镰形棘豆对SMMC-7721细胞线粒体膜电位和凋亡相关蛋白表达的影响

目的?研究藏药镰形棘豆对SMMC-7721人肝癌细胞活性、线粒体膜电位,细胞色素C(Cyt C)及Caspase-3蛋白表达的影响与细胞凋亡的关系。方法?以镰形棘豆总黄酮0.05、0.075、0.1g/L处理肝癌细胞SMMC-7721,24h后观察细胞的生长状况;镰形棘豆总黄酮作用于SMMC-7721细胞后,流式细胞仪检测细胞总体凋亡率和线粒体膜电位,Western blot检测对凋亡相关蛋白Cyt C及Caspase-3表达的影响。结果?结果表明,镰形棘豆总黄酮抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长,呈浓度依赖关系;镰形棘豆作用后可观察到凋亡细胞的比例升高;可导致细胞的线粒体跨膜电位明显降低,与药物浓度呈负相关。中、高剂量组的细胞中Cyt C及Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论?镰形棘豆总黄酮诱导SMMC-7721细胞的凋亡可能是通过线粒体途径,并且与影响Cyt C及Caspase-3的表达有关。为镰形棘豆抗肿瘤的作用机制的实验和临床研究提供依据。      

聚肌苷酸胞苷酸对人肝癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的 探讨聚肌苷酸胞苷酸(Poly I:C)对体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721生长的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其作用机制.方法 肝癌SMMC-7721细胞经不同剂量Poly I:C作用后,CCK-8法检测细胞增殖抑制,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期变化,SYBR-Green荧光定量PCR检测TLR3、TRIF、IFN-βmRNA的表达.结果 Poly I:C 高剂量组的生长抑制率最高,高、中、低三个剂量组间比较差异有显著性(P<0.05).Poly I:C同一剂量组生长抑制率72 h最高,48 h次之,24 h时最低,每组不同时间点比较差异有显著性(P<0.05).流式细胞仪检测结果 显示Poly I:C可诱导SMMC-7721细胞凋亡,随浓度增加和时间的延长凋亡率逐渐升高(P<0.05).Poly I:C组细胞处于G1期的百分率明显高于对照组.TLR3、TRIF、IFN-βmRNA的表达均增高,三组间比较差异有显著性(P<0.05).结论 Poly I:C对体外培养的SMMC-7721有显著的增殖抑制作用,呈剂量依赖性和时间依赖性,其机制可能与细胞周期阻滞,TLR3通路激活,诱导产生IFN-β,诱导细胞凋亡有关.     

低相对分子质量肝素增强顺铂诱导肝癌细胞的凋亡作用

目的：探讨低相对分子质量肝素(low molecular weight heparin,LMWH)对顺铂(cisplatin,DDP)诱导肝癌细胞凋亡作用的影响及其作用机制。方法：实验分为对照组、LMWH组、DDP组、LWMH与DDP联合应用组。应用MMT法检测药物对肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响;吖啶橙/溴化乙锭双荧光法和流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR和Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白Fas,Bcl-2和Bax的表达。结果：MTT检测结果显示：与对照组相比,DDP组及LWMH与DDP联合应用组的SMMC-7721细胞生长均有显著的抑制(均P<0.05);LMWH组的Fas,Bcl-2和Bax mRNA及蛋白均无明显的变化(均P>0.05);DDP组Fas表达量明显增加(P<0.05),而Bcl-2轻度降低(P<0.05),Bax 无明显变化(P>0.05)。LWMH与DDP联合应用组与对照组及DDP组相比,Bcl-2表达明显降低(均P<0.05),Bax表达明显增高(均P<0.05);Fas表达量与对照组相比明显增加(P<0.05),但与DDP组相比增加不明显(P>0.05)。结论：LMWH具有增强DDP诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用,其机制可能与LMWH增强DDP诱导的细胞凋亡中线粒体通路和促使细胞凋亡增加有关。     

四羟基二苯乙烯增强肝癌细胞对顺铂的敏感性

目的:探讨四羟基二苯乙烯(THS)是否能增强肝癌细胞对顺铂的敏感性。方法:⑴MTT法检测不同浓度顺铂和THS对肝癌细胞SMMC-7721与Bel-7402细胞活力的影响;⑵TUNEL法检测THS加强顺铂的促凋亡作用;⑶荧光定量PCR和Western blot法检测细胞在THS作用下X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达。结果:THS和顺铂可剂量依赖性地降低两种细胞的细胞活力;THS加强顺铂对SMMC-7221的促凋亡作用;THS可明显提高肝癌细胞系XIAP的mRNA和蛋白表达。结论:THS可诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡,增强肝癌细胞对顺铂的敏感性。     

蟾酥注射液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究蟾酥注射液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响。方法 CCK-8法检测SMMC-7721细胞活力;DCFH-DA染色法检测SMMC-7721细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;荧光染色法观察SMMC-7721细胞线粒体膜电位变化;流式细胞术检测SMMC-7721细胞凋亡率。结果 蟾酥注射液明显抑制SMMC-7721细胞增殖,呈时间和浓度依赖性,作用24、48和72h后,半数抑制浓度(IC₅₀)分别为2.60±0.01、2.00±0.10和1.57±0.17μg/L;ROS检测结果显示不同浓度药物处理组细胞内ROS水平与对照组比较均明显升高(P=0.000);荧光染色观察到药物处理组细胞的绿色荧光随药物浓度增加而变强,红色荧光反而逐渐变弱;流式细胞术检测出SMMC-7721细胞经低、中、高浓度蟾酥注射液处理48h后,总凋亡率分别为17.33%±3.20%、25.60%±1.05%和35.76%±4.72%,与对照组比较,总凋亡率明显增加,呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 蟾酥注射液能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,并诱导7721细胞凋亡。该凋亡可能与蟾酥注射液引起SMMC-7721细胞ROS水平增加、线粒体损伤以及膜电位下降有关。     

塞来昔布通过ERK1/2信号通路对肝癌细胞株SMMC-7721增殖、凋亡的影响

目的:观察COX-2抑制剂塞来昔布对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨该作用与ERK1/2信号通路之间的关系。方法:用不同浓度的塞来昔布溶液(0、25、50、75和100μmol/L)处理对数生长期的肝癌SMMC-7721细胞,MTT比色法检测不同时间点各药物浓度组细胞增殖情况;流式细胞术分析不同浓度的塞来昔布溶液对SMMC-7721细胞凋亡的影响;RT-PCR检测COX-2、VEGF和ERK1/2mRNA表达的变化;Western blot检测COX-2、VEGF和ERK1/2蛋白表达的变化。结果:塞来昔布对SMMC-7721细胞增殖具有抑制作用,该作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增强;流式细胞术检测结果显示出明显的细胞凋亡,且凋亡率随着塞来昔布浓度的增高而升高;随着塞来昔布剂量的增加,COX-2、VEGF和ERK1/2mRNA及蛋白的表达水平逐渐降低。结论:塞来昔布可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖、促使瘤细胞凋亡,且作用呈时间和剂量依赖性,其机制可能与下调ERK1/2信号通路及抑制新生血管生成有关。     

大黄素在体外诱导人肝癌细胞smmc-7721凋亡的实验研究

目的:研究Emodin(大黄素)对人肝癌细胞smmc-7721的作用及探讨其诱导人肝癌细胞凋亡的分子机制.方法:肝癌细胞smmc-7721经emodin(大黄素)处理后,用MTT法观察emodin对肝癌细胞株smmc-7721细胞增殖的抑制作用,荧光显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞仪分析诱导凋亡作用,采用western blot 检测p53、p21蛋白水平变化,采用细胞免疫组化方法检测Fas的表达变化.结果:与对照组相比,emodin能明显抑制smmc-7721细胞的生长,其IC50为49.6umol/L.荧光显微镜观察示emodin处理的肝癌细胞胞核内可见浓染致密的颗粒荧光,典型细胞可见新月型改变,固缩或片段化的核.DNA凝胶电泳可见典型的梯状条带,细胞凋亡与emodin作用的浓度和时间相关.流式细胞DNA直方图上出现典型的亚二倍体"凋亡峰 ",emodin能浓度依赖地诱导smmc-7721细胞发生G2/M期阻滞.Emodin处理smmc-7721细胞后,western blot 检测结果显示p53、p21蛋白表达明显增加,免疫组化方法检测结果显示Fas的表达明显增强.结论: emodin对人肝癌细胞smmc-7721株有强烈的增殖抑制作用,其分子机制可能是诱导smmc-7721细胞发生凋亡.Emodin 诱导smmc-7721细胞发生凋亡是p53依赖性的,即与p53、p21有关,并且Fas表达水平的上调在此过程中也起了一定作用.     

神经酰胺诱导肝癌细胞凋亡

目的:观察C2-神经酰胺诱导肝癌细胞凋亡,为进一步研究肝癌细胞凋亡信号的传导提供实验依据.方法:将C2-神经酰胺作用于肝癌细胞SMMC-7721及BEL-7402后,分别行H-E染色、荧光染色、TUNEL方法检测及流式细胞仪Sub-G1法,检查细胞的凋亡.结果:10 μmol/L C2-神经酰胺作用肝癌SMMC-7721细胞,48 h后发生凋亡,H-E染色及荧光染色检测可见典型的细胞凋亡表现,细胞核固缩、碎裂,以及碎裂的细胞核浓染成为凋亡小体.经流式细胞仪检测可见典型的Sub-G1凋亡峰,凋亡细胞占细胞总数(9.20±0.73)％.在BEL-7402细胞也观察到相似的结果.结论:C2-神经酰胺可诱导肝癌SMMC-7721及BEL-7402细胞的凋亡.     

丹皮酚诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制探讨

目的:探讨丹皮酚诱导人肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡作用及其分子机制。方法:噻唑蓝(MTT)法检测丹皮酚的增殖抑制作用;Hoechst-33258染色法、DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡;逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)法检测抑癌基因PTEN、致癌基因Akt mRNA表达水平。结果:丹皮酚在3.13~200.00 mg.L-1剂量之间均能抑制SMMC-7721的增殖;丹皮酚处理SMMC-7721后,光镜下可见明显的凋亡细胞;Hoches-33258染色、DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征;RT-PCR检测示丹皮酚可使PTEN mRNA表达升高,Akt1、Akt2 mRNA表达下降。结论:丹皮酚能显著抑制SMMC-7721增殖,诱导细胞凋亡,其作用可能是通过抑制PI3K通路来实现的。     

一氧化氮对肝癌细胞线粒体膜通透性和胞浆中细胞色素C含量的影响

目的探讨一氧化氮(NO)对肝癌细胞线粒体膜通透性和胞浆中细胞色素C(cytC)含量的影响.方法用NO供体硝普钠(SNP)诱导SMMC-7721和HepG2肝癌细胞株凋亡,流式细胞术检测SMMC-7721和HepG2细胞凋亡率,MTT法观察肝癌细胞生长增殖情况,流式细胞术检测细胞线粒体跨膜电位变化,Western blot检测胞浆中cyt C含量的变化,同时应用线粒体膜通透性转变孔开放抑制剂CsA和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂BSO预处理细胞,并观察以上各指标的变化.结果 SNP能诱导人肝癌细胞SMMC-7721和HepG2凋亡,并可导致两株细胞线粒体跨膜电位下降,胞浆中cyt C含量增加,与SNP的作用时间成正比.CsA能够抑制SNP所致的肝癌细胞线粒体跨膜电位的下降及胞浆中cyt C含量的增加;而BSO则可促进线粒体跨膜电位下降,cyt C从线粒体释放到胞浆.结论 NO可能通过下调线粒体跨膜电位、开放线粒体膜通透性转变孔并释放线粒体cyt C,来诱导SMMC-7721和HepG2细胞凋亡.     

Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶对骨肉瘤MG-63细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的：研究骨肉瘤MG-63细胞中Ⅱ型谷氨酰胺转氨酶（TG2）的抗凋亡作用,探讨其抑制肿瘤细胞凋亡的机制。方法：设计针对TG2的siRNA,建立骨肉瘤MG-63细胞体外缺氧培养模型,分为常氧组（细胞在常氧下培养）、单纯缺氧组（细胞在缺氧培养箱里培养）、对照siRNA缺氧组（转染对照siRNA后在缺氧培养箱里培养）和TG2 siRNA缺氧组（转染TG2 siRNA后在缺氧培养箱里培养）。观察各组骨肉瘤MG-63细胞在缺氧培养不同时间(6、12、24、48和72 h) 后Bax和Cyt C的表达及细胞凋亡率。微量滴定法检测TG2活性,RT-PCR法检测TG2和Bax mRNA表达水平,免疫组织化学法检测TG2和Bax蛋白在细胞内的分布,Western blotting法检测TG2、Bax和Cyt C蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：与常氧组比较,单纯缺氧组和对照siRNA缺氧组细胞TG2活性、TG2 mRNA和蛋白表达水平明显增强(P<0.01),并随缺氧时间延长逐渐升高（P<0.01）;Bax mRNA表达水平变化不明显(P>0.05),但Bax蛋白表达水平明显下降(P<0.01),细胞胞浆和线粒体内Cyt C蛋白水平及细胞凋亡率无明显变化（P>0.05）。与单纯缺氧组和对照siRNA缺氧组比较,TG2 siRNA缺氧组细胞各时间点TG2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bax mRNA表达水平无明显变化（P>0.05）,Bax蛋白表达明显增加(P<0.01),胞浆内Cyt C蛋白水平明显增加(P<0.01),线粒体内Cyt C蛋白水平明显降低（P<0.01）,细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论： TG2通过与Bax形成混合物而消耗Bax,阻止Cyt C释放至胞浆,从而抑制肿瘤细胞凋亡。     

病理性瘢痕组织中Livin和Smac的表达

目的:检测病理性瘢痕组织中凋亡抑制蛋白Livin和促凋亡因子Smac的表达情况及两者之间的关系。方法:分别采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测55例病理性瘢痕(25例瘢痕疙瘩、30例增生性瘢痕),24例非病理性瘢痕和20例正常皮肤组织中Livin和SmacmRNA和蛋白的表达。结果:以上4种组织中Livin和SmacmRNA和蛋白的表达差异均有统计学意义(mRNA:F=269.533和95.514,P<0.001;蛋白:χ2=36.611和26.320,P<0.001);瘢痕疙瘩、增生性瘢痕中LivinmRNA的表达水平和蛋白的阳性表达率高于非病理性瘢痕及正常皮肤组织,SmacmRNA的表达水平和蛋白的阳性表达率低于非病理性瘢痕及正常皮肤组织(P<0.05或0.008)。病理性瘢痕组织中Livin和Smac蛋白的表达呈负关联(rP=0.418,P<0.001)。结论:Livin和Smac可能在病理性瘢痕凋亡信号传导网络中起重要的作用。     

Smac在顺铂促非小细胞肺癌细胞株凋亡中的作用

目的 探讨Smac在顺铂诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株凋亡中的作用.方法 不同浓度顺铂刺激NSCLC细胞株A549,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,Annexin V/P双染流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR、Western blotting检测Smac mRNA及蛋白表达.结果 顺铂对A549细胞株具有增殖抑制作用,且呈浓度依赖性.顺铂对A549细胞株具有促凋亡作用,且呈浓度依赖性.顺铂作用后,Smac的mRNA及蛋白表达增加,且呈浓度依赖性.结论 smac在顺铂诱导NSCLC细胞株A549凋亡过程中,可能起到促凋亡的作用.     

PTEN基因对慢性粒细胞白血病Survivin、Xiap、Smac调控的研究

目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人慢性粒细胞白血病(CML)中生存素(Survivin)、X连锁凋亡抑制蛋白(Xiap)、线粒体促凋亡蛋白(Smac)调控的作用.方法(1)将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及对照载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测转染效率、细胞周期及凋亡率;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN、Survivin、Xiap、Smac mRNA水平变化,Western印迹检测PTEN蛋白表达水平的变化.(2)研究10例慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)、10例慢性粒细胞白血病急变期(CML-BC)及10名健康人(NC)骨髓单个核细胞内PTEN、Survivin、Xiap、Smac mRNA表达水平变化.结果 以感染复数(MOI)=200转染K562细胞后,Ad-PTEN-GFP组K562细胞最大增殖抑制率为38.6％,转染3d后Ad-PTEN-GFP组K562细胞内Survivin、Xiap、Smac mRNA表达水平(0.0700±0.0059、0.0089±0.0006、0.0600±0.0039)均明显低于Ad-GPF组(0.4370±0.0790、0.0661±0.0072、0.1580±0.0078)和未转染组(0.4530±0.0810、0.0700±0.0079、0.1770±0.0085),转染Ad-PTEN-GFP组与转染Ad-GFP相比Survivin mRNA表达水平降低6.14倍、Xiap降低7.44倍,而Smac mRNA降低2.95倍(均P＜0.01).CML-BC患者中PTEN mRNA表达水平低于CML-CP及健康对照组,而Survivin、Xiap、Smac mRNA在CML-BC患者中均高于CML-CP及健康对照组(均P＜0.01).结论 Survivin、Xiap、Smac基因可能在PTEN介导的慢性粒细胞白血病细胞凋亡通路中参与抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用.     

Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株中survivin和SMAC/DIABLO基因表达的影响

目的 观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3中survivin、Smac/DIABLO表达的影响,探讨survivin、Smac/DIABLO在ASODN诱导卵巢癌细胞凋亡和细胞周期改变中的作用和分子机制.方法 用脂质体(LipofectamineTM 2000)介导survivin ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT比色法检测细胞生长活性,流式细胞学技术检测细胞凋亡指数、细胞周期分布及survivin、Smac蛋白表达改变,逆转录酶链反应检测survivin、Smac/DIABLO基因表达改变.结果 同对照组比较,不同浓度ASODN作用后细胞生长明显减慢,转染后48 h IC50在600 nmol/1左右.用600 nmol/LASODN转染48h后,细胞凋亡指数(AI)明显增加,(t=6.3671,P＜0.05);更多的细胞停留在G0/G1期(t=10.3832,P＜0.01).Survivin mRNA和蛋白表达明显下调(t=3.5031,P＜0.05,t=7.8146,P＜0.01),SmacmRNA和蛋白表达上调(t=2.8011,P＜0.05,t=11.3917,P＜0.01).结论 ASODN诱导细胞凋亡,使更多的细胞停留在G0/G1期,减少进入有丝分裂细胞数的作用,是通过下调survivin基因,上调Smac基因表达来共同完成的,survivin、Smac/DIABLO基因在调节SKOV3细胞周期、凋亡的功能上密切相关,二者的相互作用是卵巢癌发生、发展的重要分子机制之一.     

Smac在TRAIL诱导人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡中的作用

目的:初步研究Smac在TNF相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导的人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡中的作用.方法:观察细胞形态变化和以琼脂糖凝胶电泳分析TRAIL作用的Saos-2细胞DNA片段,利用流式细胞术及细胞计数法比较Smac或Bcl-2表达不同的细胞的凋亡程度,同时以Western 印迹半定量检测细胞胞质内Smac表达水平.结果:Saos-2细胞在TRAIL的作用下出现典型的凋亡样改变.在TRAIL作用Saos-2细胞时,Smac在胞质中的含量明显增加.在TRAIL作用24 h后,Smac在Saos-2细胞中过表达,细胞凋亡率由12.7%增加到31.4%.TRAIL作用Saos-2细胞48 h后,转染Bcl-2的细胞与转染空载体的Saos-2细胞相比,凋亡率显著降低(由24%降至15%),且胞质中Smac的表达水平也明显降低.结论:在TRAIL诱导的凋亡中Smac起促进作用,Bcl-2可以通过阻止Smac从线粒体释放到胞质中来抑制细胞凋亡.     

Effects of Smac gene over-expression on the radiotherapeutic sensitivities of cervical cancer cell line HeLa

Background　Thesecondmitochondria derivedactivatorofcaspases(Smac) isanovelproapoptoticgene,whichplaysanimportantroleintheapoptosis inducingeffectsofirradiationontumorcells ThepurposeofthisstudywastoinvestigatetheeffectsofextrinsicSmacgenetransferanditsover expressioninradiotherapeuticsensitivitiesofcervicalcancercells Methods　AftertheSmacgenewastransferredintothecervicalcancercelllineHeLa, subclonedcellswereobtainedbypersistentG418selection CellularSmacgeneexpressionwasdetectedbyRT PCR…     

pshuttle-Egr-1-hSmac质粒联合X线照射对乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖的抑制作用

目的:构建pshuttle-Egr-1-hSmac质粒并转染人乳腺癌MDA-MB-435细胞,观察其抑制肿瘤细胞的辐射增敏作用。方法：转染pshuttle-Egr-1-hSmac质粒的MDA-MB-435细胞经过2 Gy X线照射不同时间（4、8、12、24 和48 h）和0.5 ~ 5.0 Gy X线照射后24 h收集细胞,采用RT-PCR和Western blotting法检测Smac mRNA及其蛋白表达。将细胞分为对照组、pshuttle质粒组、pshuttle-Egr-1-hSmac 质粒组、2 Gy 组、pshuttle+2.0 Gy组 和pshuttle-Egr-1-hSmac+ 2.0 Gy组,MTT法检测各组细胞增殖;克隆形成实验检测细胞存活能力;Annexin Ⅴ-FITC双染法检测细胞凋亡;PI单染法检测细胞周期。结果:对照组和pshuttle质粒组MDA-MB-435细胞中Smac mRNA无表达,而pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组MDA-MB-435细胞Smac mRNA表达水平随时间延长逐渐升高,于24和48 h时表达水平最高;经0.5 ~ 5.0 Gy X线照射后24 h MDA-MB-435细胞Smac mRNA表达水平随照射剂量增加而逐渐增加,在2.0和5.0 Gy X线照射后Smac mRNA表达水平最高。pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组4、8、12和24 h后Smac蛋白表达水平逐渐升高,24 h后表达水平最高。经过0、0.5、1.0、2.0和5.0 Gy X线照射后24 h Smac蛋白表达水平逐渐升高,尤其以5.0 Gy X线照射时表达水平最高。MTT法检测时程效应,2.0 Gy、pshuttle+2.0 Gy和pshuttle-Egr-1-hSmac+2.0 Gy质粒组24、48和72 h细胞A490值明显低于对照组（P<0.01）;剂量效应,pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组1.0～5.0 Gy X线照射后,MDA-MB-435细胞A490值明显低于0 Gy X线照射(P<0.05或P<0.01)。pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组细胞存活分数明显低于对照组（P<0.01）。pshuttle-Egr-1-hSmac+2.0 Gy组细胞凋亡率明显高于2.0 Gy组（P<0.01）,G0/G1期和S期细胞百分率明显低于2.0 Gy照射组（P<0.01）,G2/M期细胞百分率明显高于2.0 Gy组（P<0.01）。结论：X线照射能增加pshuttle-Egr-1-hSmac质粒转染的MDA-MB-435细胞有效表达Smac mRNA及蛋白,能抑制细胞存活,且诱导G2/M期阻滞和凋亡增加;Smac基因联合放射治疗可明显增加乳腺癌细胞的放射敏感性。     

Effect of Smac on TRAIL-induced apoptosis of prostate cancer cell line PC-3 and the molecular mechanism

The effect of Smac gene on the TRAIL-induced apoptosis of the prostate cancer cell line PC-3 and the molecular mechanism were investigated. The Smac gene was transfected into PC-3 cells under the induction of liposome. The intrinsic Smac gene expression was detected by Western blotting. After treatment with TRAIL as an apoptosis inducer, in vitro cell growth activity was as-sayed by MTT colorimetry. The apoptosis rate of PC-3 cells was determined by annexin Ⅴ-FITC and propidium iodide staining flow cytometry. The expression of cellular XIAP and caspase-3 genes was examined by Western blotting. Smac-transfected cells (PC-3/Smac group) had significantly in-creased Smac protein level as compared with PC-3 controls (P<0.01). After induction with 100-200 ng/mL TRAIL for 12-36 h, cellular proliferation rate in PC-3/Smac group was significantly lower than in PC-3 controls (P<0.05). After induction with 100 ng/mL TRAIL for 24 h, the apoptosis rate in PC-3/Smac group was significantly enhanced as compared with that of PC-3 controls (P<0.05). Ac-cordingly, the XIAP expression level was down-regulated significantly (P<0.05) and caspase-3 sub-unit P20 was up-regulated significantly (P<0.05). It is suggested that the over-expression of cellular Smac can inhibit inhibitor of apoptosis proteins (IAPs), enhance caspases activity and the apoptosis rate of PC-3 cells induced by TRAIL, which may provide a useful experimental basis for prostate cancer therapy.     

沉默信息调节因子3在丹酚酸A抗紫外线诱导视网膜色素上皮细胞氧化应激性损伤中的作用及机制

目的：探讨SIRT3在丹酚酸A（Sal A）抗紫外线诱导视网膜色素上皮细胞损伤中的作用及其机制。方法：将ARPE-19细胞分为对照（Sal A）组、UV组、Sal A+UV组、Sal A+UV+阴性si-RNA组、Sal A+UV+si-SIRT3组,UV照射剂量为30 mJ/cm2,Sal A浓度为50 μmol/L,采用MTT法检测细胞存活,DCFH-DA法分析细胞内ROS水平,CuZn/Mn-SOD活性检测试剂盒（WST-8法）检测SOD2活性,Western blot分析SIRT3、SOD2、Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase3、Cyt c的表达,RT-qPCR法检测细胞内SIRT3和SOD2的mRNA表达情况。结果：UV处理后,ARPE-19细胞内SIRT3蛋白和mRNA表达量降低,经5、25、50 μmol/L预处理后,SIRT3表达量明显增加。与对照组相比,UV组细胞凋亡率,ROS含量,Bax、cleaved-Caspase3、Cyt c表达量明显增加,细胞存活率、SOD2表达量和活性明显降低。与UV组相比,Sal A+UV组细胞凋亡率,ROS水平,SIRT3、cleaved-Caspase3、Cyt c表达量明显降低,细胞存活率、SOD2表达量和活性明显增加。与Sal A+UV相比,Sal A+UV+si-SIRT3组细胞凋亡率,ROS水平,SIRT3、cleaved-Caspase3、Cyt c表达量明显增加,细胞存活率、SOD2表达量和活性明显降低。结论：Sal A可增加SIRT3的表达,恢复SOD2活性,降低UV诱导细胞损伤作用。