藏族人群apoB基因3′等位基因的多态性及血脂水平的分析

目的 研究我国藏族人群载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）基因３′端高可变区等位基因的多态性及其与血脂水平的关系。方法 采用聚合酶链反应和聚丙烯酰胺梯度凝胶是泳方法分析ＰＣＲ产物。结果 从９９份ＤＮＡ样品中分离到２０种等位基因，其频率分布呈双峰型（Ｂｉｉｍｏｄｅｌ）；以ＨＶＥ３２和ＨＶＥ３４最为常见。结论 藏族人群ａｐｏＢ基因３′高可变区（ＶＮＴＲ）等位基因多生既与重复单位的拷贝数不同有关，也与每一拷贝内的核苷     

乙肝病毒基因前C区突变株感染的检测及临床意义

乙肝病毒基因前Ｃ区突变株感染的检测及临床意义刘华瑞，王小飞，王锦蓉等。华西医科大学肝炎研究室四川医学１９９４；１５（４）１９２应用３′－末端突变特异性ＰＣＲ（ｍｓＰＣＲ）技术对１１７例１４２份临床各型乙肝病毒（ＨＢＶ）感染者的血清标本进行了ＨＢＶ基因...     

应用RT－PCR检测丙肝病毒246例分析

用ＲＴ－ＰＣＲ（逆转录聚合酶链反应）扩增丙型肝炎病毒５′端非编码（５′ＮＣＲ）序列，２４６例肝炎患者中ＨＣＶＲＮＡ（丙型肝炎病毒核糖核酸）阳性者４５例，阳性率１８．３％（４５／２４６），凡阳性者用酶联免疫法测抗－ＨＣＶ（抗丙型肝炎病毒抗体），其中２４例测到抗－ＨＣＶ，阳性重叠率５３．３％（２４／４５），用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＣＶＲＮＡ，能在抗－ＨＣＶ转阳以前检出ＨＣＶＲＮＡ，更早地确诊丙型肝炎。     

成人多囊肾病家系的连锁分析

目的 通过对成人多囊肾病家系的限制性片断长度多态性连锁分析，探讨该病出现症状前的诊断。方法 以α珠蛋白基因３′端高度可变区（３’ＨＶＲ）为遗传标记进行Ｓｏｕｔｈｈｅｒｎ杂交。结果 观察到超过１０种３′ＨＶＲ等位片段，对１名家系成员做出症状出现前诊断，结论３’ＨＶＲ能有效地应用于成人多囊肾病的连锁分析。     

~（31）用PCR技术产前诊断人巨细胞病毒感染

~（３１）用ＰＣＲ技术产前诊断人巨细胞病毒感染［孙永玉，陶幼慈，蒋晓薇．中华医学遗传学杂志，１９９５，１２（５）：２７９］人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）可危害孕妇及胎儿健康。作者应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１２～２０周孕妇羊水中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ，研究?..     

庚型肝炎病毒不同地理株5'端非编码区序列的变异性分析

目的：为明确了解中国不同地区（广东、云南、香港）庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）株５′端非编码区（ＮＣＲ）序列的差异。方法：采用逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术,从广东省２例、云南省１例、香港３例共６例ＨＧＶ感染者血浆中扩增ＨＧＶ５′ＮＣＲｃＤＮＡ片段,为２３８ｂｐ,ＰＣＲ产物纯化后直接经双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列。结果：中国ＨＧＶ株间５′ＮＣＲ相应序列的同源性介乎９２９３％～９７９８％,与国外分离株比较,同源性介乎８６３６％～９１９２％。结论：中国ＨＧＶ株间５′ＮＣＲ相应序列的同源性较大,与国外分离株的同源性较小;碱基变异在序列中呈散在分布,部分区段变异较大;ＨＧＶ核酸变异与地域因素有关。     

慢性乙型肝炎患者HBV前C区基因突变与临床的关系

目的：探讨慢性乙型肝炎患者ＨＢＶ前Ｃ区基因变异与临床的关系。方法：应用３′－碱基特异性ＰＣＲ法（３′－ＢＳ－ＰＣＲ）。结果：５５例ＨＢＶＤＮＡ阳性慢性乙型肝炎患者中检出突变株２５例。突变株的检出主要集中在抗－ＨＢｅ阳性患者中，并随肝损害加重而增加，重型肝炎患者突变株检出率最高。ＨＢＶ、ＨＣＶ重叠感染者高于ＨＢＶ单纯感染者。结论：突变株感染者病情较重，预后差；抗－ＨＢｅ的出现并不完全意味着病情的缓解；ＨＣＶ的重叠感染可能是导致ＨＢＶ前Ｃ区基因突变的原因之一。     

新生儿TORCH感染的检测

为探讨弓形虫（ＴＯＸ）、巨细胞病毒（ＣＭＶ）、单纯疮疹病毒（ＨＳＶ）及风疹病毒（ＲＶ）（总称ＴＯＲＣＨ）在新生儿中的感染情况，采用聚合酶链反应法及捕获－ＥＬＩＳＡ法，对１２６例新生儿进行了检测。产科组９３例，儿科组３３例。结果：儿科组ＴＯＲＣＨ感染阳性总检出率为７２．７％（２４例），其中ＴＯＸ１５例（４５．５％）、ＲＶ４例（１２．１％）、ＣＭＶ３例（９．１％）、ＨＳＶ２例（６．１％）；产科组总阳性率５２．７％（４９例）：ＴＯＸ３３例（３５．５％）、ＲＶ３例（３．２％）、ＣＭＶ３例（３．２％）、ＨＳＶ１０例（１０，８％）。两组总检出率经统计学处理有显著性差异（Ｘ２＝４．０１４，Ｐ＜０．０５），但各单项之间无显著性差异（Ｐ均＞０．０５）。两组中有１１例（８．７％）同时查出两种病原体，因此，两组总的ＴＯＲＣＨ感染阳性率为４９．２％（６２例）。ＴＯＲＣＨ感染新生儿中临床出现各种疾病者：ＴＯＸ３１．３％、ＲＶ５７．１％、ＣＭＶ５０．０％、ＨＳＶ１６．７％。ＴＯＲＣＨ感染阳性组与阴性组在母亲年龄、职业、胎次及胎龄之间无显著性差异。提示：ＴＯＲＣＨ感染在新生儿中阳性率较高，尤其在患有各种疾病的新生儿中较突出，应引起高度重     

PCR循环测序法检测K-ras和HCV 5'非编码区基因变异

目的：建立一种简单、快速、可靠的ＤＮＡ序列分析方法，并利用此方法分析Ｋｒａｓ基因和ＨＣＶ５′非编码区基因的变异情况。方法：ＰＣＲ循环测序法是将ＰＣＲ扩增与核酸序列分析相结合的一种研究方法。根据此技术原理，建立了以ＰＣＲ扩增引物为测序引物，利用ＴａｑＤＮＡ聚合酶、荧光标记的２′，３′双脱氧核苷三磷酸（ｄｄＮＴＰ）直接进行ＰＣＲ扩增产物序列分析的方法。应用该方法对人肺癌组织中的Ｋｒａｓ癌基因和丙型肝炎病毒５′非编码区（ＨＣＶ５′ＮＴＲ）进行了序列测定。结果：肺癌组织中的Ｋｒａｓ基因第１外显子第３５位碱基发生点突变（ＧＧＴ→ＧＡＴ）；属于高度保守区的ＨＣＶ５′ＮＴＲ存在基因变异。结论：ＰＣＲ循环测序法具有简单、快速、结果可靠等特点，为基因突变的检测和病原体的核酸序列分析提供了一个快速实用的方法。     

应用RT—PCR检测丙肝病毒246例分析

用ＲＴ－ＰＣＲ（逆转录聚合酶链反应）扩增丙型肝炎病毒５’端非编码（５’ＮＣＲ）序列，２４６例肝炎患者中ＨＣＶ ＲＮＡ（丙型肝炎病毒核糖核酸）阳性者４５例，阳性率１８．３％（４５／２４６），凡阳性者用酶联免疫法测定－ＨＣＶ（抗丙型肝炎病毒抗体），其中２４例测到抗－ＨＣＶ，阳性重叠率５３．３％（２４／４５），和ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＣＶ ＲＮＡ，能在抗－ＨＣＶ转阳以前检出ＨＣＶ ＲＮＡ，更早地确诊丙型肝     

抗戊型肝炎病毒开放读码框架及IgM和IgG抗体的消长规律及临床意义

目的研究戊型肝炎病人抗戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）开放读码框架２（ＯＲＦ２）和３（ＯＲＦ３）及ＩｇＭ和ＩｇＧ抗体的消长规律及其临床意义。方法采用ＨＥＶＯＲＦ２、ＯＲＦ３合成多肽单独和联合酶联免疫法,动态检测５２例病人血清抗ＨＥＶ。结果起病初期ＯＲＦ２抗体和ＯＲＦ３抗体水平均较高,随病程的延长两者均下降,ＯＲＦ３抗体尤为明显。联合检测ＯＲＦ２和ＯＲＦ３抗体可提高试验的敏感性。血清抗ＨＥＶＩｇＭ和抗ＨＥＶＩｇＧ阳性率于起病半个月内分别为７１．１％（３２／４５）和９７．８％（４４／４５）,随病程的延长抗ＨＥＶＩｇＭ较早阴转。结论ＨＥＶ抗体诊断试剂盒至少应含有ＯＲＦ２和ＯＲＦ３两种抗原。抗ＨＥＶＩｇＭ的特异性好而抗ＨＥＶＩｇＧ的灵敏度高。     

乙型肝炎病毒前C区1896位点突变的PCR分析法

目的 分析乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区突变与ＨＢＶ感染患者肝脏病变的关系，建立ＨＢＶ前Ｃ区１９８６位点突变的ＰＣＲ分析方法。方法 根据ＨＢＶ前Ｃ区ＤＮＡ序列，采用３′－碱基特异性聚合酶链反应分析ＨＢＶ第１８９６位核苷酸的突变，并检测了１２６例临床血清标本。结果 成功分析了ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变，１２６例临床标本突变株检出率为４７．２％。结论 本法操作简单，重复性好，为临床ＨＢＶ的研究和病情分     

庚型肝炎病毒基因组全长cDNA的拼接及克隆

目的：构建ＧＢ病毒Ｃ／庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）基因组全长ｃＤＮＡ克隆。方法：以覆盖ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ分离株ＨＧＶ－Ｉｗ全长基因组且互相重叠的５个基因片段Ｉｗ５，Ｉｗｑ２，Ｉｗｈ６，Ｉｗ３′和Ｉｗ３为起始材料，采用重叠延伸ＰＣＲ拼接和连接酶连接的方法，构建ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ克隆。结果：ＧＢＶ／Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ克隆的酶切图谱与预期一致；核苷酸序列分析显示，克隆的     

室上性心动过速的临床电生理分析

本文对９７例室上性心动过速（ＳＶＴ）患者的食管心房调搏结果分析发现：国人房室旁道折返ＳＶＴ（ＡＶＲＴ）多于房室结折返性ＳＶＴ（ＡＶＮＲＴ）；约２／３旁道位于左游离壁（ＬＦＷ），１／３位于间隔及右游离壁；房室结可存在双径路（ＤＡＶＮＰ）或多条径路；ＡＶＲＴ的Ｐ′明显，Ｒ—Ｐ′≥７０ｍｓ，ＡＶＮＲＴ多无Ｐ′、Ｒ—Ｐ′＜７０ｍｓ；Ｐ′和Ｒ—Ｐ′对ＡＶＲＴ和ＡＶＮＲＴ手术前后符合率为１００％。提示：食管心房调搏检查可初步明确ＳＶＴ发生机制，对ＳＶＴ的诊断、治疗及预后估计具有重要价值。     

套式PCR技术检测肝细胞癌患者血清HBV DNA

应用套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ）技术检测了１６例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，并与ＰＣＲ结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）的方法作了比较。２种方法灵敏度均可达１０￣（－５）ｐｇ。套式ＰＣＲ无需制备探针，试验周期短，更适于推广。１６例ＨＣＣ患者检出ＨＢＶＤＮＡ９例（５６．２５％）。ＨＢｓＡｇ阳性组９例检出４例，ＨＢｓＡｇ阴性组４例检出２例。３例未测ＨＢＶ血清标记物均检出ＨＢＶＤＮＡ。结果表明ＨＣＣ患者血清中仍有ＨＢＶＤＮＡ低水平复制，仍具传染性。     

中国株HGV部分基因的分子克隆与核苷酸序列分析

采用ＲＴ－ＰＣＲ对广东地区３３例肝炎病血清进行ＨＧＶＲＮＡ检测，结果２例（６．１％）阳性，对其中１株输血后ＨＧＶ（ＣＨ－Ｓ）基因组５端非翻译区（５′ＵＴＲ）进行分子克隆与测序，并分别与Ｌｉｎｎｅｎ等报道的２株ＨＧＶ（ＰＮＦ２１６１，Ｒ１０２９１）和Ｌｅａｒｙ等报道的ＧＢＶ－Ｃ相比较，其核苷酸序列的同源性分别为８９．２％，８８．７％，８７．１％，本研究首次证实我国华南地区存在ＨＧＶ感染，ＨＧＶ高度保     

贵州HCV感染株基因分型研究

为了解本地区ＨＣＶ感染株的基因型及现有分型方法的适用性，从贵州２０６例慢性肝炎和血液病患者中筛出３５份抗－ＨＣＶ阳性血清，用逆转录套式聚合酶链反应作ＨＣＶＲＮＡ检测。３０份ＨＣＶＲＮＡ阳性血清用３种分型方法（核心区特异引物ＰＣＲ，非结构５区特异探针核酸杂交，５′末端非编码区限制性长度多态性分析）进行ＨＣＶ基因分型。结果３份血清为ＨＣＶ２ａ感染，２７份为ＨＣＶ１ｂ感染。对８份ＨＣＶ１ｂ、１份ＨＣＶ２ａ血清的ＰＣＲ扩增产物直接测序，核酸序列分型结果与原型别一致。表明ＨＣＶ１ｂ是贵州地区ＨＣＶ感染株的主要基因型，ＨＣＶ２ａ感染并不常见。以ＨＣＶ基因组不同区域为基础的各方法分型结果间有很好的相符性。     

应用PCR技术研究肝细胞性肝癌组织中的HCVRNA,HDVRNA和HG …

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测３１例石蜡包埋的肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）组织中的ＨＣＶＲＮＡ、ＨＤＶＲＮＡ和ＨＧＶＲＮＡ。结果ＨＣＶＲＮＡ阳性４例，ＨＤＶＲＮＡ阳性１例，ＨＧＶＲＮＡ未检出，阳性率分别为１２．９％、３．３％和０，表明ＨＣＣ的发生民ＨＣＶ有一定相关性。     

PCR检测乙肝病人肝组织和血中HBVDNA

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合地高辛素标记的乙肝病毒ＤＮＡ探针（ＨＢＶＤＮＡ－Ｄｉｇ）杂交技术检测了４９份乙型肝炎患者的肝组织标本和４６份血清标本中的ＨＢＶＤＮＡ。结果表明：ＰＣＲ检出乙肝病人肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率比斑点杂交高（Ｐ＜０．０５）。在２１例同时检测了肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ的病人中，肝组织ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５７．１％（１２／２１）；血清阳性率为６１．３％（１３／２１）；两者总阳性率为８０．９％（１７／２１），说明用ＰＣＲ同时检测肝组织和血中ＨＢＶＤＮＡ，可明显提高ＨＢＶＤＮＡ的检出率。     

PCR检测HBV DNA对乙肝疫苗应答反应的研究

儿童全程接种乙肝疫苗后的应答反应率高（为９６％）［１］；而成人接种乙肝疫苗后免疫应答比较低（为６５．１２％）。本文对成人组接种乙肝疫苗无应答反应１５例（３４．８８％），进一步探索了乙肝疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１５例正常成人经乙肝疫苗接种后无应答反应者和３例乙型肝炎患者的血清，结果发现１５例不产生抗－ＨＢｓ者，经ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ均为阴性；仅３例为阳性。本文作者在ＰＣＲ检测指导下，对１５例成人采用乙型肝炎免疫球蛋白（ＨＢＩＧ）和３０微克乙肝疫苗联合应用１０５天后，有１２例产生抗－ＨＢｓ。提示对于接种乙肝疫苗的正常人群，凡经ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ阴性者，经过重复大剂量注射乙肝疫苗后可使绝大多数得到可靠的保护。