磷脂酶C结构及活化机制的研究进展

磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)是磷脂酰肌醇信号通路的关键酶,在机体内分布极为广泛。许多细胞外信息分子,如激素、神经递质、免疫球蛋白、细胞因子、生长因子等都可以激活磷脂酰肌醇特异性PLC。活化的PLC能水解磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2),从而产生两种重要的第二信使:二酯酰     

磷脂酰肌醇激酶的非同位素酶解测定法

用磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C水解磷脂酰肌醇激酶催化产生的磷脂酰肌醇-4-磷酸,产物1,4-二磷酸肌醇再经碱性磷酸酶水解后,测定磷的含量,建立了磷脂酰肌醇激酶的非同位素酶解测定法。该法回收率可达91％,CV=6.5％。     

抗磷脂抗体和狼疮性肾炎

1 抗磷脂抗体及抗磷脂综合征 1．1 抗磷脂抗体(Antiphospholipid antibody,aPL) aPL是一族针对带负电荷磷脂或带负电荷磷脂与蛋白的复合物的异质性自身抗体的总称,是诊断抗磷脂综合征 (Antiphospholipid Syndrome,APS)的条件之一。目前已知的aPL的靶抗原有三大类:①磷脂:心磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇;②磷脂-蛋白复合物:β2糖蛋白Ⅰ(β2-GP Ⅰ)、凝血酶     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3和AFP联合检测对原发性肝癌的诊断价值

目的:探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)和甲胎蛋白(AFP)联合检测对原发性肝癌患者血清以及组织中的表达情况,判断磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3和AFP联合检测对原发性肝癌的诊断价值,寻求合理有效的检测方法,提高原发性肝癌的诊断率。方法:本次实验我们采用分组对比的实验方法。选取2009年2月至2014年2月来我院就诊的原发性肝癌患者60例,肝炎后肝硬化患者70例,并选取肝组织正常的对照者80例。分别将他们三组并命名为观察组,非正常对照组以及正常对照组。根据不同的病理指标观察磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)和甲胎蛋白(AFP)在三组患者血清以及组织中的表达情况,分析磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3和AFP联合检测对原发性肝癌的诊断价值以及临床运用。结果:经检测原发性肝癌患者、肝炎后肝硬化患者以及正常肝组织的对照者血清中磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)的水平分别为(238.24±117.55)、(72.36±30.18)、(37.52±16.21),所以在血清中磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)浓度上,原发性肝癌的患者要明显高于肝炎后肝硬化患者以及正常肝组织对照者;在检测手段方面我们发现,单一磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)检测对原发性肝癌诊断的敏感性为79.22%、特异性为88.33%。单一甲胎蛋白检测对原发性肝癌诊断的敏感性为67.43%、特异性为80.46%。而磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3和AFP联合检测对原发性肝癌的敏感性为87.55%、特异性为97.72%。所以两者的联合检测原发性肝癌的敏感性和特异性均显著高于任意单一检测。经检测甲胎蛋白(AFP)阳性肝癌血清中GPC-3阳性率为95%,而在甲胎蛋白(AFP)阴性肝癌中GPC-3阳性率为65%。结论:磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3和AFP联合检测有助于提高对原发性肝癌的确诊率,而检测GPC-3也有助于提高AFP阴性患者肝癌的确诊率,磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3和AFP联合检测对原发性肝癌的具有较高的诊断价值。     

大豆磷脂的保健功能

大豆磷脂是指以大豆为原料所制成的一种混合磷脂,它是由卵磷脂(学名:磷脂酰胆碱,简称PC,高等级为PPC)、脑磷脂(学名:磷脂酰乙醇胺,简称PE)、肌醇磷脂(学名:磷脂酰肌醇,简称PI)和丝胺酸磷脂(又称磷脂酰丝胺酸,简称PS)等组成,还含有胆碱、肌醇、维生素E和生物素等成分,其中最典型的为前三种,是组成人体细胞(细胞膜、核膜、质体膜)的基本成分,为人体生理功能所必需的物质,具有很高营养价值和保健功能,与蛋白质、维生素并列称为"第三营养素".大豆磷脂究竟有哪些保健功能呢? 1、改善脑功能,增强记忆力 磷脂代谢与脑的机能状态有关,随着年龄增长,人的记忆力会减退,这与乙酰胆碱含量不足有一定关系.     

刚地弓形虫TgPH1蛋白的重组表达及其与磷脂酰肌醇结合性的鉴定

目的 鉴定重组刚地弓形虫TgPH1蛋白与磷脂酰肌醇在体外的相互结合作用。方法 提取刚地弓形虫总RNA,经RT-PCR扩增TgPH1基因编码序列。扩增产物连接入原核表达载体pGEX-4T-1中得到载体pGEX-TgPH1。同时通过基因定点突变获得载体pGEX-TgPH1R37H。将测序正确的以上两种载体分别转化至大肠埃希菌（E. coli）BL21(DE3) 并用IPTG诱导表达;SDS-PAGE结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。重组蛋白经亲和层析纯化后,利用PIP Strips脂质膜免疫印迹试验检测重组蛋白与不同磷脂酰肌醇的结合。结果 经IPTG诱导4 h后,具有载体pGEX-TgPH1或pGEX-TgPH1R37H的菌株,在相对分子量接近40 kD处出现一条清晰的外源蛋白条带。纯化的重组GST-TgPH1蛋白能与PI3P和PI(3,5)P2特异性结合;而其相应的突变体GST-TgPH1R37H蛋白并不与膜上的任何磷脂酰肌醇分子相结合。结论 本研究获得了弓形虫PH1全长重组蛋白,并鉴定了其与磷脂酰肌醇在体外的相互结合作用;同时表明TgPH1蛋白中R37位碱性氨基酸残基对其与磷脂酰肌醇的识别和结合过程中起着关键性的作用。本研究为进一步探索具有PH功能域的蛋白及与不同磷脂酰肌醇相互作用的分子机理研究奠定了基础。     

微RNA-126介导磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基2及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号与肿瘤关系的新进展

磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基2(PIK3R2)是磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的家庭成员之一,通过PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路参与血管的形成、维护以及改造的调控,是组织器官正常发育、损伤以及肿瘤发生的一个重要的基因调控靶目标。不同类型的肿瘤,微RNA(miRNA)126介导的PIK3R2调控水平及趋势存在差异,可能与肿瘤的发生存在联系,是肿瘤研究中有前景的调控靶目标之一。     

哮喘发作期大鼠体内肺表面活性物质功能及含量的变化

目的观察哮喘大鼠BALF中肺表面活性物质(PS)的功能和各磷脂组分含量的变化.方法设立正常对照组和哮喘模型组,建立大鼠哮喘模型,检测BALF中表面张力、磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇和磷脂酰丝氨酸的含量.结果两组中的表面张力(Nn/m)、磷脂酰胆碱(g/L)、磷脂酰肌醇(g/L)和磷脂酰丝氨酸(g/L)的测定结果分别为,正常对照组60.508±1.327,7.437±0.736,0.382±0.032,0.262±0.041,65.151±1.791,6.184±0.465,0.377±0.045和0.255±0.039.哮喘模型组BALF中表面张力明显高于正常对照组(P＜0.01),磷脂酰胆碱含量低于正常对照组(P＜0.01),两者呈负相关,磷脂酰肌醇和磷脂酰丝氨酸与正常对照组无显著差异(P＞0.05).结论哮喘发作期大鼠体内存在PS功能和磷脂含量的异常.     

丙烯酰胺对肺表面活性物质的损伤

目的 观察丙烯酰胺损伤后肺表面活性物质(PS)中磷脂(PL)的组分(磷脂酰甘油PG、磷脂酰肌醇PI、磷脂酰乙醇胺PE)和蛋白质含量的变化.寻找丙烯酰胺损伤早期敏感特征性标志物.方法 24只大鼠气管内滴注丙烯酰胺(0.1mg/kg,0.4mg/kg)建立肺损伤模型.分别设12h、2d、3d、5d组.大鼠的肺组织块分别行HE染色电镜观察,测定支气管液中PL组分和蛋白质含量.结果 实验组大鼠肺均可见PS层丧失连续、均匀的绒状结构,脱落入肺泡腔,以12h组较明显.PS中PL含量趋于增加,以12h组较明显.PS中蛋白质含量最高,以2d组较明显.结论 丙烯酰胺损伤后PS的质与量的变化能较特异的反映肺损伤.测定PL含量是判断肺早期损伤的方法.PL中的磷脂酰甘油(PG)和磷脂酰肌醇(PI)可能是丙烯酰胺损伤早期敏感特征性标志物.     

磷脂酰肌醇转运蛋白家族各亚型在动物中的生物功能

脂质是生物膜的主要组成部分,在信号转导和膜运输方面发挥重要的作用。脂质之所以能够在细胞器之间进行转运,是因为它们不但能够以囊泡出芽的方式进行转运,而且还可通过蛋白的作用进行转运。磷脂酰肌醇转运蛋白(PITP)家族就是一类可结合并促进磷脂酰肌醇、磷脂酰胆碱及其他脂质在细胞内膜系统间相互转运的蛋白质。剔除体内特异性PITP亚型会产生广泛的生物效应(如神经突增生、膜运输、细胞分裂和视觉转导等)。     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在肝癌早期诊断中的研究进展

肝癌是一种常见的消化道肿瘤,其发病率有明显的地区差异,非洲撒哈拉沙漠以南地区和远东地区是肝癌的高发地区。我国是肝癌发病率较高的国家之一,因此对肝癌早期治断的研究有特殊意义。最近,磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)作为一种新的肝癌肿瘤标记物被国外许多作者提出,现综述如下:1分子结构磷脂酰肌醇蛋白聚糖(glypicans,GPC)是一类分布在细胞膜表面的蛋白聚糖,是通过一个糖基化磷脂酰肌醇(glycosylphos-phatidylinositlo,GPI)连接在细胞膜上的,到目前为止在哺乳动物中已经发现了六个家族成员(GPC1～6)。蛋白聚糖是一类由核心蛋白和糖胺聚…     

实验性肺纤维化肺灌洗液磷脂组分分析

对博莱霉素肺纤维化大鼠模型不同时期作支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数与分类、蛋白含量测定和磷脂及其组分测定,并与肺病理变化作对照分析。结果发现BALF细胞计数和分类与肺组织细胞浸润基本一致,BALF蛋白含量增加,磷脂酰甘油(PG)随病变进展而下降,磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰乙醇胺(PE)升高。PG／PI比值下降,PG／PI比值可作为肺纤维化的一种标志。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定人肺癌细胞PI-PLC分子量

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定人肺癌细胞磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC),分子量为43～67KDa。     

肌醇磷脂代谢与输精管平滑肌收缩之间的关系

对牛精子中分离的一种蛋白激酶C(PKC)大分子抑制剂对大白鼠输精管平滑肌肌醇磷脂代谢的影响进行了研究。大白鼠输精管平滑肌细胞放入Lock's液中孵育1h,用~(32)P(无载体)标记磷脂,加入去甲肾上腺素后,在不同的时间终止反应。磷脂分析的结果显示去甲肾上腺素使磷脂的代谢增强;如在加入去甲肾上腺素的同时加入牛精子中分离的大分子抑制剂或氯丙嗪,则肌醇磷脂和磷脂酰胆碱的代谢都受到抑制     

HPLC-ELSD测定猪肺表面活性物质及其冻干粉中7种磷脂组分含量

目的 建立猪肺表面活性物质及其冻干粉中7种磷脂组分的含量测定方法.方法 采用硅胶柱,梯度洗脱,蒸发光散射检测器检测.结果 磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DP-PC)、鞘磷脂(SPH)、浴血磷脂酰胆碱(LPC)7种磷脂的线性回归方程的相关系数分别为0.999 0,0.998 4,0.999 0,0.999 3,0.999 8,0.998 8,0.998 1;日内精密度分别为2.1%,2.3%,2.8%,1.7%,1.5%,2.3%,2.3%;回收率分为99.57%,101.03%,100.02%,100.17%,98.51%,100.65%,97.76%.结论 本方法可同时测定猪肺表面活性物质及其冻干粉中7种磷脂组分的含量,专属性强、准确度高.     

山羊角研究概述

1 化学成分1.1 甾族及磷脂类成分 以30％ROH水溶液和95％乙醇处理,再以石油醚提取,经分离得到纯品胆固醇,测定其含量为0.38％。以氯仿:甲醇(2∶1)混合溶剂提取,经分离测定其总磷脂含量为0.14％,其中含卵磷脂、脑磷脂、神经鞘磷脂、磷脂酰丝氨酸及磷脂酰肌醇等成分。其总磷量2.26μg/ml。     

磷酸酶SHIP-1对T细胞分化、稳态和免疫应答的调控效应

 T细胞是适应性免疫应答的重要调控者,对其发育、分化及稳态的调节一直是免疫学领域的研究重点和热点。含有SH2结构的5′肌醇磷酸酶-1(SH2-containing inositol phosphatase-1,SHIP-1)能够水解磷脂酰肌醇 3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI-3K)信号途径中的关键物质磷脂酰肌醇三磷(phosphatidylinositol 3,4,5 triphosphate,PIP3),从而参与T细胞免疫应答。SHIP-1对T细胞发育、分化及免疫稳态发挥重要调控作用,本文就SHIP-1对T细胞的分化和稳态的免疫调控作用及其机制的研究进展作一简要综述。     

神经节苷脂GM1对乙醇引起的神经膜磷脂脂肪酸参入变化的影响

研究神经节苷脂ＧＭ１对乙醇引起的神经膜磷脂的脂肪酸参入变化的影响。使用同位素标记的脂肪酸测定其对神经膜磷脂不同组分的参入率，比较ＧＭ１和乙醇对参入率的影响。慢性乙醇暴露发迹了不饱和脂肪酸「油酸，亚油酸，花生四烯酸和二十二碳六烯酸」参入到旨酰肌醇，磷脂酰丝氨酸和磷脂酰胆碱。     

磷脂酰肌醇-3激酶与胰腺疾病的关系

磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-ki-nase,PI3K)家族是一类特异性地催化磷脂酰肌醇3-位羟基磷酸化,产生具有第二信使作用的肌醇脂物质的激酶.研究表明,PI3K家族与细胞增殖、抗凋亡、细胞迁移、膜泡转运、细胞癌性转化等众多过程相关.它与胰腺炎、胰腺癌亦密切相关.本文就PI3K与以上两种疾病的关系作一综述,揭示其在疾病发生发展过程中的重要作用,并提出利用PI3K抑制剂来治疗上述疾病的可能性.     

输精管平滑肌中肌醇磷脂代谢与去甲肾上腺素作用间关系的研究

在大白鼠输精管中，去甲肾上腺素可促进肌醇磷脂代谢，而双丁酰ｃＡＭＰ和８－溴ｃＧＭＰ则对去甲肾上腺素所促进的肌醇磷脂代谢，有明显的抑制作用。这提示，很可能在输精管平滑肌中，由去甲肾上腺素所促进的肌张力，能被ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ所抑制。本文还观察到Ａ２３１８７亦能促进肌醇磷脂代谢，而酚苄明（一种肾上腺素能α受体阻断荆）和ＥＧＴＡ则对肌醇磷脂代谢起抑制作用。