蓬草除痹汤对类风湿关节炎免疫调节作用的实验研究

目的观察蓬草除痹汤(PCCB)对Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型外周血中细胞因子IL-17、IL-1β、TNF-α及T细胞亚群CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T的干预作用,探讨PCCB治疗类风湿关节炎(RA)的抗炎免疫作用机制。方法建立CIA大鼠模型,随机分为PCCB组、雷公藤组、空白组及模型组,连续给药28 d,采用酶联免疫吸附(ELISA)法、流式细胞术评价PCCB对CIA大鼠关节炎指数(AI)及大鼠血清IL-17、IL-1β、TNF-α和CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T表达的影响。结果治疗28 d后,PCCB组、雷公藤组关节肿胀度及AI显著改善(P均0.01);血清IL-17、IL-1β、TNF-α水平明显降低(P均0.01);CD4+T降低,CD8+T升高,CD4+T/CD8+T显著降低,且PCCB组的抑制作用明显优于雷公藤组(P0.05)。结论 PCCB能有效改善CIA大鼠关节炎指数,下调大鼠血清中致炎因子IL-17、IL-1β、TNF-α的水平,调节大鼠血清中CD4+T、CD8+T及CD4+T/CD8+T比例,这可能是PCCB治疗RA的主要机制,为临床应用及进一步研究奠定了基础。     

雷公藤内酯酮对大鼠类风湿性关节炎的影响

目的:研究雷公藤内酯酮对大鼠类风湿性关节炎的影响及作用机制。方法:建立Ⅱ型胶原蛋白诱导大鼠类风湿性关节炎模型;观察药物对实验性大鼠足肿胀的抑制作用;检测脾淋巴细胞增殖活性;检测脾细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6和关节浸液内NO、PGE2的含量。结果:与模型组相比,雷公藤内酯酮能剂量依赖性抑制大鼠足肿胀的程度(P<0.01);能明显抑制ConA诱导刺激的脾T淋巴细胞增殖活性(P<0.01);对LPS诱导刺激的脾B淋巴细胞增殖活性的抑制作用不明显(P>0.05);能明显降低脾细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量以及关节浸液NO、PGE2含量(P<0.01)。结论:雷公藤内酯酮对大鼠类风湿性关节炎有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制脾T淋巴细胞增殖活性、降低致炎因子和相关炎症介质水平密切相关。     

黄芪糖蛋白、雷公藤甲素、雷帕霉素和氢化考的松体外免疫抑制作用的比较研究

目的:比较黄芪糖蛋白与雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松的体外免疫抑制作用。方法:不同浓度黄芪糖蛋白、雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松作用于小鼠脾细胞,MTT法测定4种药物对ConA、LPS诱导的淋巴细胞增殖的影响,流式细胞仪测定4种药物对脾细胞培养上清液中细胞因子IFN-γ、IL-6含量的影响。结果:4种药物对体外培养的脾细胞增殖均表现出显著的抑制活性(P<0.05),药效强度依次为雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松、黄芪糖蛋白。但黄芪糖蛋白主要表现为对T细胞的抑制作用。黄芪糖蛋白促进淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-6,而其它3种药物却抑制IFN-γ、IL-6的分泌(P<0.05)。结论:黄芪糖蛋白对于淋巴细胞体外增殖的抑制作用不同于雷公藤甲素、雷帕霉素、氢化考的松,推测其具有独特的作用机制。     

艾叶多糖对小鼠免疫细胞分泌细胞因子及其活性的影响

目的 为了探索艾叶多糖对体外培养脾细胞以及巨噬细胞分泌细胞因子或细胞因子活性的影响.方法 常规提取艾叶多糖,体外与培养的小鼠脾细胞以及腹腔巨噬细胞共孵育,通过对L929靶细胞的杀伤力以及胸腺细胞增殖法分别测定脾细胞培养上清液中细胞因子TNF和IL-2的活性,ELISA法检测巨噬细胞培养上清液中细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的含量.结果 一定浓度的艾叶多糖能明显提高小鼠脾细胞分泌的TNF和IL-2的活性(P＜0.01),对小鼠巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α无影响(P＞0.05).结论 艾叶多糖调节免疫功能的部分药理作用与其提高脾细胞的TNF和IL-2细胞因子活性有关.     

冰香散对甲Ⅰ型流感病毒感染小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响

目的 观察冰香散挥发油对甲Ⅰ型流感病毒(H1N1)感染小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响,探讨其影响机体免疫应答的作用机制。方法 冰香散挥发油不同途径给药(滴鼻、雾化)对甲Ⅰ型流感病毒感染小鼠干预性给药,用CCK-8法检测冰香散对刀豆蛋白A(ConA)、革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖(LPS)诱导T、B淋巴细胞增殖的影响;酶联免疫法(ELISA)检测冰香散对白介素-4(IL-4)、白介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等相关细胞因子的影响。结果 与正常对照组比较,模型组H1N1对小鼠脾B淋巴细胞增殖有明显的抑制作用(P < 0.05),明显提升了TNF-α、IFN-γ和IL-2等相关致炎因子的水平(P < 0.05),而对IL-4等抗炎因子提升并不明显;利巴韦林对感染小鼠脾B淋巴细胞增殖有明显的增强作用(P < 0.01),明显提高IL-4和IFN-γ的水平,同时降低TNF-α水平(P < 0.05);冰香散滴鼻能促进感染小鼠脾B淋巴细胞的增殖(P < 0.05),抑制IL-2和TNF-α的分泌(P < 0.05);冰香散雾化能促进感染小鼠脾T淋巴细胞的增殖(P < 0.05),促进IL-4和IFN-γ产生的同时,抑制IL-2的分泌(P < 0.05)。结论 冰香散挥发油对甲Ⅰ型流感病毒感染小鼠脾细胞活性有一定的促进作用,对Th1/Th2免疫平衡有一定的调节作用,但不同给药途径(滴鼻、雾化)的抗病毒免疫机制有所不同。     

雷公藤甲素对小鼠淋巴细胞体外活化的抑制作用

目的:研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL-2及IFN-γmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据.方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1 h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆体双染技术,流式细胞仪检测TRD对小鼠T细胞CD69、CD25表达的影响;采用半定量RT-PCR技术从mRNA水平检测TRD对细胞因子IL-2、IFN-γ mRNA的表达的影响.结果:TRD能抑制T细胞早期活化标志CD69和CD25,同时TRD也能抑制IL-2及IFN-γmRNA的表达.结论:TRD对T细胞早期活化分子及细胞因子表达的抑制作用可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一.     

雷公藤甲素微乳凝胶对CIA大鼠T细胞相关因子调节作用研究

目的:观察雷公藤甲素微乳凝胶(TP-MBGs)外用对CIA大鼠T细胞相关因子表达水平的影响,以探究其治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法:将56只CIA模型大鼠随机分成空白组、模型组、基质组、TP灌胃组、TP微乳高剂量组、TPMBGs高、中、低剂量组,给药28 d后处理,采用ELISA法检测各组大鼠皮肤(CD1α、Ig A)、血清(IFN-γ、IL-6、TNF-α、ColⅡ、IL-10)及滑膜细胞上清液(IL-1、PGE_2、TNF-α)中相关细胞因子的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组皮肤中CD1α、血清中IFN-γ、IL-6、TNF-α和滑膜细胞上清液中IL-1、PGE2、TNF-α的表达水平明显升高;与模型组比较,TP-MBGs中剂量组血清中的TNF-α及IL-6、滑膜细胞上清液中的IL-1及TNF-α表达水平显著降低; TP-MBGs高剂量组皮肤中CD1α、血清中的TNF-α及IFN-γ、滑膜细胞上清液中的IL-1及TNF-α的表达水平显著降低。结论:雷公藤甲素微乳凝胶外用治疗类风湿性关节炎,可能通过调节皮肤免疫功能及抑制相关细胞因子的分泌,从而起到局部及全身治疗作用。     

雷公藤甲素对BRL大鼠肝细胞增殖和凋亡的影响

目的研究雷公藤甲素(TP)对BRL大鼠肝细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养BRL大鼠肝细胞,经不同浓度TP处理细胞后,采用CCK-8法检测BRL大鼠肝细胞增殖能力;生化仪测定细胞上清液中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性;AV/PI双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡率;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素10(IL-10)、干扰素-γ(IFN-γ)等细胞因子含量。结果与正常对照组比较,雷公藤甲素能明显抑制BRL大鼠肝细胞增殖,诱导细胞凋亡;雷公藤甲素1、10、100μmol/L能明显升高BRL大鼠肝细胞上清液中AST活性,100μmol/L能明显升高ALT活性并降低IL-10含量(P0.05,P0.01)。与雷公藤甲素100μmol/L组比较,雷公藤甲素1、10μmol/L组细胞上清液中ALT含量明显降低,雷公藤甲素10μmol/L组细胞上清液中IL-10含量明显升高,雷公藤甲素1μmol/L组细胞凋亡率明显降低且细胞上清液中TNF-α含量明显升高(P0.05,P0.01)。与雷公藤甲素10μmol/L组比较,雷公藤甲素1μmol/L组细胞凋亡率明显降低,细胞上清液中TNF-α含量明显升高(P0.01)。结论雷公藤甲素对BRL大鼠肝细胞增殖具有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性,该抑制作用可能与诱导BRL大鼠肝细胞凋亡有关。     

雷公藤多甙对大鼠胶原免疫性关节炎及佐剂性关节炎黏膜免疫功能影响的对比研究

目的观察雷公藤多甙对大鼠胶原免疫性关节炎（collagen-Ⅱ induced arthritis,CIA）及佐剂性关节炎（adjuvant arthritis,AA）黏膜免疫功能的影响。方法分别以Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂单独致炎免疫大鼠造成CIA和AA模型,以雷公藤多甙治疗,观察大鼠黏膜、全身免疫指标（外周血T细胞亚群）以及关节局部炎症因子（IL-6、TNF—α、COX-2和NF-κB等）的变化。结果CIA模型组派伊尔结（Peyer’s patch,PP）CD4^＋、血中CD4^＋、CD8^＋均升高;AA模型组PPCD4^＋降低,CD8^＋升高,血中的CD4^＋,CD8^＋均升高。雷公藤对两模型组的PP和血中T细胞亚群存在不同影响。两种模型大鼠关节可见高水平IL-6、TNF—α、COX-2和NF—κB表达,雷公藤多甙可以抑制这些炎症介质的表达。结论两种关节炎模型在黏膜免疫反应方面及雷公藤多甙对这两种模型的影响存在异同。     

雷公藤多甙对大鼠胶原免疫性关节炎黏膜免疫的影响

目的:观察雷公藤多甙对于大鼠胶原免疫性关节炎黏膜免疫的影响.方法:Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂免疫大鼠,以雷公藤多甙治疗,观察大鼠黏膜免疫各项指标.结果:雷公藤多甙可以改善CIA大鼠病理改变,降低肠道PP结中CD4/CD8比值,对脾中T细胞亚群有调节作用,并可降低关节中致炎细胞因子的表达.结论:雷公藤多甙对CIA模型大鼠有抗炎和免疫抑制的作用.     

十全大补汤对移植乳腺癌小鼠免疫抑瘤作的实验研究

目的 研究十全大补汤对荷瘤小鼠抑瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响.方法 以TA2移植性乳腺癌小鼠作为研究对象,给予50%SDT和灌胃,并给予化疗,以小鼠的体重、瘤重及脾内B淋巴细胞、T淋巴细胞增殖指数、IL-6,TNF-α,IL-2作为观察指标.结果 50%SDT可明显改善荷瘤鼠的一般状况,抑制肿瘤的生长;明显增强脾内T淋巴细胞的增殖,并调节B淋巴细胞的增殖,显著提高荷瘤小鼠脾细胞的IL-2,IL-6和TNF-α的分泌.结论 SDT可在体内抑制肿瘤的生长,并降低化疗药物对机体的免疫损伤作用.     

灵芝孢子油对小鼠T淋巴细胞功能影响浅释

[目的]观察灵芝孢子油对小鼠T淋巴细胞功能的影响。[方法]测定灵芝孢子油对小鼠T淋巴细胞亚群的含量变化、IL-2的活性和ConA诱导的脾淋巴细胞的增殖反应。[结果]灵芝孢子油可显著升高正常小鼠外周血CD4+T细胞比例,降低CD8+T细胞比例,升高CD4+/CD8+比值。可以促进正常小鼠诱生IL-2。促进ConA诱导的脾T淋巴细胞增殖反应。[结论]灵芝孢子油能促进小鼠T淋巴细胞的免疫功能。     

升降散对流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠免疫功能的影响

目的:研究升降散对亚甲型流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠免疫功能的影响。方法:建立亚甲型流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠肺炎模型,用升降散全方、升降散拆方、升降散与麻黄杏仁甘草石膏汤合方治疗后,第5天用ELISA方法检测小鼠支气管肺泡、大小肠灌洗液中sIgA、血清中炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10、IL-lra、sTNFR的含量;流式细胞仪法测定外周全血中T细胞亚群CD4~+、CD8~+的百分比和CD4~+/CD8~+值;计算胸腺指数和脾指数。结果:模型组小鼠较正常组小鼠支气管肺泡、大小肠灌洗液中sIgA含量显著降低,血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10、IL-lra、sTNFR的含量显著升高,全血CD8~+的百分比增高,CD4~+百分比和CD4~+/CD8~+值下降,胸腺指数明显降低,但对脾指数无明显影响。升降散(4.55g/kg)能显著提升支气管肺泡、大小肠灌洗液中sIgA含量,降低血清IL-1βIL-6,TNF-α含量,升高IL-10、IL-lrα、sTNFR的含量、全血CD4~+百分比、CD4~+/CD8~+值及胸腺指数,升降散组对这些指标的改善作用优于拆方组而逊于合方组。结论:升降散增加黏膜分泌IgA,调控炎性因子和抗炎因子的平衡及提高T细胞亚群的比值,是其改善肺部炎症的机制之一,也是升降散治疗病毒性肺炎效用机制的初步阐明。     

十全大补汤对移植乳腺癌小鼠免疫抑瘤作用的实验研究

目的研究十全大补汤对荷瘤小鼠抑瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法以TA2移植性乳腺癌小鼠作为研究对象,给予50%SDT和灌胃,并给予化疗,以小鼠的体重、瘤重及脾内B淋巴细胞、T淋巴细胞增殖指数、IL-6,TNF-α,IL-2作为观察指标。结果50%SDT可明显改善荷瘤鼠的一般状况,抑制肿瘤的生长;明显增强脾内T淋巴细胞的增殖,并调节B淋巴细胞的增殖,显著提高荷瘤小鼠脾细胞的IL-2,IL-6和TNF-α的分泌。结论SDT可在体内抑制肿瘤的生长,并降低化疗药物对机体的免疫损伤作用。     

三草素抗炎作用的机制研究

目的对三草素抗炎作用进行机制研究。方法含药血清干预RAW264.7细胞培养4 h后,加入终浓度为100 ng/mL的LPS进行诱导,MTT法观察三草素含药血清对RAW264.7细胞及LPS诱导的RAW264.7细胞增殖的影响;ELISA法考察三草素含药血清对LTB4生成及对IL-1β、IL-6、TNF-α细胞因子产生的影响。结果三草素含药血清具有促进RAW264.7细胞增殖的活性,无细胞毒性。三草素含药血清具有抑制经LPS诱导的RAW264.7细胞的生长活性,抑制RAW264.7细胞的增殖。RAW264.7细胞经LPS诱导后促进LTB4的生成,三草素含药血清具有抑制LTB4生成的作用;RAW264.7细胞经LPS诱导后促进IL-1β、IL-6、TNF-α细胞因子的产生,三草素含药血清具有抑制IL-1β、IL-6、TNF-α细胞因子产生的作用。结论本研究结果初步表明三草素可能是通过降低上述炎症介质的分泌而发挥抗炎作用。     

乌蕨醇提取物对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:观察乌蕨醇提取物对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群、细胞因子水平及核转录因子-κB(NF-κB/P65、NF-κB/P50)蛋白表达的影响,进一步研究其抗肿瘤机制。方法:将60只雄性昆明小鼠随机分为6组,分别为正常对照组、模型组、环磷酰胺组(50mg/kg)、乌蕨低、中、高剂量组(2.5、5.0、10.0 g/kg),制备小鼠S180荷瘤模型,于造模第二天,各组分别给予乌蕨醇提取物灌胃、环磷酰胺腹腔注射,连续给药14 d后,采用流式细胞术分析荷瘤小鼠外周血CD3~+、CD4~+和CD8~+细胞在T淋巴细胞中的百分含量,并计算CD4~+/CD8~+比值;应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测荷瘤小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10);蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测肿瘤组织IL-10、IL-17、TNF-α及NF-κB/P65、NF-κB/P50的蛋白表达。结果:与模型组相比,乌蕨10.0、5.0、2.5 g/kg可显著提高荷瘤小鼠CD3~+淋巴细胞和CD4~+T淋巴细胞阳性率,显著降低中性粒细胞率、单核细胞百分比和CD8~+T淋巴细胞阳性率,显著升高CD4~+/CD8~+比值;升高血清IL-6及IL-10水平,显著提高肿瘤组织IL-10、IL-17、TNF-α、NF-κB/P65和NF-κB/P50蛋白的相对表达量。结论:乌蕨具有明显的体内抗肿瘤活性,其机制可能与激活NF-κB信号通路,升高荷瘤小鼠机体细胞因子水平、增强机体免疫功能有关。     

龟鹿益髓胶囊对实验性脑脊髓炎发病情况、T淋巴细胞增殖及细胞因子的影响

目的 观察中药龟鹿益髓胶囊对实验性脑脊髓炎的发病情况、脾T淋巴细胞增殖、血中IL-2,IL-4,IL-6,TNF-α的影响.方法 该实验采用豚鼠脊髓匀浆和完全福氏佐剂制成的抗原-佐荆乳化液诱导大鼠EAE动物模型,应用龟鹿益髓胶囊作为治疗药物.以泼尼松作为对照药物,观察脑脊髓炎大鼠发病情况,T淋巴细胞增殖及血清中IL-2,IL-4,IL-6,,TNF-α的水平.结果 龟鹿益髓胶囊能明显抑制EAE发病,减轻其病情,同时对MBP诱导的脾T淋巴细胞增殖,血清IL-2,IL-6,TNF-α活性有明显抑制作用,对conA诱导脾淋巴增殖,IL-4具有增强作用.结论 龟鹿益髓胶囊对CorA诱导的T淋巴细胞增殖有增强作用,而对MBP诱导的T淋巴细胞增殖具有抑制作用.而泼尼松片对两者诱导T淋巴细胞增殖均有抑制作用.大剂量龟鹿益髓胶囊能抑制IL-2,IL-6,增强IL-4的活性,调节免疫功能,从而抑制EAE发病,提示中药龟鹿益髓胶囊通过调节体内紊乱的免疫功能起到治疗作用.     

CIA模型大鼠关节滑膜细胞NF-κB信号表达及姜酚胶丸的调控作用研究

目的探讨姜酚胶丸对胶原诱导性关节炎大鼠关节滑膜细胞NF-κB信号表达及炎症因子TNF-α、IL-1和IL-1β影响的研究。方法将6周龄雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、姜酚胶丸治疗组和雷公藤多苷对照组,每组10只。制备CIA模型,采用Western blot法检测关节滑膜细胞NF-κB/P65、IκBα表达,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-1β表达情况。结果 1姜酚胶丸治疗组及雷公藤多苷对照组可下调CIA大鼠滑膜细胞NF-κB/P65、IκBα的表达,与模型组比较均有显著性差异(P0.01);2姜酚胶丸治疗组及雷公藤多苷对照组可下调CIA大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-1β的表达,与模型组比较均有显著性差异(P0.01)。结论姜酚胶丸可通过降低CIA大鼠关节滑膜细胞NF-κB/P65、IκBα信号蛋白表达,显著下调CIA大鼠血清致炎因子TNF-α、IL-1、IL-1β表达,达到缓解炎症的作用。     

杨梅素对小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞增殖的影响

目的:研究杨梅素体外对小鼠脾脏淋巴细胞增殖及腹腔巨噬细胞活化的影响。方法:取健康小鼠,MTT法检测杨梅素对小鼠脾淋巴细胞增殖的作用;中性红法测腹腔巨噬细胞吞噬活性;Griess试剂法测NO释放量;Elisa法测TNF-α、IL-1β和IL-4的含量。结果:杨梅素对未活化及丝裂原(Con A、LPS)活化的淋巴细胞增殖均有明显促进作用;可剂量依赖性地增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力和促进NO释放;促进RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β产生,抑制IL-4的释放。结论:杨梅素可能通过促进小鼠脾淋巴细胞增殖和提高巨噬细胞吞噬及分泌功能,提高机体免疫功能。     

小半夏加茯苓颗粒对荷瘤小鼠抑瘤及免疫调节作用的研究

目的研究小半夏加茯苓颗粒对小鼠S180、H22实体瘤的抑制作用以及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法建立S180、H22荷瘤小鼠模型,观察小半夏加茯苓颗粒的抑瘤作用,并检测各组小鼠的脾T淋巴细胞亚群的分布、CoA诱导的脾淋巴细胞增殖活性以及血清中TNF-α的含量。结果小半夏加茯苓颗粒对S180和H22荷瘤小鼠的肿瘤均具有明显抑制作用,抑瘤率分别为11.5%和9.3%;同时小半夏加茯苓颗粒可明显上调荷瘤小鼠CD4+、CD8+T细胞数量(P<0.01)及CD4+/CD8+比值(P<0.05);小半夏加茯苓颗粒可明显增强CoA诱导的荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖能力(P<0.01)以及血清中TNF-α的含量(P<0.05)。结论小半夏加茯苓颗粒可增强荷瘤小鼠的免疫功能,抑制模型鼠肿瘤的生长。