PCR扩增IgH和TCRβ基因重排在检测淋巴细胞白血病微小残…

利用ＩｇＨ和ＴＣＲβ克隆性基因重排原理，用多聚酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术检测小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）骨髓和外周血共１３例。结果：ＡＬＬ初治的２例患儿ＰＣＲ检测全部呈现阳性特异性单带。ＡＬＬ完全缓解（ＣＲ）的１１例患儿中阳性７例，阴性４例，其中２例骨髓移植（ＢＭＴ）患儿移植前ＰＣＲ阳性，移植后转为阴性。１例自体骨髓移植（ａｕｔｏ－ＢＭＴ）患儿于     

应用半重叠TCRγ链特异性引物检测淋巴细胞白血病

采用更加敏感的半重叠式ＴＣＲγ特异性引物的ＰＣＲ方法，对２８例ＡＬＬ初治ＣＲ及ＢＭＴ患儿进行检测。２８例ＡＬＬ患儿中１６例检出ＴＣＲγ特异性条带，占５７．１％。其中ＭＲＤ组１８例。阳性检出１２例，占６６．７％。其中免疫分型标记为Ｂ细胞型的４例。占２５％，免疫标记为Ｔ细胞墼得全部出现ＴＣＲγ阳性条带。     

急性淋巴细胞白血病微量残留病的PCR监测

①目的探讨急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）微量残留病（ＭＲＤ）检测的临床意义。②方法应用筑巢式多聚酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）对３２例ＡＬＬ进行Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖδ２Ｄδ３基因重排检测。③结果１８例Ｂ系ＡＬＬ中有１５例（７２．２％）、４例Ｔ系ＡＬＬ中有１例（２５．０％）存在ＴＣＲＶδ２Ｄδ３基因重排。同时对１６例进行３９例次微量残留病动态监测，其中６例ＭＲＤ－ＰＣＲ阴性病人随访５．１７～１６．１７年，无１例复发；１０例ＭＲＤ－ＰＣＲ阳性者，２例分别于阳性后０．２５，１．００年骨髓复发，１例有复发倾向，余７例随访４．３３～６．２５年无复发。④结论ＭＲＤ－ＰＣＲ阴性者预后良好，可望长期生存，治疗时应以ＭＲＤ－ＰＣＲ转阴为停止化疗的可靠指标，对ＭＲＤ－ＰＣＲ阳性者应定期监测ＭＲＤ变化，结合病人情况进行综合评价。     

急性淋巴细胞白血病微量残留病的PCR监测

探讨急性淋巴细胞白血病微量残留病检测的临床意义。方法：应用筑巢式多聚酶链反应对３２例ＡＬＬ进行了Ｔ细胞受体Ｖδ２Ｄδ３基因重排检测。结果 １８例Ｂ系ＡＬＬ中有１５例，４例Ｔ系ＡＬＬ中有１例，存在ＴＣＲＶδ２δ３基因重排。同时对１６例进行３９例次微量残留病动态监测，其中６例ＭＲＤ－ＰＣＲ阴性病人随访５．１７－１６．１７年，无１例复发，１０例ＭＲＤ－ＰＣＲ阳性者，２例分别于阳性后０．２５，１．００年骨     

小儿急性白血病MTS1基因缺乏及点突变的研究

为探讨ＭＴＳ１基因突变与恶性血液病的关系，应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＤＮＡ印迹方法检测３５例急性白血病（ＡＬ）患儿ＭＴＳ１基因改变。结果显示：急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）缺乏（包括点突变）为２５．８％（８／１３）。Ｂ－ＡＬＬ纯合缺失为１６％（４／２５），Ｔ－ＡＬ为３３％（２／６）。点突变则两型各１例。结果证明：我国儿童ＡＬＬ ＭＴＳ１基因失活的存在，Ｔ－ＡＬ高于Ｂ－ＡＬＬ，点突变仅见于少数病例。该基     

IgH超基因家族及其相关基因在急性淋巴细胞白血病微小残留病检测中的应用

探讨免疫球蛋白超基因家族及其相关基因在急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）微小残留病（ＭＲＤ）检测中的应用。方法应用免疫学和聚合酶链反应技术。对１５例ＡＬＬ进行免疫表型测定。结果发现其中１１例为Ｂ－ＡＬＬ，３例为Ｔ－ＡＬＬ。ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ分析发现，１１例Ｂ－ＡＬＬ均有ＩｇＨ基因的重排，且有ＩｇＨ基因重排的病例均能用ＩｇＨ基因ＣＤＲ３区及Ｊ区引物得到聚合酶链反应扩增条带。对其中３例Ｂ－ＡＬＬ的ＩｇＨ基因Ｖ－Ｄ－Ｊ结合部区域进行了顺序分析，并合成了２个针对ＩｇＨＶ－Ｄ－Ｊ结合部的寡核苷酸作为探针用来检测ＭＲＤ，显示其灵敏度为１０－４。另外还对１例Ｔ－ＡＬＬ病例同时进行了ＴＣＲγ基因和ＳＩＬ－ＴＡＬ－１融合基因在ＭＲＤ检测中的比较研究，显示二者具有相同的ＭＲＤ阳性检出率，但后者的敏感度更高。结论ＩｇＨ基因重排及其ＴＣＲ基因重排、肿瘤融合基因等均可作为ＡＬＬ患者ＭＲＤ检测的特异性标记     

一种检测异基因骨移植后供体植活的巢式PCR方法

目的 利用ＢＡＬＢ／Ｃ（Ｈ－２Ｋ＾ｄ）和Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２Ｋ＾ｂ）小鼠Ｈ－２Ｋ等位基因不同,建立一种检测异基因骨髓移植后供体植活的方法。方法 分别以供鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）和受鼠（Ｃ５７ＢＬ／６）及ａｌｌｏ－ＢＭＴ后小鼠骨髓和脾细胞ＤＮＡ为模板进行巢式ＰＣＲ,并用琼脂糖凝胶电泳分析ＰＣＲ扩增产物。结果 以供鼠和移植后小鼠骨髓和脾细胞ＤＮＡ行巢式ＰＣＲ可扩增了约４２１ｂｐ的特异性片段,而未经移植的Ｃ     

筑巢式PCR等多项指标对小儿急性白血病微量残留病的监测

①目的　探讨采用筑巢式聚合酶链反应（Ｎｅｓｔ－ＰＣＲ）等多项指标监测小儿急性白血病（ＡＬ）微量残留病（ＭＲＤ）的临床意义。②方法　对１５２ 例ＡＬ在形态学、免疫学和细胞遗传学（ＭＩＣ）分型诊断的基础上,结合Ｎｅｓｔ－ＰＣＲ,姐妹染色单体交换（ＳＣＥ）、染色体核型分析方法进行ＭＲＤ监测。③结果　对５８ 例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）进行了Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖδ２Ｄδ３ 基因重排监测,其中８３％ 的Ｂ－ＡＬＬ和２５％ 的Ｔ－ＡＬＬ具有此基因重排,检测灵敏度为１０－ ５～１０－ ６ ．对４４ 例ＡＬＬ进行了ＭＲＤ动态监测,结果显示化疗期间ＰＣＲ由阴性转为阳性或持续阳性者,易引起骨髓复发、死亡。ＰＣＲ转阴时间有明显个体差异性。持续完全缓解３ 年以上的ＡＬＬ病儿ＰＣＲ持续阴性可作为停药治疗的可靠指标。对７６ 例ＡＬ进行了ＳＣＥ动态监测,结果表明ＳＣＥ频率变化与疾病的严重程度呈平行关系。对６１ 例ＡＬ进行了染色体核型动态监测,结果表明初发ＡＬ染色体核型正常者亦有ＤＮＡ 严重损伤。④结论　在ＭＩＣ分型诊断的基础上,采用Ｎｅｓｔ－ＰＣＲ,ＳＣＥ,染色体核型分析等多项指标进行ＡＬ的ＭＲＤ动态监测、综合分析评价,对指导治疗、预测复发及判断     

应用PCR检测恶性淋巴瘤骨髓浸润及其临床意义

目的：检测恶性淋巴瘤（ＭＬ）的骨髓浸润（ＩＢＭ）并探讨其与临床分期、疗效和预后的关系。方法：以克隆性ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排分别作为Ｂ和Ｔ细胞淋巴瘤克隆基因标志，应用ＰＣＲ基因扩增技术检测ＭＬ患者ＩＢＭ。结果：（１）３４份ＭＬ患者骨髓标本ＩＢＭ检出率为７０．６％（２４／３４），明显高于形态学检测方法（３８．６％，Ｐ＜０．０５）。（２）１９例形态学检测正常的非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）骨髓标本，ＩＢＭ阳性率５７．９％（１１／１９），其中８例Ｂ－ＮＨＬ（８／１４）检测到克隆性ＩｇＨ基因重排；５例同时还检测到克隆性ＴＣＲγ基因重排，２例Ｔ－ＮＨＬ（２／３）检测到克隆性ＴＣＲγ基因重排，无克隆性ＩｇＨ基因重排；２例免疫分型不明确ＮＨＬ患老中１例（１／２）检测到克隆性ＩｇＨ基因重排，无克隆性ＴＣＲ，基因重排。２例霍奇金病（ＨＤ）和１０例非淋巴系肿瘤骨髓ＩＢＭ均阴性。（３）Ⅲ，Ⅳ期ＮＨＬ患者ＩＢＭ检出率显著高于ＩＩ期（ｐ＜０．０１），初诊未治及复发患者也显著高于部分或完全缓解患者（Ｐ＜０．０１）。（４）ＩＢＭ阳性组ＮＨＬ２年死亡率５４．５％（６／１１），明显高于ＩＢＭ阴性（ｐ＜０．０５）。结论：ＰＣＲ方法检测ＩＢＭ有助于估     

多聚酶链反应检测淋巴细胞白血病微小残留分析

根据ＩｇＨ、ＴＣＲ克隆性基因重排原理，用半重叠ＰＣＲ和单轮ＰＣＲ技术分别同一份ＡＬＬ患儿的骨髓标本进行检测，并对两法的检出率进行了比较。结果：半重叠ＰＣＲ阳性检出率为８０％，单轮ＰＣＲ阳性检出率５２％，前者较后者提高了２８％，尤其对ＡＬＬ－ＭＲＤ组的检测，半重叠ＰＣＲ的阳性检出率有显著提高。     

PCR-SSCP检测急性白血病患者N-ras基因突变及临床意义初探

目的 探讨N-ras基因突变与急性白血病发生的关系。方法 采取骨髓和外周血白细胞提取DNA．用PCR-SSCP分析技术分别对急性白血病患者、正常对照组的N-ras基因突变进行检测。结果 84例急性白血病患者中25例发生N-ras基因突变，基因变异频率为29．8％，其中急性淋巴细胞白血病为18．6％，急性髓细胞白血病为41.4％；11例随访6个月，7例N-ras基因突变消失，4例N-ras基因突变持续存在；正常对照组未发现N-ras基因突变、结论 N-ras基因突变对急性白血病患者的预后具有一定的参考价值。     

BCL-1 rearrangement in acute lymphocytic leukemia and its clinical significance

Nonrandomized chromosomal translocation iscommon in lymphoid system tumor.These genes inbreak terminalof chromosome play a direct role in thegenesis of tumor.Immunoglobulin heavy chain(Ig H)gene at1 4q3 2 .3 and BCL- 1 gene at1 1 q1 3 formed therearrangementof BCL- 1 /Ig H gene,which leadsto theoverexpression of cell cyclin D1 protein. It wasreported abroad that BCL- 1 gene rearrangementmostly occurred in chronic lymphoid system malignanttumor including mantle cell lymphoma (MCL ) ,fewc…     

筑巢式PCR检测白血病bcr—ablmRNA

应用筑巢式逆转录酶聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法检测了２６例慢性粒细胞性白血病及１０例急性淋巴细胞白血病患者的ｂｃｒａｂｌｍＲＮＡ，在２１例ｐｈ阳性的慢粒和２例ｐｈ阳性的急淋患者中，检出两种ｂｃｒａｂｌ融合基因ｍＲＮＡ（１６５ｂｐ或９０ｂｐ），５例ｐｈ阴性的慢粒中，４例阳性，１例阴性，经治疗后ｐｈ染色体消失，ＲＴＰＣＲ仍能检出ｂｃｒａｂｌ融合基因。本方法具有高度敏感性，可从１０６个正常细胞ＲＮＡ中检出１个白血病细胞。是对慢粒和部分急淋的诊断及监测的一种快速、灵敏、特异的方法     

p73基因在成人急性淋巴细胞白血病中表达的研究

目的:研究p73基因在急性淋巴细胞性白血病(ALL)发病机制中的作用及临床意义。方法:收集32例ALL患者及30例正常对照组骨髓样本,DNA和RNA抽提后用RT-PCR检测p73基因的表达、甲基化特异性PCR(MSP)检测p73基因第一外显子甲基化状态,并结合临床资料进行分析。结果:11例p73基因阴性表达,阴性表达率为34.38%,其中9例第一外显子区域均发生甲基化(81.82%);21例p73基因阳性表达,32例ALL患者中,仅1例发生甲基化(4.76%);正常对照组30例,均为p73基因阳性表达,阳性表达率为100%。p73基因的阴性表达与ALL患者的高年龄(≥60岁)、高白细胞数(≥30×109/L)及对治疗时间延长(4周取得完全缓解)有关。结论:p73基因异常表达与成人ALL的发病机制有关,具有一定的诊断及判断预后的价值;其甲基化可能是p73基因在ALL中表达沉默的主要机制。     

白血病微卫星不稳定与靶基因移码突变的研究

探究微卫星不稳定（MSI）的急性淋巴细胞白血病（ALL）中1 和基因微卫星序列移码突变的情况。方法采用荧光片段聚合酶链反应（PCR）对ALL细胞株和临床样本行MSI检测。采用基因测序和荧光片段PCR 检测1 、基因微卫星序列的移码突变。结果ALL 细胞株MSI 阳性率为80.0%（4/5）;儿童ALL 患者骨髓样本MSI 阳性率为25.0%（3/12）;成人ALL 患者骨髓样本MSI 阳性率为20.0%（2/10）。Molt4 细胞株中1 基因微卫星序列存在移码突变c.22delC, 基因微卫星序列存在移码突变c.2560delA;CCRF-CEM 细胞株中1 基因微卫星序列存在移码突变c.22delC;ALL患者骨髓样本中1 和基因微卫星序列均未检测到上述移码突变。结论MSI诱导1 和基因微卫星序列移码突变可发生于ALL细胞株。     

小儿急性白血病骨髓细胞Bcl-2和P~(53)蛋白的表达

目的　探讨小儿急性白血病骨髓细胞Bcl- 2、P53 蛋白的表达状态。方法　以SP免疫组化法对 41例患者及 11例对照骨髓细胞Bcl- 2、P53 蛋白进行检测 ,高倍镜下计数 5 0 0个细胞 ,P53 阳性细胞≥5 %为阳性病例 ,Bcl- 2≥ 10 %为阳性病例。结果　Bcl- 2蛋白表达率在小儿ALL、ANLL及ALL高危型中均显著高于对照组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 0 1,P <0 .0 1) ,ALL标危型与对照组相比无差异 (P >0 .0 5 ) ,但ALL高危型高于标危型 ,ANLL高于ALL(P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 )。P53 蛋白表达率在ALL、ANLL、ALL高危型及标危型均显著高于对照组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1,P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 ) ,ALL高危型与标危型及ALL与ANLL之间无差异 (P >0 .0 5 )。结论　P53 突变及Bcl- 2表达增强参与了小儿急性白血病骨髓细胞的恶性转化 ,但其作用机制可能是相互独立的。     

儿童急性淋巴细胞性白血病细胞凋亡与临床相关性研究

①目的　探讨急性淋巴细胞性白血病病儿细胞凋亡与临床分型及预后的关系。②方法　采用AO EB荧光染料双染法 ,检测 30例初治急性淋巴细胞性白血病 (ALL)病儿治疗前后不同时期骨髓单个核细胞凋亡指数 (AI)。③结果　ALL病儿治疗前AI明显低于正常对照组 (t=5 .4 17,P <0 .0 1) ,标危型治疗前AI高于高危型(t=5 .0 0 2 ,P <0 .0 1)。治疗前AI与外周血WBC呈负相关 (r =- 0 .6 32 ,P <0 .0 1) ;泼尼松及诱导缓解治疗后 ,随着细胞凋亡水平的升高 ,WBC逐渐下降 ,标危型组WBC下降明显 (t=3.14 8,P <0 .0 1) ;标危型病儿经诱导缓解期治疗完全缓解率高 (P =0 .0 0 2 5 ) ;随机动态观察标危型及高危型ALL病儿各 5例 ,高危型病儿 3例出现中枢神经系统白血病 ,2例骨髓复发 ,而 5例标危型骨髓检查为持续完全缓解 ,并且无髓外浸润表现。④结论　细胞凋亡可作为评价化疗反应及预后的参考指标之一。     

急性白血病人P_(16)基因结构的研究

为了解急性白血病中Ｐ１６基因突变的情况，应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测了３１例急性髓细胞性白血病人（ＡＭＬ）和１４例急性淋巴细胞性白血病人（ＡＬＬ）Ｐ１６基因结构。结果：３１例ＡＭＬ中有７例存在突变，突变率２２．６％，１４例ＡＬＬ中有２例突变，突变率为１４．４％，治疗达到缓解病人Ｐ１６基因突变消失，恶化病例突变出现，提示Ｐ１６基因的突变在ＡＭＬ和ＡＬＬ的发生、发展中起一定作用。     

急性淋巴细胞白血病恶性克隆的免疫球蛋白基因特征分析

目的 比较人类胚胎发育期的淋巴细胞克隆,儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）和多发性骨髓瘤（MM）的免疫球蛋白重链（IgH)基因,确定与白血病恶性克隆有关的基因特征。方法 利用IgH可变区各个基因家族（VH1－VH6）和结合区（J）的特异序列做引物,RT－PCR扩增IgH重排的CDR3区基因,然后用变性胶长电脉的方法,获得不同发育期胚胎的肝,脾,胸腺和骨髓B细胞克隆的基因指纹图谱,同样也获得15例ALL和1例MMB细胞基因指纹图谱,测序对比分析ALL及MM病人恶性细胞IgH基因的序列特征。结果 以IgH VH1-VH6基因家族为标志的各个B细胞克隆出现有一定规律。肝脏VH6基因是占优势的家族,而脾脏中VH3为优势家族,骨髓更多利用的也是VH3。ALL9／15例表现为B淋巴细胞单克隆的增生,3例属VH1族,3例属VH6家族,2例同时有VH3和VH4家族基因。患者其他基因家族表现为正常的均匀分布的梯度状的多克隆谱系或者受到抑制。1例ALL的VH1、VH3和VH6家族呈寡克隆现象。6例ALL呈正常的多克隆分布。克隆并测序分析1例ALL单克隆VH3序列,发现与胚胎13周的序列相似并具胚胎期特点。1例成人MM的IgH序列特点则完全不同,出现体细胞基因的高突变。结论 ALL的IgH基因重排可以有不同的VH1,VH3,VH4,VH6重排的克隆类型;儿童白血病发病可能与外来抗原刺激无明显关系。