IL-2协同肿瘤坏死因子对移植性鼻咽癌的抗瘤作用

目的：研究重组人肿瘤坏死因子(rhTNF-a)与重组白介素一2(rhlL-2)协同体内抗鼻咽癌效应及抗瘤机理。方法：利用我室建立的鼻咽癌细胞株(CNE3)制成裸鼠鼻咽癌模型，用rhTNF-a或与rhlL-2联合瘤内注射以观察抑瘤效应及荷瘤组织细胞的病理学、超微结构的改变，探讨其作用机理。结果：鼻咽癌裸鼠移植瘤经rhTNF-a治疗后肿瘤出现坏死、体积缩小、甚至消失。rhlL-2能增强rhTNF-a的抗瘤作用。组织病理学及超微结构观察发现，大多数癌细胞出现粗面内质网扩张；核碎裂、核溶解而消失。结论：rhlL-2增强rhTNF-a的抗瘤机理可能与IL-2诱导癌细胞表达TNF受体作用有关，本研究为临床在鼻咽镜下进行肿瘤局部注射TNF进行治疗提供实验依据。     

rhTNFα与IL-2联合瘤内注射致鼻咽癌移植瘤超微结构的改变

应用 CNE- 3鼻咽癌细胞株作为靶细胞 ,建立鼻咽癌裸鼠移植瘤模型 ,探讨rh TNFα与 IL- 2联合瘤内注射对鼻咽癌裸鼠移植瘤形态学的影响。结果显示 :单独应用rh TNFα早期鼻咽癌细胞缩小 ,异染色质增多和出现凋亡小体 ,联合应用后癌细胞改变出现时间早、程度重 ,表现为内质网扩张 ,核固缩 ,核碎裂 ,癌细胞坏死及淋巴细胞反应。提示rh TNFα和 IL- 2有不同程度协同杀伤鼻咽癌细胞的作用 ,促使癌细胞趋向死亡。该研究为临床术前 rh TNFα局部治疗鼻咽癌提供实验依据     

死亡相关蛋白3参与重组人肿瘤坏死因子-α抑制裸鼠胃癌移植瘤的生长

目的观察重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)对荷人胃癌细胞株BGC-823和HGC-27裸鼠移植瘤的生长抑制作用,并检测作用前、后移植瘤中死亡相关蛋白3(DAP3)的表达情况,探讨DAP3在rhTNF-α抑制裸鼠胃癌移植瘤生长中的作用。方法建立荷人胃癌细胞株BGC-823和HGC-27裸鼠移植瘤模型;观察腹腔注射不同剂量的rhTNF-α(0、1、5、10 mg／kg)对裸鼠移植瘤的生长抑制作用,分别采用Western印迹法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组裸鼠移植瘤中DAP3蛋白和DAP3 mRNA表达情况。结果①腹腔注射5和10 mg／kg的rhTNF-α,裸鼠荷BGC-823和HGC-27移植瘤的瘤重显著低于对照组(P值均<0．05),而1 mg／kg rhTNF-α组与对照组瘤重的差异无显著性(P>0．05)。②腹腔注射5和10 mg／kg的rhTNF-α4周后,荷人胃癌细胞株BGC-823和HGC-27移植瘤中DAP3蛋白表达显著高于1 mg／kg组和对照组;5和10 mg／kg rhTNF-α可使移植瘤中DAP3 mRNA的表达显著升高。结论DAP3参与rhTNF-α抑制荷人胃癌细胞株BGC-823和HGC- 27裸鼠移植瘤的生长作用,推测DAP3为一新的肿瘤治疗位点。     

重组人肿瘤坏死因子-α诱导黏液表皮样癌细胞凋亡

目的: 探讨重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)作用于人黏液表皮样癌细胞(MEC-1)的效应与机制. 方法: 应用细胞记数、DNA降解片段琼脂糖凝胶电泳观察、电镜观察和细胞周期测定rhTNF-α作用后MEC-1细胞的凋亡状况. 结果: rhTNF-α作用于MEC-1细胞后,导致细胞存活数目减少,大量细胞发生凋亡;基因组DNA分解成寡聚核苷酸片段,DNA琼脂糖凝胶电泳有梯形条带;细胞周期发生改变,形态学观察细胞核皱缩,染色质边集. 结论: rhTNF-α是通过MEC-1细胞发生凋亡而发挥细胞毒作用.     

瘤体内注射肿瘤坏死因子重组腺病毒对大鼠乳腺癌的治疗作用

目的:观察腺病毒重组肿瘤坏死因子(TNF)基因转染对大鼠乳腺癌细胞Walker256体内致瘤性的影响及瘤体内注射TNF重组腺病毒对Walker256荷瘤大鼠的治疗作用.方法:Walker256乳癌细胞感染人TNF重组腺病毒后,观察其体外增殖能力、皮下致瘤性的变化及进行肿瘤局部病理学检查;瘤体局部注射TNF重组腺病毒(Ad.hTNF),观察荷瘤大鼠的肿瘤生长情况及生存期.结果:Walker256感染人TNF重组腺病毒后,培养上清中24 h TNF的分泌量达5.2 ng/106细胞,细胞形态学无明显变化,体外增殖能力和皮下致瘤性显著下降,瘤体周围有大量淋巴细胞及单核细胞浸润;肿瘤局部注射Ad.hTNF能显著抑制Walker256的生长,并延长荷瘤大鼠的生存期.结论:重组腺病毒能有效介导TNF基因转染Walker256细胞,瘤体内局部注射Ad.hTNF对Walker256荷瘤大鼠具有明显的治疗作用.     

碘-131标记重组人肿瘤坏死因子-α治疗荷人肝癌裸鼠的实验研究

目的 研究碘-131标记的重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)在荷人肝癌裸鼠的治疗应用.方法 通过131I-rhTNF-α和人肝癌SMMC-7721细胞的体外结合以检测131I-rhTNF-α的生物学活性;采用单细胞悬液接种法,制备荷人肝癌裸鼠模型;在一定的时间(30 min、1 h、6 h、12 h、24 h、48 h)将相同数量的荷人肝癌裸鼠分批处死,研究131I-rhTNF-α在荷人肝癌裸鼠体内的分布,获得131I-rhTNF-α在荷人肝癌裸鼠的主要浓聚组织及在肿瘤组织的浓聚特点;通过大体观察、活组织病理检查等考察131I-rhTNF-α对荷人肝癌裸鼠肿瘤生长的影响.结果 131I-rhTNF-α与SMMC-7721细胞体外结合实验得出,131I-rhTNF-α有很好的生物学活性,与SMMC-7721细胞的结合存在饱和,在一定范围内呈剂量依赖.131I-rhTNF-α在肿瘤组织的浓聚特点为,肿瘤组织可以浓聚较多的131I-rhTNF-α,且储留时间较长;给药后6 h肿瘤组织的放射性达到高峰,48 h仍旧保留有高峰时放射性的67.5%. 与阴性对照组(生理盐水组)相比,静脉或瘤内注射131I-rhTNF-α 2次(每次注射量相当于50 kg人体注射41.58 GBq,间隔为14 d)均有较强的肿瘤抑制作用,抑瘤率分别为68.9%和72.5%,二者的抑瘤作用与阳性对照组(阿霉素组)比较差异无统计学意义 (P>0.05),与131I(9.2%)、rhTNF-α(20.3%)和阴性对照组比较差异有统计学意义 (P<0.05).结论 131I-rhTNF-α在荷人肝癌裸鼠体内能有效抑制肿瘤生长.     

肿瘤坏死因子抗鼻咽癌细胞实验研究进展

应用生物反应调节剂对肿瘤进行免疫治疗是近十几年来发展较快的一项新型抗瘤疗法 ,也是对临床手术、化疗、放疗等常规治疗肿瘤手段的有效补充。肿瘤坏死因子 ( TNF)的多种生物学活性如诱导分化、细胞调亡 ( apoptosis)和细胞毒 /细胞静止( cytotoxic)等效应 ,特别是对肿瘤细胞的抑制和杀伤作用 ,具有重要的病理生理学意义和肿瘤治疗价值 ,其作用机制研究很多 ,但尚无定论。本文仅就TNF- α介导的鼻咽癌细胞毒效应、不同鼻咽癌细胞株对 TNF- α反应差异的分子机制作一综述。1　TNF的分子生物学　　 TNF有 TNF-α和 TNF-β两种。前者…     

抗TNF-α单克隆抗体对VMC小鼠影响的实验研究

目的:了解肿瘤坏死因子α(TNFα)在病毒性心肌炎小鼠发病中的作用及抗TNFα单克隆抗体对心肌损伤的保护效应。方法:BalB/c小鼠随机分为正常对照组、病毒感染组和病毒感染加抗体治疗组,测定感染后7d和14d心肌组织TNFα的表达、病理变化、超微结构改变和小鼠生存率。结果:①治疗组TNFα表达较感染组低(P<0.05);②治疗组心肌病理变化和超微结构改变减轻,生存率提高;③感染组TNFα表达与心肌病变积分呈正相关(P<0.05)。结论:TNFα在病毒性心肌炎发病中发挥重要作用,抗TNFα单克隆抗体对受损心肌有保护作用。     

重组人肿瘤坏死因子α联合变异型IL-2治疗肝癌的实验研究

目的从大肠杆菌中获得高活性重组人肿瘤坏死α因子(rhTNF-α),并探索TNF-α与其它细胞因子临床治疗肝癌的合理配伍方案.方法CaCl2法转化大肠杆菌JM109,温度诱导rhTNF-α收获菌体,裂解后,Western bbt检测表达产物的特异性,薄层分析rhTNF-α表达量,MTT-短程法测定rhTNF-α对L929杀伤作用.以表达的rhTNF-α作用于肝癌细胞株BEL7402和荷瘤鼠(肝癌腹水瘤),验证其对肝癌细胞的体内外抑制作用.采用嵌套设计,MTT-短程法测定rhTNF-α与变异型IL-2对BEL7402的协同抑制作用.结果Western blot证实pAW711转化JM109后筛得的重组菌表达产物特异性良好,薄层分析表明rhTNF-α表达量可达菌体蛋白的17.8%,MTT-短程法证实表达产物具有良好生物活性,并可在体外明显杀伤肝癌细胞,其杀瘤活性优于标准对照.体内实验证实rhTNF-α可使人肝癌腹水瘤荷瘤鼠生命延长率达31.5%.rhTNF-α与变异型IL-2具有协同抑癌作用,其协同作用具有特殊的剂量依赖性.结论在大肠杆菌中可获得高活性rhTNF-α,rhTNF-α在体内外均可明显抑制肝癌细胞,变异型IL-2对此有协同作用.     

重组质粒hTERT-siRNA对胰腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长抑制作用的研究

目的探讨重组质粒pSilencer4.1CMV neo-hTERT-siRNA对胰腺癌细胞BxPC-3裸鼠皮下移植瘤生长抑制作用.方法建立人原发性胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为4组：（1）肿瘤对照组,未作任何处理;（2）空载组,即pSilencer4.1-CMV neo空质粒组;（3）T1组,即重组质粒pSilencer4.1-CMV neo-hTERT1-siRNA组;（4）T2组,即重组质粒pSilencer4.1-CMVneo-hTERT2-siRNA组）.荷瘤裸鼠分组处理30d后,检测移植瘤体积及瘤重,HE染色光镜观察各组裸鼠皮下移植瘤及各脏器组织形态学,电镜观测各组移植瘤组织超微结构变化.结果 T1组及T2组肿瘤体积及瘤重均明显小于肿瘤对照组和空载组（P〈0.01）.T1组、T2组移植瘤组织癌细胞密度减少,部分癌巢发生程度不等片状坏死.T1组和T2组BxPC-3细胞超微结构发生了明显变化,细胞表面微绒毛减少或消失,部分线粒体肿胀,同时见胞质密度增加,可见凋亡小体.结论重组质粒T1和T2均能在裸鼠体内有效抑制BxPC-3胰腺癌细胞皮下移植瘤的生长,促进胰腺癌细胞凋亡,具有体内抗胰腺癌的作用。     

细胞周期与鼻咽癌的放射增敏

目的探讨放射抵抗人低分化鼻咽癌的放射增敏。方法用流式细胞仪检测肿瘤坏死因子(TNFα)对CNE-2Z-S1细胞株的细胞周期同步化,应用克隆形成实验及裸鼠实验,于体外体内测定对S1细胞的放射增敏。结果TNFα使S1细胞的50%～80%阻滞在S期,并且呈剂量依赖性。S1细胞不加TNFα处理而直接于不同时间段去照射,其克隆存活率基本维持在35%～44%左右;而用TNFα处理12h后再照射,14～18h段的克隆存活率达最高峰,20～24h段的克隆存活率达最低峰。单次剂量单用TNFα治疗裸鼠移植瘤无效果,而TNFα+放射组的治疗效果却优于联合生理盐水+放射组(但无统计学意义)。结论TNFα能阻滞鼻咽癌细胞周期,达到细胞周期同步化的作用,从而使癌细胞放射敏感性显著增高。     

加减八珍汤对人鼻咽癌6-10B裸鼠移植瘤生长抑制作用及瘤体组织中cyclinD1表达水平影响

目的:构建人鼻咽癌6-10B裸鼠移植瘤模型,给予该模型鼠加减八珍汤处理,通过HE染色、RT-RCR及Western blot,探讨该方对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长及增殖能力的影响。方法:将10只建模成功的鼻咽癌裸鼠随机分为实验组和对照组,分别给予加减八珍汤(浓度150 mg/mL)和0.9%生理盐水各0.2 mL灌胃,每天两次,共14 d。观察裸鼠瘤体积的变化至第21天,显微镜观察移植瘤组织病理变化特点,RT-RCR及Western blot检测移植瘤组织中cyclinD1的表达。结果:HE染色证实人鼻咽癌6-10B裸鼠移植瘤建模成功。RT-PCR和Western blot检测结果表明加减八珍汤可显著下调cyclinD1 mRNA和蛋白质的表达(P0.05),抑制癌细胞的增殖,延缓肿瘤的生长。结论:在裸鼠体内,加减八珍汤能抑制人鼻咽癌细胞6-10B的增殖,从而达到抑制鼻咽癌组织生长的作用。     

重组人肿瘤坏死因子α联合变异型IL—2治疗肝癌的实验研究

目的：从大肠杆菌中获得高活性重组人肿瘤坏死α因子（rhTNF-α）,并探索TNF-α与其它细胞因子临床治疗肝癌的合理配伍方案。方法：CaCl2法转化大肠杆菌JM109,温度诱导rhTNF-α,收获菌体,裂解后,Western blot检测表达产物的特异性,薄层分析rhTNF-α表达量,MTT-短程法测定rhTNF-α对L929杀伤作用,以表达的rhTNF-α作用于肝癌细胞株BEL7402和荷瘤鼠（肝癌腹水瘤）,验证其对肝癌细胞的体内外抑制作用。采用嵌套设计,MTT-短程法测定rhTNF-α与变异型IL-2对BEL7402的协同抑制作用。结果：Western blot证实pAW711转化JM109后筛得的重组菌表达产物特异性良好,薄层分析表明rhTNF-α表达量可达菌体蛋白的17.8%,MTT-短程法证实表达产物具有良好生物活性,并可在体外明显杀伤肝癌细胞,其杀瘤活性优于标准对照,体内实验证实rhTNF-α可使人肝癌腹水瘤荷瘤鼠生命延长率达31.5%,rhTNF-α与变异型IL-2具有协同抑癌作用,其协同作用具有特殊的剂量依赖性。结论：在大肠杆菌中可获得高活性rhTNF-α,rhTNF-α在体内外均可明显抑制肝癌细胞,变异型IL-2对此有协同作用。     

TNF—α对鼻咽癌放射增敏的体内实验研究

目的探讨TNF—α对鼻咽癌放射敏感性的影响。方法裸鼠体内移植瘤实验观察CNE-2Z、H5、S1放射后的体内增殖能力,采用HE染色观察各组裸鼠移植瘤组织坏死程度、核分裂指数、肺转移率和淋巴结转移率,免疫组织化学染色和图像分析法检测不同方法处理的s1裸鼠移植瘤组织中Caspase-3和Survivin的表达。结果鼻咽癌细胞CNE-2Z存在放射敏感性异质性,S1细胞是具有放射抵抗潜能的亚克隆株。TNF-α联合放射治疗对s1裸鼠移植瘤生长有明显抑制作用（P〈0．01）,TNF—α联合放射治疗组中瘤组织坏死程度、核分裂指数、肺转移率和淋巴结转移率与生理盐水联合放射治疗组比无明显差异（P〉0．05）。TNF—α联合放射治疗组S1裸鼠体内移植瘤细胞核中Caspase-3表达高于单独TNF—α处理组（P〈0．05）;各组S1裸鼠移植瘤细胞浆中Caspase-3及Survivin的表达无明显差异（P〉0．05）。结论TNF—α联合放射治疗可能通过影响胞核中Caspase-3表达抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤生长。     

rh-TNFα单用及与化疗药物合用对消化道癌细胞系的杀伤作用

观察重组人肿瘤坏死因子α(rh—TNFα)及其与化疗药物合用对五株消化道癌细胞的细胞毒作用,结果发现,rh—TNFα对五种细胞株均有不同程度的细胞毒效应。随着浓度的增高,其作用呈递增趋势。其中尤以对213细胞和C1184细胞的作用为明显(P<0.05);当rh—TNFα与5—Fu或PYM或MMC合用时,其细胞毒作用明显增强(P<0.05)。提示rh—TNFα对几种消化道癌细胞具有较广谱的杀伤活性,对临床试验治疗具有一定的参考价值。     

~(32)P-玻璃微球局部给药治疗裸鼠人肝癌移植瘤的实验研究和电镜观察

探讨32P-玻璃微球（32P-GMS）局部注射对裸鼠人肝癌移植瘤的治疗作用和超微结构影响。建立裸鼠人肝癌移植瘤模型后用32P-GMS进行治疗,取治疗后瘤组织用透射电镜观察。结果：实验组癌细胞大量坏死（35％～70％）,残留的瘤细胞在分化上出现了一些差异,部分癌细胞出现了高分化肝癌的形态特征;肿瘤间质见淋巴细胞浸润和纤维结缔组织增生,但无强烈的急性放射性炎反应;瘤体周围肌纤维和皮肤均无改变。对照组肿瘤示低分化肝癌,其中有少量死亡瘤细胞（4％）。研究表明,32P-GMS抗肝癌作用明显,并有一定的免疫调节和促分化功能,对治疗区周围组织亦无损伤。     

腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶基因联合α-IFN治疗肾癌的实验观察

目的:探讨腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因联合α-IFN对肾癌的治疗作用.方法:含CD基因重组腺病毒感染人肾癌细胞株786-0,用噻唑蓝(MTr)方法观察加用5-氟胞嘧啶(5-Fc)或联用α-IFN后的杀伤效应.建立786-0裸鼠皮下移植瘤模型,瘤内注射腺病毒,腹腔注射5-Fc(500me/kg),联合应用α-IFN时行瘤内注射,观察肿瘤生长情况.结果:在对感染腺病毒的786-0细胞的体外杀伤实验中,CD 5-Fc组的细胞存活率为(67.40±1.27)%,α-IFN组的细胞存活率为(68.65±1.45)%,CD 5-Fc α-IFN组细胞存活率为(34.67±2.38)%,(P=0.000),两者之间有协同效应.在786-0裸鼠移植瘤模型中,CD 5-Fc联合α-IFN能够显著抑制肿瘤的生长.结论:腺病毒为载体的自杀基因CD加前体药5-Fc联合α-IFN可以明显增强抗肾癌效果.     

弱酸洗脱肽负载的树突状细胞激活T细胞的实验研究

目的采用弱酸洗脱提取人卵巢癌细胞膜表面的肿瘤抗原肽,用于负载脐血树突状细胞(DCs),观察其对混合T淋巴细胞的体外激活效应。方法以淋巴细胞分离液分离脐血中的单个核细胞(CBMNC),将其中贴壁的细胞在细胞因子重组人粒巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组白介素(rhIL)-4及重组肿瘤坏死因子(rhTNF-α)的配伍作用下诱导分化为DCs。室温下以pH为3．3的枸橼酸-磷酸盐缓冲液处理人卵巢癌细胞,洗脱液经Oasis HLB小柱提取纯化后负载DCs。以3H-TdR掺入法测定负载抗原的DCs对混合T淋巴细胞的体外活化效应。结果贴壁的CBMNC在细胞因子2 000 U／mL rhGM-CSF、500 U／mL rhIL-4及100 U／mL rhTNF-α的配伍作用下体外诱导分化为具有典型形态和表型的DCs。人卵巢癌细胞弱酸洗脱肽负载的DCs与混合T淋巴细胞体外共培养后,T细胞增殖加快。结论CBMNC可以在GM-CSF、IL-4和TNF-α的作用下体外诱导分化为功能性DCs。pH为3.3的枸橼酸-磷酸盐缓冲液洗脱法可得到卵巢癌细胞的弱酸洗脱肽,用其负载脐血DCs,体外可激活细胞毒T淋巴细胞。     

肿瘤坏死因子的细胞同步化作用对鼻咽癌放射敏感性的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子(TNFα)使细胞周期同步化对增加鼻咽癌的放射敏感性的影响.方法 用体内实验证实鼻咽癌细胞系中确实存在放射抵抗亚克隆株,然后用流式细胞仪检测TNFα对CNE-2Z-S1细胞周期同步化的作用,应用克隆形成实验及裸鼠实验,于体外体内测定经细胞周期同步化后S1细胞对射线的敏感性.结果 (1)CNE-2Z细胞群中确实存在着放射抵抗的亚群.(2)TNFα能阻滞CNE-2Z-S1细胞周期,达到细胞周期同步化的作用.(3)体外研究证实经TNFα预处理可使CNE-2Z-S1细胞对放射的敏感性显著提高.(4)体内研究提示TNFα有可能提高CNE-2Z-S1细胞对放射的敏感性.结论 TNFα可通过促进CNE-2Z-S1细胞周期同步化进而增加放射敏感性.     

肿瘤坏死因子αDNA疫苗的制备及其对肿瘤的治疗作用

目的观察pcTNFα真核表达质粒对小鼠Lewis肺癌瘤局部注射的治疗效果及相关免疫机理。方法用双酶切的方法由pBluescdpt／TNFα载体上切下TNFα基因片段，构建真核表达载体，转染COS及Hda细胞，并对小鼠Lewis瘤体内注射pcTNFα重组质粒，观察疗效。结果构建了携带TNFα的重整pcTNFα真核表达质粒，肿瘤局部注射pcTNFα组肿瘤生长缓慢，存活期比对照组明显延长。结论pcTNFα真核表达质粒对小鼠Lewis瘤局部注射，有一定的抗肿瘤效应。