血管紧张素Ⅱ对大鼠肾入球小动脉细胞内钙离子浓度的影响及Losartan的拮抗作用

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肾小球入球小动脉细胞内钙离子浓度([Ca²⁺]i)的影响与高血压肾小动脉重建的关系及Losartan的治疗作用。方法 细胞培养：大鼠肾小球入球小动脉细胞随机分为4组。对照组：不加AngⅡ处理;AngⅡ组：加入终浓度为0.1 μmol·L^-1的AngⅡ;Losartan组：加入终浓度为50 μmol·L^-1的Losartan;AngⅡ+Losartan组：同时加入Losartan 50 μmol·L^-1和AngⅡ0.1 μmol·L^-1。负载后上机检测[Ca²⁺]i。结果 细胞培养显示AngⅡ引起了细胞收缩变化,表现为胞突变细变短,胞突回缩,胞体变圆,细胞长度与直径均明显缩小。Losartan处理组较AngⅡ组细胞形态变化减轻且Losartan对AngⅡ增高RASMCs内[Ca²⁺]i有明显抑制作用。结论 AngⅡ可引起肾小球入球小动脉细胞内[Ca²⁺]i的上升,导致细胞收缩,因此Ca²⁺超载可能是肾素-血管紧张素系统起作用的重要环节。Losartan可抑制细胞内Ca²⁺超载。     

川芎嗪甲酸对平滑肌细胞游离钙浓度的影响

研究川芎嗪代谢产物川芎嗪甲酸（CTPZ）对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞（PCSMC）胞质内游离钙离子浓度的影响。方法：用新型Ca^2＋荧光染色剂Fluo-3／AM负载大鼠PCSMC,细胞分为氯化钾（KCl）和去甲肾上腺素（NE）作用组,应用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）实时测定胞质内[Ca^2＋]的变化,分别观察不同浓度的CTPZ对高钾和NE诱导胞质内钙浓度升高的影响,并与母药川芎嗪作用相比。结果：静息状态下,CTPZ对大鼠PCSMC胞质内[Ca^2＋]无明显影响。1,10,100μmol·L^-1 CTPZ能显著抑制高钾诱发的细胞内的钙浓度升高的影响,抑制率分别为（39．84-4．3）％,（49．2±3．6）％,（58．2±3．9）％。也能抑制1μmol·L^-1 NE诱发钙库释放的细胞内[Ca^2＋]升高,抑制率分别为（20．8±3．9）％,（32．3±2．5）％,（43．7±3．2）％。结论：CTPZ对大鼠PCSMC电压依赖性钙通道和细胞内钙库释放的抑制作用,能降低PCSMC胞质内[Ca^2＋]水平,其作用效果比母药川芎嗪佳。     

前胡丙素对Ang Ⅱ致离体血管平滑肌细胞肥厚及胞内钙、NO含量和信号转导的影响

目的 前胡丙素（Pra-C)对血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ)致离体培养大鼠血管平滑肌细胞（SMCs)肥厚模型胞内游离钙浓度、NO含量和信号转导的影响。方法 以Ang Ⅱ刺激SMCs形成肥厚模型，用倒置显微镜测定SMCs面积；用Fura-2/AM测定单细胞内[Ca^2 ]i,Griess法测定NO含量；在PMA和ST（PKC激动剂及抑制剂）、PTX（Gi蛋白敏感毒素）作用下观察Pra-C对KCl和NE所致胞内[Ca^2 ]i浓度变化的影响。结果 Pra-C组SMCs细胞面积较肥厚组减小39．01％，并接近正常细胞水平；NO含量明显增加；胞内[Ca^2 ]i对KCl和NE激动的反应明显低于肥厚组。PMA使肥厚SMCs[Ca^2 ]i升高，而ST及PTX则使之降低，Pra-C均使之恢复正常。结论 Pra-C抑制Ang Ⅱ致体外培养细胞SMCs肥厚，改善肥厚细胞因PKC和Gi蛋白的信号转导改变所致的[Ca^2 ]i改变。     

眼睛蛇毒心脏毒素对大鼠心肌细胞收缩及细胞内钙离子的作用

目的 研究眼睛蛇毒心脏毒素（Cardiotoxin，CTX）对心肌细胞的形态、收缩幅度和细胞内钙离子（[Ca^2＋]i）的作用。方法 应用荧光计量法（以Fura-2／AM为荧光染料）及光学成像系统来测定单个心肌细胞[Ca^2＋]i和收缩幅度。结果 0．001～1μmol／L的CTX使心肌细胞由杆状变成圆形，药物的作用从第1分钟时开始，到第20分钟时趋于稳定。在电刺激存在的情况下，1μmol／L的CTX最初导致电诱导的[Ca^2＋]i和收缩幅度瞬间增加，接下来[Ca^2＋]i时程延长，最终细胞对电刺激不敏感、突然收缩、[Ca^2＋]i持续增高。在缺乏电刺激的情况下，1μmol／L的CTX可诱导Ca^2＋震荡波、持续性[Ca^2＋]i增高，这种作用与40mmol／L的KCl和10mmol／L咖啡因所引起的[Ca^2＋]i瞬间增加不同。结论 CTX作用初期使[Ca^2＋]i增高，使细胞[Ca^2＋]。超载，同时伴随细胞形状的改变。     

粉防己碱对培养乳牛基底动脉平滑肌细胞内游离钙浓度的影响

目的：研究粉防己碱对培养乳牛基底动脉平滑肌细胞游离钙浓度（[Ca^2 ]i)的影响。方法：利用AR－CM－MIC阳离子测定系统,采用Fura 2-AM为指示剂,测量单个细胞内[Ca^2 ]i。结果：粉防己碱10－100μmol/L对培养乳牛基底动脉平滑肌细胞静息[Ca^2 ]i无明显影响。在细胞外钙为1．3mmol/L,粉防己碱可浓度依赖性地抑制KC1引起[Ca^2 ]i的升高。咖啡因10mmol/L可诱导一次[Ca^2 ]i瞬间快速升高,随后自发回复到静息水平,粉防己碱10和30μmol/L对咖啡因诱导的[Ca^2 ]i瞬间升高没有作用,但高浓度（100μmol/L）粉防己碱抑制了[Ca^2 ]i瞬间升高。在细胞外钙为1.3mmol/L,苯肾上腺素10μmol/L可引起双相[Ca^2 ]i变化,包括快速升高相和持续升高相。在细胞外钙为零,苯肾上腺素仅引起[Ca^2 ]i的快速升高相。粉防己碱可浓度依赖性地抑制苯肾上腺素引起[Ca^2 ]i快速升高相。结论：在培养乳牛基底动脉平滑肌细胞,粉防己碱可能通过影响电压依赖性和苯肾上腺素受体介导的钙通道而抑制钙内流。高浓度粉防己碱也可能影响肌浆网钙释放或钙摄取。     

龙葵碱对HepG2细胞线粒体膜电位及细胞内[Ca^2＋]i的影响

目的：观察龙葵碱对HepG2细胞线粒体膜电位及细胞内[Ca^2＋]i的影响，揭示龙葵碱诱导细胞凋亡的机制。方法：采用AO／EB双染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞形态学改变；TMRE单染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞线粒体膜电位的改变；Fluo-3／AM单染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞内[Ca^2＋]i的改变；TMRE和Fluo-3／AM双染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca^2＋]i的改变。结果：形态学实验表明0．0032μg／mL、0．016μg／mL龙葵碱使细胞外周呈微弱皱缩状改变，0．08、0．4、2μg／mL龙葵碱使HepG2细胞出现大量碎片及凋亡小体等典型的细胞凋亡形态，即龙葵碱能够诱导HepG2细胞凋亡；TMRE单染激光共聚焦测定表明龙葵碱能够降低HepG2细胞膜电位；Fluo-3／AM单染激光共聚焦测定表明龙葵碱能够升高肿瘤细胞内[Ca^2＋]。浓度；TMRE和Fluo-3／AM双染激光共聚焦观察表明龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca^2＋]i浓度。结论：龙葵碱能够诱导HepG2细胞凋亡，其机制为降低HepG2细胞膜电位，开放细胞膜PT通道，使细胞内Ca^2＋顺浓度梯度转运，从而升高细胞内Ca^2＋浓度启动细胞凋亡机制。     

人参皂苷Rb1对吗啡慢性作用SK-N-SH细胞增殖及[Ca~（2＋）]_i的影响

目的：探讨人参皂苷Rb1对吗啡慢性作用SK-N-SH细胞增殖及[Ca2＋]i的影响。方法：采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）研究人参皂苷Rb1对吗啡慢性作用SK-N-SH细胞增殖的影响,应用荧光分光光度法观察人参皂苷Rb1对吗啡慢性作用SK-N-SH细胞内[Ca2＋]i的影响。结果：与对照组相比,吗啡慢性作用48h可显著抑制SK-N-SH细胞的增殖,细胞内游离钙离子浓度显著增高（P〈0.01）;单独加入16μmol.L-1Rb1可显著促进SK-N-SH细胞的增殖（P〈0.05）;人参皂苷Rb1（16μmol.L-1,32μmol.L-1）对细胞进行预处理能缓解吗啡对细胞的抑制作用（P〈0.05）。单独加入16μmol.L-1Rb1可使SK-N-SH细胞内[Ca2＋]i显著降低（P〈0.01）;慢性吗啡作用SK-N-SH细胞48h,能使细胞内[Ca2＋]i明显升高（P〈0.01）;慢性吗啡作用SK-N-SH后,加入（16μmol.L-1,32μmol.L-1）人参皂苷Rb1能有效地抑制吗啡引起的细胞内[Ca2＋]i升高（P〈0.01）。结论：人参皂苷Rb1可显著缓解吗啡对SK-N-SH细胞的抑制作用和吗啡引起的[Ca2＋]i升高。     

洛沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞c—fos表达及对细胞内游离钙升高的拮抗作用

目的 研究血管紧张素AT1亚型受体拮抗剂洛沙坦（losartan,LT）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞c-fos表达及细胞内游离钙变化的影响。方法 斑点杂交及Fura-2技术。结果 AngⅡ10nmol/L能诱导培养乳鼠心肌细胞c-fos的一过性高表达及[Ca^2 ]的显升高。LT20μmol/L能显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞c-fos的高表达，而血管紧张素AT2亚型受体拮抗剂PD123319则无明显作用。LT1－100μmol/L能剂量依束性地抑制AngⅡ引起的[Ca^2 ]i升高。结论 AngⅡ诱导的心肌细胞c-fos高表达及[Ca^2 ]i升高可能是通过AT1亚型受体介导而实现的，LT可能是一种治疗心肌肥厚的有效药物。     

谷氨酸对牛大脑中动脉平滑肌细胞胞浆静息Ca^2＋和ATP触发的Ca^2＋内流的影响

目的：观察谷氨酸对牛脑中动脉平滑肌细胞有无直接的激动作以及对ATP触发的Ca^2 内流有无影响？方法：采用Fura-2荧光法测定胞浆内Ca^2 变化技术。在培养的乳牛大脑中动脉平滑肌细胞上观察药物作用。结果：谷氨酸（10－200μmol.L^-1）不能增加或减少细胞胞浆静息游离Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i)和ATP触发的Ca^2 内流（谷氨酸：10－400μmol.L^-1）。结论：谷氨酸对大脑中动脉平滑肌细胞信息Ca^2 水平和Ca^2 内流均无直接的影响。谷氨酸可能没有直接与脑血管张力的调节。     

积雪草总苷对大鼠系膜细胞游离钙的影响

目的:探讨积雪草提取物对大鼠肾小球系膜细胞增殖和游离钙离子[Ca2+];水平的影响.方法:将血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用肾小球系膜细胞,加入不同浓度的积雪草提取物,采用MTT法和Fura-2/AM荧光指示剂负载测定系膜细胞增殖和细胞内[Ca2+]i水平的变化.结果:系膜细胞一经AngⅡ刺激后增殖显著,且[Ca2+]i水平明显升高,而积雪草提取物对AngⅡ刺激下的系膜细胞增殖和Ca2+水平有抑制和降低作用,并呈一定的剂量依赖性.结论:积雪草提取物可能通过降低系膜细胞内[Ca2+]i的水平,从而达到抑制系膜细胞增殖的目的.     

果糖二磷酸钠镁对心肌细胞缺氧复氧损伤修复作用的体外研究

目的:体外研究果糖二磷酸钠镁对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞损伤的修复作用及其机制。方法:采用原代培养4d的心肌细胞建立H/R损伤模型,分为H/R组和H/R+果糖二磷酸钠镁高、中、低浓度(4.8、2.4、1.2mg·mL-1)组,另取正常细胞设为正常对照组。加入相应药物处理后分别测定各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CPK)活性及细胞内游离钙浓度([Ca2+]i),并用透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:与H/R组比较,果糖二磷酸钠镁组能显著降低细胞中LDH、CPK、[Ca2+]i水平(P<0.01或P<0.05),减轻细胞超微结构的损伤。结论:果糖二磷酸钠镁对H/R损伤的心肌细胞具有修复作用,其作用可能与降低钙超载有关,且具有浓度依赖性。     

欧亚旋覆花总黄酮提取物对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的:研究欧亚旋覆花总黄酮提取物(TFIB)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:实验分为6组,即假手术、模型、金纳多及TFIB高、中、低剂量组。对各组大鼠进行神经功能评分,采用TTC染色法测定脑梗死体积、HE染色法观察脑组织形态学变化、黄嘌呤氧化酶法测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、硫代巴比妥法测定丙二醛(MDA)含量、双波长荧光分光光度法检测大鼠大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化。结果:与模型组比较,TFIB高、中剂量组神经功能评分显著降低(P<0.01);TFIB高、中剂量组缺血再灌注损伤后脑梗死体积显著减小(P<0.01);TFIB高、中剂量组神经细胞变性坏死的病理变化显著改善;TFIB高、中剂量组大鼠血清SOD活力显著增强,MDA含量显著降低(P<0.01);TFIB高、中剂量组胞浆Ca2+浓度显著降低(P<0.01)。结论:TFIB对脑缺血再灌注损伤有显著的保护作用,其作用机制与抑制并减少体内脂质过氧化物的产生、增强机体抗氧化活性有关。     

化学性缺氧致大鼠脑细胞[Ca^2＋]i和脑红蛋白表达变化及阿司匹林干预研究

目的：观察化学性缺氧状况下大鼠脑细胞[Ca^2＋]i和脑红蛋白（NGB）表达的变化及阿司匹林（ASA）对其变化的干预,并初步探讨其作用机制。方法：连二亚硫酸钠致原代培养大鼠脑细胞缺氧,用荧光探针Flou-3负载和NGB荧光免疫组化技术双标,激光共聚焦显微镜动态观察。结果：[Ca^2＋]i和NGB表达与缺氧持续时间有关,随缺氧时间的延长,荧光强度随之增高;经ASA预防性干预,两种荧光强度增高缓慢,其增高程度明显低于单纯缺氧组;治疗性干预,用药早期两种荧光强度增高明显,其增高程度与单纯缺氧组变化相近,后期则增高缓慢,其增高程度明显低于单纯缺氧组。[Ca^2＋]i浓度和NGB表达呈正相关。结论：ASA对原代培养大鼠脑细胞化学性缺氧损伤具有保护作用,其作用可能与ASA抑制细胞内Ca2^＋超载有关;NGB的表达可能是受到Ca2^＋-CaM复合物的调节;ASA预防性用药的早期保护作用明显优于治疗性用药。     

车前子对晶状体上皮细胞氧化损伤防护作用的信号转导机制

目的：研究车前子对过氧化氢（H2O2）所致氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）内钙（Ca^2＋）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的影响,探讨归肝经明目中药防治白内障的细胞信号转导机制。方法：将H2O2与传代培养的牛LEC共同孵育复制氧化损伤模型,同时加入车前子水提取液孵育后,用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测LEC活性,用荧光分光光度法检测LEC内钙离子的浓度（[Ca^2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量,并探讨不同浓度的车前子及孵育12、24、36h的影响。结果：H2O2组LEC活性下降,车前子可明显增强氧化损伤的LEC活性（P〈0.01）,呈浓度依赖关系和时间依赖关系。H2O2组LEC的[Ca^2＋]i升高,车前子可显著降低由氧化损伤所致的LEC的[Ca^2＋]i的升高（P〈0.01）,呈时间-效应关系。H2O2组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降,车前子可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低（P〈0.01）、cGMP水平显著升高（P〈0.01）,也呈时间-效应关系。结论：车前子可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡,[Ca^2＋]i、cAMP和cGMP信号系统及其相互作用调节生物学效应可能是其细胞和分子生物学的主要作用机制。     

脑肠肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠脑主动脉血管平滑肌细胞胞内钙浓度上升的影响

目的研究脑肠肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）胞内钙离子浓度上升的作用,并初步探讨其机制。方法采用细胞培养的方法获得大鼠胸主动脉VSMCs,经Fluo-4-AM染色后,采用激光共聚焦显微镜技术分别检测加入AngⅡ后,1×10^-7mol·L^-1和1×10^-5mol·L^-1的Ghrelin对胞内钙荧光强度（FI）的影响,以及腺苷酸环化酶抑制剂Sq22536对Ghrelin作用的影响。结果①2×10^-8mol·L^-1的AngⅡ可以使得VSMCs胞内钙FI上升到静息状态的（165±76）％;②随后加入1×10^-7mol·L^-1的Ghrelin可以使FI下降到（117±34）％（P〈0．01vs①）;③加入1×10^-5mol·L^-1的Ghrelin可以使FI下降到（87±22）％（P〈0．01vs①,P〈0．05vs②）;④预先以1×10^-5mol·L^-1的Sq22536孵育,再加入2×10^-8mol·L^-1AngⅡ和1×10^-7mol·L^-1的Ghrelin,胞内FI为原来的（143±24）％（P〈0．01vs②）。结论Ghrelin能够降低AngⅡ引起的大鼠胸主动脉VSMCs胞内钙离子升高作用,其机制可能与激活胞内cAMP／PKA信号通路有关。     

黄芪总苷及黄芪甲苷对糖皮质激素诱导老前期小鼠记忆障碍的保护作用及其机制

目的探讨黄芪总苷（Astragaloside,AST）和黄芪甲苷（Astragalus Saponin I,ASI）对氢化可的松（Hydrocortisone,HC）引起小鼠记忆障碍的保护作用及对胞浆钙浓度（[Ca^2＋]i）的影响。方法用HC（4mg·kg^-1,se,21d）建立老前期小鼠学习记忆损伤模型,避暗实验检测小鼠学习记忆功能;Fura-2／AM负载法检测小鼠胸腺细胞和海马神经元突触体[Ca^2＋]i;电镜观察海马神经元的超微结构。结果与HC模型组比较,AST（50mg·kg^-1）和ASI（50mg·kg^-1）能改善小鼠的记忆功能,降低小鼠胸腺细胞和海马神经元突触体[Ca^2＋]i,改善海马神经元的超微结构。结论氢化可的松可明显引起老前期小鼠记忆障碍,AST和ASI能改善小鼠的学习记忆功能,其机制可能与抑制细胞内钙超载有关。     

比索洛尔对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及心功能的保护作用

目的研究比索洛尔(Biso)对腹主动脉结扎所致慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡和心功能的保护作用。方法 SD大鼠40只,随机分为4组,即腹主动脉缩窄(COA)+Vehicle组;COA+Biso组;假手术(Sham)+Vehicle组;Sham+Biso组。Biso干预8周后采用超声心动图和心室插管法评估各组大鼠的心功能,计算左、右心室质量指数(LVMI、RVMI),高敏酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆去甲肾上腺素(NE)水平,放射免疫法(RIA)检测血浆血管紧张素Ⅱ,AngⅡ水平。用琼脂糖凝胶电泳和TUNEL法观察心肌细胞的凋亡状态,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因的表达变化。结果与COA+Vehicle组相比,COA+Biso组大鼠心功能明显改善[LVEF:COA+Biso组:(67±8)%比COA+Vehicle组:(43±8)%,P<0.05],血浆NE[COA+Biso:(570±41)pg/ml比COA+Vehicle:(908±75)pg/ml,P<0.05]和AngⅡ[COA+Biso:(357±49)pg/ml比COA+Vehicle:(476±51)pg/ml,P<0.05]水平降低,未出现细胞凋亡特有的"DNAladder"现象,TUNEL检测凋亡指数减少[COA+Biso:(9.6±0.5)%比COA+Vehicle:(7.2±0.6)%,P<0.05],RT-PCR检测Bax/Bcl-2比例降低[COA+Biso:(114±9)%比COA+Vehi-cle:(137±9)%,P<0.05]。与Sham+Vehicle组相比,COA+Vehicle组大鼠各项心功能指标明显恶化,心肌细胞凋亡较为严重。结论 Biso可降低血浆NE和AngⅡ水平,并通过阻断NE与β1肾上腺素能受体(β1-AR)结合,抑制凋亡相关通路,从而抑制慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡,改善心功能,延缓心力衰竭进展。     

激光共聚焦扫描显微镜技术在大鼠皮层神经元细胞内钙离子浓度动态测定中的应用

目的探讨激光共聚焦扫描显微镜(LCSM)技术在动态测定神经元细胞内钙离子浓度中的应用。方法采用原代培养大鼠皮层神经元,用LCSM测定给KCl前后细胞内钙离子浓度的动态变化。结果培养神经元状态良好,用LCSM准确、稳定、可靠地测出细胞内钙离子浓度的动态变化。结论LCSM在动态测定神经元细胞内钙离子浓度中具有明显优势。     

参附注射液对病毒性心肌炎模型小鼠心肌腺苷酸酶活性和钠/钙代谢的影响

目的:研究参附注射液对病毒性心肌炎模型小鼠心肌腺苷酸酶活性及钠、钙代谢的影响。方法:实验分为4组,即对照、感染及参附注射液高、低剂量组。在不同时相点分别测定小鼠心肌腺苷酸酶活性和钠/钙含量,观察组织病理变化。结果:与对照组比较,感染组心肌Na+,K+-ATPase及Ca2+-ATPase活性显著减弱,钠、钙含量显著升高(P<0.01),并早于心肌结构变化;与感染组比较,参附注射液高剂量组Na+,K+-ATPase及Ca2+-ATPase活性显著增强,钠、钙含量显著降低(P<0.01或P<0.05),且心肌炎症、坏死程度也显著减轻(P<0.01或P<0.05)。结论:参附注射液能显著改善模型小鼠病毒感染后心肌继发性损伤状况,其机制可能与抑制心肌腺苷酸酶活性下降,阻止反常性钠、钙超载有关。