牙周炎牙龈组织基质金属蛋白酶活性及蛋白表达的研究

目的：探讨来源于宿主的基质金属蛋白酶（MMPs)在牙周炎发病机制中的作用。方法：利用明胶酶活性分析（zymography)和免疫组化方法，检测15例牙周炎患者牙龈组织中和4例健康牙龈中MMP－2、MMP－9的酶活性及蛋白表达。结果：牙周炎牙龈组织以及正常的牙龈组织中均能检测到MMP－2、MMP－9的前体形式（pro-MMP-2和pro-MMP-9)，只有在牙周炎牙龈组织中发现活化形式的MMP－2，没有见到活化形式的MMP－9。免疫组化结果显示：15例成人牙周炎牙龈组织中MMP－2在炎性结缔组织中较正常牙龈阳性表达，而且经图像分析较正常牙龈组织MMP－2阳性细胞表达显著增强（P＜0．05）。结论：提示基质金属蛋白酶MMP－2参与牙周组织破坏过程，在细胞外基质的降解、牙周组织破坏过程中起重要作用。     

EMMPRIN与牙周炎的相关性研究

目的：研究EMMPRIN在牙周组织中的表达情况,分析其可能发挥的作用。方法：免疫组化、RT-PCR和western blot检测牙龈组织中EMMPRIN mRNA和蛋白表达情况。结果：临床健康和炎性牙龈组织中检测到EMMPRIN蛋白的表达,在炎性牙龈组织中的蛋白表达水平显著高于正常牙龈（P〈0.05）。Pg LPS处理后的牙龈上皮细胞（HGEC）中EMMPRIN和MMPs mRNA的表达存在个体差异：来源于临床健康个体、牙龈炎和轻度牙周炎患者的HGEC在作用前后EMMPRIN和MMPs mRNA的表达无显著差异,而来源于重度牙周炎患者的HGEC在Pg LPS刺激后mRNA的水平显著上调（P〈0.05）。结论：EMMPRIN可能参与牙周组织正常的生理改建;在炎症状态下EMMPRIN可能作为MMPs的诱导因子参与了对牙周组织的破坏,且与牙周炎的严重程度存在一定相关性。     

雌激素受体和孕激素受体在女性牙周炎患者牙龈组织中的表达

目的观察比较女性牙周炎患者及正常女性牙龈组织雌激素(ER)和孕激素(PR)的表达分布,为进一步阐明ER和PR与女性牙周炎的关系提供实验依据。方法收集正常对照组牙龈标本30例,中、重度牙周炎组34例,按年龄各自分成3组,标本行免疫组化处理(Envision法),显微镜下观察,统计分析。结果ER和PR在细胞胞浆及胞核中均有表达,无规律地分布于牙龈上皮层中,阳性样本的染色强度强弱不一。正常女性牙龈组织中ER及PR阳性率较低,女性牙周炎患者牙龈组织中ER阳性率明显升高(P<0.01),PR阳性率无明显改变(P>0.05),与年龄无明显关系。结论女性牙龈组织中ER的表达可能与牙周炎相关,雌激素对牙龈组织除了起间接作用外,还可通过ER直接影响牙周组织;而孕激素对牙周组织可能以间接影响为主。     

牙周炎患者牙龈组织中IL-21表达的研究

目的：研究不同类型牙周炎患者牙龈组织中IL-21基因的表达,探讨其在牙周炎发病中的作用。方法：选择慢性牙周炎患者12例,侵袭性牙周炎8例,健康对照组8例,采用实时定量PCR方法定量检测IL-21 mRNA在牙龈组织表达情况。结果：慢性牙周炎、侵袭性牙周炎、健康对照组牙龈组织中均有IL-21 mRNA的表达,慢性牙周炎组和侵袭性牙周炎组IL-21 mRNA相对表达量分别为0.000534±0.000504和0.00602±0.000137,显著高于健康对照组0.000161±0.000352,差异有统计学意义(P<0.05)。慢性牙周炎和侵袭性牙周炎牙龈组织IL-21mRNA表达没有显著性差异（P>0.05）。结论：IL-21在慢性牙周炎发病机制中可能发挥重要作用。     

慢性牙周炎患者IL-17mRNA的表达及意义

目的：观察TL-17mRNA基因在慢性牙刷炎和健康牙龈组织中的表达水平变化,探讨TL-17在慢性牙周炎发生发展巾的作用。方法：选择慢性牙周炎患者23例,正常对照组15例,记录才周临床指标,采用Real—time PCR方法定量检测TL-17mRNA在牙龈组织中的表达。结果：慢性牙周炎组TL-17mRNA相对表达晕（0．00147＋0．00055）显著高于正常牙龈组（O．00047±0．00019）（P〈0．01）,并且慢性牙周炎组TL-17mRNA表达水平与牙龈指数（r=0．58,P〈0．01）、牙周袋探诊深度（r=0．57,P〈0．01）、附着丧失水平（r=0．49,P〈0．05）呈正相关。结论：Th17相关细胞凶子IL—17呵能住慢性牙周炎发病机制中发挥致炎作用。     

RECK、MMP-2在牙周炎患者牙龈组织中的表达

目的:研究RECK蛋白和MMP-2在牙周炎中的表达及其相互关系。方法:应用免疫组化SP法检测56例牙周炎患者牙周组织和16例正常牙龈组织中RECK和MMP-2的表达。结果:RECK在16例正常牙龈组织中的阳性表达率100%,而在牙周炎牙龈组织中的阳性表达率为51.8%。MMP-2在正常牙龈组织中的阳性表达率为31.3%,而在牙周炎牙龈组织中的阳性表达率为76.8%。牙周炎中RECK与MMP-2的表达呈负相关(P<0.01,r=-0.300)。结论:RECK可能通过调控MMP-2来影响牙周炎的发生与发展。     

慢性牙周炎与健康牙龈组织中MMP-1的表达和意义

目的:通过检测基质金属蛋白酶-1(MMP-1)在慢性牙周炎牙龈组织中的表达和分布特征,探讨MMP-1在慢性牙周炎发病中的作用和临床意义。方法:收集8例因非牙周疾病而需拔牙患者健康牙龈及24例慢性牙周炎患者牙龈组织,按健康对照、牙周袋深度≤4mm、4~6mm、>6mm分A、B、C、D四组,利用免疫组化方法检测其中MMP-1的表达。结果:正常牙龈组织上皮及固有层MMP-1弱表达,慢性牙周炎患者牙龈组织MMP-1表达明显增高,两者间有显著性差异(P<0.05)。并且MMP-1表达与牙周袋深度间显著正相关(r=0.623,P<0.01)。结论:MMP-1参与慢性牙周炎病变牙周组织的破坏过程,并且其表达随牙周袋深度加深有增加趋势。     

老龄鼠实验性牙周炎的免疫特点

目的： 通过口腔涂抹牙周致病菌的方法建立小鼠牙周炎模型,比较低龄小鼠与老龄小鼠牙周炎发病免疫状态差异,分析Th17/Treg细胞相关因子在不同年龄牙周炎小鼠中的表达情况。方法：采用实体显微镜评价牙周骨吸收的程度,H-E染色法观察牙周组织病变的炎细胞浸润情况,TRAP染色法观察牙周骨组织表面破骨细胞浸润情况,实时定量PCR检测牙龈组织中Th17/Treg细胞相关因子TGF-β1、IL-10、IL-17A、RANKL mRNA的表达水平。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果：实验4周后,牙周炎组与正常对照组相比,釉-牙骨质界至牙槽嵴顶的距离显著增加（P<0.01）,老龄组小鼠釉-牙骨质界至牙槽嵴顶的距离比低龄组小鼠显著增加（P<0.01）;牙周组织中大量炎细胞浸润,牙周袋加深;牙周组织中 TGF-β1、IL-10 mRNA的表达水平显著降低（P<0.01）,IL-17A、RANKL mRNA表达水平显著增高（P<0.01）。结论：老龄小鼠牙周炎中炎症介质的表达存在异常状态,比低龄小鼠牙周组织病损状态加剧,提示牙周炎的炎症状态可能不仅与其分泌的免疫抑制性细胞因子表达降低有关,更与其增龄性相关。     

糖尿病对大鼠牙周组织及诱导型一氧化氮合酶分布的影响

目的：观察糖尿病对大鼠牙周炎牙周组织形态结构的影响及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在牙龈组织中的分布。方法：建立大鼠糖尿病牙周炎模型,制作组织切片,进行HE及免疫组织化学染色,观察牙周组织形态结构的破坏情况及iNOS在牙龈组织中的分布。结果：糖尿病牙周炎组的结缔组织附着丧失量及牙槽骨高度丧失量均明显高于牙周炎组、糖尿病组及正常组。差异有显著性（P〈0．05）。糖尿病牙周炎组和糖尿病组的免疫组化染色均为阳性或强阳性。结论：糖尿病加重了牙周炎牙周组织的破坏程度。     

实验性牙周炎中调节性T细胞的检测及免疫状态

目的：通过口腔涂抹牙周致病菌加腹腔注射抗原的方法建立一种模拟人类牙周病发病的动物模型,分析调节性T细胞在牙周炎小鼠中的表达情况。方法：采用实体显微镜评价牙周骨吸收的程度,HE染色法观察牙周组织病变的炎细胞浸润情况;FACS检测调节性T细胞在牙周炎慢性炎症期间的表达;实时定量PCR检测牙龈组织中TGF-β1、IL-10mRNA的表达。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果：第4周后,牙周炎组与正常对照组相比,釉牙骨质界至牙槽嵴顶的距离显著增加(P<0.05);牙周组织中大量的炎性细胞浸润,牙周袋加深;TGF-β1、IL-10mRNA的表达水平显著降低(P<0.01);脾脏中调节性T细胞的比率及数量显著少于正常对照组(P<0.05)。结论：牙周炎小鼠中调节性T细胞的数量及功能存在异常,可能与其分泌的免疫抑制性细胞因子表达降低有关。     

慢性牙周炎龈组织中Smac和Bax的表达及其对细胞凋亡的作用

目的:通过检测Smac和Bax蛋白在慢性牙周炎龈组织中的表达,旨在探讨二者的相关性及其在细胞凋亡中与牙周炎发生、发展的关系。方法:慢性牙周炎测试组27人,健康对照组27人,利用光镜和透射电镜观察凋亡细胞形态结构,流式细胞仪测定线粒体膜电位。免疫组化检测Smac、Bax在龈组织不同区域的表达。结果:光镜观察慢性牙周炎龈组织中存在有凋亡细胞;电镜观察凋亡细胞中线粒体形态结构改变;慢性牙周炎龈组织线粒体膜电位降低,与健康组比较,两组间有显著性差异(P<0.05);慢性牙周炎组中Smac和Bax在上皮组织、结缔组织的表达增加,与健康组相比具有显著性差异(P<0.05);Smac、Bax二者的表达在慢性牙周炎龈组织具有明显正相关(P<0.05)。结论:慢性牙周炎龈组织中有凋亡细胞存在;Smac、Bax的表达在慢性牙周炎组中呈明显正相关,表明在细胞凋亡过程中起协同作用,这与牙周组织破坏有关。     

模拟高原低氧兔牙周炎模型血清和牙龈组织中sICAM-1及sVCAM-1的含量

目的:探讨血清和牙龈组织中可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、可溶性血管黏附分子-1(sVCAM-1)在高原牙周病炎症反应中的作用。方法:将40只雄兔随机分为常氧对照组、常氧实验组、低氧对照组、低氧实验组,每组10只,采用正畸丝结扎下颌中切牙与牙周炎食谱的方法建立牙周炎模型,常氧组和低氧组分别在平原和模拟海拔5 000 m条件下饲养8周,对牙周组织取材进行组织学观察,用ELISA法检测各组实验动物血清和牙龈组织中sICAM-1、sVCAM-1表达情况。结果:低氧实验组sICAM-1、sVCAM-1浓度显著高于其余各组(P<0.05),且牙龈组织中浓度高于血清。结论:模拟高原低氧环境下黏附分子的表达上调,使牙周组织破坏加重,同时促使炎症反应向外周血管扩散。     

Preparation and characterization of human gingival cells

A procedure was developed for the preparation of single cell suspensions from gingival and periodontal tissues using collagenase digestion followed by gentle mechanical disruption. The procedure was evaluated on rat gingival tissues. One-hour incubation was found to produce the greatest number of cells with the highest viability, and the largest recovery of mononuclear cells. Collagenase did not appear to effect recovery, viability or B cell surface markers on human peripheral blood cells. Human gingival and periodontal tissues were obtained from 35 patients: 20 with adult periodontitis; 8 with juvenile periodontitis; 7 with normal gingivae or chronic gingivitis. Scaling, followed by probing measurements and then surgery of the affected sites was routinely performed. In single cell suspensions from tissue obtained from surgery, significantly fewer mononuclear cells were recovered from the tissues of normal/chronic gingivitis patients than cells/mg of tissue recovered from adult periodontitis or juvenile periodontitis groups. The maximum contribution of blood mononuclear cells to the gingival cells averaged 0.5+0.2%. This method is useful for recovering gingival (periodontal) cells for phenotypic and functional studies.     

人β防御素3基因转染及金纳米颗粒处理后的牙周膜细胞对大鼠牙周炎形成影响研究

目的    探讨人β防御素3基因转染大鼠牙周膜细胞,并经金纳米颗粒处理后,局部注射对SD大鼠慢性牙周炎形成的影响。方法    丝线结扎法构建SD大鼠慢性牙周炎模型,酶消化法提取大鼠牙周膜细胞并鉴定,用携带人β防御素3基因的腺病毒转染细胞并经金纳米颗粒处理,在慢性牙周炎构建同期局部注射细胞悬液到腭侧牙龈,对照组分别注射生理盐水和空载体腺病毒转染后的细胞悬液。2周后处死大鼠取材。通过Micro-CT和免疫组化染色观察大鼠牙周炎形成情况。结果    单纯结扎组第二磨牙周围牙槽骨明显吸收,牙龈上皮钉突向内增生,棘层增厚,炎细胞浸润,胶原纤维变性、局部断裂。局部注射经转染和金纳米颗粒处理的牙周膜细胞后,结扎区域牙槽骨吸收水平降低,骨密度和骨体积分数增加;牙龈上皮炎症细胞浸润和上皮钉突增生减少,胶原纤维断裂和排列紊乱等病理变化得到改善。结论    人β防御素3基因转染及金纳米颗粒处理后的大鼠牙周膜细胞局部注射后,可减轻SD大鼠的牙周组织炎症,降低牙周组织破坏,从而在牙周炎的形成过程中起到保护作用。     

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??Objective    To investigate whether local injection of periodontal ligament cells which were transfected by human β defensin 3 gene and then treated with gold nanoparticles can affect the chronic periodontitis progress in SD rats. Methods    Chronic periodontitis model was established by silk thread ligation. Periodontal ligament cells were cultured by enzyme digestion method and then identified. Cells after transfection and gold nanoparticles treatment were injected into the palatal gingival tissues after ligation. The control groups were injected with normal saline or cells transfected by empty vector adenovirus respectively. After 2 weeks??rats were executed and sampled. Micro-CT and immunohistochemical staining were performed to observe the chronic periodontitis progress in SD rats. Results    In ligation group??the alveolar bone around second molars was obviously absorbed??the gingival epithelial spikes hyperplasia and thickened stratum spinosum could also be observed??so did the inflammatory cell infiltration??altered and broken collagen fibers. Local injection of periodontal ligament cells which were transfected by human β defensin 3 gene and then treated with gold nanoparticles could significantly reduce the absorption of alveolar bone in the ligation area and increase the bone mineral density as well as bone volume fraction. It could also decrease inflammatory cells and epithelial spikes hyperplasia in the gingival epithelium. Furthermore??situation of altered and broken collagen fiber could be improved in those groups. Conclusion    Local injection of periodontal ligament cells transfected by human β defensin 3 gene and treated by gold nanoparticles can alleviate the inflammatory reaction and thus play a protective role in the progress of chronic periodontitis in SD rats.