初步证明能够得到了乙肝表面抗原的高效表达，在家蚕幼虫的血淋巴和蛹体中，用ＲＰＨＡ法检测的滴度可达１：４０９６。     

家蚕核多角体病毒载体稳定高效表达ＨＢeＡg条件及其初步应用的研究

利用已构建的含有HBeAg基因的重组家蚕核多角体病毒rBmHBe，摸索了HBeAg在家蚕细胞中表达的最佳条件组合，细胞接种密度（3.2～6.4）×10     

柞蚕核多角体病毒基因工程载体的研究 Ⅰ柞蚕核多角体病毒DNA限制性内切酶图谱

本文研究了柞蚕核多角体病毒的分离、纯化、纯化后的病毒DNA经限制性内切酶Pat Ⅰ、Hind Ⅲ、BamH Ⅰ、XhoⅠ、SalⅠ、EcoRⅠ及EcoRⅠ+BamHⅠ等酶解后电泳分别形成31、26、6、15、24、5及7条区带。据内切酶图谱测算柞蚕核多角体病毒的分子量为75.16±2.3×10~6道尔顿。并比较了柞蚕、蓖麻蚕及家蚕等核多角体病毒的亲缘关系。     

人α1—干扰素基因真核表达载体的构建及其活性

选用与ＨｕＩＦＮ－α１基因及其信号肽相应的引物，采用ＰＣＲ技术，从中国人血白细胞染色体中分离带有信号肽ＩＦＮ－α１基因片段，分别克隆到质粒Ｍ１３ｍｐ１９和Ｍ１３ｍｐ１８中通过序列分析进行鉴定。然后克隆家蚕多角体病毒（ＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ，ＢｍＮＰＶ）载体ＰＢＦ５的ＥｃｏＲＩ和ＸｂａＩ之间，用合成的相应寡核苷酸片段为引物进行双链测序，鉴定为阳性重组转移     

用杆状病毒载体在家蚕细胞中表达HBeAg基因及其表达产物纯化的 …

以ＰＣＲ技术扩增含有Ｐｒｅ－Ｃ信号肽序列及完整的ＨＢｅＡｇ基因序列，克隆至家蚕核多角体病毒转移载体ｐＢｍ０３０，与野生型ＢｍＮＰＶ ＤＮＡ共转染家蚕ＢｍＮ细胞，空斑纯化后得重组病毒，研究结果表明ＢｍＮ细胞能正确识别与切割ＨＢｅＡｇ信号肽序列，所表达的ＨＢｅＡｇ效价高，纯度好，ＥＬＩＳＡ法测得培养上清中ＨＢｅＡｇ效价达１：３２０００。上清经过Ｓｅｐｈａｃｒｙ １ Ｓ－２００和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏ     

深海嗜压菌水通道蛋白AqpSS9在Bac-to-Bac家蚕杆状病毒系统中表达

利用家蚕杆状病毒表达系统合成深海嗜压菌Photobacterium profundum SS9的新型水通道蛋白AqpSS9。首先通过家蚕核型多角体病毒BmNPV的Bac-to-Bac系统构建重组转移载体pFasBac HTB-AqpSS9,将其转化到含穿梭载体Bm-Bacmid的大肠杆菌Bm-DH10Bac中进行转座作用,白斑筛选得到重组穿梭载体Bacmid-AqpSS9。用脂质体介导将Bacmid-AqpSS9转染家蚕BmN细胞,在细胞内包装形成重组的BmNPV病毒rBm AqpSS9。利用SDS-PAGE及Western blot检测重组蛋白AqpSS9在家蚕培养细胞中的表达,结果显示目标蛋白被成功表达。该实验为新型水通道蛋白AqpSS9的进一步应用研究奠定了基础。     

人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在家蚕中的表达与鉴定

目的 以家蚕为生物反应器表达人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL),并检测其生物学活性.方法 将人TRAIL(93～281aa)基因重组于质粒pBacPAK8构建重组转移载体pBacAK8-TRAIL.与经线性化修饰的家蚕棱型多角体病毒(BmBacPAK)DNA共转染家蚕培养细胞株BmN,获得了插入TRAIL基因的重组病毒,重组病毒感染家蚕细胞和家蚕幼虫,使其表达人TRAIL.结果 Southern杂交表明重组病毒基因组中含有人TRAIL基因片段,RNA斑点杂交表明人TRAIL基因得到了转录,重组病毒感染家蚕细胞株(BmN)、家蚕幼虫,在细胞培养上清、细胞抽提物、幼虫的体液样品中通过Westblot分析都能检测得到表达产物的特异性条带;采用L929细胞检测TRAIL的生物学活性.结论 提示人TRAIL基因分别在家蚕培养细胞和蚕幼虫中得到高效表达,此基因杆状病毒表达系统的建立为进一步研究TRAIL奠定了基础.     

家蚕制品的急性毒性及微核试验

我国的养蚕业已有5000多年历史。家蚕一直被认为是对人类有益无害的重要经济昆虫。随现代科学技术的发展,通过基因操作,已将家蚕核型多角体病毒作为新型表达载体,用其宿主家蚕用为生物反应器生产重要的医药产品。验证这个表达环境对人体的安全性及对系统的推广应用具有重要的意义。为此,我们参照了国家药物评价指南,对家蚕幼虫和蛹的体液、蚕卵的急性毒性试验,致突变性进行评价,为该系统的环境和人体危险度评估,也为家蚕的综合利用提供参考依据。1　材料与方法11　家蚕及制备　家蚕体液、蚕蛹体液以及蚕卵粉均为中国农业科学院镇江蚕业研究…     

多角体病毒DNA和蛋白对大鼠毒性的病理学观察

选择家蚕核型多角体病毒作为新型表达载体 ,并选择其宿主家蚕作为生物反应器建立的家蚕基因工程表达系统具有高效、表达条件简便等优点 ,在生物医药等领域具有广阔的应用前景和经济效益[1 ] ,评价和验证家蚕生物反应系统及其相关产品的安全性 ,保证接触ＢｍＮＰＶ的操作人员的健康及其产品临床应用的安全性有着重要意义。为此我们参照国家卫生部药政局颁布的《新药临床前评价指南》[2 ] 和国家原科学技术委员会发布的《基因工程安全管理办法》[3] 对家蚕基因工程表达系统 (家蚕生物反应器 )的表达载体ＢｍＮＰＶ的ＤＮＡ和蛋白质进行长期毒…     

MECHANISM OF ACTION OF NATRIURETIC FRACTION OF URINE

The nature of calcium dependence of natriuretic fraction (NF)-induced contractions in the rat smooth muscle anococcygeus and a possible correlation between the effect of NF on sodium transport and its natriuretic potency was investigated. NF and noradrenaline-induced contractions were partially dependent on external calcium concentration. Ouabain and potassium (K) free solution (KoPSS)-induced contractions were totally dependent on external calcium and were more effectively inhibited by calcium antagonists than those of NF and noradrenaline suggesting pharmacomechanical coupling as the mode of calcium dependence of NF. Like other agonists which contract by pharmacomechanical coupling, NF stimulated sodium transport (86rubidium uptake) in dog saphenous vein. Such stimulation correlated positively (r = 0.495, n = 17, P less than 0.05) with the natriuretic potency of NF. NF, like noradrenaline, contracts smooth muscle by pharmacomechanical coupling and NF-induced natriuresis is associated with stimulation of the sodium pump.     

黄瓜花叶病介体蚜虫种群空间格局动态分析

本文采用聚集指标、聚集指标的模糊聚类分析和空间格局的回归分析等方法,对黄瓜花叶病传毒介体——瓜蚜自然种群动态进行分析,春秋两季瓜蚜种群均为聚集分布;秋季瓜蚜种群空间格局聚集性可划分为前、中、后三种类型;春季瓜蚜分为前、后两种类型。     

绞股蓝总甙微丸溶出度及稳定性研究

采用包衣造粒工艺制成绞股蓝总甙微丸，并将此微丸装入硬胶囊制成胶囊剂。用不同的溶出介质对其体外溶出进行了研究，并对其稳定性进行了考察。     

电渗作用对甲硝唑经皮渗透的影响

在Ａｇ／ＡｇＣｌ电极的双室扩散池中测定不同电场对模型药物甲硝唑（１）通过离体大鼠皮肤渗透速率的影响。结果表明，１生理盐水饱和液阳极导入时的透皮速率是被动扩散的２．３倍，阴极导入时药物的透皮速率是其被动扩散的４５％，说明电渗作用明显促进了分子型药物１的经皮渗透；与药物渗透方向相反的电渗流则明显阻碍其经皮渗透     

磷酸丙吡胺缓释片的生物利用度研究

比较了每１２ｈ口服自制磷酸丙吡胺缓释片和对照胶囊各２００ｍｇ后的稳态血药浓度及波动系数（ＦＩ％）。测求稳态时Ｃｍａｘ：ＣｍｉｎＴｍａｘ和血药浓度时间曲线下面积（ＡＵＣ０－１２），结果显示两制剂Ｔｍａｘ、ＦＩ％有极显著差异，Ｃｍｉｎ有显著差异而Ｃｍａｘ、ＡＵＣ０－１２并无显著差异。缓释片具明显的缓释效果，然而生物利用度与胶囊剂相当。     

合浦珠母贝珍珠细胞相容性的初步评价

本文报道了合浦珠母贝珍珠的体外细胞毒性试验结果。将珍珠粉的浸提液加L_(929)细胞培养瓶中,通过细胞相对增殖率(RGR)及细胞形态观察表明,合浦珠母贝珍珠具有较好的细胞相容性,对L_(929)细胞形态无明显影响,但细胞相对增殖率略低于羟基磷灰石陶瓷。     

卡马西平多晶型的研究

红外吸收图谱与中国药典图谱不符合的卡马西平（Ａ晶），可通过用较高浓度乙醇使其转为Ｂ晶而符合规定，经￣（１３）ＣＮＭＲ、ＭＳ、Ｘ线衍射分拆，证实该两种晶体为同质异晶。     

抗血吸虫病药鹤草酚类似物的合成

鹤草酚(Agrimophol)(Ⅰ)是从植物仙鹤草(Agrimonia pilosa Ledeb)根芽中分离出来的一种驱绦虫有效成分,王根法等发现它有抗血吸虫作用,但减虫率不高,胃肠道反应也较重。鹤草酚是间苯三酚的衍生物,分子中有角甲基,人工合成较复杂。我们企图改变其化学结构,使成为结构简单而又易于制备并有抗血吸虫活性而毒性低于鹤草酚的类似物。文     

贝母辛的结构修正

从川产家种华西贝母(Fritillaria siechuanica)鳞茎中分出贝母辛(peimisine)(碱Ⅲ)。应用光谱法(¹H—¹H,¹³C—¹H COSY,2D—NOE),对文献报告的贝母辛的结构作了修正,并证明FR—5与贝母辛系同一化合物。指出湖贝辛结构的某些错误以及对松贝辛的结构提出怀疑,认为其可能为贝母辛。     

二阶导数光谱法测定酮洛芬体外经皮渗透量

为进一步探讨酮洛芬透皮给药的可行性,用二阶导数光谱法测定酮洛芬体外经皮渗透量。结果表明,本法可排除皮下组织的干扰,能准确测定药物体外渗透量,且操作简便、快速。平均回收率为99.00%±1.51%。