rhG—CSF改变大鼠局灶性脑缺血预后的初步研究

目的　 研究重组人粒细胞集落刺激因子 (recombinanthumangranulocytecolony stimulatingfactor,rhG CSF)对大鼠局灶性脑缺血预后的影响以及与微管相关蛋白 (macrotubule associatedprotein 2 ,MAP 2 )mRNA表达的关系。 方法　 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,观察rhG CSF对死亡率和神经功能评分的影响。用半定量逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,测定rhG CSF用药组和非用药组的MAP 2mRNA表达水平的改变。 结果　 比较rhG CSF治疗组与非用药组 :治疗组大鼠 ,局灶性脑缺血再灌注后死亡率显著降低 ,神经功能评分明显改善。治疗组缺血侧脑组织的MAP 2mRNA表达明显提前恢复正常。结论　一定剂量的rhG CSF可以减轻脑缺血再灌注损伤 ,保护神经元 ,改善功能预后。     

粒细胞集落刺激因子对大鼠局灶性脑缺血的疗效及其机制分析

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠局灶性脑缺血的疗效及其相关机制。方法 采用改良线栓法建立永久性局灶性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠12只,并随机分为2组,G-CSF组术后2 h用G-CSF行皮下注射干预,对照组行PBS干预,采用t检验比较组间术后24 h脑梗死灶的体积差异(TTC染色法)和炎症及趋化因子TNF-α、TGF-β、IL-10、MCP-1 mRNA水平(RT-PCR法)和CD11b分子的表达(免疫组织化学染色法)水平差异。结果 G-CSF组比对照组梗死体积减小19.6%(P=0.001); G-CSF组MCP-1mRNA水平较对照组减少约22%(P=0.03),G-CSF组IL-10 mRNA水平较对照组增高47%(P=0.01),而TGF-βmRNA则较对照组增高约1倍(P<0.01),但TNF-αmRNA水平在2组间无明显差异(P=0.88); G-CSF组与对照组缺血区域的CD11b浸润数目无明显差异(P=0.61)。结论 G-CSF能显著减少局灶性脑缺血的梗死体积,机制可能涉及TGF-β、IL-10、MCP-1等一系列重要的炎症和趋化因子。     

粒细胞集落刺激因子对大鼠局灶性脑缺血的治疗作用及研究

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠局灶性脑缺血的治疗作用.方法 在激光脑血流监测下,采用线栓法制成大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型,在梗死前3d开始皮下注射G-CSF,持续注射8d,对照组注射同样的生理盐水,并且在手术结束后4h开始监测神经功能评分,直至术后第8天.术后第8天及第22天利用图像分析仪进行梗死面积的测定.结果 神经功能缺损评分,病理上梗死面积用药组及对照组都有明显差异.结论 G-CSF可减轻大鼠脑梗死程度,减少脑梗死体积,促进神经功能恢复.     

重组人粒细胞集落刺激因子在大鼠局灶性脑缺血中促进神经细胞分化作用的实验研究

目的 探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在大鼠局灶性脑缺血中促进神经细胞分化作用.方法 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)模型,于再灌注不同时间点对治疗组和对照组进行神经功能缺损评分,并用免疫组织化学方法测定5-溴脱氧尿核苷(Brdu)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性核蛋白(NeuN)的表达.结果 与对照组相比,rhG-CSF治疗组大鼠的神经功能缺损评分明显降低,治疗组缺血区及周边的Brdu、GFAP、NeuN表达较对照组增多.结论 脑缺血再灌注后,rhG-CSF可促进神经细胞分化,增加神经细胞修复,具有神经保护作用.

Abstract：

Objective To investigate recombinant human granulocyte colony-stimulating factor ( rhG-CSF) induce neuronal differentiation in focal cerebral ischemia rats. Methods A model of focal cerebral ischemia /reperfusion in rats was performed with the intraluminal filament occlusion. To evaluate neurological severity score of rhG-CSF treated group and contrast group in different reperfusion time,and using immunohistochemistry to measure the expression of 5-bromodeoxyuri-dine( Brdu) ,glial fibrilary acidic protein( GFAP) ,Neuronal Nuclei( NeuN) . Results Compare to contrast group, rhG-CSF significantly reduced the neurological severity scores and increased the expression of Brdu, GFAP, NeuN in peri-infarcted zones. Conclusion The rhG-CSF treatment can induce neuronal differentiation, can enhance the repairment of neuronal cells and have neuroprotective effects.     

大鼠局灶性脑缺血模型的建立

急性脑缺血溶栓研究已有20余年的历史,曾因导致出血频繁而停用。随着新型溶栓药物的出现,其安全性逐渐提高,引起人们对溶栓疗法的重新认识。目前适用于溶栓研究的局灶性脑缺血动物模型均有不足之处。我们采用并改良Overgaard K[1]等的颈内动脉注入自体血凝块的方法,制作大鼠局灶性脑缺血模型,此模型具有与人类脑缺血极其相似的特点,最适用于溶栓研究,现报道如下。     

兔局灶性脑缺血模型研究

在局灶性脑缺血模型研究中，人们相继制作了灵长类、狗、猫、鼠等多种动物的局灶性脑缺血模型，但这些动物有的价格昂贵，有的太小，使研究工作受到一定限制。兔作为实验动物日渐受到重视，因其具有如下优点：（１）兔性情温驯，易于饲养，便于操作。其体重相对较大，复杂...     

rhG-CSF增加糖尿病并发脑梗死大鼠神经细胞增殖的实验研究

目的研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对局灶性脑缺血糖尿病大鼠的神经功能是否得到改善,并观察对神经细胞的再生的影响。方法线栓法制作糖尿病大鼠大脑中动脉栓塞模型,rhG-CSF干预组连续皮下注射rhG-CSF 50μg/(kg.d),进行神经功能缺损评分,采用免疫组化方法观察BrdU蛋白表达。结果rhG-CSF干预组神经功能缺损评分明显低于对照组(P<0.01)。结论rhG-CSF可增加糖尿病脑缺血后缺血周边BrdU蛋白表达,促进脑组织的再生修复。     

细胞周期蛋白在局灶性脑缺血中作用机制研究的新进展

局灶性脑缺血对脑神经元损伤的机制是多种因素参与的过程，其中细胞周期相关蛋白有重要作用。研究发现在局灶性脑缺血模型中，许多细胞周期相关蛋白表达增加，且多分布在半暗带。多数学者倾向认为细胞周期相关蛋白参与细胞凋亡过程，并在此过程中起到重要的作用。例如Timsit等认为脑缺血后半暗带神经元内Cyclin D1和CDK4的表达是评估缺血神经元是否再次进入细胞周期的关键标志。本文就目前细胞周期相关蛋白在局灶性脑缺血损伤机制中的研究进展进行综述。     

大鼠局灶性脑缺血后脑内HO-2蛋白的表达

目的 :研究局灶性脑缺血时脑内血红素氧合酶 2 (HO 2 )的表达。方法 :在大鼠大脑中动脉阻塞致脑缺血的不同时间点应用免疫组化、病理学及图像分析检测HO 2的表达。结果 :正常大鼠及实验大鼠的梗死侧与非梗死侧皮质、丘脑基底节区和海马齿状回均有HO 2阳性神经元。梗死灶内无表达。梗死后各时间段 ,HO 2阳性神经元的数量无明显变化 (P >0 0 5) ,而图像分析显示1 2～ 2 4h时达最高峰 (P <0 0 1 )。结论 :脑缺血时脑内神经元有HO 2蛋白阳性表达 ,其对脑保护作用的机制有待进一步研究     

栓线法大鼠局灶性脑缺血模型的研究

采用颈部旁侧手术入路，结扎右侧颈总动脉、颈外动脉及其分支后颈内动脉栓线法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌流损伤模型。闭塞成功率９４．１％，动物偏瘫症状评分在缺血２ｈ再灌流３ｄ后趋于稳定，病理改变以尾壳核损害最重。再灌流７ｄ脑梗塞体积为９７．８±９．４ｍｍ３，动物死亡率５９．４％。缺血２ｈ后再灌流先出现过渡灌注，而后呈持续性低灌注。本文模型勿需开颅，缺血效果可靠，对局灶性脑缺血的研究具有实用价值。     

人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)治疗急性脑梗死的短期评估

目的通过随机、安慰剂对照的临床研究,对人重组粒细胞集落刺激因子(rhG—CSF)治疗急性脑梗死的有效性及安全性进行客观评价。方法将50例发病1周的急性脑梗死患者随机分为rhG-CSF治疗组和对照组。其中rhG—CSF治疗组为25例,给予rhG—CSF皮下注射2μg／kg,连续使用5d。对照组25例,按同样方式给予安慰剂。评定的终点指标包括急性脑梗死治疗后第10天、第20天的神经功能缺损评分NIHSS评分以及副作用。结果经治疗后,rhG-CSF治疗组第20天NIHSS评分与治疗前有显著性差异(P=0．004,P<0．01)、第20天治疗组和对照组两组间差异有显著性(P=0．007,P<0．01)。结论 rhG—CSF治疗急性脑梗死在短时间内观察有效,未见不良反应。其在适应证、治疗剂量及用药时限等方面与临床疗效的关系有待进一步研究。     

重组人粒细胞集落刺激因子对局灶性脑缺血大鼠的抗凋亡作用

The neuroprotective effects of granulocyte colony-stimulating factor in cerebral ischemia/reperfusion injury are currently contentious. The present study examined the effects of subcutaneous injection of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor (50 μg/kg) over 5 days in a model of cerebral ischemia/reperfusion with intraluminal filament occlusion in rats. The results indicated that recombinant human granulocyte colony-stimulating factor reduced brain infarct volume following cerebral ischemia/reperfusion injury in rats, down-regulated the expression of caspase-3 mRNA (a key protease for apoptosis in the cerebral ischemia zone), lowered the rate of neuronal apoptosis in the cerebral ischemia zone, and notably ameliorated neurological function. These results indicate that recombinant human granulocyte colony-stimulating factor has anti-apoptotic effects on neurons following focal cerebral ischemia/reperfusion injury, and exerts neuroprotective effects.     

rhG—CSF增加实验性脑缺血周围区的nestin蛋白表达

目的研究重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulatingfactor,rhG-CSF)对大鼠局灶性脑缺血的神经元保护作用.方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于再灌注不同时间点对治疗组和对照组进行神经缺损评分(NSS);并用免疫组织化学方法测定神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达.结果与对照组相比,rhG-CSF治疗组大鼠的神经缺损评分明显降低(P＜0.05);治疗组脑梗死区周围的nestin表达较对照组增多.结论脑缺血再灌注后,一定剂量rhG-CSF可能通过提高nestin的表达,增加神经细胞的修复,改善脑卒中的预后.     

经鼻导入rhG-CSF对脑梗死大鼠皮层FasL和HO-1表达的影响

目的 探讨经鼻靶向中枢导入重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对脑梗死大鼠皮层Fas配体(FasL)和血红素氧合酶-1(HO-1)表达的影响. 方法将60只大鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、脑梗死组、脑梗死+皮下注射rhG-CSF组、脑梗死+经鼻导入生理盐水组、脑梗死+经鼻导入rhG-CSF组.线栓法制作大鼠可逆性大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,2 h后再灌注.于MCAO模型制作成功后1 d、3 d制备脑组织冠状冰冻切片,用免疫荧光染色检测FasL和HO-1在缺血半暗带皮层的表达,激光共聚焦显微镜采集图像并计数阳性细胞数. 结果正常组和假手术组大鼠脑组织中见极少量FasL和HO-1阳性细胞,两组比较差异无统计学意义(P>0.05).脑梗死组大鼠FasL和HO-1阳性细胞数明显增加(1 d时较3 d时高),表达区域主要为缺血半暗带皮层,与脑梗死+经鼻导入生理盐水组比较差异无统计学意义(P>0.05).经鼻给予rhG-CSF治疗后脑梗死大鼠脑组织内FasL阳性细胞表达下降,HO-1阳性细胞表达进一步上调,与脑梗死+皮下注射rhG-CSF组大鼠比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论经鼻靶向中枢导入rhG-CSF可以通过降低FasL、上调HO-1表达抑制脑梗死大鼠缺血半暗带皮层神经元凋亡,参与脑保护机制.     

重组人粒细胞集落刺激因子对脑出血大鼠神经功能的影响

目的 探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对脑出血大鼠神经功能的影响.方法 将48只SD大鼠按随机数字表法分为模型组和rhG-CSF治疗组,均应用大鼠脑立体定位仪注射自体不凝血法制作脑出血模型,其中rhG-CSF治疗组于造模后1h开始腹腔注射rhG-CSF[60μg/(kg· d)],模型组注射等量生理盐水.造模后第7天及第14天对2组大鼠分别进行神经功能评分,流式细胞仪检测外周血CD34+细胞的含量,免疫组化染色观察脑出血灶周围组织微管相关蛋白2 (MAP-2)的表达. 结果 rhG-CSF治疗组第7天及第14天的神经功能评分(0.407±0.057,0.649±0.014)、外周血CD34+细胞含量(0.381％±0.054％,0.205％±0.088％)及MAP-2表达(0.205±0.088,0.281±0.054)均明显高于模型组(0.168±0.066,0.326±0.047; 0.074％±0.028％,0.030％±0.057％;0.080±0.017,0.124±0.028),差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 rhG-CSF可促进脑出血区神经细胞的增生和修复,对出血后脑组织具有保护作用,从而改善脑出血后神经功能.     

经鼻导入rhG-CSF对脑梗死大鼠皮层FasL和HO-1表达的影响

目的 探讨经鼻靶向中枢导入重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对脑梗死大鼠皮层Fas配体(FasL)和血红素氧合酶-1(HO-1)表达的影响. 方法将60只大鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、脑梗死组、脑梗死+皮下注射rhG-CSF组、脑梗死+经鼻导入生理盐水组、脑梗死+经鼻导入rhG-CSF组.线栓法制作大鼠可逆性大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,2 h后再灌注.于MCAO模型制作成功后1 d、3 d制备脑组织冠状冰冻切片,用免疫荧光染色检测FasL和HO-1在缺血半暗带皮层的表达,激光共聚焦显微镜采集图像并计数阳性细胞数. 结果正常组和假手术组大鼠脑组织中见极少量FasL和HO-1阳性细胞,两组比较差异无统计学意义(P>0.05).脑梗死组大鼠FasL和HO-1阳性细胞数明显增加(1 d时较3 d时高),表达区域主要为缺血半暗带皮层,与脑梗死+经鼻导入生理盐水组比较差异无统计学意义(P>0.05).经鼻给予rhG-CSF治疗后脑梗死大鼠脑组织内FasL阳性细胞表达下降,HO-1阳性细胞表达进一步上调,与脑梗死+皮下注射rhG-CSF组大鼠比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论经鼻靶向中枢导入rhG-CSF可以通过降低FasL、上调HO-1表达抑制脑梗死大鼠缺血半暗带皮层神经元凋亡,参与脑保护机制.