Flt3、c-kit和SHP-1基因在急性白血病中的作用

目的探讨Flt3、造血细胞磷酸酶（SHP-1）基因与原癌基因c-kit在髓系白血病患者中的表达以及其与白血病发生和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测52例髓系白血病患者（实验组）及33例正常对照组Flt3、SHP-1与c-kitmRNA表达。结果急性髓系白血病（AML）患者的Flt3及c-kit平均表达水平高于对照组,SHP-1平均表达水平均低于对照组（P〈0.05）;34例初治AML患者中,Flt3＋及c-kit＋的完全缓解率低于Flt3-及c-kit-者,而SHP-1则相反。结论Flt3、c-kit对于白血病的转归、预测白血病的复发、监测微小残留病变有重要的意义,SHP-1可能作为潜在的抑癌基因与Flt3、c-kit基因参与白血病的发生。     

骨髓自然杀伤细胞水平对急性髓细胞性白血病患者预后的影响

目的：探讨骨髓自然杀伤（naturalkiller,NK）细胞水平对急性髓细胞性白血病（acutemyeloidleukemia,AML）患者预后的影响。方法：研究分成AML初治组40例,缓解组20例,正常对照组20例。均抽取骨髓液2ml,采用直接免疫荧光标记法对骨髓有核细胞进行单克隆抗体（CD16＋／CD56＋）标记,应用流式细胞仪进行NK细胞数量的检测。结果：初治组患者骨髓NK细胞表达水平较缓解组显著降低（P〈0．01）。缓解组患者骨髓NK细胞表达水平仍低于对照组（P〈0．05）。不同骨髓NK细胞表达水平间原始细胞数量和AML患者疗效差异均有统计学意义（P〈0．01和P〈0．05）。结论：骨髓NK细胞表达水平可以作为AML的预后指标,亦有助于指导治疗。     

SHP-1与c-kit基因在慢性髓系白血病中表达水平的研究

目的探讨造血细胞磷酸酶（SHP-1）基因、c-kit基因在慢性髓系白血病患者中的表达及其与白血病转化和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测SHP-1 mRNA、c-kit mRNA分别在慢性髓系白血病慢性期、急变期及正常对照组中的表达。结果慢性期和急变期SHP-1 mRNA的表达均低于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,慢性期和急变期比较差异无统计学意义（P〉0.05）。慢性期和急变期c-kit mRNA的表达均高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,急变期c-kit mRNA的表达均高于慢性期,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 SHP-1基因与c-kit基因可作为判断慢性髓系白血病患者转归及预后的指标。     

急性髓细胞白血病中p27kip1的表达及临床意义

目的探讨急性髓细胞白血病中p27kip1的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测37例急性髓细胞白血病及10例正常对照者骨髓中p27kip1蛋白的表达情况,并结合临床病历资料进行分析。结果p27kip1蛋白在急性髓细胞白血病的阳性表达率为29．7％,正常对照组表达率为70．0％,二者比较差异有显著性（P〈0．05）;在34例接受化疗的急性髓细胞白血病中,p27kip1阳性表达组化疗后的缓解率（81．8％）高于p27kip1表达阴性组的缓解率（43．5％）,差异有显著性（P〈0．05）。结论p27kip1在急性髓细胞白血病患者中存在异常表达,且其蛋白的表达水平可能会影响化疗疗效。     

白血病患者骨髓中VEGF、bFGF、slOAM．1及CD105表达与髓血屏障调节机制关系研究

目的：探讨白血病患者骨髓中血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、可溶性细胞间粘附分子一l（siCAM一1）及CDl05表达与髓血屏障调节机制的关系。方法：采用ELISA检测63例白血病患者骨髓中VEGF、bFOF、siCAM一1表达,采用原位杂交法,用CDl05标记骨髓活化的血管内皮细胞。结果：急性髓系白血病患者VEGF、bFGF、sicAM一1、CDl05表达高于对照组,急性淋巴细胞白血病患者中B—ALL的VEGF、bFGF、siCAM—l、CDl05表达高于对照组,T～ALI。的bFGF、CDl05表达高于对照组,差异均具有统计学意义（P〈0．05）;VEGF、siCAM一1表达与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;慢性粒细胞白血病患者VEGF、bFGF、siCAM-1、CDl05表达高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0．05）;慢性淋巴细胞白血病患者sicAM—l表达高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0．05）,VEGF、bFGF、CDl05表达与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：骨髓VEGF、bFGF、siCAM一1及CDl05表达在不同类型白血病中水平不同,并影响白血病患者髓血屏障的正常调节机制。     

WT1基因、TGF-β_1在急性白血病患者中表达及其临床意义

目的探讨WT1基因、TGF-β1在急性白血病患者中表达及其临床意义。方法入选2008年8月-2010年12月来我院就诊的急性髓系白血病初发（AML组）、经治疗完全缓解的急性髓系白血病患者（AML-CR组）和非恶性血液病组（对照组）各30例,分别采用实时RT-PCR和ELISA检测三组患者骨髓中WT1基因、TGF-β1表达情况,并分析二者之间的相关性。结果分析显示,AML组和AML-CR组WT1 mRNA表达显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;AML组WT1 mRNA表达高于AML-CR组,差异有统计学意义（P〈0.05）;AML组TGF-β1mRNA和TGF-β1蛋白显著低于AML-CR组、对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;而AML-CR组与对照组之间的差异无统计学意义（P〉0.05）。Pearson相关分析显示,对照组和AML-CR组中WT1基因、TGF-β1表达不存在相关性（P〉0.05）;而在AML组中,WT1基因、TGF-β1存在明显的线性负相关（r=0.724,P〈0.05）。结论急性白血病患者存在WT1基因高表达、TGF-β1低表达状态,并且二者存在一定的负相关,同时检测两种指标在白血病患者临床治疗和预后评价上具有一定的临床价值。     

干细胞因子mRNA在原代白血病细胞的表达

目的：观察白血病原代细胞中干细胞因子（SCF）mRNA的表达情况并探讨其与预后的关系。方法：以巢式逆转录多聚酶链反应检测了49例（两种类型）白血病患者骨髓原代白血病细胞中SCF mRNA的表达情况。结果：在19例急性淋巴细胞白血病（ALL）中,SCF mRNA5例阳性,14例阴性,30例急性髓性白血病（AML）中,24例M1-M4亚型者表达SCF mRNA,4例M5及2例M6为阴性。两组间有显著差异（P＜0．05）。在29例SCF阳性者中,8例（27．6％）属难治性白血病,在20例CSF阴性者中,12例（60．0％）为难治性白血病（P＜0．05）。结论：AML组的SCF表达率显著高于ALL,SCF阴性提示患者预后较差,其确切机制有待进一步研究。     

BP1基因在急性白血病患者中的表达及相关研究

目的探讨BP1基因在急性白血病患者中的表达及其临床意义。方法运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测HEL白血病细胞系（BP1阳性细胞株）、92例急性白血病（AL）患者及10名正常对照者BP1基因的表达水平;分析其在急性白血病中的表达规律及与临床预后的关系。结果10名正常人和急性淋巴细胞白血病患者的骨髓细胞中无BP1基因表达（阴性）;HEL细胞系BP1阳性;急性髓系白血病（AML）患者BP1基因总阳性率42.59%,在各亚型AML中均表达,AML各亚型间的阳性率无差异（P〉0.05）。AML初治、复发、完全缓解的BP1基因阳性率分别为50.00%、46.15%、11.11%,各组间无明显差异（P〉0.05）。AML初治患者中BP1阳性表达者首次完全缓解（CR1）后缓解持续时间短于BP1阴性表达者（P〈0.01）,早期病死率（确诊后3个月内死亡）明显升高（P〈0.01）。结论BP1基因在AML中有异常高表达,具有髓系特异性,可作为区别淋系和髓系的标志性基因。BP1基因在AML的发病中可能起一定作用,可作为判断AML预后的一个指标。     

中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）染色对急性白血病鉴别诊断的研究

目的：通过中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）染色,探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）与急性髓细胞白血病（AML）患者NAP的阳性率及积分鉴别诊断的价值,以提高急性白血病诊断的准确性和及时性。方法：应用偶氮偶联法⑴对105例急性白血病,包性急性淋巴细胞白血病（ALL）41例、急性髓系细胞白血病（AML）64例,90例正常对照组进行NAP阳性率及积分进行检测,经统计学分析,算出相关性、特异性及差异性。结果：急性淋巴细胞白血病NAP阳性率和积分比急性髓性白血病、正常对照组明显增高,有显著差异（P＜0．01）;急性髓性白血病比急性淋巴细胞白血病、正常对照组明显降低,有显著差异（P＜0．01）。结论：NAP对急性白血病有重要的鉴别作用。     

ANGPT1、ANGPT2、VEGF在急性髓系白血病小鼠模型中的表达研究

目的：通过构建急性髓系白血病（AML）小鼠模型,从mRNA水平研究促血管生成素（ANGPT ）1、ANGPT2、血管内皮生长因子（VEGF）的表达水平与急性髓系白血病的关系。方法 NOD／SCID小鼠腹腔接种HL‐60细胞,建立AML小鼠模型,称模型组,未经处理的NOD／SCID小鼠作对照组。用病理组织学及流式细胞学方法鉴定小鼠模型是否成功。实时荧光定量PCR （RQ‐PCR）技术检测ANGPT2、ANGPT1及VEGF mRNA在AML小鼠肿瘤组织中的表达水平。应用Spearman相关分析法分析ANGPT2 mRNA表达水平与小鼠生存期的关系。结果成功构建 AML 小鼠模型。RQ‐PCR结果显示模型组肿瘤组织的ANGPT2、VEGF mRNA的表达水平较正常对照组显著增高,差异有统计学意义（P＜0．05）,而 ANGPT1 mRNA的表达水平两组差异无统计学意义（P＞0．05）。ANGPT2 mRNA表达水平与AML小鼠生存期呈负相关。结论 ANGPT2 mRNA在AML小鼠中高表达且与AML小鼠生存期呈负相关,ANGPT2表达与AML病情进展及预后相关。     

急性髓系白血病CTNNA1基因的表达及临床意义

目的：研究急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者钙黏蛋白相关蛋白（α—catenin,CTNNA1）基因的表达情况并探讨其临床意义。方法：应用实时定量PCR（qRT-PCR）法检测25例非恶性血液病患者（对照组）和92例初诊AML患者（观察组）中CTNNA1基因的表达水平,并分析其与临床参数的相关性。结果：观察组中51例（51／92,55．43％）存在CTNNA1低表达,而对照组未发现CTNNA1低表达（0．00％）,两组比较,差异有统计学意义（,=17．152,P〈0．001）;CTNNA1表达水平与AML患者的年龄、性别、外周血白细胞计数、血小板计数、血红蛋白含量、FAB分型、核型分组之间均无相关性（P均〉0．05）。ROC曲线分析表明CTNNA1表达水平能有效鉴别观察组和对照组,AUC=0．806。观察组中CTNNA1低表达的患者化疗后完全缓解率高于对照组,但差异无统计学意义（x^2=2．476,P=0．142）。4例初诊AML患者在获得完全缓解后CTNNA1表达水平均较治疗前有所升高。结论：CTNNA1基因低表达可能是AML中的一个常见分子事件,检测其表达可用于AML患者的辅助诊断和疾病状态监测。     

BAALC蛋白在急性白血病中的表达及其临床意义

目的探讨脑和急性白血病胞质（Brain and acute leukemia cytoplasmic,BAALC）蛋白在急性髓细胞性白血病（Acute myeloid leukemia,AML）的表达及其临床意义。方法采用Western blot方法半定量检测BAALC蛋白在58例AML患者（初诊24例、完全缓解28例和复发6例）的骨髓单个核细胞（Bone marrow mononuclear cells．BM-MNCs）的表达水平。15例非恶性血液病患者以及AML细胞系KG1a和HL-60分别作为阴性和阳性对照。结果KG1a和HL-60细胞BAALC均为阳性高表达,非恶性血液病对照者BAALC表达均为阴性。BAALC阳性率在AML初诊组（83．3％）与复发组（100％）均高于完全缓解（CR）组（7．1％）和阴性对照组（0）（P〈0．001）;AML初诊组和复发组的BAALC蛋白相对含量明显高于CR组和阴性对照组（P〈0．01）,且CR组和阴性对照组之间BAALC表达阳性率和相对含量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论BAALC蛋自在AML中表达水平异常增高,提示BAALC可能与AML的发生发展密切相关。     

急性髓细胞白血病患者环氧化酶-2与骨桥蛋白表达的意义及相关性研究

目的：探讨环氧化酶-2 （COX-2）与骨桥蛋白（OPN）在急性髓细胞白血病患者中的表达及二者的相关性.方法：采用免疫酶联法（ELISA）检测34例初发未治急性髓细胞白血病患者不同时期的78份标本,以及20例健康对照组外周血中COX-2及OPN的表达情况.结果：在急性髓细胞白血病（AML）初发未治组、未缓解组、复发组患者外周血中COX-2及OPN的表达水平高于正常对照组和完全缓解组（P＜0.05）;正常对照组与完全缓解组患者表达无统计学差异（P＞0.05）;COX-2及OPN在未治组、未完全缓解组及复发组患者外周血中的表达情况,每二者之间表达无统计学意义（P＞0.05）;COX-2及OPN在AML患者中的表达正相关（P＜0.05）.结论：COX-2及OPN的高表达可能与AML的发生发展相关.因此检测COX-2及OPN的表达水平对AML患者的早期诊断、监测疗效、预测复发和评价预后具有一定意义.     

急性白血病患者WAVE-1蛋白测定的临床研究

目的探讨WASP家族Verprolin同源蛋白-1（WAVE-1）测定在急性白血病患者中的临床意义。方法运用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blotting法分别测定65例急性白血病、21例非恶性血液病及50例正常对照者血清中WAVE—1含量,并进行比较。结果急性白血病患者血清WAVE-1含量明显高于正常对照组（P〈0．01）;非恶性血液病患者血清WAVE—1低于急性白血病患者（P〈0．01）,而与正常对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。化疗后完全缓解的急性白血病患者血清WAVE-1含量明显低于化疗前（P〈0．01）,复发者血清WAVE-1含量又复升高（P〈0．01）。结论检测WAVE-1对急性白血病诊断、鉴别诊断及预后判断均有参考价值。     

RT-PCR法检测白血病干细胞Flt3和N-ras基因的表达

目的：采用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）法检测益气养阴方及其拆方后的扶正方组、祛邪方组急性白血病干细胞Fh3和N-ras基因的表达,以期阐明Flt3和N-ras基因表达与疾病发生、发展的关系。方法：RT-PCR法检测中药益气养阴方组、扶正方组、祛邪方组及对照组AML患者骨髓单个核细胞Fh3和N-ras基因表达的情况。结果：Fh3和N-ras基因表达阳性率益气养阴组、扶正组、祛邪组与对照组比较,差异有显著性意义（P均〈0．01）;益气养阴组与扶正组和祛邪组比较,差异有显著性意义（P均〈0．01）;扶正组与祛邪组比较,差异无显著性意义（P〉0．05）;各FAB亚型AML间Fh3与N-ras表达阳性率比较,差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：中药益气养阴方可降低Flt3和N-ras基因在AML细胞的表达水平,抑制AML细胞的克隆性增殖,对AML具有治疗作用。     

MicroRNA-145在急性髓系白血病患者中的表达及意义

目的：探讨MicroRNA‐145（miR‐145）在急性髓系白血病患者骨髓细胞中的表达情况,并分析其临床意义。方法收集急性髓系白血病患者骨髓标本70例,其中初治组46例、缓解组24例,非血液肿瘤性疾病14例作为对照组。通过实时荧光定量PCR方法检测miR‐145的相对表达水平。结果 miR‐145在初治急性髓系白血病骨髓中表达水平明显低于缓解组及对照组（P＜0．01）;其中9例经化疗后缓解的急性髓系白血病患者骨髓miR‐145表达水平较治疗前显著升高,差异有统计学意义（P＜0．05）;且miR‐145表达水平与初诊时原始细胞百分数及外周血白细胞数均无相关性（P＝0．456、0．394）。结论 miR‐145在急性髓系白血病患者表达下调,提示miR‐145的表达与白血病的发生、发展存在显著的关系。     

白血病患者WT1基因的表达及临床意义

目的：检测白血病患者WT1基因的表达水平，并探讨其与临床的关系。方法：应用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）技术，检测58例初治急性白血病（AL）、20例慢性粒细胞白血病（CM）和10例非血液病患者WT1基因的表达。结果：10例非血液病患者WT1基因的表达均呈阴性。58例AL患者44例检测有WT1基因的表达，阳性率为75．9％，其中急性髓性白血病（AML）阳性率为86．4％，急性淋巴细胞白血病（ALL）为42．9％，两者差异有显著性（P＜0．01）；AML治疗前WT1的表达水平与完全缓解（CR）率无相关（P＞0．05），但倾向于WT1基因低表达者有更高的CT率（低表达组CR率为75．0％，高表达组率为34．8％）。CML慢性期WT1的表达水平极低，随临床分期进展水平增高，高表达者预示急变。结论：AL和CML急变期患者WT1基因过度表达，初治AML治疗前WT1的表达水平与疗效无相关，但低表达组CR为75％，高表达组CR为34．8％。     

血管内皮生长因子在急性髓系白血病细胞中的表达

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在成人急性髓系白血病（AML）的发生发展中的作用。方法：采用志录PCR（RT－PCR）和酶联免疫吸附（ELISA）的方法研究50 AML病人及16位正常人骨髓细胞及血浆VEGF的表达。结果：部分正常人和大多数AML病人的骨髓细胞及白血病细胞系均表达VEGF。AML病人骨髓细胞VEGF表达阳性率（82％）明显高于正常人（30．76％）及骨髓移植后的AML病人（41．76％）。难治型和非难治型AML病人血浆中VEGF浓度均显著高于正常人AML骨髓移植后病人（P＜0．01）。队正常人与骨髓事AML病人血浆中VEGF浓度比较无统计学差异外（P＞0．05），另与其他两者之间均有显著性差异（P＜0．01）。难治型和非难治型白血病病人骨髓细胞分泌的VEGF分别比正常人高11．0和7．3倍，且两者之间比较有显著性差异（P＜0．01）。结论：VEGF在AML病人中存在异常表达，在AML的发病机制中可能起一定的作用，且可能成为判断AML病人预后指标之一。     

急性髓系白血病患者早期血清CCN1蛋白检测及临床价值

目的：研究CCN1蛋白在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者早期血清中的表达水平及其与临床特征的相关性,探讨CCN1在早期急性髓系白血病中的诊断价值。方法：收集96例急性髓系白血病早期患者和159名同年龄段、性别匹配的健康对照者血清样本,采用ELISA检测血清中的CCN1蛋白水平,通过ROC曲线评估其作为诊断标志物的价值;比较CCN1表达水平与临床特征的相关性;分析不同AML分型分组中的血清CCN1表达是否具有差异。结果：AML早期患者血清中的CCN1表达水平明显低于健康对照组（P=0.000）,ROC曲线下面积为0.823,最佳cut-off值是101.22 pg/mL,灵敏度为0.823,特异度为0.667。CCN1表达水平与临床特征无相关性。AML不同分型与对照组均有统计学差异（P=0.000）,但AML各型之间的CCN1差异无统计学意义（P>0.05）。结论：CCN1蛋白在急性髓系白血病早期患者和正常人血清中表达差异显著,因此CCN1在急性髓系白血病早期诊断中可能有诊断价值。     

BAG-1蛋白在急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞中的表达

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞中BAG-1蛋白的表达及意义。方法:用免疫细胞化学SP染色法分别检测初治AML患者(76例)、急性髓系白血病完全缓解(AML-CR)患者(49例)、急性髓系白血病难治复发(RRAML)患者(17例)及正常对照者(15例)的骨髓单个核细胞中BAG-1蛋白的表达。结果:四组BAG-1蛋白阳性表达率差异有统计学意义(字2=47.857,P0.001);初治AML组和RRAML组中BAG-1蛋白阳性表达率均高于AML-CR组和正常对照组(P0.001);AML各分型患者的BAG-1蛋白阳性表达率差异无统计学意义(字2=1.920,P0.05);初治AML患者骨髓单个核细胞中BAG-1蛋白阳性表达率与白细胞计数及髓外浸润有关(字2=9.248,13.689,P0.01)。结论:BAG-1可能参与了急性髓系白血病的发生发展。