绿原酸通过PI3K/Akt信号通路抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大

目的 探讨绿原酸（CGA）通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路抑制异丙肾上腺素（ISO）诱导的心肌肥大的作用机制。方法 采用ISO诱导H9c2心肌细胞,建立心肌肥大模型。将细胞随机分为5组： 空白对照组（Control组）、异丙肾上腺素组（ISO组）、绿原酸处理组（ISO+CGA组）、抑制剂LY294002组（ISO+LY组）、绿原酸处理＋LY294002(ISO+CGA+LY组)。检测各实验组H9c2心肌细胞的心肌表面积及存活率;各组心肌细胞凋亡率和活性氧类（ROS）水平;各组细胞中Caspase、Akt、p-Akt、Gsk-3β、p-Gsk-3β蛋白的表达水平。结果 与Control组相比,ISO组心肌细胞严重受损,细胞存活率明显降低（P<0.05);比较ISO+CGA组和ISO组,ISO刺激显著增加心肌细胞表面积（50%）,而CGA预处理可防止ISO诱导的细胞肥大。与ISO组相比,ISO+CGA组p-Akt、p-Gsk-3β蛋白表达水平升高（P<0.05）,H9c2心肌细胞存活率明显提高（P<0.05）,细胞凋亡率明显降低（P<0.05）,Caspase蛋白表达降低（P<0.05）。与ISO+CGA组相比,ISO+LY组细胞存活率明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,p-Akt、p-Gsk-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）,Caspase蛋白表达升高（P<0.05）;ISO+CGA+LY组的心肌细胞存活率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,p-Akt、p-Gsk-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）,Caspase蛋白表达升高（P<0.05）。结论 CGA可能是通过PI3K/Akt信号通路调控细胞凋亡,进而抑制ISO诱导的心肌细胞肥大。     

HIF-1α介导上调BNIP3在蛛网膜下腔出血后早期皮层神经元凋亡中的作用机制

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1琢）、BNIP3在蛛网膜下腔出血（SAH）后早期皮层神经元凋亡中的作用机制。方法采用颈内动脉穿刺法建立SAH大鼠模型,设SAH组、2-甲氧雌二醇（2ME2）组和假手术（sham）组,每组10只。造模后24h对SAH大鼠神经功能进行评价;取大鼠脑组织,采用TUNEL法检测凋亡指数,免疫荧光染色检测HIF-1琢的组织细胞定位,Westernblot检测HIF-1α、BNIP3蛋白表达水平。结果与sham组比较,造模后24hSAH组大鼠脑组织中HIF-1琢、BNIP3蛋白表达水平均明显升高（均P＜0.05）,凋亡指数明显增高（P＜0.05）,神经功能评分明显降低（P＜0.05）。与SAH组比较,2ME2组大鼠脑组织中HIF-1琢、BNIP3蛋白表达水平均明显下降（均P＜0.05）,凋亡指数明显下降（P＜0.05）,神经功能评分明显升高（P＜0.05）。HIF-1琢主要定位表达于神经元。结论HIF-1琢介导上调BNIP3并参与了SAH后早期皮层神经元凋亡过程。     

腺苷酸激活蛋白酶介导糖尿病大鼠心肌线粒体自噬的机制与TSC2的关系研究

目的：探讨腺苷酸激活蛋白酶（AMP-activatedproteinkinase,AMPK）介导糖尿病大鼠心肌线粒体自噬的机制与结节性硬化复合物-2（tuberoussclerosiscomplex-2,TSC2）的关系。方法：成年雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组、模型+AMPK激动剂AICAR组（AICAR组）。采用腹腔注射链脲佐菌素建立大鼠糖尿病大鼠模型。AICAR组大鼠连续皮下注射AICAR12周。采用超声诊断仪检测所有大鼠的心功能：左室舒张末期容积（leftventricularend-diastolicvolume,LVEDV）、左室收缩末期容积（leftventricularend-systolicvolume,LVESV）、左室射血分数（leftventricularejectionfraction,LVEF）、心率（heartrate,HR）、舒张早期血流峰值速度（peakvelocityofearlydiastolicflow,E）、舒张晚期血流峰值速度（peakvelocityoflatediastolicflow,A）、E/A。取心肌组织,采用免疫共沉淀法检测AMPK和TSC2的结合水平;Westernblot检测AMPK、TSC2、p-TSC2、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin-1和P62蛋白的表达水平。结果：AICAR组LVEDV、LVEF、E和E/A均高于模型组,而A低于模型组（P=0.004,P=0.001,P=0.000,P=0.011,P=0.027）;AICAR组AMPK和TSC2蛋白表达水平高于模型组（0.71±0.06vs.0.36±0.09,P=0.003;0.80±0.02vs.0.40±0.05,P=0.017）;AICAR组结合水平高于模型组（0.49±0.09vs.0.23±0.03,P=0.002）;AICAR组p-TSC2蛋白水平高于模型组（1.48±0.07vs.0.92±0.07,P=0.029）;AICAR组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1和P62均高于模型组（P＜0.05）。结论：AMPK介导糖尿病大鼠心肌线粒体自噬的机制可能与其对TSC2的磷酸化作用有关。     

慢性缺氧诱导小鼠心肌细胞自噬及其机制

目的 观察慢性缺氧对小鼠心肌细胞自噬水平的影响,并初步探讨AMPKα2敲除对该过程的作用.方法 采用野生型与AMPKα2-/-雄性C57小鼠均分为野生型常氧组、野生型缺氧组、敲除型常氧组和敲除型缺氧组(n=10).常氧组于空气环境中饲养,缺氧组于10％ O2的低氧舱内饲养.4周后野生型小鼠取静脉血标本,测红细胞及血红蛋白水平;取心脏标本用Western blot检测AMPKα2及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与p62的变化,用免疫荧光染色法检测心肌冰冻切片LC3变化.敲除型小鼠取心脏标本用Western blot检测心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值变化.结果 ①野生型小鼠中,与常氧组比较,缺氧组红细胞与血红蛋白水平显著增加[红细胞:(9.33 ±0.15)×1012/L vs(12.78±0.66)×1012/L,P ＜0.05;血红蛋白:(135 ±3)g/L vs (192 ±4)g/L,P＜0.05];②野生型小鼠中,与常氧组相比,缺氧组心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著增加[(0.49 ±0.29) vs(1.70 ±0.24),P＜0.05];p62表达明显降低[(1.32±0.57) vs (0.71 ±0.19),P＜0.05];免疫荧光结果显示,缺氧组心肌组织LC3荧光较常氧组增多;③在常氧条件下,与野生型小鼠比较,AMPKα2-/-小鼠心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低,但差异无统计学意义[(0.78 ±0.08) vs (0.73 ±0.34),P＞0.05];在缺氧条件下,与野生型小鼠比较,AMPKα2-/-小鼠心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低[(2.08±0.72) vs (1.01 ±0.21),P＜0.05];④野生型小鼠中,与常氧组比较,缺氧组AMPKα2蛋白表达水平并无显著增加[(1.14±0.13) vs(1.25±0.19),P＞0.05].结论 慢性缺氧可能通过AMPKα2依赖的途径增强心肌细胞自噬,该自噬可能是心肌细胞对慢性缺氧的适应机制.     

miR-1通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬的影响

目的 探讨miR-1对高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法H9c2细胞随机分为4组。正常组使用普通培养基培养,未转染;诱导组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,未转染;miR-1 NC组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,转染miR-1 NC;miR-1 inhibitor组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,转染miR-1 inhibitor。在加入葡萄糖诱导前48 h,使用Lipofectamine 3000转染试剂盒进行转染。实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测H9c2细胞和高糖诱导的H9c2细胞中miR-1表达水平;CCK-8法检测各组H9c2细胞增殖活性;蛋白免疫印记法（Western blot）检测各组H9c2细胞中Beclin1、p65、PI3K蛋白表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值以及AKT、mTOR蛋白磷酸化水平;生物信息学预测和双萤光素酶验证miR-1和PI3K的靶向关系。结果与正常组相比,诱导组的H9c2细胞中,miR-1表达水平显著升高（P<0.05）,PI3K蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与正常组相比,诱导组H9c2细胞Beclin1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,自噬小体增多,细胞增殖率、p62蛋白表达以及PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平显著降低（P<0.05）;与诱导组和miR-1 NC组相比,miR-1 inhibitor组H9c2细胞miR-1水平、Beclin1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低,自噬小体减少,细胞增殖率、p62蛋白表达以及PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.05）;miR-1和PI3K间存在靶向关系。结论在高糖诱导的H9c2细胞中,miR-1表达水平升高,抑制miR-1,可通过靶向激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬。     

姜黄素对非酒精性脂肪性肝炎肝细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨姜黄素对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）肝细胞凋亡的影响及其相关机制。 方法 将HL-7702细胞分为对照组、模型组和治疗组,其中对照组给予普通培养基培养,模型组培养基内加入1mmol/L的游离脂肪酸（FFA）诱导NASH模型,治疗组在加入FFA的同时给予20μmol/L的姜黄素干预。48小时后收集细胞,检测细胞凋亡率、活性氧（ROS）含量及线粒体膜电位水平。 结果 模型组肝细胞的早期凋亡率及总凋亡率均明显高于对照组[（10.34±0.13）% vs.（0.55±0.08）%,P<0.05; （13.30±0.10）% vs.（2.15±0.91）%,P<0.05],治疗组与模型组相比,肝细胞早期凋亡率及总凋亡率均明显降低[（0.83±0.35）% vs.（10.34±0.13）%,P<0.05;（3.11±1.06）% vs.（13.30±0.10）%;P<0.05];模型组肝细胞内ROS含量明显高于对照组（233.58±8.00 vs. 187.24±10.60,P<0.05）,而线粒体膜电位水平则明显低于对照组（1.08±0.03 vs. 1.25±0.04,P<0.05）;治疗组肝细胞内ROS含量较模型组显著降低（192.57±23.86 vs. 233.58±8.00,P<0.05）,而线粒体膜电位水平则显著升高（1.17±0.04 vs. 1.08±0.03,P<0.05）。 结论 姜黄素可调节NASH肝细胞凋亡,该作用可能与其线粒体保护作用相关。     

胰岛素抵抗大鼠的肝脏中丝氨酸/酪氨酸磷酸化异常与血清TNF-α相关

目的 探讨胰岛素抵抗大鼠胰岛素受体底物-1丝氨酸,酪氨酸磷酸化与肿瘤坏死因子α(TNF-α)的关系.方法 雄性Wistar大鼠30只(体质量80～120 g),随机分为普通饮食组(NC)及高脂饮食组(FH)2组,每组15只.喂养10周,以高胰岛素-正常血糖钳夹技术评估胰岛素抵抗大鼠模型.应用ELISA法检测大鼠血清TNF-α含量,Western Blot法检测肝脏组织中胰岛素受体底物-1丝氨酸磷酸化(IRS-ISer636)及酪氨酸磷酸化(IRS-ITyr456)表达.结果 FH组葡萄糖输注率(GIR)60-120水平明显低于NC组[(1.56±0.43 vs.5.15±0.66)mg/(kg·min),P<0.01];FH组大鼠TNF-α、IRS-ISer636均高于NC组[(15.43±2.16 vs.5.4±2.16)pg/mL,P<0.01;(109.45±13.75 vs.94.23±15.05),P<0.05],IRS-ITyr456水平低于NC组[(111.08±14.28 vs.125.77±14.51),P<0.05].TNF-α水平与IRS-ISer636呈正相关(r=0.503,P=0.024),与IBS-ITyr456呈负相关(r=-0.521,P=0.019).结论 胰岛素抵抗大鼠TNF-α水平与IRS-ITyr456负相关,与IBS-ISer636正相关,提示TNF-α引起胰岛素抵抗机制可能与IBS-1磷酸化异常有关.     

HIF-1α在低氧刺激的气道平滑肌细胞中的表达及意义

目的:观察低氧状态下大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell,ASMC)增殖情况及低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达变化,探讨ASMC低氧反应机制?方法:体外传代(5代)培养大鼠ASMC分3组:常氧状态下培养为正常对照组(A组),低氧状态下培养为单纯低氧组(B组),低氧 + HIF-1α抑制剂2-甲氧雌二醇(2-methoxyestradiol,2ME)为低氧2ME干预组(C组)?甲基甲苯基硫(MTS)法检测细胞增殖,荧光实时定量RT-PCR检测HIF-1α mRNA表达,Western blot检测HIF-1α蛋白表达?结果:①大鼠ASMC增殖B组比A组更加明显(1.123 ± 0.006 vs 0.809 ± 0.003,P < 0.05),C组较B组明显受抑制(1.012 ± 0.005 vs 1.123 ± 0.006,P < 0.05);②HIF-1α mRNA和蛋白表达B组比A组表达明显增加(5.265 ± 0.040 vs 0.449 ± 0.017,P < 0.05和0.905 ± 0.013 vs 0.105 ± 0.008,P < 0.05),C组较B组表达明显减少(1.903 ± 0.044 vs 5.265 ± 0.040,P < 0.05和0.278 ± 0.012 vs 0.905 ± 0.013,P < 0.05)?ASMC增殖与HIF-1α mRNA表达呈正相关(r = 0.850),与HIF-1α蛋白表达呈正相关(r = 0.883)?结论:低氧刺激促进大鼠ASMC增殖,可能是由HIF-1α所介导?     

在模拟低氧环境下心肌细胞HIF-1与CT-1的相互作用

目的:研究低氧环境下大鼠心肌细胞系H9C2细胞中HIF-1与CT-1的相互作用。方法:氯化钴(CoCl2)模拟低氧环境。采用CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率。化学合成siRNA片段,并通过li-pofectamine 2 000转染大鼠心肌细胞系H9C2。采用Real-time PCR和Western-blot技术分别检测HIF-1α和CT-1的mRNA和蛋白质水平。结果:低氧处理48h后,干扰组(转染针对HIF-1α的siR-NA的H9C2)中CT-1mRNA和蛋白水平较对照组(转染无义干扰片段的H9C2)明显减少(P<0.05)。低氧3d和4d后,加入CT-1组的心肌细胞存活率较对照组高(P<0.05),HIF-1mRNA表达水平与对照组无显著差异(P>0.05),HIF-1蛋白水平增加。结论:在培养心肌细胞中模拟低氧环境,HIF-1表达减少伴随着CT-1表达减少,加入CT-1后,HIF-1蛋白表达也增加,HIF-1与CT-1相互作用。     

Beclin-1、P62、LC3B在肺炎链球菌感染小鼠肺部中的表达变化

目的：探讨自噬相关蛋白Beclin-1、P62及微管相关蛋白轻链3B（microtubule-associated protein light chain 3B,LC3B）在肺炎链球菌感染小鼠肺部中的表达及意义。方法：生长至对数生长期的肺炎链球菌标准株D39用无菌PBS调节浓度为1.5×109 CFU/mL,采用鼻滴的方法对50只SPF级雌性Balb/c鼠（6~8 周,16~20 g）进行处理,分别在感染后0、6、12、24、48 h收集Balb/c小鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）及肺组织,瑞氏-吉姆萨染色进行BALF细胞计数,HE染色观察肺组织病理学改变,Western blot 检测自噬相关蛋白Beclin-1、P62、LC3B在肺组织中的表达水平,免疫荧光观察LC3B在肺组织中的表达情况。结果：HE染色显示,小鼠鼻饲肺炎链球菌后12 h及24 h后肺组织内出现大量炎症细胞浸润。BALF中总细胞数量及中性粒细胞数量于感染后6 h开始增高[（1.280±0.506） vs. （6.272±1.312）,P=0.000;（0.000±0.000） vs. （3.456±1.308）,P=0.000],在12 h时达到高峰[（1.280±0.506） vs. （19.456±0.997）,P=0.000;（0.000±0.000） vs. （15.040±1.012）,P=0.000],48 h后基本恢复正常水平[（1.280±0.506） vs. （3.520±0.933）,P=0.005;（0.000±0.000） vs. （0.128±0.175）,P=0.835]。Western blot结果显示：自噬相关蛋白Beclin-1于感染后6 h开始增加[（0.626±0.078） vs. （0.921±0.093）,P=0.002],48 h时达到最高水平[（0.626±0.078） vs. （1.884±0.158）,P=0.000];自噬相关蛋白P62于感染后6 h开始减少[（2.915±0.094） vs. （2.275±0.269）,P=0.000],48 h时降低至最低水平[（2.915±0.094） vs. （1.178±0.142）,P=0.000];自噬相关蛋白LC3B于感染后12 h开始升高[（0.747±0.197） vs. （1.429±0.318）,P=0.006],24 h时达到高峰[（0.747±0.197） vs. （2.002±0.451）,P=0.000],48 h后降低[（0.747±0.197） vs. （1.563±0.501）,P=0.002]。免疫荧光显示：小鼠感染后12 h与24 h,肺组织中LC3B蛋白表达水平增加。结论：肺炎链球菌感染小鼠肺部后激活自噬的发生,且自噬在免疫调节过程中发挥着重要作用。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路研究南葶苈子水提液对心衰大鼠心室重构的影响

目的：观察南葶苈子水提液对压力后负荷性 心衰大鼠心室重构的影响并探索PI3K/Akt/mTOR信号通路在其中的作用。方法：雄性SD大鼠15只,随机分为正常组、模型组、南葶苈子组。4周后处死大鼠,测定各组大鼠心室肥厚指数;HE染色法和电镜观察心室组织病理变化;Western blot检测各组左室心肌组织Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 3、P-Akt、Akt、P-mTOR、mTOR蛋白表达。结果：南葶苈子组心室肥厚指数为0.0033±0.0002,较模型组0.0037±0.0001降低（P＜0.05）;HE染色和电镜显示南葶苈子组心肌纤维排列不规则和心肌细胞肥厚程度较模型组减轻;Western blot证实,南葶苈子组Bcl-2/Bax蛋白表达灰度值比值0.75±0.20,较模型组0.54±0.18上调（P＜0.05）;Caspase-3/GAPDH蛋白表达灰度值比值1.31±0.22,较模型组1.62±0.26下调（P＜0.05）;而P-Akt/Akt和P-mTOR/mTOR蛋白表达灰度值比值分别为1.50±0.18、1.36±0.32,较模型组1.18±0.21、1.16±0.12上调（P＜0.05）。结论：南葶苈子水提液具有改善压力后负荷性心衰大鼠心室重构的作用,其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制心肌细胞凋亡有关。     

黄芪甲苷对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其自噬机制研究

  目的  研究黄芪甲苷（AS-Ⅳ）对新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的保护作用,并探讨其潜在的作用机制。  方法  提取并培养新生大鼠心肌细胞,随机分为6组:对照组,H/R组,H/R+低、中、高浓度AS-Ⅳ（AS-Ⅳ终浓度0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L）组,和H/R+高浓度AS-Ⅳ（10 μmol/L）+AKT抑制剂（5 μmol/L）组。H/R前分组预处理心肌细胞（对照组和H/R组不进行预处理）48 h后,除对照组外,其余各组心肌细胞建立细胞H/R损伤模型。MTT法检测各组心肌细胞活力,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测自噬基因LC3-Ⅱ、p62的表达,Western blot 检测LC3-Ⅱ、P62蛋白和磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（PI3K/AKT）通路蛋白〔包括AKT、磷酸化（p-）AKT（p-AKT）、p-雷帕霉素（p-mTOR）〕和自噬启动因子未配位的51样激酶1（ULK1）的表达,免疫荧光染色检测心肌细胞自噬体P62的表达。  结果  AS-Ⅳ在本研究低、中、高浓度范围内以浓度依赖的方式改善H/R损伤下心肌细胞活力,并抑制H/R损伤后的心肌细胞自噬基因LC3-Ⅱ和p62 mRNA和蛋白的表达,抑制ULK1蛋白的表达（P<0.05）,添加AKT抑制剂后,AS-Ⅳ的以上作用被部分抑制（P<0.05）。AS-Ⅳ对AKT和mTOR蛋白的表达没有影响（P>0.05）,但可以促进AKT和mTOR的磷酸化（P<0.05）。免疫荧光染色检测结果显示,高浓度AS-Ⅳ可以逆转H/R损伤诱导的自噬体P62的表达。  结论  AS-Ⅳ对H/R损伤心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能是通过激活PI3K/AKT途径中的mTOR信号降低自噬水平,从而预防H/R损伤。     

大蒜素对大鼠肾间质纤维化的干预作用及对TGF-β1/Smads信号通路的影响[*]

目的 观察大蒜素对大鼠肾间质纤维化的干预作用，探究其作用与TGF-β1/Smads信号通路的关系。方法 将SD雄性大鼠随机分为3组，采用单侧输尿管结扎术（UUO）建立肾间质纤维化模型，造模后24h予大蒜素组大鼠大蒜素60mg/(kg?d)灌胃，予假手术组和模型组等量生理盐水灌胃。造模后第15日检测3组大鼠的血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）及24h尿蛋白（U-TP），并处死大鼠，留取肾组织，包埋切片后行Masson染色，观察肾组织的病理结构，运用免疫组化法检测大鼠肾组织中TGF-β1及α-SMA的表达，Western Blot法测定肾组织中p-Smad2和p-Smad3的表达。结果 与模型组相比，大蒜素组大鼠的体质量显著增高［（298.52±14.82）g比（275.53±23.92）g，P<0.05］，肾脏指数显著下降［（0.53±0.15）%比（0.84±0.25）%，P<0.01］，肾脏组织病变程度有所改善，SCr、BUN及U-TP均显著低于模型组［SCr：（48.54±5.03）μmol/L比（55.10±7.50）μmol/L，BUN：（5.56±0.43）mmol/L比（6.25±0.51）mmol/L，U-TP：（1009.87±105.02）mg/L比（1300.57±229.65）mg/L ，P<0.05］，肾组织中TGF-β1、α-SMA、p-Smad2和p-Smad3蛋白的表达均有下调［TGF-β1：（0.227±0.011）比（0.282±0.020），α-SMA：（0.326±0.009）比（0.471±0.012），p-Smad2：（0.195±0.011）比（0.279±0.016），p-Smad3：（0.220±0.020）比（0.699±0.076），P<0.01］。结论 大蒜素能够通过调节TGF-β1/Smads信号通路，从而改善大鼠的肾间质纤维化程度，对肾功能起到一定的保护作用。     

Vaspin对棕榈酸诱导的INS-1细胞自噬水平的影响

目的：研究脂肪细胞因子Vaspin对棕榈酸诱导的INS-1细胞自噬水平的影响。方法：培养INS-1细胞,分为正常组：用普通培养基培养24h;棕榈酸（palmiticacid,PA）组：以0.5mmol/LPA培养24h;PA+Vaspin组：先加入320ng/mLVaspin预培养2h,再以0.5mmol/LPA+320ng/mLVaspin共培养24h;PA+Vaspin+雷帕霉素（rapamycin）组：先以50nmol/LRapamycin预培养2h,再以0.5mmol/LPA+320ng/mLVaspin共培养24h;PA+Vaspin+3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）组：先以1mmol/L3-MA预培养2h,再以0.5mmol/LPA+320ng/mLVaspin共培养24h。葡萄糖（3.3mmol/L和16.7mmol/L）刺激胰岛素分泌实验检测各组胰岛素分泌水平,Westernblot检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammaliantargetofrapamycin,mTOR）、p-mTOR、Beclin-1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及P62蛋白水平,mRFP-GFP-LC3检测自噬流水平,流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果：与正常组相比,PA组INS-1细胞上清液中胰岛素分泌水平在3.3mmol/L葡萄糖和16.7mmol/L葡萄糖刺激下均降低[（1.02±0.08）ng/mLvs.（0.54±0.06）ng/mL,P=0.000;（1.15±0.13）ng/mLvs.（0.71±0.05）ng/mL,P=0.000）],PA+Vaspin组较PA组升高[（0.76±0.03）ng/mLvs.（0.54±0.06）ng/mL,P=0.001;（0.91±0.04）ng/mLvs.（0.71±0.05）ng/mL,P=0.011）];与正常组相比,PA组INS-1细胞p-mTOR与mTOR蛋白比值低（2.04±0.14vs.1.19±0.09,P=0.000）,PA+Vaspin组p-mTOR与mTOR蛋白比值较PA组高（1.51±0.05vs.1.19±0.09,P=0.005）;同时,PA组自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与正常组相比明显增加（0.81±0.07vs.0.65±0.04,P=0.005;2.35±0.25vs.1.16±0.11,P=0.000）,P62蛋白水平降低（1.04±0.19vs.0.60±0.08,P=0.000）;PA+Vaspin组Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平较PA组低（0.58±0.04vs.0.81±0.07,P=0.001;1.95±0.08vs.2.35±0.25,P=0.007）,P62蛋白增加（0.82±0.03vs.0.60±0.08,P=0.032）;PA组自噬溶酶体数量较正常组多（8.33±1.53vs.0.33±0.58,P=0.000）,Vaspin干预后降低（3.67±1.53vs.8.33±1.53,P=0.001）;同时,PA干预INS-1细胞24h后细胞凋亡明显增加（7.91±0.50vs.22.15±2.05,P=0.000）,PA+Vaspin组较PA组细胞凋亡减少（13.23±1.97vs.22.15±2.05,P=0.000）。结论：Vaspin能够改善棕榈酸诱导的INS-1细胞过度自噬和细胞凋亡,改善胰岛β细胞分泌功能。     

七氟烷预处理对缺氧/复氧损伤的心肌细胞H9c2 LC3蛋白表达的影响

目的观察七氟烷预处理对缺氧/复氧（H/R）损伤的H9c2大鼠心肌细胞自噬相关蛋白LC3表达的影响,探讨自噬在七氟烷预处理延迟性保护中的作用。方法 H9c2心肌细胞随机分为5组：空白对照组（CON）;缺氧/复氧组H/R（缺氧2 h,复氧1 h）;七氟烷预处理组（SEVO）予2.5%七氟烷预处理1 h,24 h后进行H/R;3-MA＋SEVO组,七氟烷预处理前15 min在培养液内加入3-MA（10 mmol/L）,24 h后进行H/R;3-MA组,即在培养液内加入3-MA（10 mmol/L）,25 h后进行H/R。取复氧后心肌细胞,MTT法检测各组H9c2心肌细胞存活率,Western blot法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达。结果与CON组相比H/R组和SEVO组细胞存活率均降低（均P〈0.05）;与H/R组相比SEVO组、3-MA组和3-MA＋SEVO组细胞存活率均增高（均P〈0.05）。Western blot结果显示,与CON组相比SEVO组、H/R组自噬蛋白LC3-Ⅱ表达均上调（均P〈0.05）,与H/R组相比SEVO组LC3-Ⅱ蛋白表达均下调（均P〈0.05）,而3-MA组和3-MA＋SEVO组表达均显著下调（均P〈0.01）。结论七氟烷预处理对H/R损伤H9c2心肌细胞具有延迟性保护作用,自噬可能参与了七氟烷预处理的延迟性保护机制。     

姜黄素通过提高Rab家族蛋白的表达增强N2a/APP695swe细胞的自噬作用

目的：研究姜黄素（curcumin）对N2a/APP695swe细胞中自噬和Rab家族蛋白的影响,并且探讨姜黄素调节N2a/APP695swe细胞自噬的可能机制。方法：采用N2a/WT和N2a/APP695swe细胞,并将其分为4个组：N2a/WT组（WT组）、N2a/APP695swe组（APP组）、DMSO溶剂对照组（DMSO组,5 μmol/L,24 h）、curcumin处理组（curcumin组,5 μmol/L,24 h）。Western blot分别检测各组自噬标志性蛋白LC3BⅡ和底物蛋白SQSTM1的表达,以及Rab家族蛋白Rab1、Rab5、Rab7、Rab9、Rab24和Rab33B的表达;共聚焦显微镜观察免疫荧光进一步验证各组LC3BⅡ与SQSTM1蛋白的表达情况。结果：Western blot结果表示,curcumin组LC3BⅡ蛋白表达量明显高于APP组和DMSO组（0.54±0.02 vs. 0.29±0.09,0.54±0.02 vs. 0.29±0.09,P=0.000）;同时,curcumin组SQSTM1蛋白表达量则明显低于APP组（0.67±0.01 vs. 1.02±0.02,P=0.000）。共聚焦显微镜观察免疫荧光实验再次验证了LC3B和SQSTM1蛋白的这种表达趋势。Western blot进一步检测发现,与APP组相比,curcumin组Rab家族蛋白Rab1、Rab5、Rab7和Rab33B的蛋白表达量均明显增加（1.00±0.02 vs. 0.63±0.02,P=0.000;0.94±0.03 vs. 0.79±0.03,P=0.000;0.75±0.00 vs. 0.56±0.01,P=0.000;0.88±0.04 vs. 0.59±0.03,P=0.000）,而Rab9和Rab24的改变差异无统计学意义（1.04±0.02 vs. 1.06±0.02,P=0.578;0.79±0.00 vs. 0.80±0.00,P=0.067）。结论：姜黄素提高N2a/APP695swe细胞的自噬水平,其机制可能与增强Rab家族蛋白Rab1、Rab5、Rab7和Rab33B的表达有关。     

缺氧诱导因子-1α基因沉默逆转卵巢癌细胞SKOV3/DDP耐药性的机制

目的：观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)沉默后人卵巢癌细胞顺铂耐药株SKOV3/DDP 的HIF-1α、多药耐药基因1 （MDR1）和B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）mRNA及蛋白产物的表达,探讨HIF-1α逆转SKOV3/DDP耐药性的机制。方法：体外培养卵巢癌细胞株SKOV3（敏感组）及其顺铂耐药株SKOV3/DDP（耐药组）,部分耐药株转染HIF-1α干扰质粒 pshRNA-HIF（转染组）及对照质粒pshRNA-Control（对照组）。RT-PCR法检测各组细胞HIF-1α、MDR1和Bcl-2 mRNA表达量;Western blotting和免疫组织化学法测定HIF-1α、P-gp（MDR1基因编码蛋白）和Bcl-2蛋白的表达量。结果：RT-PCR检测,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2 mRNA表达量明显低于耐药组（P<0.05)。Western blotting检测,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2蛋白表达量明显低于耐药组(P<0.05) ;免疫组织化学法,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2蛋白表达量明显低于耐药组(P<0.05);MDR1、Bcl-2 mRNA及蛋白在敏感组与转染组的表达量差异无统计学意义（P>0.05）。HIF-1α表达与MDR1、Bcl-2 mRNA表达量均呈正相关关系（r=0.908,P=0;r=0.916,P=0);HIF-1α表达与P-gp、Bcl-2蛋白表达呈正相关关系(r=0.773,P=0.003;r=0.862,P=0）。结论：HIF-1α沉默逆转人卵巢癌细胞顺铂耐药株SOV3/DDP耐药性可能与MDR1和Bcl-2表达降低有关联。
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针刺对脑出血大鼠自噬相关蛋白p62、Beclin-1表达的影响

目的：观察针刺“百会”透“曲鬓”穴对脑出血（ICH）大鼠自噬相关蛋白的影响,探究针刺促进ICH后大鼠神经功能恢复的作用机制。方法：将80只雄性SD大鼠（250-300 g）随机分成4组,假手术组、模型组（50 μL自体血注入尾状核）、非穴位组（平行中线距“百会”穴1 cm 处）、针刺组（患侧“百会”透“曲鬓”）,每个亚组20只。于行为学评分（前肢放置试验、拐角试验）结束后取患侧出血半暗带区脑组织,用免疫组化检测p62蛋白表达,用Western blot检测p62、Beclin-1表达含量变化。结果：在ICH后7天模型组出现明显神经功能缺损体征（均P＜0.01,转角试验（%）：28±8.37 vs. 60±15.81;前肢放置试验（%）：36±8.94 vs. 88±8.37）,并上调脑组织p62、Beclin-1蛋白表达含量（均P＜0.01,p62：0.85±0.07 vs. 0.37±0.03;Beclin-1：0.57±0.05 vs. 0.28±0.04）;而针刺干预能够明显提高ICH大鼠行为学评分（均P<0.01 vs. 模型组/非穴位组,44±11.41 vs. 28±8.37 or 22±8.37; 64±11.40 vs. 36±8.94 or 38±8.37）,并下调ICH大鼠脑组织p62,上调Beclin-1蛋白表达含量（均P＜0.01 vs. 模型组/非穴位组,0.61±0.05 vs. 0.85±0.07 or 0.82±0.06; 0.82±0.07 vs. 0.57±0.05 or 0.61±0.08）。结论：针刺能下调ICH大鼠脑组织p62蛋白表达,上调Beclin-1蛋白表达,进而改善大鼠神经功能缺损体征。     

原发性高血压患者血清同型半胱氨酸水平对血压变异性及左心室肥厚的影响

[摘要]　目的　探讨原发性高血压患者同型半胱氨酸（Hcy）血症对血压变异性及左心室肥厚的影响。　方法　入选高血压患者148例,根据Hcy水平,分为H型高血压组（H组,Hcy≥15 mmol/L）及非H型高血压组（非H组,Hcy<15 mmol/L）,两组均查动态血压,记录血压变异性;彩色多普勒超声测定左心室形态结构,并计算左心室质量及左心室质量指数。比较两组患者血压变异性及左心室肥厚指标。　结果　H组患者24 h收缩压、舒张压变异率、日间收缩压、舒张压变异率、夜间收缩压、舒张压变异率均高于非H组[分别为（16.4±6.6）vs（13.6±7.3）、（10.3±5.8）vs.（9.7±5.4）、（15.7±5.6）vs.（12.6±4.9）、（9.6±3.7）vs.（8.8±3.2）、（12.4±4.8）vs.（11.5±3.8）、（9.1±3.3）vs.（8.4±2.7）mmHg],差异均有显著性意义,P<0.05;H组患者室间隔厚度、 左室后壁厚度、 舒张末期左室内径、收缩末期左室内径、左心室质量、左心室质量指数均高于非H组[分别为（11.3±1.4）vs.（10.5±1.5）、（11.5±1.3）vs.（10.1±1.3）、（47.5±3.3）vs.（46.4±4.0）、（27.1±3.8）vs.（26.5±3.4）mm,（190.7±30.2）vs.（174.5±33.8）g,（105.1±9.8）vs.（93.6±11.5）g/m2],P<0.05。　结论　高Hcy血症是高血压患者血压变异性增高及左心室肥厚的危险因素。